Práctica 4

Universidad Autónoma de
Campeche
Facultad de Ciencias Químico-

Biológicas
Lic. Como Ingeniería en alimentos y

biotecnología
MICROBIOLOGIA GENERAL
GRADO: 4to semestre

GRUPO: A
PRACTICA 4: “PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO”
PRESENTA:
MARGLETH TELLO RAMOS

AARON CAN ESTRADA
FASE II
SAN FRANCISCO DE CAMPECHE, CAMPECHE FEBREBRO 2020

PRÁCTICA 4
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
Conocimientos Previos
 Nutrientes en microorganismos
 Cálculos para preparar medios de cultivo
Propósito
Aprender sobre la preparación, el uso y manejo de medios de cultivo empleados en el

laboratorio de Microbiología, y así poder detectar por medio de crecimiento bacteriano, las
colonias que se forman en el hagar y así detectar algunas bacterias nocivas para la salud.
Marco Teórico
Un método ampliamente y necesariamente utilizado para el estudio de microorganismos

como bacterias, hongos y cianobacterias, es cultivar a los microorganismos en medios
artificiales que cubran las necesidades nutricionales de los mismos para su estudio. Un
medio de cultivo es cualquier sustancia líquida o sólida que puede ser utilizado en el
laboratorio para que crezcan los microorganismos. Este medio puede ser un substrato
natural sobre el cual crecen los microorganismos en forma habitual.
Cualquiera que sea el medio debe de incluir todo lo necesario para el crecimiento de un
microorganismo particular que se desee cultivar:
1. Agua.
2. Compuestos nitrogenados: aminoácidos, proteínas, sales inorgánicas.
3. Fuente de energía como carbohidrato para un quimioheterótrofo, sales inorgánicas

para un quimioautótrofo.
4. Micronutrientes o elementos traza, que son necesarios para el desarrollo de los
microorganismos y se requieren en concentraciones entre 0.1 g y 0.01 gramo.
5. En ocasiones vitaminas y/o otras sustancias inductoras de crecimiento y otras

sustancias específicas de cada grupo microbiano.
6. Para medios sólidos se utiliza un agente solidificante llamado agar que se disuelve a
temperatura de 100 oC o cercana a esta y solidifica a partir de los 40 oC
Los medios de cultivo se utilizan con diferentes fines: aislamiento de microorganismos,

mantenimiento y conservación de los cultivos, determinación de las potencialidades
metabólicas con el fin de la caracterización genética, así como el mantenimiento del cultivo
en constante crecimiento para fines industriales e investigativos, para la obtención de
biomasa y con fines diagnósticos.
Una vez preparado el medio de cultivo debe ser inoculado con el microorganismo de interés
y después incubado bajo las condiciones que favorezcan mejor su crecimiento, temperatura,
oxígeno, presencia o ausencia de luz o ciclos de luz y obscuridad.
De acuerdo a su consistencia se pueden clasificar en:
Líquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote.
Sólidos: Los nutrientes quedan en una matriz sólida formada por la adición de un agente
gelificante generalmente agar a una concentración entre el 1.5 y 2%, con estos medios los
microorganismos permiten observar sus características macroscópicas de
crecimiento de un conjunto de células confinado a un especio limitado llamado colonia, para
distinguir entre microorganismos distintos en una población.
Semisólidos: Contienen 0.5% de agar y son empleados para el estudio de movilidad en

bacterias
De acuerdo a su consistencia se pueden clasificar en:

Definidos: Aquellos de los que se conoce su composición exacta, un ejemplo de estos son
los medios mínimos cuya función es proporcionar la menor cantidad de nutrientes para el
desarrollo de un microorganismo.
Complejos: En estos no se conoce su composición exacta del medio, generalmente utilizan

complejos de sustancias como el extracto de levadura, extracto de carne, peptonas entre
otras, aquí la composición química exacta se desconoce. Se utilizan para cultivar
microorganismos desconocidos con requerimientos nutricionales complejos.
De acuerdo a su consistencia se pueden clasificar como:
Medios selectivos: Presentan en su composición uno o más componentes que inhibirán la

aparición de microorganismos y permitirán la presencia de los deseados, además del ajuste
de otros parámetros como el pH, o la temperatura de cultivo que en conjunto ayudaran a la
selectividad del microorganismo.
Medios diferenciales: Permiten distinguir poblaciones de bacterias en base a

características morfológicas expresadas en las colonias formadas, como la producción de
un pigmento, por cambios de coloración debido a indicadores de pH, o halos de
degradación de algÚN componente en particular.
Medios de enriquecimiento: Presentan alGÚN componente que permite el crecimiento de

