Determinacion de Colesterol en Sangre

UNIVERSIDAD NACIONAL
FEDERICO VILLARREAL
FACULTAD DE INGENIERÍA GEOGRÁFICA, AMBIENTAL Y

ECOTURISMO
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL
“DETERMINACIÓN DEL
COLESTEROL EN LA SANGRE”
CURSO: Bioquímica
PROFESOR: Dors Yupanqui Siccha
INTEGRANTES:
• Cariapaza Roque Diana Carolina
• Chumbes Zacarías Nallely Beatriz
• García Castañeda Frey Mijail
• Llantoy Flores Luz Mercedes
• Ruíz Carbajal Manuel
Lima, 9 de julio de 2019

DETERMINACIÓN DEL COLESTEROL EN LA SANGRE
INDICE
1. FUNDAMENTO TEORICO ....................................................................................... 3
1.1. EL COLESTEROL ............................................................................................ 3

1.2. FUNCIONES DEL COLESTEROL: ................................................................. 3
1.3. REACTIVOS ..................................................................................................... 3
1.4. NIVEL NORMAL DEL COLESTEROL .......................................................... 4
1.5. MUESTRA ........................................................................................................ 4
1.6. CALCULOS ...................................................................................................... 4
2. OBJETIVOS ................................................................................................................ 5
2.1. OBJETIVO GENERAL ..................................................................................... 5

2.2. OBJETIVO ESPECÍFICO ................................................................................. 5
3. RECOMENDACIONES PARA LA PRACTICA ....................................................... 5
4. MATERIALES ............................................................................................................ 6
5. PROCEDIMIENTO PRÁCTICO ................................................................................ 8
6. RESULTADOS ......................................................................................................... 11
7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS ............................................................................. 11
8. CONCLUSIONES ..................................................................................................... 12
9. ANEXOS ................................................................................................................... 13
10. BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................... 16
2
1. FUNDAMENTO TEORICO
1.1. EL COLESTEROL
Es un lípido encontrado en los tejidos corporales y en el plasma sanguíneo de los

vertebrados. Tiene la cualidad de ser una sustancia cerosa, de tipo grasosa que existe
naturalmente en todo el cuerpo.
El colesterol es un tipo de grasa que se encuentra solamente en los alimentos de
origen animal. En el cuerpo humano, esta grasa es necesaria para producir hormonas
como las sexuales, formar las paredes de nuestras células, las sales biliares y la
vitamina D (Piedra Alfaro, 2014).
Nosotros necesitamos una determinada cantidad de colesterol para la función
adecuada de nuestro cuerpo. Pero el exceso de colesterol en la sangre puede
adherirse a las paredes arteriales, esto se denomina placa. Las placas pueden
estrechar las arterias o incluso obstruirlas.
Se presenta en altas concentraciones en el hígado, medula espinal, páncreas y
cerebro. Es precursor de los ácidos biliares, esteroides y vitamina D. Su
determinación contribuye al diagnóstico y clasificación de las dislipidemias.
1.2. FUNCIONES DEL COLESTEROL
• Estructural: el colesterol es un componente muy importante de las membranas

plasmáticas de las células animales.
• Precursor de la vitamina D: esencial en el metabolismo del calcio.
• Precursor de las hormonas sexuales: progesterona, estrógenos y testosterona.
• Precursor de las hormonas corticoesteroidales: cortisol y aldosterona.
• Precursor de las sales biliares: esenciales en la absorción de algunos nutrientes
lipídicos y vía principal para la excreción de colesterol corporal.
• Precursor de las balsas de lípidos.
1.3.REACTIVOS
El colesterol se determina por acción de las enzimas Colesterol éster hidrolasa y
Colesterol oxidasa. La primera libera el colesterol de los ésteres de colesterol y la
segunda oxida el colesterol libre produciéndose peróxido de hidrogeno, en cual en
presencia de la enzima peróxidasa reacciona con el sistema cromogénico dando
origen a un compuesto coloreado que absorbe a 505nm.
Colesterol ester Colesterol + ácidos grasos
Colesterol + O2 Colesterol – 4-en-3-ona+H2O2
2H2O2+4-AAP+p-HBA Comp.Coloreado+4H2O
3
Los reactivos conservados entre 2o a 8o y protegidos por la luz, estables hasta la fecha
de caducidad indicada en la etiqueta.
Buffer Pipes pH 7.3 50Mm

