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    Técnica de PCR

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    Cristy López Rivas
    La técnica de PCR permite la amplificación exponencial de una molécula de ADN a través de varios ciclos que consisten en la desnaturalización del ADN, el alineamiento de oligonucleótidos complementarios, y la extensión de la cadena de ADN por una polimerasa. Kary Mullis desarrolló esta técnica en 1985, la cual genera millones de copias de un fragmento de ADN específico y resultó relevante para la secuenciación de ácidos nucleicos.

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    Técnica de PCR

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    Cristy López Rivas
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    La técnica de PCR permite la amplificación exponencial de una molécula de ADN a través de varios ciclos que consisten en la desnaturalización del ADN, el alineamiento de oligonucleótidos complementarios, y la extensión de la cadena de ADN por una polimerasa. Kary Mullis desarrolló esta técnica en 1985, la cual genera millones de copias de un fragmento de ADN específico y resultó relevante para la secuenciación de ácidos nucleicos.

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    Técnica del PCR

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    La técnica de PCR permite la amplificación exponencial de una molécula de ADN a través de varios ciclos que consisten en la desnaturalización del ADN, el alineamiento de oligonucleótidos complementarios, y la extensión de la cadena de ADN por una polimerasa. Kary Mullis desarrolló esta técnica en 1985, la cual genera millones de copias de un fragmento de ADN específico y resultó relevante para la secuenciación de ácidos nucleicos.

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    Técnica de PCR

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    Cristy López Rivas
    La técnica de PCR permite la amplificación exponencial de una molécula de ADN a través de varios ciclos que consisten en la desnaturalización del ADN, el alineamiento de oligonucleótidos complementarios, y la extensión de la cadena de ADN por una polimerasa. Kary Mullis desarrolló esta técnica en 1985, la cual genera millones de copias de un fragmento de ADN específico y resultó relevante para la secuenciación de ácidos nucleicos.

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    Tcnica de PCR

    En 1985, el qumico Kary Mullis desarroll la tcnica de la reaccin en cadena


    de la polimerasa (PCR). Este mtodo permite la amplificacin exponencial de
    una molcula de ADN, generando millones de copias de un fragmento. Esto se
    lleva acabo con oligonucletidos que contienen un grupo extremo 3 libre, que
    es complementario con la cadena molde de ADN. Los oligos funcionan como
    punto de inicio para la adicin de nucletidos y para copiar la cadena molde en
    el PCR. Una vez que el oligonucletido se une a su blanco, la polimerasa de
    ADN puede seguir extendiendo la hebra complementaria. En una reaccin
    tpica de PCR se usan dos oligonucletidos que flanquean la regin de ADN
    que se desea amplificar. El nmero de copias del fragmento de ADN que se
    encuentra entre los dos oligonucletidos se amplifica con varios ciclos de
    reaccin. Cada ciclo de una reaccin de PCR consta de tres pasos.
    Desnaturalizacin de las hebras de ADN- El templado es el fragmento de
    ADN que se desea amplificar, junto con la regin que reconocen los
    oligonucletidos. Para que el oligonucletido se pueda unir, es necesario que el
    templado sea de cadena sencilla. As que este paso del PCR es para separar
    las cadenas de ADN, si el templado es de doble cadena. Adems, en este paso
    se deshace cualquier tipo de estructura secundaria formada entre los
    segmentos complementarios de los oligonucletidos y que pudiera interferir con
    su habilidad de unirse al templado. Tpicamente, la desnaturalizacin del ADN
    se hace con una incubacin breve del tubo de reaccin a una temperatura de
    94 C.

    Temperatura de alineamiento - Esta temperatura se calcula con base en las


    caractersticas de los oligos que sern utilizados. La temperatura a la cual la
    mitad de los oligos estn unidos a su blanco (Tm), se calcula tomando en
    cuenta el tamao de los oligos y su contenido de GC (%GC). Despus de
    Figura 7. La reaccin de PCR consiste en varios ciclos de 3 pasos. Las
    temperaturas y los tiempos indicados son ejemplos y varan dependiendo de
    las caractersticas del ADN que se desee amplificar.24 desnaturalizar las
    hebras de ADN, se incuba a una temperatura cercana a la Tm, para que los

    oligos puedan encontrar su regin complementaria en el templado. y se unan a


    ella.
    Extensin de la cadena de ADN
    Este es el ltimo paso de un ciclo de reaccin de PCR y normalmente se hace
    a 72 C, la temperatura ptima para la polimerasa de ADN. En este paso, la
    polimerasa extiende la cadena complementaria del templado. La sntesis de la
    cadena

    complementaria

    tiene

    como

    punto

    de

    inicio

    el

    complejo

    oligonucletido/templado. El tiempo de incubacin de este paso depende del


    tamao del segmento que se desea amplificar. Como regla general se
    considera que la polimerasa puede sintetizar 1,000 bases por minuto. En la
    reaccin de PCR, tpicamente, se llevan acabo de 30 a 40 ciclos de estos tres
    pasos, para lograr la amplificacin deseada. La tcnica de PCR result
    relevante para la secuenciacin de cidos nucleicos debido a que se adapt al
    mtodo de Sanger, de tal forma que se puede sintetizar un mayor nmero de
    copias de los fragmentos con una terminacin especfica. De esta forma, la
    seal del marcaje que lleva cada fragmento aumenta, y es posible obtener
    lecturas ms claras de los fragmentos grandes, lo que a su vez, permite la
    lectura de secuencias ms largas, una vez que se pueda superar el problema
    de la resolucin de los geles.

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