un microorganismo en particular y no contiene sustancias inhibidoras.
Medios enriquecidos: Para cultivar microorganismos que necesitan de una gran cantidad de
factores de crecimiento, generalmente extractos de fuentes proteicas en particular y no
contiene sustancias inhibidoras.
En la actualidad es posible adquirir tanto los constituyentes de los medios como los medios
completos deshidratados, de diferentes firmas productoras, como son Oxoid de Inglaterra,
Difco de EEUU o Bioxon en México. El almacenamiento de los medios de cultivo
deshidratados debe realizarse teniendo la precaución de cerrar perfectamente
bien los envases atendiendo a las condiciones del fabricante, generalmente en un lugar
fresco, alejados de fuentes de calor y lugares HÚMedos para evitar su hidratación.
Metodología
Recursos Materiales
Muestra Material
 1 Matraz Erlenmeyer de 500 ml

 1 Vaso de Precipitado de 500 ml
 1 Probeta Graduada de 100 ml
 9 Tubos con tapón de rosca de 15 x 150 mm
 10 Cajas de Petri estériles desechables de 9
 1 Pipeta serológica de 1, y 10 mL
 Espátulas o abatelenguas
 Papel aluminio
 2 Mecheros de Fischer o de bunsen
 1 par de guantes de asbesto
 Tiras reactivas para pH
 Contenedores para tubos
Equipo de laboratorio
 1 Balanza analítica
 1 Balanza granataria
 1 Autoclave
Reactivos
 Agua destilada
 NaOH y HCl (1 N y 0.1 N), 100 ml
 Agar papa dextrosa
 Agar de soya y tripticaseína
 Agar extracto de malta
 Carbonato de calcio
 100 ml Solución salina al 0.85%
Técnica
1. Verificar el material esté limpio y seco
2. Marcar el matraz con nombre y volumen del medio a preparar.
3. Elaborar un tapón para el matraz con algodón y gasa.
4. Ajustar el pH del agua al indicado por el fabricante del medio de cultivo
5. Medir el volumen de agua a usar, añadir a 1/3 de su capacidad, utilizar la cantidad

de matraces necesarios para completar el volumen total.
6. Pesar en papel aluminio el medio de cultivo a preparar, utilizar una espátula o

abatelenguas por cada medio de cultivo.
7. Colocar el medio pesado en el matraz (etiquetado) con agua destilada

previamente medida y calentar sobre el mechero con movimientos de agitación
suave hasta disolver y luego hasta ebullición sin dejar rebosar.
8. Colocar un tapón de algodón y gasa y cubrir con papel de estraza y encintar.
9. Los tubos vacíos se depositan en recipientes y se cubren con papel de estraza.

10. Colocar el material en las celdillas y esterilizar.
11. Retirar las celdillas al finalizar la esterilización y depositar los tubos en gradillas.
Enfriar los matraces con medio de cultivo hasta 70-80°C aproximadamente y
verter en cajas de Petri estériles.
12. Esperar a que gelifiquen y se enfríen las cajas.
13. Con sumo cuidado y bajo condiciones de esterilidad adicionar10 ml de solución

salina al primer tubo, a los demás agregar 9 ml de la misma.
14. Etiquetar las cajas indicando el medio de cultivo del que se trata, nÚMero de
equipo, grado y grupo. Apilar en grupos de cinco, encintar.
15. Incubar junto con los tubos a 37°C durante 24 horas en posición invertida.
16. Revisar después del periodo de incubación y verificar la ausencia de

contaminación.
17. Almacenar el material no contaminado en refrigeración, los tubos se depositan

en contenedores, las cajas en bolsas de plástico, hasta su uso.
18. Si se llegara a presentar contaminación en tubos y/o cajas disponer como lo

indica el diagrama ecológico (figura 1).
Cálculos
Para determinar la cantidad de medio de cultivo a emplear, tomar en consideración que

cada caja de Petri de 90 x 15 mm lleva una cantidad de 20 ml de medio de cultivo.
CMCU gr = ICPMC gr (MCP ml)