Colesterol éster hidrolasa >150U/I
Colesterol oxidasa (recombinante) >100U/I
Peroxidasa >1000U/I
4-Aminoantipirina 0.4 Mm
Acido p-hidroxibenzoico 10Mm
Azida sódica 0.1 g/dl
Estabilizantes y preservantes no reactivos c.s
El reactivo se prevee listo para su uso. El reactivo con el tiempo puede tomar un color
leve de rosado que no afecta a los resultados. Descarta el reactivo si su absorbancia
contra blanco de agua es superior a 0.4 D.O. a 505 nm.
1.4. NIVEL NORMAL DEL COLESTEROL
El HDL, o colesterol bueno, debe oscilar entre 29 y el 72 con un intervalo óptimo de 45
a 85. Esta forma de colesterol protege contra las enfermedades del corazón y en realidad
elimina el exceso de depósitos de las arterias. Por tanto, es bueno tener niveles altos de
HDL normales. Valores normales de LDL, o colesterol malo, oscila de 60 a 130. Sin
embargo, es mejor tener el número de LDL por debajo de 100. El VLDL también debe
mantenerse lo más bajo posible dentro de los niveles normales de colesterol. El rango de
colesterol VLDL debe estar entre 0 y 40, con un óptimo de 0 a 30. En función de tu riesgo,
tu médico te dará las directrices, que son las más adecuadas para tu cuerpo.
1.5. MUESTRA
La muestra debe tomarse recomendablemente con el paciente en ayunas. Los tubos y
materiales de vidrio deben estar limpios y libres de residuos de detergente. El colesterol
es estable 7 días a temperatura ambiente y 6 meses en congelador.
1.6. CALCULOS
Factor= Concentración calibrador

Abs. Calibrador
Colesterol Total (mg/Dl) =Factor x Abs. Muestra.
4
2. OBJETIVOS
2.1. OBJETIVO GENERAL
• Hallar la concentración de colesterol en diferentes muestras de sangre y definir

cuál es el grado de salud.
2.2. OBJETIVO ESPECÍFICO
• Aprender el uso correcto del espectrómetro.

• Tener una buena práctica con la pipeta automática.
• Emplear el Espectrofotómetro e interpretar sus resultados.
• Analizar la concentración de colesterol para cada muestra de sangre.
3. RECOMENDACIONES PARA LA PRACTICA
• Usar todos los implementos del equipo de protección personal como guantes,
mascarilla, guardapolvo etc. para el laboratorio.
• Usar una medida adecuada de reactivo para cada muestra extraída.
• Mientras se colocan las muestras en la centrifuga verificar que no se encuentre
con otros tubos de ensayo en su interior porque al ejecutarlo se estaría dañando el
equipo.
• Calibrar el espectrofotómetro verificando que se encuentre en su absorción
requerida.
• Al utilizar la pipeta automática debemos extraer solo el suero de la muestra, ya
que si escogemos por error el plasma malograremos y perderemos la muestra.
• Mantener el laboratorio limpio u ordenado durante el desarrollo de la práctica.
5
4. MATERIALES
REACTIVO COLESTEROL (PARA MUESTRA DEL REACTIVO ESTÁNDAR

SUERO) (PARA LA MUESTRA)
PIPETA AUTOMÁTICA PIPETA (EXTRAE LA

(CALIBRAR 0.01ml) MUESTRA DE
COLESTEROL)
6
ESPECTROFOTOMETRO (LONGITUD DE CENTRIFUGADORA (ENCARGADO DE

ONDA = 505nm.) SEPARAR EL PLASMA DE LA SANGRE)
MATERIALES PARA LA EXTRACCIÓN DE

SANGRE
7
5. PROCEDIMIENTO PRÁCTICO
PASO 1: Para determinar el COLESTEROL primero extraemos la sangre del voluntario
del grupo y colocaremos en el tubo de ensayo. Siempre debemos estar con los guantes
bien puestos y con los materiales especializados para poder desinfectar después de la
extracción de sangre.
PASO 2: Colocaremos el tubo de ensayo que contiene la muestra y en otro tubo de ensayo
echaremos agua de la misma medida de la muestra para ponerlo en la centrifugadora, pero
en lados opuestos.
8
PASO 3: Cronometramos la centrifugadora a 10 minutos (1min=2000 revol). Este tiempo

será suficiente para separar el suero y el plasma de la sangre.
PASO 4: Terminado el proceso de centrifugado, pasamos a retirar el tubo de ensayo con

el plasma ya separado de la sangre. Utilizaremos la pipeta automática para extraer el
plasma de la muestra y lo echaremos en otro tubo de ensayo.
9
PASO 5: Extraer con la pipeta automática 1ml de reactivo (ESTANDAR) para cada
muestra las cuales se colocarán junto con el plasma extraído.
PASO 6: Una vez colocado el plasma más el reactivo (estándar) de cada muestra en los
tubos de ensayos; calentar las muestras en el BAÑO MARIA a unos grados adecuados.
Y por último ingresar las muestras al ESPECTROFOTÓMETRO para saber la
absorbancia de cada muestra para posteriormente hacer los cálculos respectivos.
10
6. RESULTADOS
Los resultados del espectrofotómetro fueron:
Blanco: 2.844
Estándar: 2.864
Paciente: 2.875
✓ El estándar debe ser siempre más alto que el blanco.
• VALOR DE REFERENCIA: Un colesterol total de 180 a 200 mg/dL (de 10 a 11.1

