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Present Ac I On Citric o

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PRODUCCION DE ACIDO CITRICO

POR Aspergillus niger EN


FERMENTACION SUMERGIDA
LABORATORIO DE BIOSINTESIS Y
BIOTECNOLOGIA
SEMESTRE 2017-1
PRODUCCION DE ACIDO CITRICO POR Aspergillus niger
EN FERMENTACION SUMERGIDA
OBJETIVOS
- Obtener ácido cítrico mediante
fermentación en líquido.

- Hacer el seguimiento de la
fermentación evaluando la
concentración de sustrato, pH,
acidez y biomasa.

- Realizar el estudio cinético de


la fermentación , mediante el
cálculo de diferentes
rendimientos.
Historia
• El descubrimiento del ácido cítrico se atribuye al alquimista
islámico Jabir Ibn Hayyan en el siglo octavo después de Cristo.

• La producción de ácido cítrico a nivel industrial comenzó en


1860, basado en la industria italiana de los cítricos. En 1860
comenzó a obtenerse el ácido cítrico de las frutas mediante el
uso de sales de calcio.

• Este proceso tenía un rendimiento muy bajo. Eran


necesarias de 30a 40 toneladas de limones
para obtener una tonelada de ácido cítrico.
Historia
• Tres décadas después se observó que algunos hongos
producen ácido cítrico cuando crecen en un medio azucarado.

En 1917, el químico americano James Currie y Claudio Colán descubrió que


ciertos cultivos de Aspergillus niger podían ser productores eficientes de
ácido cítrico, y Pfizer comenzó la producción a escala industrial usando esta
técnica dos años más tarde.
Historia

• En 1923, los hermanos Pfizer logran obtener


ácido cítrico a partir de Aspergillus níger con la
fermentación del azúcar.
Actualmente casi el 100% de la demanda de este producto
se obtiene por Fermentación Sumergida.

Fermentadores de 10, 000 L. Tanques profundos


• También en ocasiones se realiza en tanques no
profundos (fermentación de superficie o
fermentación semisólida).
caña de azúcar como materia prima.
Las melazas son la parte no cristalizable del
azùcar.
La fermentación produce ácido cítrico
en solución que luego se purifica, concentra
y cristaliza.

Acido orgánico tricarboxílico C6H8O7


PESO MOLECULAR 192 g/mol
Produccion Industrial de ácido cítrico por
Fermentación Sumergida
Usos del Acido Cítrico

INDUSTRIA DE ALIMENTOS
Bebidas Saborizante y regulador de pH; incrementa la efectividad de los
conservantes microbianos.

Dulces y conservas Acidulante y regulador de pH para lograr una óptima gelificación.

Caramelos Acidulante y regulador de pH con el objetivo de alcanzar


la máxima dureza de los geles.

Verduras procesadas En combinación con ácido ascórbico, previene la


oxidación.

Alimentos congelados Ayuda a la acción de los antioxidantes, inhibe el


deterioro del sabor y el color.

Frutas y hortalizas enlatadas Disminuye el pH, al actuar como quelante; previene la


oxidación enzimática y la degradación del color, resalta el sabor.
COSMÉTICOS Y PRODUCTOS DE TOCADOR
Constituyente de formulaciones, contribuyendo a mejorar la
vida de anquel, la eficiencia y la apariencia del producto final.
Fácilmente se observa su uso en productos para el cuidado del
cabello, perfumes, cremas, lociones desodorantes, quita-
esmaltes y jabones.
USO FARMACÉUTICO
Con el bicarbonato de sodio y otras sales, al
agregarse agua se produce una bebida
salina gaseosa, efervescente y
refrescante. Esta combinación es
especialmente efectiva en productos
donde se desea una disolución rápida,
buena apariencia visual y sabores
singulares.

Uno de los principales


usos del ácido cítrico es
en la producción de
Alka Seltzer.
Estabilizador de
ingredientes activos por
su acción antimicrobiana
y antioxidante.

En muchas formulaciones se
usan mezclas del ácido
cítrico y sus sales de sodio
y potasio para estos fines.
• Como anticoagulante • Tubos Vacutainer con
especial para bancos de citrato de sodio
sangre
OTRAS INDUSTRIAS
En la formulación de detergentes biodegradables. Las ventajas principales de
los citratos en las formulaciones de detergentes son su biodegradabilidad
y la facilidad de tratamiento, particularmente en formulaciones que
contienen zeolita. Para contener los costos las grandes empresas de
detergentes generalmente compran ácido cítrico y lo convierten en el
citrato requerido.
AGROINDUSTRIAL
Tratamiento de terrenos se usa con el sulfato de calcio. Ayuda a mejorar la
asimilación de los micronutrientes por parte de las plantas y el sulfato para el
control de la alcalinidad de los suelos.

