UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA E.A.P ING.

AGROINDUSTRIAL

PRACTICA: Practica de Laboratorio N 03 NOMBRE: Preparacin de Medios de Cultivo ALUMNO: Dylan Paolo Alvarado Salgado DOCENTE: Eterio Alva Muoz GRUPO: B ; IV Ciclo

PRACTICA N3

Preparacin de Medios de Cultivo

I. INTRODUCCIN

El medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos el cual constituye el aporte de nutrientes indispensables para el crecimiento de los microorganismos. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier microorganismo contaminante. Los medios de cultivo contienen como mnimo: carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y sales inorgnicas. En muchos casos sern necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras. De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en: Lquido: Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulacin. Semislidos: Contienen 0.5% de agar en su formulacin. Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo). Slidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulacin. Estos medios inmovilizan a las clulas, permitindoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. El agar es el principal agente solidificante utilizado en los medios de cultivo. Se disuelve completamente a 100C y se solidifica al enfriarse a 42C. La composicin precisa del medio de cultivo depender del microorganismo que se quiera cultivar, por lo que las necesidades nutricionales tienden a variar de al tipo de microorganismo. Hay microorganismos muy poco exigentes que crecen bien en medios de laboratorio normales y microorganismos muy exigentes que necesitan determinadas sustancias como vitaminas, suero o sangre para crecer. Durante las prcticas se van a manejar medios de cultivo de composicin muy variada y de tres tipos diferentes en cuanto a ingredientes. Este ltimo aspecto es importante a la hora de la preparacin de los mismos. Aunque los medios artificiales o sintticos se pueden preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden adquirir comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que aadir la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la composicin, la caducidad, y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe esterilizarse.

II.

OBJETIVOS OBJETIVOS GENERALES Preparar medios de cultivo como soporte y fuente de nutrientes para el desarrollo de los microorganismos in vitro. Manejar los instrumentos de uso rutinario, a la vez que imprescindibles, en el laboratorio de microbiologa

OBJETIVOS ESPECIFICOS III. Preparar medios de uso general en el laboratorio Conocer los nutrientes en cada medio preparado y su funcin que ejerce cada uno. Identificar colonias bacterianas en forma macroscpica Conocer los materiales que utilizan en la preparacin de medios de cultivo Conocer el modo de accin del autoclave y su funcionamiento

MATERIAL Y MTODOS 3.1. MATERIAL

3.1.1.

Reactivos para: Agar comn, Caldo comn y Agar Sabouraud. Peptona Cloruro de sodio (NaCl) Extracto de carne Glucosa Agar Agar Agua destilada

3.1.2.

Material de vidrio Baln de fondo plano Bureta

3.1.3.

Equipo Balanza Autoclave Cocina elctrica

3.1.4

Otros Algodn Pabilo Gasa Tijera Papel

3.2. METODOS Divisin de alumnos en grupos: Lo que aqu se hizo es dividir a los alumnos en dos grupos, y designo un trabajo especfico para cada grupo.

Mtodo observativo: En los pequeos momentos que se tena libre cada alumno recorra a los dems grupos observando y haciendo los apuntes que crea conveniente de los trabajos que se estaban realizando.

Mtodo explicativo: Dentro de este mtodo estn las exposiciones que cada grupo haca de su trabajo asignado, hablaban de su trabajo en forma detalla pero de manera personalizada (solo explicaban a las personas que se les acercaban a preguntar).

