VOLUME 7 NOMOR 2 DESEMBER 2020 ISSN 2548 – 611X

JURNAL
BIOTEKNOLOGI & BIOSAINS INDONESIA

Homepage Jurnal: http://ejurnal.bppt.go.id/index.php/JBBI

ANALISIS HASIL FRAKSINASI PROTEASE DAN LIPASE YANG

BERASAL DARI SALURAN PENCERNAAN UDANG VANAME
(Litopenaeus vannamei)

Analysis of Protease and Lipase Fractionation Originated from the Digestive Tract
of Vannamei Shrimp (Litopenaeus vannamei)
Hanifah Rahmi*, Hariyanti, Rina Putri A, Devi Wulandari
Fakultas Farmasi dan Sains, Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka,
Jl. Delima II/IV, Klender Jakarta Timur 13460
*Email: hanifah_rahmi@uhamka.ac.id

ABSTRACT
Vannamei shrimp is a fishery commodity with a high consumption value, so it has an impact
of high shrimp waste in the form of head and skin. The digestive tract connected to the head
of the vaname shrimp (Litopenaeus vannamei) contains digestive enzymes, including
proteases and lipases. This study aims to obtain the protein fraction that has the highest
protease and lipase activity. The separation method used was centrifugation followed by
precipitation using ammonium sulfate salt and dialysis. The dialysate was purified by gel
filtration chromatography at a volume retention of 10 drops per tube. The proteolytic and
lipolytic enzyme activity of the fraction was measured using a spectrophotometer. The results
showed that fraction 102 had the highest protease activity value of 96.3924 U / mL, while
fraction 100 had the highest lipase activity of 531.07 U / mL. This study showed that in the
digestive tract of vaname shrimp, protease and lipase activity increased with the level of purity.

Keywords: digestive enzymes, gel filtration chromatography, lipase, protease, vannamei shrimp

ABSTRAK
Udang vaname merupakan komoditi perikanan dengan nilai konsumsi yang tinggi, sehingga
berdampak pula dengan tingginya limbah udang yang berupa kepala dan kulit. Saluran
pencernaan yang terhubung dengan kepala udang vaname (Litopenaeus vannamei)
mengandung enzim pencernaan, diantaranya protease dan lipase. Penelitian ini bertujuan
untuk mendapatkan fraksi protein yang memiliki aktivitas protease dan lipase tertinggi. Metode
pemisahan yang dilakukan adalah sentrifugasi dilanjutkan dengan pengendapan
menggunakan garam ammonium sulfat dan dialisis. Dialisat dimurnikan dengan kromatografi
filtrasi gel pada retensi volume sebanyak 10 tetes tiap tabung. Aktivitas enzim proteolitik dan
lipolitik fraksi diukur menggunakan spektrofotometer. Hasil menunjukkan bahwa fraksi 102
memiliki nilai aktivitas protease tertinggi sebesar 96,3924 U mL–1, sedangkan fraksi 100
memiliki aktivitas lipase tertinggi sebesar 531,07 U mL–1. Penelitian ini menunjukkan bahwa
pada saluran pencernaan udang vaname terdapat aktivitas protease dan lipase yang
meningkat seiring dengan tingkat kemurniannya.

Kata Kunci: enzim pencernaan, kromatografi filtrasi gel, lipase, protease, udang vaname

