Tema 5 Espectrometria Uv-Vis

TEMA 5
ESPECTROSCOPIA DE RADIACION ULTRAVIOLETA-VISIBLE
1. FUNDAMENTOS DE LA ESPECTROSCOPIA UV-VIS.

La absorción molecular en la región ultravioleta y visible del espectro depende de la
estructura electrónica de una molécula. La absorción de energía se cuantifica y da por
resultado la elevación de los electrones desde orbitales en el estado básico o basal a
orbitales de mayor energía en un estado excitado. Para muchas estructuras electrónicas,
la absorción no ocurre en una porción fácilmente accesible de la región ultravioleta.
En la práctica, la espectrometría ultravioleta está limitada en gran parte a los sistemas

conjugados.
El espectro ultravioleta está formado por una gráfica de la longitud de onda en funcioón
de la intensidad de absorción. (Ver figura)
El uso de la absortividad molar como unidad de la intensidad de absorción tiene la ventaja

de que todos los valores de intensidad se refieren al mismo número de especies
absorbentes.
La región del ultravioleta se extiende desde 200 hasta 300 nm. La atmosfera es
transparente en esta región que resulta ser fácilmente accesible con la óptica de cuarzo.
La energía total de la molécula es la suma de su energía electrónica de unión, su energía

vibracional y su energía rotacional. La magnitud de estas energías disminuye en el orden
siguiente:
Eelec → Evib → Erot
La energía absorbente en la región ultravioleta produce cambios en la energía electrónica
de la molécula que resulta de las transiciones de electrones de valencia en la molécula.
Estas transiciones consisten en la excitación de un electrón desde un orbital molecular

lleno al siguiente orbital de energía mayor. El orbital antienlace se designa por un asterisco
que se indica de la siguiente forma:
π → π*
La relación entre la energía absorbida en una transición electrónica y la frecuencia (f),

longitud de onda (λ) y el número de ondas de radiación que produce la transición es:
σE = hf = hc/λ
Donde: h = constante de Planck

c = velocidad de la luz
σE = Energía absorbida en una transición electrónica en una molécula
desde un estado de energía bajo hasta un estado de energía alto (estado
excitado)
La energía absorbida depende de la diferencia de energía entre el estado basal y el estado

excitado; cuanto menor es la diferencia de energía mayor es la longitud de onda de la
absorción.
El exceso de energía en el estado excitado puede dar por resultado la disociación o

ionización de la molécula o se puede volver a emitir en forma de calor o luz.
El desprendimiento de energía en forma de luz da por resultado la fluorescencia o

fosforescencia.
Ya que la energía ultravioleta es cuantificada, el espectro de absorción que se origina de

una transición electrónica simple debe consistir en una línea discreta simple.
Las principales características de una banda de absorción son su posición e intensidad.
La posición de la absorción corresponde a la longitud de onda de la radiación cuya energía

es igual a la requerida para la transición electrónica.
La intensidad de la absorción depende principalmente de dos factores: la probabilidad de

interacción entre la energía de radiación y el sistema electrónico para elevar el estado
basal al estado excitado, así como la polaridad del estado excitado.
La absorción intensa se presenta cuando la transición va acompañada de un gran número

de cambio en el momento de transición. La absorción con εmax > 104 es una absorción de
alta intensidad; la absorción de baja intensidad corresponde a los valores de εmax < 103.
La intensidad de la absorción puede expresarse como transmitancia (T) definida por:
T = P/P0
Dónde: P0 = Intensidad de la muestra radiante que incide en la muestra
P = Intensidad de la energía radiante que sale de la muestra
La expresión que se utiliza para la absorción es la Ley de Beer:
Log10 = (P0/P) = εbC = A
Dónde: ε = Absortividad molar (característico del soluto) [lt/mol.cm]
C = Concentración de la solución [mol/lt]
b = Longitud de celda [cm]
A = Absorbancia
2. IDENTIFICACION ESPECTROMETRICA DE COMPUESTOS ORGANICOS

Es necesario definir algunos términos que frecuentemente se utilizan en la descripción de
los espectros electrónicos:
Cromófero: Es un grupo insaturado covalentemente que es responsable de la absorción
electrónica: C = C; C = O; O = N = O
Auxocromo: Es un grupo saturado que, cuando se encuentra unido a un cromófero, altera
tanto la longitud de onda como la intensidad del máximo de absorción; por ejemplo:OH, Cl
Las características de absorción de las moléculas orgánicas en la región ultravioleta

dependen de las transiciones electrónicas que pueden ocurrir y del defecto del medio
atómico en las transiciones. La figura resume las facilidades relativas con que pueden
ocurrir las diversas transiciones
Aun cuando los cambios de energía no se muestran a escala, se pueden observar
fácilmente, por ejemplo que la transición n → π* requiere de menor energía que la
transición π → π*.
3. INSTRUMENTACION UV-VIS
¿Cómo es un equipo de UV-VIS?