IV. PROCEDIMIENTO 1. Pesar las sustancias indicadas en las formulas respectivas, calculando las cantidades en relacin a los volmenes requeridos. 2. Disolverlas en la cantidad de agua destilada necesaria llevando a ebullicin. 3. Colocar los medios preparados dentro del autoclave pata esterilizarlos durante 15 minutos, 15 lb/in2. y 250F o su equivalente de (15 x 1atmsfera x 121C). 4. Prender la autoclave y esperar a que llegue a 250F y 15 lb/in2. A partir de este momento, debers tomar el tiempo de 15 minutos. Debers tener cuidado de que la presin de la autoclave, nunca rebase los 20 lb/in2, ni est por debajo de los 15 lb/in2. Esto se puede controlar conectando y desconectando la autoclave. Si es que no tiene termostato, en caso contrario se har automticamente 5. Transcurridos los 15minutos, desconecta la autoclave. Comienza a abrir la vlvula para liberar el vapor y que la presin comience a bajar. La autoclave puede abrirse nicamente cuando el manmetro marque cero. Antes no ya que podra explotar! 6. La autoclave se abre desde atrs, procurando que nadie quede de frente hacia donde se abre la tapa, ya que saldr mucho vapor caliente que causa quemaduras. Una vez que se abri con cuidado, con ayuda del trapo, sacar el matraz. 7. Vaciar el medio en las cajas de Petri estriles siguiendo la tcnica asptica. Las cajas no pueden ser destapadas a menos que sea entre los mecheros o dentro de la campana de flujo laminar. Las tapas no se tocan por dentro con los dedos, ni se sacan del rea de esterilidad. 8. Ya slidas, se cierran adecuadamente y se etiquetan con el tipo de medio, equipo, grupo y fecha de elaboracin. Guardar en el refrigerador para utilizar la siguiente prctica. 9. Vaciar el agua de la autoclave con cuidado de no quemarse Los medios lquidos se reparten en tubos en ambiente estril y siempre frente a una llama (Mechero de Bunsen o alcohol). En el caso de los medios slidos se repartir en placa Petri un promedio de 10cm y en tubo, se les dar antes de que enfren y solidifique, la inclinacin que deben tomar al tiempo de ser empleados: la finalidad de esta inclinacin es la de conseguir una mayor superficie de siembra. Otra modalidad consiste en repartir el medio en los tubos y esterilizar despus. Tambin es usual esterilizar en frascos grandes y almacenar. En este caso, el reparto en tubos y placas Petri se hace cuando el medio se va a utilizar. Tratndose de medios solidos se procede a licuarlos previamente en baomara. Comprobar la esterilidad en estufa a 37C durante 24 horas.

V.

RESULTADOS CALDO COMUN:

Este medio es bastante bueno para el cultivo de grmenes que no presentan exigencias particulares. No es diferencial. Es un medio de uso general que permite el crecimiento tanto de grmenes exigentes como no. Se ajusta el pH a 7,3. Es un MEDIO LIQUIDO Un color amarillo claro. Se disolv rpidamente Los microbilogos necesitan cultivar bacterias en el laboratorio por varias de razones para llevar a cabo experimentos sobre investigaciones. Para lograrlo de la manera ms efectiva, es importante utilizar un medio de crecimiento que se asemeje lo ms posible al medio natural. El caldo de cultivo con agar se denomina agar nutritivo. El propsito general del agar es adaptar el medio para esas bacterias especficas.

AGAR COMUN:
Es un medio de cultivo de uso general para microorganismos poco exigentes. Medio de cultivo color mbar oscuro. Por ser el Agar Comun un medio enriquecido permitir el crecimiento de bacterias tanto patgenas como saprofitas, por esto es importante trabajar con las mayores condiciones de asepsia para garantizar que no hay crecimiento de microorganismos contaminantes que puedan ocasionar un resultado errneo. Es un Medio solido

AGAR SABORAUD Medio para la deteccin y aislamiento de hongos en muestras mediante tcnica de filtracin por membrana. Para que ocurra el crecimiento selectivo de hongos sobre bacterias en la muestra depende tan solo de la reaccin cida (pH 5.6). Este medio es recomendado en el cultivo de hongos, ya que su pH bajo favorece el crecimiento de stos. Es tambin un medio selectivo que impide en crecimiento de otro tipo de microorganismos. Medio de cultivo color mbar claro

Como se puede apreciar en la imagen los tres medios de cultivo se tornan en distintos tonos amarillentos.

VI. DISCUSIONES
o o o Los medios de cultivos permiten el crecimiento y desarrollo microorganismos, gracias a que proporcionan sustancias nutritivas. de

Los medios de cultivos se pueden clasificar de acuerdo al porcentaje de Agar en tres grupos: medios slidos, medios semi-slidos y medios lquidos. El procedimiento para la preparacin de cualquier medio de cultivo debe realizarse rigurosamente para no contaminar el medio.