VIMCC ml
Donde:
CMCU: Cantidad de medio de cultivo a utilizar
ICPMC: Indicaciones comerciales de preparación del medio de cultivo a utilizar
MCP: Medio de cultivo a preparar
VIMCC: Volumen de preparación indicado en el medio de cultivo comercial.
Resultados y Discusión
Empezamos preparando el cultivo de manera correcta y precisa como lo dice el distribuidor.
USO:
El Agar para Métodos Estándar es un medio utilizado para el recuento de bacterias mesofílicas
aeróbias a partir de agua, aguas residuales, alimentos y productos lácteos. Este medio también es
conocido como Agar Cuenta Estándar.
FÓRMULA: (aproximada en g/L)
Peptona de Caseína
5.0 g
Dextrosa
1.0 g
Extracto de Levadura
2.5 g
Agar Bacteriológico
15.0 g
pH 7.0 ± 0.2
PREPARACIÓN:
Método
Suspender 23.5 g del medio en un litro de agua purificada. Calentar con agitación suave hasta su
completa disolución y hervir durante un minuto. Esterilizar en autoclave a 121 °C (15 libras de
presión) durante 15 minutos. Dejar enfriar a una temperatura entre 45-50 °C y vaciar en placas de
petri estériles.
Procedimiento
Consultar las referencias apropiadas respecto a los procedimientos para procesar y sembrar
muestras de alimentos, agua y otros materiales. Colocar alícuotas de la muestra en las placas
petri y vaciar el medio enfriado a 45 ºC. Mezclar, dejar solidificar e incubar. Este medio también
puede utilizarse para hacer la siembra por filtración de membrana. Incubar las placas a 35 + 2 °C
durante 18-24 horas. Proceder a la identificación.
PRESENTACIONES:
Medio deshidratado: Frasco 450 g y 500 g, Caja c/20 sobres p/1 litro, Cubeta 5 kg y 10 kg.
Medio preparado: Paquete con 10 placas.
Discusión y Conclusión
Realizar reporte de lo observado y corroborar con la bibliografía consultada.
Diagrama Ecológico
Medio de cultivo contaminado
R1
Conclusión
Bibliografía
Benson, HJ. 2002. Microbiological applications. Laboratory manual in general

microbology. Octava edición. Editorial McGraw-Hill. Estados Unidos de Norteamérica.
Mandigan MT, Martinko JM, Parker J 1999. Brock. Biología de los

Microorganismos. Octava edición. Editorial Prentice Hall. Madrid. España.
Nom. 087. Norma oficial Mexicana para el manejo de RPBI.

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MARGLETH TELLO RAMOS

SAN FRANCISCO DE CAMPECHE, CAMPECHE FEBREBRO 2020

Aprender sobre la preparación, el uso y manejo de medios de cultivo empleados en el

Un método ampliamente y necesariamente utilizado para el estudio de microorganismos

3. Fuente de energía como carbohidrato para un quimioheterótrofo, sales inorgánicas

5. En ocasiones vitaminas y/o otras sustancias inductoras de crecimiento y otras

Los medios de cultivo se utilizan con diferentes fines: aislamiento de microorganismos,

De acuerdo a su consistencia se pueden clasificar en:

Líquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote.

Semisólidos: Contienen 0.5% de agar y son empleados para el estudio de movilidad en

De acuerdo a su consistencia se pueden clasificar en:

Complejos: En estos no se conoce su composición exacta del medio, generalmente utilizan

De acuerdo a su consistencia se pueden clasificar como:

Medios selectivos: Presentan en su composición uno o más componentes que inhibirán la

Medios diferenciales: Permiten distinguir poblaciones de bacterias en base a

Medios de enriquecimiento: Presentan alGÚN componente que permite el crecimiento de

 1 Matraz Erlenmeyer de 500 ml

1. Verificar el material esté limpio y seco

2. Marcar el matraz con nombre y volumen del medio a preparar.

3. Elaborar un tapón para el matraz con algodón y gasa.

4. Ajustar el pH del agua al indicado por el fabricante del medio de cultivo

5. Medir el volumen de agua a usar, añadir a 1/3 de su capacidad, utilizar la cantidad

6. Pesar en papel aluminio el medio de cultivo a preparar, utilizar una espátula o

7. Colocar el medio pesado en el matraz (etiquetado) con agua destilada

8. Colocar un tapón de algodón y gasa y cubrir con papel de estraza y encintar.

9. Los tubos vacíos se depositan en recipientes y se cubren con papel de estraza.

12. Esperar a que gelifiquen y se enfríen las cajas.

13. Con sumo cuidado y bajo condiciones de esterilidad adicionar10 ml de solución

16. Revisar después del periodo de incubación y verificar la ausencia de

17. Almacenar el material no contaminado en refrigeración, los tubos se depositan

18. Si se llegara a presentar contaminación en tubos y/o cajas disponer como lo

Para determinar la cantidad de medio de cultivo a emplear, tomar en consideración que

CMCU gr = ICPMC gr (MCP ml)

CMCU: Cantidad de medio de cultivo a utilizar

ICPMC: Indicaciones comerciales de preparación del medio de cultivo a utilizar

MCP: Medio de cultivo a preparar

VIMCC: Volumen de preparación indicado en el medio de cultivo comercial.

Empezamos preparando el cultivo de manera correcta y precisa como lo dice el distribuidor.

FÓRMULA: (aproximada en g/L)

Medio preparado: Paquete con 10 placas.

Realizar reporte de lo observado y corroborar con la bibliografía consultada.

Benson, HJ. 2002. Microbiological applications. Laboratory manual in general

Mandigan MT, Martinko JM, Parker J 1999. Brock. Biología de los

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