Bioquimica Del Nitrogeno y Regulacion Genetica

Práctica 2:
Extracción y aislamiento de ADN
Objetivo
Efectuar la extracción del ADN de células vegetales.
Introducción
En la década de los cincuenta, el campo de la biología fue convulsionado por el
desarrollo del modelo de la estructura del ADN. James Watson y Francis Crick en 1953
demostraron que consiste en una doble hélice formada por dos cadenas.
El ADN es un ácido nucléico formado por nucleótidos. Cada nucleótido consta de tres
elementos: un azúcar: desoxirribosa en este caso (en el caso de ARN o ácido ribonucleico, el
azúcar que lo forma es una ribosa), un grupo fosfato y una base nitrogenada. Si la molécula
tiene sólo el azúcar unido a la base nitrogenada entonces se denomina nucleósido.
Actualmente es muy importante el conocimiento del ADN pues permite explicar el

genoma humano, este favorece directamente el esclarecimiento de crímenes, así como
establecer el diagnóstico molecular de enfermedades como cirrosis, artritis reumatoide,
síndrome hepatorrenal, por mencionar algunos. Al mismo tiempo es posible comprender
tópicos como mutación, clonación y transgénicos.
Materiales y reactivos
Materiales: Reactivos:
1 Vaso de precipitado ( 200 ml) Fruta madura (de tipo pulposa)
1 Probeta Alcohol etílico o isopropílico (-10 C)
1 Bolsa ziploc (plástico grueso) Cloruro de sodio
1 Agitador de vidrio Bromuro de etidio (solución)
1 Papel filtro para cafetera Detergente líquido
2 Tubos cónicos para centrifuga Ablandador de carnes
3 Tubos para microcentrífuga de 1 mL Agua destilada
Pipeta con pipeteador (5mL)
Procedimiento
1. Colocar la fruta, sin cáscara, en la bolsa.
2. Homogeneizar el tejido del fruto triturando la fruta con las manos hasta obtener
una consistencia uniforme.
3. Agregar 2mL de detergente líquido a la pasta obtenida, cerrar y homogeneizar
nuevamente. Si es necesario agregue un poco de agua destilada.
4. Filtrar el extracto de frutas utilizando una pieza de papel filtro para cafetera,
recolectando el contenido en el vaso de precipitados.
5. Agregar 0.1 a 0.5 g de ablandador de carne y homogeneizar nuevamente.
6. Agregar 0.1 a 0.5 g de cloruro de sodio
7. Colocando el vaso de manera inclinada agregar el alcohol utilizado (frio) por las
paredes del vaso, evitando agitar la mezcla. Se obtendrán dos fases una acuosa
(inferior) y otra orgánica (superior).
8. Dejar reposar un par de minutos y con la varilla de vidrio recolectar las hebras de
color blanco (ADN extraído) entre las dos fases. Realizarlo efectuando movimientos
circulares hacia el centro del vaso para recuperarlo fácilmente.
9. Transferir a un tubo cónico para microcentrífuga.
10. A fin de comprobar la obtención de ADN, tomar una pequeña muestra y colocarla en
un tubo para microcentrífuga.
11. Agregar bromuro de etidio y observar bajo luz UV.
a. Es importante que este paso se realice por una sola persona, utilizando
protección ocular, guantes y bata de manga larga. Recuerde que el bromuro
de etidio es mutagénico.
12. Centrifugar por 10 minutos a 13000 RPM. Remover el sobrenadante con la ayuda de
una pipeta (con pipeteador). Lavar nuevamente con alcohol frio si es necesario.
13. Transferir el ADN a un tubo para microcentrífuga y dejar que se evapore el solvente
al menos media hora.
14. Almacenar el ADN según lo indique el profesor para las prácticas posteriores.
Sugerencias didácticas
Repetir el experimento utilizando otras fuentes de ADN (tejido animal, saliva
humana, cultivo bacteriano, diversos frutos) o emplear jugo de piña o papaya como
sustituto del ablandador de carnes.
Cuestionario
1. ¿Cuál es la función del detergente líquido?
2. ¿Cuál es el agente o compuesto activo del detergente líquido?
3. ¿Cuál es la función del ablandador de carne?
4. ¿Cuál es la función del cloruro de sodio?
5. ¿Por qué es necesario agregar el alcohol al extracto de fruta?
6. ¿De qué manera actúa el alcohol en la obtención del ADN?
7. ¿Para qué se agrega bromuro de etidio a la muestra de ADN?
Referencias
1. Extracción Casera de ADN
https://notaminima.wordpress.com/2013/10/24/extraccion-adn/
2. Extracción del ADN

https://sites.google.com/site/parecidoconpapa/extraccion-del-adn
3. How to Extract DNA from Fruits

http://www.funsci.com/fun3_en/dna/dnaen.htm
4. Cómo extraer ADN de cualquier cosa viviente

http://learn.genetics.utah.edu/es/extraction/

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