Received: 06 March 2020 Accepted: 17 September 2020 Published: 08 December 2020

194
 J Bioteknol Biosains Indones – Vol 7 No 2 Thn 2020

PENDAHULUAN Keunggulan enzim sebagai biokatalisator

antara lain memiliki spesifikasi tinggi,
Udang merupakan komoditi yang dapat mempercepat reaksi kimia tanpa
meningkatkan ekspor sub-sektor perikanan. pembentukan produk samping, produktivitas
Menurut data statistik perikanan budidaya tinggi dan dapat menghasilkan produk akhir
dari Kementerian Kelautan dan Perikanan RI, yang tidak terkontaminasi sehingga
produksi udang di Indonesia rata-rata mengurangi biaya purifikasi dan efek
mengalami peningkatan setiap tahunnya. kerusakan lingkungan (Gurung et al. 2013).
Produksi udang vaname (Litopenaeus Aktivitas lipase dapat dtemukan secara luas
vannamei) mengalami peningkatan pada di alam dan dapat diproduksi oleh banyak
tahun 2014-2018 dari 442.380 ton menjadi mikroorganisme. Bakteri, jamur berfilamen,
717.094 ton (KKP 2019). Kementerian dan ragi dapat memproduksi lipase yang
Kelautan dan Perikanan juga melaporkan memungkinkan mikroorganisme ini
bahwa tingginya volume produksi udang menggunakan lipid asal hewani maupun
nasional disertai pula dengan tingginya nabati sebagai sumber karbon dan energi
volume ekspor udang pada tahun 2018 bagi pertumbuhannya (Ribeiro et al. 2011).
sebesar 180 ribu ton meningkat dari 147 ribu Lipase telah dimanfaatkan di bidang kimia,
ton pada tahun 2017, sedangkan nilai ekspor kesehatan, farmasi, dan kosmetik, sehingga
naik dari USD 1,42 milyar menjadi USD 1,80 purifikasi lipase menjadi penting untuk
milyar (Dirjen Perikanan Budidaya 2018). dilakukan. Salah satu manfaat lipase di
Udang diekspor dalam bentuk udang bidang farmasi yaitu untuk mensintesis
beku segar, yang telah mengalami cold lovastatin, sebagai obat yang mampu
storage setelah melalui pemisahan kepala menurunkan kadar kolesterol dalam darah
dan kulit. Industri udang beku segar (Andualema dan Gessesse 2012).
mengakibatkan adanya limbah berupa kepala Protease merupakan enzim yang dapat
(carapace) dan kulit (peeled) yang menghidrolisis protein menjadi senyawa-
menimbulkan masalah pencemaran senyawa yang lebih sederhana seperti peptida
lingkungan. Sekitar 40-45% limbah dihasilkan dan asam amino. Protease sebagian besar
dari hasil konsumsi udang (Kandra et al. berperan dalam hidrolisis substrat polipeptida
2012). Limbah udang yang dihasilkan besar serta berperan dalam fungsi fisiologis
mengandung protein, lemak, kitin, dan lainnya, seperti pencernaan, maturasi hormon,
kitosan yang dapat dimanfaatkan dalam perakitan virus, respon imun, inflamasi,
bidang farmasi, contohnya sebagai kapsul fertilisasi, koagulasi darah, fibrinolisis, kontrol
(Younes dan Rinaudo 2015). Oleh karena itu, tekanan darah, sporulasi, germinasi dan
limbah udang (kulit dan kepala) perlu patogenesis. Selain itu protease juga
penanganan yang lebih serius terutama diimplikasikan dalam peran regulasi ekspresi
karena limbah ini mengandung senyawa gen, perbaikan DNA, dan sintesis DNA (Chitte
kimia yang bermanfaat. Salah satu spesies dan Chaphalkar 2017). Oleh karena itu
udang yang banyak dikonsumsi adalah dibutuhkan pemanfaatan enzim yang optimal
udang vaname. Udang ini menghasilkan dan efisien, dengan perlu dilakukannya
limbah yang dapat dimanfaatkan. Sistem pemurnian suatu enzim.
saluran pencernaan udang membentang dari Pemurnian suatu enzim bertujuan untuk
kepala hingga ke bagian dalam ekor, yang memisahkan enzim yang diinginkan dari
terbagi dalam 3 bagian yaitu foregut, midgut, senyawa yang tidak dikehendaki. Tahap-
dan hindgut (Corteel 2013). Pada limbah tahap pemurnian tergantung dari tujuan akhir,
kepala udang vaname terdapat saluran apakah untuk tujuan komersial atau tujuan
pencernaan yang bisa menjadi sumber enzim riset. Enzim yang kasar atau yang dimurnikan
seperti protease dan lipase (Huang et al. sebagian masih dapat dipakai untuk
2019). komersial, sedangkan enzim yang murni atau
Enzim adalah biomolekul berupa hampir murni digunakan dalam riset atau
protein berbentuk bulat (globular), yang terdiri dipakai dalam produk analitik. Untuk tujuan
atas satu rantai polipeptida atau lebih. Enzim riset, biasanya digunakan untuk mempelajari
berfungsi sebagai katalis atau senyawa yang aktivitas enzim, struktur dan fungsinya.
dapat mempercepat proses reaksi tanpa Jumlah dari protein yang telah dimurnikan
habis bereaksi (Worthington et al. 2019). tidak hanya bergantung pada material awal

