Prova Reversa Abo

DETERMINAO DOS GRUPOS SANGUNEOS DO
SISTEMA ABO

1. PRINCPIO

A determinao do grupo sanguneo consiste na identificao dos antgenos do
sistema ABO existentes nos eritrcitos e que so geneticamente determinados por 3 genes,
respectivamente, os genes A, B e O. Tais genes so autossmicos (genes alelos) presentes
em um nico lcus ou ento muito prximos entre si, dificultando o crossing-over.
Conforme a existncia dos antgenos A e B , as hemcias sero classificadas
(fenotipicamente) como sendo do grupo A, B, AB ou O.
No soro de indivduos de cada um dos grupos, existem anticorpos chamados
naturais: Anti-A (em indivduos do grupo B); anti-B (em indivduos do grupo A); anti-A
e anti-B (em indivduos do grupo O), sendo que os indivduos do grupo AB no possuem
os anticorpos anti-A e anti-B em seu soro. Os grupos sanguneos so transmitidos por
genes autossmicos e para a sua determinao empregam-se soros padres, cujas principais
qualidades devem ser: ESPECIFICIDADE (antigenicidade), POTNCIA (ttulo) e
AVIDEZ (rapidez para que se estabelea a aglutinao).

COMPORTAMENTO DA PROVA DIRETA
HEMCIAS DO
INDIVDUO TESTADAS
COM SORO
ANTGENO
PRESENTES NAS
HEMCIAS
GRUPO
SANGUNEO
ANTI-A ANTI-B
Aglutinao - A A
- Aglutinao B B
Aglutinao Aglutinao AB AB
- - O O

COMPORTAMENTO DA PROVA REVERSA
SORO DO INDIVDUO
TESTADO COM HEMCIAS
ANTICORPO PRESENTE
NO SORO
TIPO A TIPO B -
Aglutinao - Anti-A
- Aglutinao Anti-B
Aglutinao Aglutinao Anti-A
Anti-B

Prof. Helton Resende
ESO - IMUNOLOGIA

2. PROVA DIRETA

- EM TUBO

a. preparar uma suspenso a 5% das hemcias (2,5 ml de salina e 2 a 3 gotas de
sangue);
b. em dois tubos de 12 x 75 mm, adicionar 2 gotas de suspenso acima; em um deles
colocar uma gota de soro anti-A e no outro uma gota de soro Anti-B.
Homogeneizar;
c. centrifugar por 15 segundos a 1.000 r.p.m.;
d. inclinando e agitando delicadamente o tubo, observar a presena ou no de
aglutinao.

3. PROVA REVERSA

Na prova reversa utiliza-se o soro (ou plasma) do paciente e suspenses de hemcias (5%)
conhecidas (hemcias do tipo A, Rh negativo e do tipo B, Rh negativo).
a. em dois tubos de ensaio 12x75mm, colocar duas gotas do soro ou do plasma; em
um dos tubos adicionar 2 gotas de suspenso de hemcias A, Rh negativo e, no
outro, duas gotas da suspenso de hemcias B, Rh negativo;
b. homogeneizar;
c. centrifugar por 15 segundos a 1.000 r.p.m.;
d. inclinando e agitando delicadamente os tubos, observar a presena ou no de
aglutinao.
e.

DETERMINAO DO FATOR Rh

1. PRINCPIO

Os antgenos eritrocitrios do sitema Rh-hr (D, C, E e seus respectivos alelos d, c, e) so
determinados geneticamente . O sistema Rh comandado por 2 genes estruturais, intimamente
ligados: 1 gene codifica o Ag D e outro codifica os Ags C ou c, E ou e.
Os soros especficos existentes para identificao destes antgenos so os soros anti-D,
anti-C, anti-E, anti-c, anti-e, no existindo o soro anti-d.
Propriedades destes soros:
a. so adquiridos por imunizao;
b. possuem um timo de temperatura de 37 graus C;
c. especificidade;
d. potncia;
e. reao em meio albuminoso.

A separao dos indivduos em Rh positivo ou Rh negativo se faz segundo a presena ou
no na hemcia, de antgeno D (Rh).

Soro REAO COM
HEMCIAS DO
PACIENTE
GENTIPO FATOR Rh
Anti-Rho (D) Aglutinao positiva D/D ou D/-
Ausncia de aglutinao -/-

2. TCNICA EM TUBO:

a. preparar a partir do sangue total em estudo, uma suspenso salina de hemcias a 5%;
b. colocar em tubos (12 x75 mm) 2 gotas da suspenso acima e 2 gotas do soro anti-D;
homogeneizar;
c. centrifugar a 1.000 r.p.m. por 15 segundos;
d. inclinar e agitando suavemente o tubo observar a presena ou no de aglutinao;
e. se houver aglutinao, o indivduo classificado como Rh positivo; caso no haja
aglutinao, colocar o tubo em banho a 37.C, durante 30 a 45 minutos;
f. proceder como no item c;
g. leitura: se houver aglutinao, o paciente classificado como Rh positivo, se no houver,
dever-se- fazer pesquisa do fator D
u
.

OBS: Em paralelo, fazer um controle positivo (com hemcias O, Rh positivo), um controle
negativo (com hemcias O, Rh negativo) e um controle de albumina.

3. TCNICA PARA PESQUISA DO FATOR D DE BAIXA EXPRESSO

a. proceder como nos itens a e g da tcnica em tubo;
b. a seguir, lavar as hemcias 3 vezes com soluo fisiolgica (centrifugar a 3.000 r.p.m. por 1
minuto);
c. aps a ltima lavagem, adicionar duas gotas do Soro de Coombs (soro anti-globulina
humana) e agitar;
d. centrifugar a 1.000 r.p.m. por 15 segundos e proceder a leitura.

Presena de aglutinao: o paciente classificado como D positivo.

Ausncia de aglutinao: o paciente classificado como Rh negativo.

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