Por el contrario, en otras ocasiones, la alteracin resulta beneficiosa debido a la adquisicin de nuevas propiedades fisicoqumicas de inters organolptico o de conservacin (que impidan la colonizacin por otros microorganismos). Las siguientes prcticas se centran en la deteccin de microorganismos en el propio alimento y adems se describen tcnicas sencillas para estudiar el papel de los microorganismos en la produccin de alimentos.

VII. CONCLUSIONES
En esta prctica se aprendi la importancia de preparar medios de cultivo, de que materiales pueden ser hechos, los distintos tipos de cultivos que pueden desarrollarse en el laboratorio, as como su clasificacin, sus caractersticas principales, los distintos tipos que pueden servir para identificar diferentes bacterias, as como las condiciones que estos deben de reunir. Se reconocieron los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos aplicando conceptos bsicos de nutricin y preparacin de los mismos, adems se desarrollaron competencias que deben tenerse en cuenta antes, durante y despus de la preparacin de un medio de cultivo.

El procedimiento que se llevo a cabo tuvo como objetivo aprender sobre la preparacin adecuada de un medio de cultivo dependiendo de los nutrimentos bsicos y factores fsicos que requiere un microorganismo para su desarrollo, de acuerdo a esto se procedi a la preparacin de dos medios siguiendo los requerimientos exigidos por estos, se obtuvo que los dos medios preparados.

VIII. CUESTIONARIO a) Glosario: Define los siguientes trminos: . 1. Elemento traza: Un elemento traza puede hacer referencia a diferentes cosas, segn el campo del saber en el que sea utilizado. En qumica analtica, un elemento traza es un elemento presente en una muestra que posee una media de concentracin menor de 100 partes por milln, realizando la medicin en un contador atmico, o menor de 100 microgramos por gramo. En bioqumica, un elemento traza en un compuesto qumico que es necesario en cantidades nfimas para el crecimiento, desarrollo y fisiologa de un organismo.1 En este campo, un elemento traza tambin puede ser referido como micronutriente. En geoqumica, un elemento traza es un elemento qumico cuya concentracin es menor de 1000 partes por milln menor del 0,1% de la composicin de una roca. Este trmino se utiliza principalmente en el campo de la petrologa gnea.

2.

Macronutrientes:
Son aquellos nutrientes que suministran la mayor parte de la energa metablica del organismo. Los principales son glcidos, protenas, y lpidos. Otros incluyen alcohol y cidos orgnicos. Se diferencian de los micronutrientes las vitaminas y minerales en que estos son necesarios en pequeas cantidades para mantener la salud pero no para producir energa. En nutricin los macronutrientes que suministran la mayor parte de la energa en los alimentos de las cuales depende la vida son los nutrientes. Estos proporcionan la energa y los materiales de construccin para las innumerables sustancias que son esenciales para el crecimiento y la supervivencia de las cosas vivas.

3.

Micronutrientes:
Se conocen como "micronutrientes" a las sustancias que el organismo de los seres vivos necesitan en pequeas dosis. Es decir es lo que al cuerpo le falta lo que no hay demasiado. Son indispensables para los diferentes procesos metablicos de los organismos vivos y sin ellos moriran.1 Desempean importantes funciones catalizadoras en el metabolismo como cofactores enzimticos, al formar parte de la estructura de numerosas enzimas (grupos prostticos) o al acompaarlas (coenzimas). En los animales engloba las

vitaminas y minerales y estos ltimos se dividen en minerales y oligoelementos. Estos ltimos se necesitan en una dosis an menor. En algunos casos como el del sodio pueden ser aportados solo por tocar una hoja de una planta. El sudor de los dedos contiene suficiente sal y hace el efecto de un abono foliar.Los micronutrientes no siempre necesitan ser aportados diariamente. La vitamina A y D o la B12 pueden almacenarse en el hgado para cubrir las necesidades de periodos superiores al ao. De hecho en pases pobres se suministra a los nios una pastilla al ao que cubre todas sus necesidades de vitamina A en ese periodo, por ejemplo. Idealmente, seria mejor sumistrales una dosis cada 6 meses.En plantas, algunos micronutrientes es suficiente con que se les suministre una vez en la vida. Simplemente con el contenido de l que hay en la semilla. Para que se produzca deficiencia se deberan cultivar varias generaciones en ausencia de ese mineral.