195
Analisis Hasil Fraksinasi Protease dan Lipase... Rahmi et al.

tetapi juga proses karena ada protein yang kisaran 23–62 kDa (Anhar 2018).
hilang pada setiap tahap pemurnian. Selain Berdasarkan uraian tersebut, maka penelitian
itu, beberapa penelitian melaporkan terdapat lanjutan ini bertujuan untuk menentukan
sekitar 5-10% atau lebih hasil pemurnian aktivitas enzim protease dan lipase dari
mengandung kontaminasi dengan protein saluran pencernaan udang vaname dengan
lain. Oleh karenanya perlu tahapan pengendapan amonium sulfat 70% dan
pemurnian yang lebih tinggi untuk pemurnian melalui metode kromatografi
meningkatkan kemurnian sampel (Wingfield filtrasi gel.
2015).
Kromatografi filtrasi gel merupakan BAHAN DAN METODE
salah satu teknik pemisahan protein dan
makromolekul biologi lain berdasarkan Tempat dan waktu penelitian
ukuran molekul. Matriks filtrasi gel berupa gel Penelitian dilakukan pada bulan
yang berpori seperti dekstran, agarosa atau Januari hingga Juli 2019 di Laboratorium
poliakrilamida. Contoh matriks komersial Bioteknologi dan Laboratorium Biokimia,
tersebut adalah sepharose, sephadex, dan Fakultas Farmasi dan Sains, Universitas
biogel, kemudian dikemas di dalam kolom Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka, Jakarta.
dan dielusi dengan fase cair. Pori-pori matriks
dapat menampung molekul berukuran lebih Bahan dan alat
kecil. Molekul berukuran lebih kecil akan Alat-alat yang digunakan antara lain,
memasuki pori-pori matriks, namun molekul sentrifus (Thermo Scientific), timbangan
yang besar tidak terperangkap ke dalam pori analitik (OHAUS Adventure Pro), pH meter
kolom. Hasil yang dicapai adalah molekul (Hanna Instruments), magnetic stirrer (MS H-
besar akan keluar dari kolom lebih dulu Pro), mikropipet (Eppendorf Research),
dibanding molekul yang lebih kecil (Bouvier waterbath, membran selofan 14 kDa,
dan Koza 2014). spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu), kolom
Pada penelitian yang telah dilakukan kromatografi (Pyrex).
mengenai pemurnian dan karakterisasi enzim Bahan-bahan yang digunakan dalam
protease dari Planomicrobium sp. dengan penelitian yaitu udang vaname yang
metode kromatografi kolom dihasilkan berat dipisahkan dari saluran pencernaannya.
molekul 61,4 kDa (Liu et al. 2013), sehingga Udang vaname diperoleh dari Krabben
dapat disimpulkan bahwa enzim protease Fresh Market di Jl. Tenggiri Blok K7A,
memiliki berat molekul >20 kDa (Sajuthi et al. Muara Baru Ujung, Jakarta Utara (S 6° 8'
2010). Analisis hasil SDS-PAGE enzim 4.25''; E 106° 51' 37.087''). Bahan lain yang
pencernaan pada fraksi amonium sulfat 80% digunakan antara lain, akuades, dapar
dari saluran pencernaan udang vaname fosfat pH 7, amonium sulfat (Merck), EDTA,
memiliki rerata aktivitas enzim protease BaCl2 (Merck), bovine serum albumin, asam
sebesar 18,0016 U mL–1 dan aktivitas enzim fosfat 85%, etanol 96%, asam oleat, tris HCl
lipase sebesar 88,5694 U mL–1. Berat molekul pH 8,3, minyak zaitun, tirosin, substrat
dari enzim lipase serta protease dari saluran kasein 1,5%. reagen TCA, coomasie briliant
pencernaan udang vaname memiliki rentang blue G-250 (AMRESCO), membran selofan,
dan sephadex G-100.

Pengambilan sampel saluran pencernaan

Udang vaname (L. vannamei) yang
digunakan adalah udang yang berumur 4
bulan sebanyak 7,11 kg dengan berat 20 -
25 g per udang. Sampel diperoleh dengan
cara membedah kepala udang dan
mengeluarkan saluran pencernaannya
(Gambar 1 dan 2). Proses ini dilakukan
pada suhu 0ºC di dalam cooler box dengan
Gambar 1. Skema sistem pencernaan udang tujuan untuk mencegah kerusakan enzim
vaname (Corteel 2013) (Aslamyah 2011).

