Este documento describe un método para determinar la concentración de albúmina en suero mediante el uso de un reactivo de verde bromocresol. La albúmina se combina selectivamente con el reactivo a pH 4.2 y el aumento de absorbancia a 630 nm es proporcional a la concentración de albúmina. El documento también proporciona instrucciones para la recolección de muestras, el procedimiento, los cálculos, el control de calidad y los valores esperados.
Este documento describe un método para determinar la concentración de albúmina en suero mediante el uso de un reactivo de verde bromocresol. La albúmina se combina selectivamente con el reactivo a pH 4.2 y el aumento de absorbancia a 630 nm es proporcional a la concentración de albúmina. El documento también proporciona instrucciones para la recolección de muestras, el procedimiento, los cálculos, el control de calidad y los valores esperados.
Este documento describe un método para determinar la concentración de albúmina en suero mediante el uso de un reactivo de verde bromocresol. La albúmina se combina selectivamente con el reactivo a pH 4.2 y el aumento de absorbancia a 630 nm es proporcional a la concentración de albúmina. El documento también proporciona instrucciones para la recolección de muestras, el procedimiento, los cálculos, el control de calidad y los valores esperados.
Este documento describe un método para determinar la concentración de albúmina en suero mediante el uso de un reactivo de verde bromocresol. La albúmina se combina selectivamente con el reactivo a pH 4.2 y el aumento de absorbancia a 630 nm es proporcional a la concentración de albúmina. El documento también proporciona instrucciones para la recolección de muestras, el procedimiento, los cálculos, el control de calidad y los valores esperados.
Descargue como PDF, TXT o lea en línea desde Scribd
Descargar como pdf o txt
Está en la página 1/ 2
JUEGO DE REACTIVOS PARA ALBUMINA
Para la determinación cuantitativa de la concentración de
albúmina en suero. DETERIORO DEL REACTIVO INTRODUCCION El reactivo debe ser claro, de color verde amarillento. Si ha La albúmina es la más abundante de las proteínas ocurrido turbidez o precipitación, debe desecharse. constituyentes del suero. Se sintetiza en el hígado y se caracteriza por su habilidad para cambiar su configuración. RECOLECCION DE LA MUESTRA Esta afinidad esférica permite a la molécula de albúmina 1. Las muestras deben ser sueros y libres de hemólisis. servir como portador de muchas sustancias tales como 2. Evite la hemólisis excesiva, pues 100 mg/dl de bilirrubina, ácidos grasos, varias drogas, así como hemoglobina equivalen a 100 mg/dl de albúmina. antibióticos. La albúmina también realiza funciones de 3. La albúmina en el suero es estable por una semana a mantener la presión osmótica. temperatura ambiente (18 – 30°C) y aproximadamente un mes cuando se refrigera entre 2 y 8°C protegido de la Los niveles elevados de albúmina se asocian a la evaporación. deshidratación. Los niveles bajos de albúmina son indicadores potenciales de mala nutrición, enfermedad SUSTANCIAS QUE INTERFIEREN hepática, desordenes renales y artritis reumatoidea. La ampicilina y otros medicamentos afectan seriamente las propiedades de desarrollo de color de la albúmina. También Los antiguos métodos de funcionamiento para la se recomienda que solo se utilicen estándares y controles de determinación de albúmina sérica eran muy laboriosos y albúmina humana con este procedimiento. Las propiedades han sido remplazados por métodos de desarrollo de color. de desarrollar color de las albúminas de diferentes especias El uso del verde debromocresol en la reacción se ha varían mucho. convertido en el método preferido por su alta especificidad por la albúmina y no es interferido por la hemólisis, la MATERIALES REQUERIDOS PERO NO bilirrubina y los salicilatos. PROVISTOS 1. Pipetas de precisión. PRINCIPIO 2. Porta tubos. La albúmina sérica se combina selectivamente al verde de 3. Reloj. bromocresol a un pH de 4.2. El aumento de absorbancia del 4. Espectrofotómetro. complejo de color resultante, leído a 630 nm, es proporcional a la concentración de albúmina. INSTRUCCIONES GENERALES El reactivo para albúmina puede usarse tanto en métodos COMPOSICION DEL REACTIVO manuales como automatizados. 