4.

Reactivo grado reactivo o qumicamente puro:

Son aquellos reactivos qumicos cuyo grado de impureza es mnimo, por lo cual se dice que estn purificados y son utilizados en laboratorios, y en la industria quimicofarmaceutica y de la medicina.

5.

Peptona:
Las peptonas son polipptidos formados durante la degradacin enzimtica de protenas. Son la principal fuente de nitrgeno en el medio orgnico para el cultivo de bacterias. Contienen aminocidos libres y cadenas cortas de pptidos, ciertas vitaminas y a veces carbohidratos. Es soluble en agua e insoluble en etanol y ter. Para uso en laboratorio, la peptona se presenta como un polvo amorfo, o bien como escamas o masas irregulares, esponjosas, de color blanco amarillento o amarillo parduzco; con olor caracterstico que recuerda al de la carne asada; de sabor amargo (peptona pancretica) o amargo y salado (peptona ppsica). Es muy higroscpica y por tanto se altera con facilidad en contacto con aire hmedo.

6.

Cloruro de sodio:
El cloruro de sodio, ms conocido como sal de mesa, o en su forma mineral halita, es un compuesto qumico con la frmula NaCl. El cloruro de sodio es una de las sales responsable de la salinidad del ocano y del fluido extracelular de muchos organismos. Tambin es el mayor componente de la sal comestible, es comnmente usada como condimento y conservante de comida. En la antigedad, el cloruro de sodio era muy apetecido como un bien transable y como condimento, y se remuneraba en la poca preclsica romana a los soldados que construan la Va Salaria que empezaba en las canteras de Ostia hasta Roma con un generoso salarium argentum. Tambin era el salario de un esclavo ya que se entregaba una pequea bolsa con sal; por lo que la palabra asalariado tiene un significado etimolgicamente peyorativo.

7.

Extracto de carne:
El extracto de carne es un caldo de carne muy concentrado, normalmente de vacuno. Se usa para dar sabor a carne a diversas recetas, y para elaborar consoms y sopas. El extracto de carne fue inventado por barn Justus von Liebig, el qumico orgnico alemn del siglo XIX. Liebig se especializ en la clasificacin de la comida y escribi un ensayo sobre cmo cocer la carne sin destruir su valor nutricional. Movido por ell deseo de ayudar a los desnutridos, en 1840 desarroll un extracto de vaca concentrado, extractum carnis Liebig, para proveer de un sustituto barato y nutritivo de la carne a quienes no podan adquirirla. Por desgracia, se necesitaban 30 kg de carne para producir 1 kg de extracto, lo que lo haca demasiado caro.

8.

Glucosa:
La glucosa es un monosacrido con frmula molecular C6H12O6. Es una hexosa, es decir, contiene 6 tomos de carbono, y es una aldosa, esto es, el grupo carbonilo est en el extremo de la molcula (es un grupo aldehdo). Es una forma de azcar que se encuentra libre en las frutas y en la miel. Su rendimiento energtico es de 3,75 kilocaloras por cada gramo en condiciones estndar. Es un ismero de la fructosa, con diferente posicin relativa de los grupos -OH y =O. La aldohexosa glucosa posee dos enantimeros, si bien la D-glucosa es predominante en la naturaleza. En terminologa de la industria alimentaria suele denominarse dextrosa (trmino procedente de glucosa dextrorrotatoria) a este compuesto.

9.