196
 J Bioteknol Biosains Indones – Vol 7 No 2 Thn 2020

Ekstraksi enzim kasar G-100 yang sebelumnya telah dikalibrasi

Sebanyak 540,0985 g isi saluran dengan dapar tris HCl 0,1 M pH 8,3 dengan
pencernaan udang vaname dihomogenisasi pengelusi 2 kali volume tabung kolom.
dengan ditambahkan dapar fosfat pH 7,0 Langkah-langkahnya yaitu dengan
dengan perbandingan 1:2. Kemudian pembuatan kolom sephadex G-100. Tepung
sampel dihaluskan menggunakan blender sephadex G-100 dikembangkan dengan
sampai halus. Ekstrak kasar enzim yang dapar tris HCl 0,1 M pH 8,3 dan diinkubasi
diperoleh disentrifugasi pada kecepatan pada suhu kamar selama 24 jam. Suspensi
10.000 rpm selama 15 menit (Livshits et al. ini dibiarkan sampai mengembang.
2015). Sentrifugasi digunakan untuk Gel yang sudah mengembang
memisahkan enzim intraseluler dari sisa- kemudian diaduk perlahan dan dimasukkan
sisa sel. Endapan hasil sentrifugasi dibuang lewat batang pengaduk ke dalam kolom
dan supernatannya digunakan sebagai kromatografi sampai seperempat dari tinggi
ekstrak kasar enzim. Supernatan yang kolom kromatografi dan dielusi dengan dapar
diperoleh adalah sebanyak 968 mL. tris HCl 0,1 M pH 8,3 sebanyak 2 kali volume
tabung kolom, hasil fraksi ditampung
Presipitasi dengan amonium sulfat sebanyak 1 mL per tabung. Gel dibiarkan
Supernatan yang diperoleh ditambahkan mengendap semua pada tabung kolom
dengan amonium sulfat dengan konsentrasi 0- kromatografi. Pemisahan enzim protease
70%. Penambahan amonium sulfat sebanyak dengan kolom sephadex G-100 sebanyak 1,9
456,896 gram untuk 968 mL supernatan ini mL sampel enzim dimasukkan ke dalam
dilakukan sedikit demi sedikit ke dalam ekstrak kolom sephadex G-100 kromatografi, lalu
enzim hingga larut yang dibantu dengan proses dielusi sampai sampel habis dielusi, hasil
pengadukan menggunakan magnetic strirrer. fraksi ditampung sebanyak 1 mL per tabung.
Larutan akan berubah menjadi keruh karena Hasil fraksi dianalisis kandungan proteinnya
protein telah mengendap. Presipitasi enzim pada panjang gelombang 280 nm secara
dibiarkan selama 1 jam pada suhu 20ºC, langsung diukur pada spektrofotometer UV-
kemudian disentrifugasi pada kecepatan Vis. Hasil fraksi yang ditampung, terdapat 17
10.000 rpm selama 30 menit. Hasil dari fraksi yang memiliki serapan tertinggi dengan
sentrifugasi, larutan akan membentuk endapan pengukuran pada panjang gelombang 280
dan supernatan. Endapan yang didapatkan nm, setelah itu dilakukan uji aktivitas enzim.
adalah sebanyak 30 mL dan dilanjutkan
dengan proses dialisis terhadap endapan yang Penentuan kadar protein
didapat. Selanjutnya endapan didialisis untuk Sebanyak 0,1 mL ekstrak kasar enzim
memisahkan molekul yang besar dari molekul ditambahkan 5 mL pereaksi Bradford,
yang kecil melalui membran semipermeabel. divortex dan diinkubasi selama 10 menit.
Serapan diukur menggunakan
Dialisis Spektrofotometer UV-Vis pada panjang
Dialisis dilakukan selama 72 jam pada gelombang maksimum (Malle et al. 2015).
suhu 4ºC menggunakan magnetic stirrer Panjang gelombang maksimum yang
pada kecepatan 125 rpm. Pelarut yang diperoleh sebesar 593,5 nm. Kadar protein
digunakan selama proses dialisis adalah dihitung menggunakan persamaan kurva
dapar fosfat pH 7. Pergantian pelarut standar larutan BSA (bovine serum
dilakukan setiap 3 jam. Uji kualitatif amonium albumin).
sulfat terhadap larutan dialisis dilakukan
dengan menambahkan larutan BaCl2 1% dan
HCl 0,1 N untuk memastikan bahwa garam
amonium sulfat sudah tidak terdapat di dalam
larutan enzim. Hasil dialisis yang didapatkan
adalah sebanyak 20 mL.

Kromatografi filtrasi gel

Hasil dialisis dilanjutkan ke metode
kromatografi filtrasi gel, dengan
mengaplikasikan ke dalam kolom sephadex Gambar 2. Udang vaname

197
 J Bioteknol Biosains Indones – Vol 7 No 2 Thn 2020

Tabel 1. Hasil ekstraksi enzim dari saluran pencernaan Uji aktivitas enzim lipase
udang vaname Aktivitas lipase diukur dengan metode
Kwon dan Rhee yang dilakukan oleh
No Keterangan Hasil
Supriyatna et al. (2015) menggunakan
1 Udang vaname 7,11 kg
substrat minyak zaitun. Prosedur
2 Saluran pencernaan 540,0985 g pengujiannya adalah dengan menambahkan
udang vaname
1 mL larutan minyak zaitun ke dalam 1 mL
3 Ekstrak enzim kasar 1080 mL dapar fosfat pH 7,2. Kemudian sebanyak 0,1
mL sampel enzim ditambahkan ke dalam
4 Hasil sentrifugasi I 968 mL
(supernatan) campuran di atas lalu dihomogenkan dengan
vortex selama 10 menit. Campuran diinkubasi
5 Hasil sentrifugasi II 30 mL
(endapan) pada suhu 37ºC selama 20 menit lalu
ditambahkan 1 mL HCl 6 N dan 5 mL
6 % Rendemen saluran 7,5963% heksana. Campuran dikocok kuat dan ambil
pencernaan udang
lapisan atasnya sebanyak 4 mL, lalu
7 % Rendemen endapan 5,5545% ditambahkan reagen tembaga (II) asetat
sebanyak 1 mL. Serapan asam oleat diukur
pada panjang gelombang maksimumnya
Tabel 2. Hasil kadar protein pencernaan dari saluran yaitu 746 nm.
pencernaan udang vaname