Los aparatos diseñados para la medición de absorción o emisión de radiación
electromagnética en función de la longitud de onda se denominan:
 Fotómetros
 Espectrómetros
 Espectrofotómetros
Fotómetro: Es un equipo que proporciona la relación o alguna función de la relación de los

poderes de radiación de 2 haces electromagnéticos. Utilizan como monocromador
simplemente filtros.
Espectrómetro: Es un instrumento con un sistema monocromador con el que se llevan a

cabo mediciones de un intervalo espectral. La cantidad detectada está en función del
poder de radiación. Utilizan rejillas difractoras o prismas para dispersar la luz.
Espectrofotómetro: Es un espectrómetro con equipo accesorio que proporciona la

relación o una función de la relación, del poder de radiación de 2 haces electromagnéticos
con respecto a la longitud de onda espectral. Utilizan rejillas difractoras o prismas para
dispersar la luz.
¿Cómo se conforma un espectrofotómetro de luz ultravioleta-visible?
Un espectrofotómetro de luz ultravioleta-visible se compone básicamente de 7 partes:

 Fuente de luz o lámpara
 Lentes
 Monocromador
 Celdas donde se coloca la muestra
 Detector
 Amplificador
 Registrador
Las lámparas o fuentes luminosas son usualmente:
Para UV: Deuterio, Mercurio, Xenon
Para Visible: Tunsteno
Otra diferencia significativa en los equipos es que los espectrofotómetros de luz

Ultravioleta-visible suelen ser de dos tipos:
• De un haz de luz
• De doble haz
A continuación se presenta un diagrama para su mejor comprensión de un espectrómetro

de un haz o haz simple y un diagrama esquemático de un espectrofotómetro de doble haz:
4. Manejo de muestras para la técnica UV-Vis
Para realizar un análisis eficiente se requiere de un buen manejo de la muestra, para las
regiones de UV-Vis usualmente se manejan muestras en fase líquida (soluciones).
Soluciones
Las muestras en estado líquido deben manejarse en forma de soluciones debido a que en
las regiones ultravioleta y visible el porcentaje de Transmitancia de los compuestos a los
que se les pueden determinar espectros debe quedar dentro de 20 y 65% porque a valores
fuera de este rango existe mucha incertidumbre. Es preferible para compuestos cuyas
absorciones molares sean altas en su máximo de absorción, es recomendable manejar
soluciones diluidas, ya que a concentraciones altas los compuestos dan porcentajes bajos
de Transmitancia.
Disolventes
• En estudios espectrofotométricos, los disolventes deben disolver o diluir la muestra y

transmitir en la región de longitudes de onda de estudio.
• Para la región ultravioleta se emplean disolventes que no absorben arriba de 200-220
nm (agua, alcohol metílico, alcohol etílico, alcohol isopropílico, hexano, ciclohexano,
octano, éter dietílico, dioxano, acetonitrilo)
Celdas para contener las muestras
Existen en variedad de formas y materiales. Los espectrofotómetros se equipan con

portaceldas.
Las caras ópticas de las celdas deben estar altamente pulidas y transparentes, se deben
construir con mucha precisión, para evitar pérdidas por flexión o difusión de la luz en la
superficie.
Tamaño de las celdas
• Las celdas de 1, 2 y 5 mm de trayecto óptico se utilizan cuando la muestra tiene un

coeficiente de extinción alto y no es conveniente realizar una dilución.
• Las celdas de 10, 20 y 40 mm de trayecto óptico se emplean cuando la sensibilidad
analítica está limitada y además su uso puede evitar una extracción de solvente.
Cálculos aplicando directamente la Ley de Beer
Como el coeficiente de absortividad molar de gran número de compuestos se encuentra

en tablas, es posible calcular la concentración del compuesto aplicando la Ley de Beer.
C = A/ε.b
Sin embargo, es preferible emplear un estándar de referencia, ya que la concentración

determinada en esta forma está sujeta a muchas fuentes de error, como la
reproductividad de las condiciones, errores instrumentales, etc.
5. Cuantificación en la espectroscopía UV-Vis

5.1. Métodos de comparación con un estándar
Cuando se prepara un estándar con una concentración semejante y en las mismas
condiciones que la muestra, la concentración del compuesto en estudio se puede
determinar aplicando la Ley de Beer:
AM = εMbMCM
AE = εEbECE
La relación de absorbancias entre la muestra y el estándar está dada por:
AM/AE = εMbMCM/ εEbECE
Si se emplea la misma celda en ambas determinaciones: bM = bE, y como el
coeficiente de absortividad es el mismo para la muestra y el estándar: εM = εE se tiene
AM/AE = CM/CE
De donde:
CM = AMCE/AE
Este método es rápido y sus resultados son confiables