1. Verde bromocresol (BCG) 0.25 mM, buffer pH 4.0 más o menos 0.1, ingredientes no reactivos y estabilizadores. PROCEDIMIENTO MANUAL 2. Estándar: Fracción V de albúmina bovina con 1. Rotule tubos: Blanco, estándar, control, pacientes, etc. estabilizador. 2. Pipetee 1.5 ml de reactivo a cada tubo. 3. Agregue 0.01 ml (10 ul) de muestra a los tubos ADVERTENCIAS Y PRECAUCIONES respectivos, mezcle, y déjelos a una temperatura 1. Para diagnóstico “In Vitro”. ambiente durante 5 min. PRECAUCION: Los reactivos para diagnóstico “In 4. Ajuste a cero el espectrofotómetro con el blanco a 630 vitro” pueden ser peligrosos. nm. (Rango de Longitud de onda) Manipúlese de acuerdo a un buen procedimiento de 5. Lea y anote las absorbancias de todos los tubos. laboratorio que evite la ingestión y el contacto con ojos y piel. ● VOLUMENES ALTERNATIVOS: 0.02 ml de El reactivo es una solución ácida. Enjuague con muestra a 3.0 ml de reactivo. abundante agua si existe el contacto. ● SE PUEDE USAR CALIBRADOR TC-MULTI 2. Las muestras de suero deben considerarse infecciosas y PROPOSITO PARA REMPLAZAR AL deben manipularse adecuadamente. ESTÁNDAR 3. Evite la ingestión. LIMITES DEL PROCEDIMIENTO ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD 1. Las propiedades de generar color de la albúmina, otra 1. Almacénese el reactivo a temperatura ambiente (18 – que no sea humana, difiere entre las especies. 30°C). 2. Las muestras con valores por encima de 8.0 g/dl deben 2. Refrigérese el estándar de albúmina. (2 – 8°C). diluirse con salina 0.9% en dilución 1:1 y multiplicar los resultados por dos. Muestras con resultados por debajo de 0.5 g/dl deben realizarse electroforéticamente. 3. Los sueros severamente lipémicos deben realizarse con blanco de muestra. A. Agregue 0.02 ml (20 ul) de muestra a 3.0 ml de agua destilada y lea la absorbancia contra el agua destilada a 630 nm. B. Reste la absorbancia del blanco de suero del test de absorbancia y use la absorbancia corregida para los cálculos.
CALCULOS Abs.= Absorbancia
Abs. de la muestra x Conc. del estándar = Albúmina en
g/dl Abs. del estándar
Ejemplo: Si la absorbancia de la muestra = 0.455 y la
absorbancia del estándar es 0.705 y la concentración del Estándar = 5.0, tendremos:
0.455 x 5.0 = 3.23 g/dl
0.705 E CALIDAD CONTROL DE CALIDAD Se recomienda que se incluyan controles en cada corrida de muestras. Se pueden utilizar patrones comerciales con valores conocidos. El valor consignado del control debe confirmarse con el método utilizado. Si falla la obtención de rango de valores en el desarrollo del examen habrán indicios de deterioro del reactivo, fallo instrumental, o procedimiento de técnica indebido.
VALORES ESPERADOS Entre 3.5 – 5.3 g/dl
Se recomienda mucho que cada laboratorio establezca su
propio rango normal.
CARACTERISTICAS 1. Linealidad: De 0.5 – 8.0 g/dl. 2. Sensibilidad: Basada en una resolución instrumental de A=0.001 el método presente tiene una sensibilidad de 0.005 g/dl. 3. Comparación: Un estudio comparativo entre éste método y otro similar arrojó un coeficiente de correlación de 0.99 con una regresión de y= 0.96 + 0.1.
Precisión:
Dentro de la corrida (repetibilidad) Valor (mg/dl) D.S. C.V.% 3.3 0.07 2.1 2.7 0.07 2.4
De corrida a corrida Valor (mg/dl) D.S. C.V.% 3.3 0.06 1.8 2.7 0.08 2.9