Kadar Protein Rerata Protein HASIL DAN PEMBAHASAN

Keterangan
(mg mL−1) (mg mL−1)
Hasil determinasi dari Laboratorium
Ekstrak 0,1204
pengendapan 0,1225 0,1215 Crustasea, Bidang Zoologi, Pusat Penelitian
salting out 0,1217 Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan
Indonesia (LIPI) Cibinong menunjukkan
0,1182 bahwa jenis udang yang digunakan dalam
Dialisis 0,1179
0,1182
0,1181 penelitian ini adalah benar udang vaname (L.
vannamei). Saluran pencernaan yang
0,1173
Kromatografi
0,1121
terdapat di sepanjang bagian atas abdomen
fraksi ke 100 0,1161 udang diperoleh dengan cara pembedahan.
0,1188
Selama proses pembedahan, suhu dijaga
0,1160
Kromatografi
0,1191
tetap dingin agar tidak terjadi kerusakan
fraksi ke 102 0,1166 enzim. Saluran cerna atau usus udang sendiri
0,1147
berwarna hijau, sedangkan kepala udang
Uji aktivitas enzim protease yang diambil berupa cairan berwarna orange
Metode Nakanishi yang dilakukan oleh serta memiliki tekstur kental.
Ong dan Yang (2017) digunakan untuk uji Saluran cerna udang yang didapat
aktivitas protease dengan menggunakan sebanyak 540,09 g dari 7,11 kg udang
substrat kasein 2%. Prosedur pengujiannya vaname dengan rendemen sebesar 7,59%
adalah dengan mencampurkan 0,6 mL kasein (Tabel 1). Hasil rendemen saluran pencernaan
2% dan 0,1 mL larutan enzim. Campuran udang vaname yang didapatkan lebih besar
diinkubasi pada suhu 37ºC selama 10 menit. dari penelitian sebelumnya, yaitu penelitian
Reaksi diakhiri dengan penambahan 0,6 mL Anhar (2018) yang memiliki rendemen
reagen TCA. Blanko yang digunakan adalah sebesar 4,33%. Hal ini dapat terjadi karena
0,6 mL kasein 2% tanpa penambahan larutan umur udang yang digunakan pada penelitian
enzim dan diinkubasi selama 10 menit, ini lebih tua dan berat udang yang digunakan
kemudian ditambahkan larutan TCA lebih besar dari berat udang sebelumnya,
sebanyak 0,6 mL. Hasil inkubasi diukur sehingga diperoleh saluran pencernaan yang
absorbansinya dengan spektrofotometer lebih banyak. Saluran cerna disimpan pada
pada panjang gelombang 270 nm. Satu unit suhu −28ºC agar enzim tidak terdenaturasi jika
protease (U) didefinisikan sebagai banyaknya tidak langsung digunakan.
dalam mL enzim yang dibutuhkan untuk Penambahan 70% amonium sulfat pada
menghasilkan 1 µmol tirosin tiap menit ekstrak enzim kasar sebanyak 456,896 gram
dengan kasein sebagai substrat. dilakukan sedikit demi sedikit dengan

198
 J Bioteknol Biosains Indones – Vol 7 No 2 Thn 2020

bantuan pengadukan menggunakan Tabel 3. Hasil uji aktivitas enzim protease dan lipase
magnetic stirrer, dengan tujuan untuk dari saluran pencernan udang
meningkatkan kecepatan melarut amonium
Fraksi Aktivitas Enzim (U mL−1)
sulfat dan menghomogenkan amonium sulfat No
Ke- Protease Lipase
ke seluruh bagian ekstrak kasar enzim.
Proses pengadukan dilakukan secara 1 41 11,4231 345,73
perlahan yaitu 100 rpm untuk menghindari 2 56 4,9231 337,73
terbentuknya buih. Terbentuknya buih akan 3 65 4,0209 300,07
menyebabkan perubahan konformasi
4 70 10,0867 265,07
molekul protein (Báez et al. 2011). Endapan
yang terbentuk dari penjenuhan dipisahkan 5 76 8,4048 234,57
dengan cara sentrifugasi. Kadar protein dari 6 100 13,2873 531,07
hasil pengendapan dapat dilihat pada Tabel 2. 7 102 96,3924 147,07
Pengendapan protein bertujuan untuk
8 113 7,956 497,07
mengurangi kadar air sehingga didapatkan
enzim yang memiliki aktivitas lebih baik 9 125 7,1981 166,40
karena mengurangi kontaminan yang dapat 10 129 21,0652 376,07
mengganggu sisi aktif enzim untuk berikatan 11 135 32,115 185,73
dengan substrat. Prinsip presipitasi 12 140 22,906 394,73
menggunakan garam amonium sulfat adalah
13 149 7,3788 165,40
salting out, yang mana pada penambahan
konsentrasi garam tertentu akan 14 150 7,631 201,07
menyebabkan kelarutan protein menurun 15 152 15,1606 421,40
(Purwanto 2016). 16 155 16,0446 166,07
Pemisahan protein dilanjutkan dengan
17 156 2,3946 186,73
dialisis, yang merupakan perpindahan
molekul terlarut dari suatu campuran yang 18 Blanko
terjadi akibat proses difusi pada membran
semipermeabel berdasarkan ukuran molekul membran yaitu 14 kDa. Hasil dialisis yang
protein (Katoch 2011). Proses ini bertujuan didapat sebanyak 20 mL dan memiliki kadar
untuk memisahkan residu garam amonium protein sebesar 0,1181 mg mL–1 (Tabel 2).
sulfat maupun zat terlarut lainnya Hasil ini menunjukkan adanya pengurangan
berdasarkan ukuran molekul menggunakan volume sebanyak 10 mL dari sebelum
membran selofan (Gunarti et al. 2013). dialisis, hal ini dikarenakan sebagian larutan
Dialisat protein berada di dalam membran dapar dengan ukuran di bawah ukuran pori
selofan karena protein memiliki ukuran membran ikut keluar melewati membran
molekul yang lebih besar dari ukuran pori selofan.

