Fred Luciano Neves Santos E-mail: fred.santos@bahia.fiocruz.br WhatsApp: + 55 (71) 99390-3004 Skype: flucianon@hotmail.com Utilização de proteínas quiméricas na identificação de anticorpos anti-Trypanosoma cruzi em indivíduos infectados por diferentes cepas do parasita Eva Dopico1; Rodrigo Del-Rei2; Paola Celedon3; Laura Guerrero1; Teresa Vinuesa4; Nilson Zanchin5; Yara Gomes6; Fred Santos2 1 Institut Català de La Salut, Barcelona, Espanha; 2 Instituto Gonçalo Moniz - Fiocruz-BA; 3 Instituto de Biologia Molecular do Paraná – IBMP; Barcelona, Barcelona, Espanha; 5 Instituto Carlos Chagas - Fiocruz-PR; 6 Instituto Aggeu Magalhães - Fiocruz-PE 4 Universitat INTRODUÇÃO O Trypanosoma cruzi, agente causador da doença de Chagas, apresenta elevado polimorfismo genético, podendo levar a variações na resposta imune do hospedeiro. Por conta desta característica, variações regionais na sensibilidade dos testes diagnósticos já foram relatadas. Uma alternativa para superar esta dificuldade consiste no uso de antígenos quiméricos constituídos por epítopos conservados e repetitivos de diversas proteínas do parasito, aumentando a possibilidade de interação com anticorpos anti-T. cruzi de diferentes especificidades. OBJETIVO Avaliar a utilização das proteínas quiméricas IBMP-8.1 e IBMP8.4 no diagnóstico da doença de Chagas em portadores crônicos do Brasil e em imigrantes bolivianos residentes em Barcelona - Espanha. Tabela 1. Valores de sensibilidade obtidos utilizando amostras de diferentes regiões geográficas do Brasil e de Barcelona/Espanha Origem IBMP-8.1 IBMP-8.4 Sensibilidade % [IC95%] 98,5 [91,8-99,7] Bahia (BA) 98,5 [91,8-99,7] Goiás (GO) 97,1 [90,2-99,2] 100 [94,8-100] Minas Gerais (MG) 94,8 [85,9-98,2] 100 [93,8-100] Pernambuco (PE) 97,8 [96,3-98,7] 99,2 [98,1-99,6] Paraná (PR) 97,2 [85,8-99,5] 100 [90,4-100] 100 [86,2-100] Painel AEQ 100 [82,6-100] Painel Internacional (PCI) 75,0 [40,9-92,9] 100 [67,6-100] Barcelona/Espanha (BCN) 99,4 [97,9-99,8] 99,1 [97,5-99,7] MATERIAIS E MÉTODOS As quimeras foram clonadas em vetores pET28a, expressas em Escherichia coli BL21-Star e purificadas por meio de cromatografia de troca iônica e de afinidade. As amostras séricas de indivíduos infectados foram oriundas da Bahia (n = 65), Goiás (n = 70), Minas Gerais (n = 58), Paraná (n = 36), Pernambuco (n = 596) e de imigrantes bolivianos residentes em Barcelona/Espanha (n = 347). Adicionalmente foram utilizados dois painéis comerciais internacionais (Boston Biomedical Inc e Sera-Care Life Sciences Inc) contendo amostras da Nicarágua (n = 3), México (n = 2), Honduras (n = 1), Guatemala (n = 1) e Argentina (n = 1), além de 24 amostras do painel do Programa de Avaliação Externa de Qualidade (AEQ, Fiocruz-RJ). Os imunoensaios foram realizados através de ELISA indireto. Valores de ponto de corte foram determinados através da curva ROC e os dados expressos através da determinação do índice de reatividade (DO/CO). Amostras com índice de reatividade igual ou superior a 1.0 foram consideras positivas. Valores de índice de reatividade iguais a 1.0 ± 10% foram julgadas na zona cinza. RESULTADOS A Tabela 1 ilustra valores de sensibilidade obtidos em ensaios com as quimeras IBMP-8.1 e IBMP-8.4 utilizando amostras de diferentes regiões geográficas do Brasil, painéis comerciais nacional e internacional e de imigrantes bolivianos residentes em Barcelona/Espanha. Valores de sensibilidade superiores a 99% foram obtidos em ensaios com a quimera IBMP-8.4, independente da origem geográfica das amostras. Por outro lado, a molécula IBMP-8.1 mostrou-se menos sensível, em especial para as amostras provenientes dos painéis internacionais. Considerando a sobreposição do IC a 95%, o parâmetro de desempenho avaliado não mostrou diferença significativa entre as amostras de origens distintas (Figura 1). Por outro lado, a média dos índices de reatividade das amostras dos bolivianos residentes na Espanha foram significativamente maiores daqueles encontrados para as amostras dos portadores brasileiros (IBMP-8.1: 4,15 vs. 2,85; IBMP-8.4: 3,16 vs. 2,59). Figura 1. Índices de reatividade obtidos com amostras de indivíduos positivos para a doença de Chagas oriundos de diferentes regiões geográficas do Brasil e de Barcelona/Espanha DISCUSSÃO Os resultados demonstram elevada capacidade das quimeras em identificar indivíduos positivos para a doença de Chagas, tanto do Brasil (país onde circula o DTU TcII) quanto de imigrantes bolivianos residentes na Espanha (caracterizados por apresentar o DTU TcV), sugerindo que as moléculas identificam anticorpos anti-T. cruzi independentemente da linhagem circulante. Para confirmar nossa hipótese, iremos avaliar o potencial diagnóstico das quimeras utilizando amostras de indivíduos infectados com outras linhagens do parasita, como os DTUs TcI e TcIII. REFERÊNCIAS 1. Santos FL, et al. Performance assessment of four chimeric T. cruzi antigens based on antigen-antibody detection for diagnosis of chronic Chagas disease. PLoS One 2016; 11: e0161100. 2. Santos FL, et al. Accuracy of chimeric proteins in the serological diagnosis of chronic Chagas disease - a Phase II study. PLoS Negl Trop Dis 2017; 11: e0005433. 3. Santos FL, et al. Performance assessment of a T. cruzi chimeric antigen in multiplex liquid microarray assays. J Clin Microbiol 2017; 55: 293-45. Financiamento: FIOCRUZ