5.2. Método de adición de un estándar
Generalmente se emplea para concentraciones pequeñas de muestra.
Para este método se emplean dos soluciones:
1. Solución A, que solo contiene la muestra en estudio.
2. Solución B, que contiene un volumen exactamente medido de la solución A y
un volumen medido de la solución estándar.
5.3. Preparación de las curvas de calibración
En este método es necesario preparar una serie de diluciones del estándar. Se miden
las absorbancias y se grafican contra las concentraciones respectivas; se obtiene una
gráfica de absorbancia contra concentración. De la absorbancia de la muestra en
estudio se calcula, por medio de la gráfica (interpolando), la concentración.
Las curvas de calibración proporcionan resultados mas exactos que los otros métodos,
aplicando la Ley de Beer.
6. Aplicaciones cuantitativas.
6.1. Compuestos orgánicos
Los compuestos que tienen un coeficiente de absortividad molar alto se pueden
determinar directamente; en caso contrario, se debe preparar un derivado con
coeficiente molar alto. Cuando un compuesto es puro o se encuentra en una mezcla
en que dicho compuesto es el único que absorbe, la determinación es relativamente
sencilla. La absorbancia se mide a la longitud de onda máxima, la cual se puede
encontrar en tablas o bien obteniendo previamente un espectro del compuesto.
6.2. Compuestos inorgánicos

Es necesario preparar complejos, usualmente se leen como complejos coloridos. Esta
aplicación se usa mucho para las mediciones de compuestos metálicos (Cobre, Hierro,
zinc, cromo, etc.)

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ESPECTROSCOPIA DE RADIACION ULTRAVIOLETA-VISIBLE

1. FUNDAMENTOS DE LA ESPECTROSCOPIA UV-VIS.

En la práctica, la espectrometría ultravioleta está limitada en gran parte a los sistemas

El uso de la absortividad molar como unidad de la intensidad de absorción tiene la ventaja

La energía total de la molécula es la suma de su energía electrónica de unión, su energía

Estas transiciones consisten en la excitación de un electrón desde un orbital molecular

La relación entre la energía absorbida en una transición electrónica y la frecuencia (f),

Donde: h = constante de Planck

La energía absorbida depende de la diferencia de energía entre el estado basal y el estado

El exceso de energía en el estado excitado puede dar por resultado la disociación o

El desprendimiento de energía en forma de luz da por resultado la fluorescencia o

Ya que la energía ultravioleta es cuantificada, el espectro de absorción que se origina de

Las principales características de una banda de absorción son su posición e intensidad.

La posición de la absorción corresponde a la longitud de onda de la radiación cuya energía

La intensidad de la absorción depende principalmente de dos factores: la probabilidad de

La absorción intensa se presenta cuando la transición va acompañada de un gran número

Dónde: P0 = Intensidad de la muestra radiante que incide en la muestra

P = Intensidad de la energía radiante que sale de la muestra

La expresión que se utiliza para la absorción es la Ley de Beer:

Log10 = (P0/P) = εbC = A

Dónde: ε = Absortividad molar (característico del soluto) [lt/mol.cm]

C = Concentración de la solución [mol/lt]

b = Longitud de celda [cm]

2. IDENTIFICACION ESPECTROMETRICA DE COMPUESTOS ORGANICOS

Las características de absorción de las moléculas orgánicas en la región ultravioleta

¿Cómo es un equipo de UV-VIS?

Fotómetro: Es un equipo que proporciona la relación o alguna función de la relación de los

Espectrómetro: Es un instrumento con un sistema monocromador con el que se llevan a

Espectrofotómetro: Es un espectrómetro con equipo accesorio que proporciona la

¿Cómo se conforma un espectrofotómetro de luz ultravioleta-visible?

Un espectrofotómetro de luz ultravioleta-visible se compone básicamente de 7 partes:

Las lámparas o fuentes luminosas son usualmente:

Para UV: Deuterio, Mercurio, Xenon

Para Visible: Tunsteno

Otra diferencia significativa en los equipos es que los espectrofotómetros de luz

A continuación se presenta un diagrama para su mejor comprensión de un espectrómetro

• En estudios espectrofotométricos, los disolventes deben disolver o diluir la muestra y

Celdas para contener las muestras

Existen en variedad de formas y materiales. Los espectrofotómetros se equipan con

• Las celdas de 1, 2 y 5 mm de trayecto óptico se utilizan cuando la muestra tiene un

Cálculos aplicando directamente la Ley de Beer

Como el coeficiente de absortividad molar de gran número de compuestos se encuentra

Sin embargo, es preferible emplear un estándar de referencia, ya que la concentración

5. Cuantificación en la espectroscopía UV-Vis

Este método es rápido y sus resultados son confiables

6.2. Compuestos inorgánicos

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