0,400

0,300
Serapan

0,200

0,100

-
0 30 60 90 120 150 180
Fraksi

Gambar 3. Hasil pengukuran serapan protein pada panjang gelombang 280 nm

199
Analisis Hasil Fraksinasi Protease dan Lipase... Rahmi et al.

Dialisat protein diaplikasikan ke dalam semakin tinggi kadar protein yang dihasilkan.
kolom kromatografi filtrasi gel. Kromatografi Hasil uji kadar protein enzim dari saluran
ini merupakan salah satu metode pemurnian pencernaan udang vaname dapat dilihat
protein dan makromolekul biologi lainnya pada Tabel 2. Berdasarkan hasil ini dapat
berdasarkan ukuran molekul. Molekul kecil dinyatakan bahwa semakin murni suatu
akan masuk ke dalam polimer gel sebagai enzim, maka kadar protein yang dihasilkan
fase diam dan akan diikat oleh partikel gel semakin rendah.
sedangkan molekul yang besar tidak diikat Metode yang digunakan untuk
partikel gel sehingga turun terlebih dahulu mengukur aktivitas enzim protease pada
(Hong et al. 2012). penelitian ini adalah metode Nakanishi
Hasil kromatografi ditampung sebanyak (Yusriah dan Kuswytasari 2013). Fraksi yang
174 fraksi (Gambar 3). Tujuh belas fraksi terkumpul diuji aktivitas enzim lipase dan
diantaranya diukur aktivitas enzimnya. protease-nya. Aktivitas enzim diukur secara
Pemilihan fraksi ini berdasarkan nilai serapan triplo pada sampel untuk mendapatkan rerata
protein di atas 0,2000 dengan pengukuran aktivitasnya. Pembuatan kurva standar
pada panjang gelombang 280 nm. Protein menghasilkan persamaan regresi linier yaitu
menyerap sinar ultraviolet maksimum pada y = 0,0764 + 0,0072x. Tabel 3 merupakan
panjang gelombang 280 nm, karena adanya hasil pengukuran uji aktivitas dari 17 fraksi
asam amino tirosin, triptophan, dan dengan nilai absorban protein tertinggi,
fenilalanin (Anthis dan Clore 2013). Gel yang aktivitas protease yang diperoleh dari fraksi
digunakan pada pemisahan dengan nomor 102 yaitu 96,3924 U mL–1. Nilai ini
kromatografi ini adalah sephadex G-100 yang dapat diartikan dengan sejumlah enzim
memiliki pemisahan berat molekul sebesar protease (mL) yang mampu mengkatalisis
kisaran 4-150 kDa untuk pemisahan protein 96,3924 µmol substrat kasein tiap menit,
(Katoch 2011). Molekul protein dengan sedangkan tiap 1 mL enzim lipase mampu
ukuran kecil akan terjerap masuk ke dalam mengkatalisis 531,07 µmol substrat minyak
pori gel, sehingga keluar lebih lama zaitun per satuan waktu (menit). Aktivitas
dibandingkan molekul ukuran besar. lipase tertinggi diperoleh pada fraksi ke-100.
Pemilihan fraksi yang memiliki serapan Hasil uji aktivitas yang diperoleh lebih besar
yang tinggi diharapkan memiliki kandungan dibandingkan dengan penelitian sebelumnya
protein yang tinggi sehingga enzim lipase dan yang dilakukan oleh Anhar (2018) yang
protease yang diperoleh memiliki aktivitas hanya memperoleh nilai aktivitas enzim
tertinggi. Metode Bradford dipilih sebagai protease sebesar 18,0016 U mL–1 dan
metode untuk pengujian kadar protein karena 88,5694 U mL–1 untuk nilai aktivitas lipase.
metode ini cukup akurat, selektif, stabil Sehingga aktivitas enzim yang dihasilkan dari
terhadap keadaan pengotor, dan sangat cepat studi ini mengalami peningkatan sebanyak
dalam pengerjaannya dibandingkan dengan 5,35× untuk protease dan 6× untuk lipase
metode lainnya (Datki et al. 2019). Uji Bradford dibanding dengan aktivitas enzim yang
melibatkan pewarna coomasie brilliant blue G- dihasilkan Anhar (2018). Perbedaan timbul
250 (CBBG) yang mana CBBG akan berikatan karena pada penelitian sebelumnya hanya
dengan protein yang terdapat pada sampel menggunakan teknik penjenuhan (salting
larutan dalam suasana asam, sehingga akan out), sedangkan pada penelitian ini telah
dihasilkan warna kebiruan. CBBG yang semula dilakukan pemisahan menggunakan metode
berwarna merah akan menghasilkan warna kromatografi filtrasi gel dengan buffer tris-HCl
biru, karena adanya interaksi antara pewarna pH 8,3 sehingga enzim protease dan lipase
dengan asam amino penyusun protein. Larutan yang diperoleh lebih murni dan hasil
bovine serum albumin merupakan larutan aktivitasnya menjadi lebih besar.
standar yang digunakan dalam penentuan Enzim protease dan lipase yang murni
panjang gelombang maksimum. dapat dimanfaatkan pada bidang pangan
Kadar protein ditentukan dengan maupun kesehatan. Pada industri pangan,
persamaan linier yang dihasilkan dari protease sering dimanfaatkan sebagai
pembuatan kurva standar. Kurva linier pengempuk daging, penggumpal susu, serta
menunjukkan hubungan antara absorbansi sebagai bahan tambahan yang dapat
dengan kadar protein berbanding lurus. meningkatkan kualitas roti (Raveendran et al.
Semakin tinggi nilai absorbansi, maka 2018). Enzim lipase dapat digunakan sebagai