Se conoce también el uso del ácido cítrico como dispersante en la aplicación


de pesticidas y herbicidas.
CURTIDO DE PIELES

La industria textil
en el área de teñido,
la industria de cueros
y marroquinería,
la industria del papel.
Aspergillus niger
A. niger es el principal microorganismo que se utiliza para
la obtencion del ácido cítrico.
También se utilizan:
A. wentii
Penicillium sp
Levaduras
Aspergillus niger
A Agar papa dextrosa
Preparación en fresco de A. niger
Impronta
Estructura de A. niger.
Cumple con las características de un
microorgasnismo de interés biotecnológico

- Estar disponible en cultivo puro


- Ser genéticamente estable
- Ser fenéticamente estable
- Crecer en cultivos a gran escala
- Crecer y producir la sustancia (efecto) deseada
rápidamente
- Crecer en un medio y en condiciones rentables
económicamente
- No ser patógeno
-Ser GRAS (Generalmente reconocido
como seguro) clasificación que otorga
la FDA a compuestos que están
permitidos para consumo humano
Bioquímica del Ciclo

1 2
Cis aconitato

3
Iso citrato

1 CITRATO SINTASA
2 ACONITASA
3 ISOCITRATO DEHIDROGENASA

Bajo condiciones normales de


crecimiento el objetivo del ciclo
es la generacion de poder
reductor
Metabolitos primarios

• Generación de ATP
• Procesos biosintéticos Metabolitos primarios
• Etapa exponencial de crecimiento

Aminoácidos
Proteínas
Ácidos nucléicos
Metabolito secundario
¿Que pasa cuando el microorganismo deja de crecer
o se agotan los nutrientes?
• a) El moo entra en fase estacionaria

• b) Citrico enzimas 2 y 3 disminuyen hasta 10 veces.

• c) Citrico, agente quelante capta el Fe2+, las enzimas dependientes


lo necesitan como cofactor.
El hongo es un hongo sideroforo , que necesita a Fe2+ para crecer, el citrato es un agente que lo atrapa

Los compuestos que producen y acumulan los


moos en fase estacionaria, se consideran
metabolitos secundarios, ya que no es necesario
para el crecimiento del moo.
Metabolito secundario
• Los compuestos que producen y acumulan los moos en fase estacionaria, se consideran
metabolitos secundarios, ya que no es necesario para el crecimiento del moo.

• No cumplen funciones esenciales, su ausencia no es fatal para el organismos.

• En estado natural, los microorganismos los producen para su sobrevivencia, ante una
situación de estrés.

• Se producen en pequeñas cantidades.

• No de forma generalizada por todos los organismos, restringido solo a algunas especies.
Etapas de crecimiento

Durante la ideofase aumenta 1


Citrato sintasa hasta 10 veces Ideofase
y disminuyen 2 y 3
Tropofase Anafase
Via o rutas anapleroticas
• La citrato sintasa no puede ser solamente responsable del mantenimiento de la
actividad del ciclo de los ácidos tricarboxílicos, ya que el ciclo se detendría si el
ácido cítrico fuera removido. Por lo tanto deben existir durante la fase de
producción distintas secuencias que rellenan los intermediarios del ciclo de los
ácidos tricarboxílicos.
• a) Fosfoenolpiruvato+CO2 PEP CARBOXIQUINASA Oxalacetato+ ATP

• b) Pirutavo + CO2 PIRUVATO CARBOXILASA Oxalacetato+ ATP


Condiciones de Fermentacion
• Que hacer para que el microorganismo llegue a fase estacionaria?
• Manipular condiciones para favorecer la produccion de acido citrico

– Sustrato que se facilmente metabolizable, a una concentracion alta,


alrededor del 10 al 14%, para favorecer la acumulacion de citrico y no se
produzca acido oxalico, ademas proporciona el C para la acumulacion de
citrico.

– Bajas concentraciones de Fe, Zn y Mg , se limita el crecimiento , el moo


entra en fase estacionaria.

– Bajas concetraciones de NH4 SO4, PO4, 10-4, para entrar a fase


estacionaria.
– Agitacion elevada , de 175 rpm, para favorecer la formacion de pellets

– pH < 3.5 para que no se produzcan otros acidos organicos como el


gluconico u oxalico.

– Tanques de fermentacion de acero inoxidable, para evitar corrosion por


citrico
Crece en forma sumergida en forma de esferas (pellets)
constituidas por hifas enrolladas sobre sí mismas. Para una
buena fermentación, con un diámetro de a 1- 1.5mm

Acido Citrico

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