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    Aula Prtica ABO-1

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    Este documento descreve os procedimentos para classificar grupos sanguíneos ABO através de provas direta e reversa, utilizando hemácias, anti-soros e células-teste. O documento explica como preparar as amostras, realizar os testes, interpretar os resultados e possíveis causas de erro.

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    CLASSIFICAÇÃO ABO

    Aula Prática
    Fundamento:
    Consiste na determinação dos grupos sanguíneos a partir de uma reação de
    aglutinação, pesquisando-se antígenos eritrocitários na membrana das hemácias
    (classificação direta) e anticorpos no soro (classificação reversa). Quando
    hemácias são testadas com anti-soros contendo anticorpos específicos e ocorre
    interação entre as hemácias e o anti-soro, presume-se que estas células sejam
    dotadas do antígeno contra o qual o anticorpo é dirigido.

    Material ✔REAGENTES
    ✔Sangue colhido com EDTA ✔Soros anti-A, anti-B e anti-AB
    (ou sem anticoagulante) ✔Células “A1” e “B”
    ✔Centrífuga ✔Solução NaCl 0,9% (solução salina)
    ✔Tubos de ensaio (12 x 75 mm)
    ✔Bastão plástico/vidro
    ✔Caneta piloto
    ✔Pipeta Pasteur
    ✔Aglutinoscópio
    ✔Lâminas de vidro
    PREPARO DA SUSPENSÃO DE HEMÁCIAS a 5%

    ✔Em um tubo de hemólise colocar 20 gotas de sangue total (sangue


    com anticoagulante).
    ✔Encher o tubo com solução salina 0,9% até 1 cm da borda.
    ✔Homogeneizar por inversão e centrifugar a 3.400 rpm por 1
    minuto.
    ✔Retirar o tubo da centrífuga, sem misturar e aspirar o
    sobrenadante até 1 cm da superfície dos glóbulos.
    ✔Repetir os itens 2, 3 e 4 por mais 2 vezes. Após a terceira
    lavagem, retirar toda a quantidade de sobrenadante.
    ✔Retirar 1 gota das hemácias lavadas e transferir para outro tubo de
    hemólise.
    ✔Adicionar 19 gotas de solução de NaCl 0,9% e homogeneizar.
    PROCEDIMENTOS
    CLASSIFICAÇÃO EM TUBO (PROVA DIRETA)

    ● Preparar uma suspensão a 5% das hemácias a testar;


    ● Rotular 3 tubos de hemólise: anti-A, anti-B e anti-AB;
    ● Colocar em cada tubo 2 gotas dos anti-soros anti-A, anti-B
    e anti-AB, respectivamente;
    ● Adicionar 1 gota da suspensão de hemácias a 5% a cada
    um dos tubos;
    ● Misturar levemente e centrifugar a 3.400 rpm por 15
    segundos;
    ● Ressuspender delicadamente o botão de hemácias formado
    e realizar a leitura observando se houve ou não
    aglutinação.
    PROCEDIMENTOS
    CLASSIFICAÇÃO EM TUBO (PROVA REVERSA)

    ● Rotular dois tubos de hemólise: A e B;


    ● Colocar 2 gotas do soro a testar em cada tubo;
    ● Adicionar uma gota de suspensão de células “A1”
    ao tubo “A”, e uma gota de células “B” ao tubo
    “B”;
    ● Misturar levemente e centrifugar a 3.400 rpm
    por 15 segundos;
    ● Ressuspender delicadamente o botão de
    hemácias formado e realizar a leitura
    observando se houve ou não aglutinação.
    INTERPRETAÇÃO DOS GRUPOS SANGUÍNEOS ABO

    PROVA DIRETA PROVA REVERSA


    GRUPO
    Reação com anti-soros: Reação com hemácias-teste:
    SANGÜÍNEO
    Anti-A Anti-B Anti-AB Células “A1” Células “B”
    + - + - + A
    - + + + - B
    + + + - - AB
    - - - + + O
    CAUSAS DE ERRO

    ✔Falhas na identificação e/ou troca de amostras;

    ✔Erro na interpretação dos resultados;

    ✔Vidraria mal lavada e com resíduos;

    ✔Reagentes vencidos ou contaminados;

    ✔Falha ao adicionar reagentes


    OBSERVAÇÕES

    ✔Não realizar classificação reversa em recém-nascidos, pois


    no sangue de cordão ainda não existem anticorpos naturais.
    Os anticorpos só começam a ser produzidos a partir do 3º
    mês de vida;

    ✔Na classificação reversa em imunodeprimidos (AIDS e LLC),


    pode ocorrer discrepância (reversa não coincidir com direta)
    por haver uma redução acentuada de anticorpos circulantes;
    BIBLIOGRAFIA:

    VALGUEIRO, M.C., GÓES, S.M.P. Práticas em Imunologia


    eritrocitária. São Paulo: Medsi, 1999

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