200
 J Bioteknol Biosains Indones – Vol 7 No 2 Thn 2020

bahan tambahan dalam pembuatan keju 10.1002/pro.2253

(Chandra et al. 2020). Dalam industri farmasi, Aslamyah S (2011) Kualitas lingkungan dan
lipase digunakan untuk mensintesis molekul aktivitas enzim pencernaan udang
enantiomer. Molekul ini dimanfaatkan pada vannamei (Litopenaeus vannamei) pada
obat antiinflamasi, antikanker, antiviral, berbagai konsentrasi probiotik
antihipertensi, antikolesterol, anti-alzheimer bioremediasi- Bacillus sp. Fish Sci 1: 161-
dan vitamin A (Houde et al. 2004). Tidak 178. doi: 10.20527/fs.v1i2.1186
kalah dengan lipase, enzim protease juga Báez GD, Moro A, Ballerini GA, Busti PA,
dapat dimanfaatkan dalam bidang farmasi Delorenzi NJ (2011) Comparison
yaitu sebagai agen terapi pada gangguan between structural changes of heat-
pencernaan, inflamasi, serta gangguan kulit treated and transglutaminase cross-
(Razzaq et al. 2019). linked beta-lactoglobulin and their effects
on foaming properties. Food Hydrocoll
KESIMPULAN 25: 1758-1765. doi:
10.1016/j.foodhyd.2011.02.033
Fraksi protein dari saluran pencernaan Bouvier ESP, Koza SM (2014) Advances in
udang vaname (L. vannamei) yang memiliki size-exclusion separations of proteins
nilai aktivitas enzim proteolitik tertinggi and polymers by UHPLC. Trends Anal
terdapat pada fraksi 102 dengan nilai sebesar Chem 63: 85-94. doi:
96,3924 U mL–1, sedangkan aktivitas lipolitik 10.1016/j.trac.2014.08.002
tertinggi terdapat pada fraksi 100 dengan nilai Chandra P, Enespa, Singh R, Arora PK (2020)
sebesar 531,07 U mL–1. Aktivitas enzim dari Microbial lipases and their industrial
hasil fraksinasi kromatografi filtrasi gel applications: a comprehensive review.
mengalami peningkatan sebanyak 5,35× Microb Cell Fact 19: 169. doi:
untuk protease dan 6× untuk lipase 10.1186/s12934-020-01428-8
dibandingkan aktivitas enzim dari ekstrak Chitte R, Chaphalkar S (2017) The world of
sampel yang belum difraksinasi. Selain proteases across microbes, insects, and
kromatografi filtasi gel, pemurnian akan lebih medicinal trees, Pp 517-524. In:
baik jika dilakukan kombinasi teknik Chakraborti S, Dhalla NS (Eds).
kromatografi sesuai dengan karakteristik Proteases in Physiology and Pathology.
enzim. Springer, Singapore. doi: 10.1007/978-
981-10-2513-6_24
UCAPAN TERIMA KASIH Corteel M (2013) White spot syndrome virus
infection in P. vannamei and M.
Terima kasih kepada Lemlitbang rosenbergii: experimental studies on
Universitas Muhammadiyah Prof. Dr. Hamka susceptibility to infection and disease.
atas dana penelitian yang diberikan dengan Thesis, Ghent University, Belgium
nomor surat kontrak 751/F.03.07/2019. Datki Z, Olah Z, Macsai L, Pakaski M, Galik B,
Mihaly G, Kalman J (2019) Application of
DAFTAR PUSTAKA BisANS fluorescent dye for developing a
novel protein assay. PLoS One 14:
Andualema B, Gessesse A (2012) Microbial e0215863. doi:
lipases and their industrial applications: 10.1371/journal.pone.0215863
review. Biotechnol 11: 100-118. doi: Dirjen Perikanan Budidaya (2018) KKP:
10.3923/biotech.2012.100.118 Budidaya udang masih sangat potensial.
Anhar D (2018) Analisis SDS-PAGE enzim https://kkp.go.id/djpb/artikel/8688-kkp-
pencernaan pada fraksi ammonium sulfat budidaya-udang-masih-sangat-
80% dari saluran pencernaan udang potensial. Accessed 7 Oct 2020
vannamei (Litopenaeus vannamei). Gunarti DR, Rahmi H, Sadikin M (2013)
Skripsi, Universitas Muhammadiyah Prof. Isolation and purification of thiamine
Dr. Hamka binding protein from mung bean. HAYATI
Anthis NJ, Clore GM (2013) Sequence-specific J Biosci 20: 1-6. doi: 10.4308/hjb.20.1.1
determination of protein and peptide Gurung N, Ray S, Bose S, Rai V (2013) A
concentrations by absorbance at 205 nm. broader view: microbial enzymes and
Protein Sci 22: 851-858. doi: their relevance in industries, medicine,