Agar:
Qumicamente el agar es un polmero de subunidades de galactosa; en realidad es una mezcla heterognea de dos clases de polisacridos: agaropectina y agarosa. Aunque ambas clases de polisacridos comparten el mismo esqueleto de galactosa, la agaropectina est modificada con grupos cidos, tales como sulfato y piruvato. Los polisacridos de agar sirven como la estructura primaria de la pared celular de las algas. Disuelto en agua caliente y enfriado se vuelve gelatinoso. Su uso principal es como medio de cultivo en microbiologa, otros usos son como laxante, espesante para sopas, gelatinas vegetales, helados y algunos postres y como agente aclarador de la cerveza. Tambin es conocido por los siguientes nombres: gelosa, gelosina, gelatina vegetal, gelatina china, gelatina japonesa, etc. que se utiliza en la mayora de los medios de cultivo ya que adems no tiene valor nutritivo para los microorganismos. El agar nutritivo es usado como medio de cultivo para el crecimiento de bacterias y hongos, pero no para virus (aunque los virus bacterifagos crecen frecuentemente en bacterias cultivadas en agar).

10. Autoclave:
Un autoclave es un recipiente de presin metlico de paredes gruesas con un cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin debe ser tal que resista la presin y temperatura desarrollada en su interior. La presin elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a los 100 C. La accin conjunta de la temperatura y el vapor produce la coagulacin de las protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproduccin de stos, cosa que lleva a su destruccin. En el mbito industrial, equipos que funcionan por el mismo principio tienen otros usos, aunque varios se relacionan con la destruccin de los microorganismos con fines de conservacin de alimentos, medicamentos, y otros productos. La palabra autoclave no se limita a los equipos que funcionan con vapor de agua ya que los equipos utilizados para esterilizar con xido de etileno se denominan de la misma forma.

b) Haz un diagrama de flujo del procedimiento a seguir en esta prctica:

Agar comn Ingredientes (g/L) - Peptona - NaCl - Extracto de carne - Agar Agua destilada pH

Caldo comn

Agar Sabouraud

5gr Peptona 5 5gr NaCl 5 3gr extracto de Carne 3 15 1l 1l 7.0 0.2 7.2-7.4

Peptona Glucosa Agar

10 40 15 1l 5.60,2

Pectona 0.3 gramos Cloruro de sodio 0.25 gramos Extracto de carne AADIR AADIR En el mismo papel COLOCAR En papel

En el mismo papel

0.15 gramos
PESAR En la balanza

COLOCAR

En una fiola con 0.25 ml de agua destilada

HECHAR

Agua destilada por las paredes

DISOLVER

CALENTAR

Para poder disolverlo hasta su ebullicin

 AGAR COMUN Pectona 0.3 gramos Cloruro de sodio 0.25 gramos Extracto de carne AADIR 0.15 gramos Agar 0.75 gramos AADIR En el mismo papel AADIR En el mismo papel COLOCAR En papel

En el mismo papel

PESAR

En la balanza

COLOCAR

En una fiola con 0.25 ml de agua destilada

HECHAR

Agua destilada por las paredes

DISOLVER

CALENTAR

Para poder disolverlo hasta su ebullicin

 Agar sabouraud Glucosa 2 gramos pectona 0.5 gramos AADIR En el mismo papel COLOCAR En papel

Agar 0.8 gramos AADIR

En el mismo papel

PESAR

En la balanza

COLOCAR

En una fiola con 0.25 ml de agua destilada

HECHAR

Agua destilada por las paredes

DISOLVER

CALENTAR

Para poder disolverlo hasta su ebullicin

 Pectona Cloruro de sodio Extracto de caree

Colocarlo todo en la fiola para disolverlo.

Calentarlo hasta que se disuelva y llegue a su ebullicin

VIII. BIBLIOGRAFA
BRYAN, A., h: C.A BRYAN y C.G. BRYAN. 1984. Bacteriologa. Principios Y prcticas. Edit. Continental. Mxico. PELCZAR, M., J. E. D. REID y E.C.S. CHAN. 1991 Microbiologa. 4ta. Ed. Edit. Mac Graw-Hill. Espaa. IX. LINKOGRAFA http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/ca tedraMicro/10_AgarSabouraudDextrosa.pdf http://www.buenastareas.com/ensayos/Medios-DeCultivo/933305.html http://www.slideshare.net/ESLAMA356/manual-de-practicas-2012 http://www.casadelabuelasilvia.com.ar/index.php?option=com_ content&view=article&id=3408:caldo-comuncaldo&catid=62:sopas-pures-cremas