mmol/l) o menos se considera ideal.
7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Si bien es cierto la cantidad de colesterol total en la sangre incluye el colesterol
lipoproteína de baja densidad (LDL) y el colesterol de lipoproteína de alta
densidad (HDL).
El LDL es el que se acumula en las arterias y las obstruye (colesterol malo).
El HDL es el que ayuda a eliminar el colesterol de las arterias (colesterol bueno).
Los niveles de colesterol se miden en miligramos por decilitro (mg / dL).
La voluntaria de la prueba de sangre tiene 18 años y su colesterol fueron dentro
de los intervalos correspondientes (saludable).
11
8. CONCLUSIONES
Los niveles de concentración de colesterol en la sangre presentan establecidos unos

valores de referencia que nos ayudan a descartar posibles enfermedades cardiovasculares.
Tener el colesterol total alto no significa siempre que la persona está enferma, ya que
puede ocurrir un aumento de colesterol bueno HDL, lo que también hace que se eleve
el valor del colesterol total. Las muestras analizadas en la práctica resultaron con un nivel
de colesterol relativamente bueno. El uso del espectrofotómetro ayudó a determinar los
espectros de absorción de cada muestra para una longitud de onda respectiva. Sus
resultados fueron debidamente analizados en gabinete logrando valorar su concentración
de colesterol.
12
9. ANEXOS
13
14
Grupo de trabajo (BIOQUÍMICA)
10. BIBLIOGRAFÍA
Anahi, C. T. (2013). Quimica de los carbohidratos. En E. P. Laguna José, Bioquimica de Laguna
(págs. 201-213). El manual moderno.
Bárbara, C. C. (2011). Glúcidos. Recuperado el 26 de Mayo de 2018, de

http://www.clasesalacarta.com/files/03-glucidos-2-bach.pdf
Biblioteca Nacional de Medicina de los EE.UU. (14 de Noviembre de 2017). Obtenido de

MedlinePlus , Sangre : https://medlineplus.gov/spanish/blood.html
Fuentes, M. R. (2010). Carbohidratos. Recuperado el 26 de Mayo de 2018, de

http://www.fmvz.unam.mx/fmvz/p_estudios/apuntes_bioquimica/Unidad_3.pdf
Piedra Alfaro, M. I. (22 de Diciembre de 2014). Colesterol. Guías alimentarias para la educacion
nutrucional en Costa Rica. Recuperado el 01 de Agosto de 2018, de
https://www.ministeriodesalud.go.cr/gestores_en_salud/guiasalimentarias/colesterol.
pdf
wikipedia. (16 de 04 de 2018). Wikipedia. La enciclopedia libre . Obtenido de Hemoglobina:

https://es.wikipedia.org/wiki/Hemoglobina
15

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Lima, 9 de julio de 2019

1. FUNDAMENTO TEORICO ....................................................................................... 3

1.1. EL COLESTEROL ............................................................................................ 3

2.1. OBJETIVO GENERAL ..................................................................................... 5

5. PROCEDIMIENTO PRÁCTICO ................................................................................ 8

7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS ............................................................................. 11

10. BIBLIOGRAFÍA ..................................................................................................... 16

Es un lípido encontrado en los tejidos corporales y en el plasma sanguíneo de los

1.2. FUNCIONES DEL COLESTEROL

• Estructural: el colesterol es un componente muy importante de las membranas

Colesterol + O2 Colesterol – 4-en-3-ona+H2O2

Buffer Pipes pH 7.3 50Mm

Factor= Concentración calibrador

• Hallar la concentración de colesterol en diferentes muestras de sangre y definir

2.2. OBJETIVO ESPECÍFICO

• Aprender el uso correcto del espectrómetro.

3. RECOMENDACIONES PARA LA PRACTICA

REACTIVO COLESTEROL (PARA MUESTRA DEL REACTIVO ESTÁNDAR

PIPETA AUTOMÁTICA PIPETA (EXTRAE LA

ESPECTROFOTOMETRO (LONGITUD DE CENTRIFUGADORA (ENCARGADO DE

MATERIALES PARA LA EXTRACCIÓN DE

PASO 3: Cronometramos la centrifugadora a 10 minutos (1min=2000 revol). Este tiempo

PASO 4: Terminado el proceso de centrifugado, pasamos a retirar el tubo de ensayo con

• VALOR DE REFERENCIA: Un colesterol total de 180 a 200 mg/dL (de 10 a 11.1

Los niveles de concentración de colesterol en la sangre presentan establecidos unos

Grupo de trabajo (BIOQUÍMICA)

Bárbara, C. C. (2011). Glúcidos. Recuperado el 26 de Mayo de 2018, de

Biblioteca Nacional de Medicina de los EE.UU. (14 de Noviembre de 2017). Obtenido de

Fuentes, M. R. (2010). Carbohidratos. Recuperado el 26 de Mayo de 2018, de

wikipedia. (16 de 04 de 2018). Wikipedia. La enciclopedia libre . Obtenido de Hemoglobina:

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