201
Analisis Hasil Fraksinasi Protease dan Lipase... Rahmi et al.

and beyond. Biomed Res Int 2013: daun kipas. Indones J Chem Res 2:
329121. doi: 10.1155/2013/329121 182-189
Hong P, Koza S, Bouvier ESP (2012) Size- Ong ILH, Yang KL (2017) Recent
exclusion chromatography for the developments in protease activity assays
analysis of protein biotherapeutics and and sensors. Analyst 142: 1867-1881.
their aggregates. J Liq Chromatogr Relat doi: 10.1039/c6an02647h
Technol 35: 2923-2950. doi: Purwanto MGM (2016) The role and efficiency
10.1080/10826076.2012.743724 of ammonium sulphate precipitation in
Houde A, Kademi A, Leblanc D (2004) Lipases purification process of papain crude
and their industrial applications: an extract. Procedia Chem 18: 127-131 . doi:
overview. Appl Biochem Biotechnol 118: 10.1016/j.proche.2016.01.020
155-170. doi: 10.1385/ABAB:118:1- Raveendran S, Parameswaran B, Ummalyma
3:155 SB, Abraham A, Mathew K, Madhavan A,
Huang Z, Wang Y, Qiu M, Sun L, Deng Y, Wang Rebello S, Pandey A (2018) Applications
X, Bi S, Gooneratne R, Zhao J (2019) of microbial enzymes in food industry.
Effects of T-2 toxin on digestive enzyme Food Technol Biotechnol 56: 16-30. doi:
activity, intestinal histopathology and 10.17113/ftb.56.01.18.5491
growth in shrimp Litopenaeus vannamei. Razzaq A, Shamsi S, Ali A, Ali Q, Sajjad M,
Sci Rep 9: 13175. doi: 10.1038/s41598- Malik A, Ashraf M (2019) Microbial
019-49004-4 proteases applications. Front Bioeng
Kandra P, Challa MM, Jyothi HKP (2012) Biotechnol 7: 110. doi:
Efficient use of shrimp waste: present 10.3389/fbioe.2019.00110
and future trends. Appl Microbiol Ribeiro BD, de Castro AM, Coelho MAZ,
Biotechnol 93: 17-29. doi: Guimaraes DM (2011) Production and
10.1007/s00253-011-3651-2 use of lipases in bioenergy : a review from
Katoch R (2011) Analytical Techniques in the feedstocks to biodiesel production.
Biochemistry and Molecular Biology. Enzyme Res 2011: 615803. doi:
Springer Science, New York. doi: 10.4061/2011/615803
10.1007/978-1-4419-9785-2 Sajuthi D, Suparto I, Yanti, Praira W (2010)
KKP (2019) Pengembangan komoditas Purifikasi dan pencirian enzim protease
unggulan strategis perikanan budidaya, fibrinolitik dari ekstrak jamur merang.
dan tata kelola perizinan untuk memacu Makara Sains 14: 145-150. doi:
investasi. Workshop Pembangunan 10.7454/mss.v14i2.727
Perikanan Budidaya berkelanjutan. Supriyatna A, Amalia D, Jauhari AA,
Kementerian Kelautan dan Perikanan. Holydaziah D (2015) Aktivitas enzim
https://wri- amilase, lipase, dan protease dari larva. J
indonesia.org/sites/default/files/Bappena Istek 9: 18-32
s - Double Tree%2C 9 September Wingfield PT (2015) Overview of the purification
2019.pdf. Accessed 7 Oct 2020 of recombinant proteins. Curr Protoc
Liu Q, Sun S, Piao M, Yang JY (2013) Protein Sci 80: 61.1-6.1.35. doi:
Purification and characterization of a 10.1002/0471140864.ps0601s80
protease produced by a Planomicrobium Worthington CC, Worthington V, Worthington A
sp. L-2 from gut of Octopus vulgaris. Prev (2019) Introduction to Enzymes.
Nutr Food Sci 18: 273-279. doi: Worthington Biochemical Corporation,
10.3746/pnf.2013.18.4.273 Lakewood USA
Livshits MA, Khomyakova E, Evtushenko EG, Younes I, Rinaudo M (2015) Chitin and
Lazarev VN, Kulemin NA, Semina SE, chitosan preparation from marine
Generozov EV, Govorun VM (2015) sources. Structure, properties and
Isolation of exosomes by differential applications. Mar Drugs 13: 1133-1174.
centrifugation: Theoretical analysis of a doi: 10.3390/md13031133
commonly used protocol. Sci Rep 5: Yusriah, Kuswytasari ND (2013) Pengaruh pH
17319. doi: 10.1038/srep17319 dan suhu terhadap aktivitas protease
Malle D, Telussa I, Lasamahu AA (2015) Penicillium sp. J Sains dan Seni POMITS
Isolasi dan karakterisasi papain dari 2: 48-50. doi:
buah pepaya (Carica papaya L) jenis 10.12962/j23373520.v2i1.2744

202