Informe Inmunologia

LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA
INFORME No. 01 - PRUEBAS DE AGLUTINACIÓN
Integrantes: Ricardo Aislant Abril (2150427); Juliana Valentina Bello Martinez (2181466); Diego
Andrés Zárate Luna (2171269).
FUNDAMENTO
La aglutinación se basa en la reacción que se lleva a cabo entre un anticuerpo y un antígeno

particulado tipo células, bacterias o partículas inertes como látex o bentonita a las cuales se les ha
adosado ya sea el antígeno o el anticuerpo soluble. Para observar la reacción se hace necesario
que la molécula de anticuerpo se una a epítopes localizados en dos moléculas de antígenos, para
formar una red o trama que es debida a la agregación celular, la cual podemos observar como
grumos. Los microorganismos para actuar como aglutinógenos pueden estar vivos o muertos.
Si el epítopo buscado existe en forma natural en la superficie de la célula se habla de aglutinación

activa o directa; si por el contrario el antígeno es soluble y se absorbe a una célula tipo eritrocito o
a una partícula inerte como el látex o bentonita estamos hablando de aglutinación pasiva o
indirecta, en esta el anticuerpo puede ser también el que se adose a la célula o al látex. La
aglutinación pasiva es 10 veces más sensible que la activa porque la concentración de antígeno en
la superficie la fija quien está estandarizando la prueba.
Hemaglutinación para la determinación de grupos sanguíneos:
● Significado clínico.
A comienzo del siglo pasado, Landsteiner descubrió que los individuos podían ser agrupados en A,
B, AB u O de acuerdo a la presencia (grupos A, B, o AB) o ausencia (grupo O) de antígenos
fuertemente inmunogénicos en la superficie de los glóbulos rojos. También demostró la existencia
de anticuerpos (aglutininas) dirigidos contra los antígenos A y B y que el suero de un individuo no
contiene anticuerpos para el antígeno presente en sus propios glóbulos rojos pero sí contra los
que no posee. Actualmente se han identificado subgrupos de los grupos A y B. Todas estas
observaciones revelaron la importancia de la compatibilidad ABO en la práctica transfusional.
● Fundamento del método.

La determinación de grupos sanguíneos del sistema ABO se efectúa enfrentando los glóbulos rojos
del paciente con anticuerpos monoclonales Anti-A, Anti-B o Anti-AB. La aglutinación o no de los
hematíes ensayados frente a cada uno de los reactivos indica la presencia o ausencia de los
correspondientes antígenos
Prueba de Antígenos Febriles:
● Fundamento del método.

La prueba se basa en una reacción inmunológica entre los anticuerpos séricos y el antígeno
correspondiente produciendo una reacción de aglutinación macroscópica.
● Significado clínico.
La infección causada por microorganismos de diversas especies produce, entre otros síntomas,
una marcada elevación de la temperatura, tal es el caso de la fiebre tifoidea causa da por
Salmonella typhi, S. enteritis, así como las paratifoideas causadas por S. paratyphi A y B, y el tifo
causado por el género Rickettsias. La infección por estos microorganismos induce a una respuesta
inmune de tipo humoral con la producción de anticuerpos que pueden ser detectados con el
antígeno específico. Debido a la dificultad existente para el aislamiento de las Rickettsia sp, el
antígeno empleado para la determinación de anticuerpos es el de Proteus OX-19, el cual presenta
una reacción cruzada con bacterias del genero Rickettsia.
La reacción de Huddleson es un método serológico que detecta anticuerpos contra B. abortus, B.
melitensis y B. Suis, agentes causales de la brucelosis; también conocida como fiebre de malta o
fiebre ondulante por el cuadro febril característico que se presenta.
inmunodifusión radial (IDR)

Es una técnica que puede determinar cuantitativamente la concentración de un antígeno. Es una
técnica sensible que es usada clínicamente para detectar niveles de proteínas plasmáticas.
● Principio: Un anticuerpo es incorporado en agarosa fundida, la cual es vertida dentro de

una caja de Petri la cual se deja solidificar. Se cortan pequeños pozos dentro de la agarosa
y estos son llenados con concentraciones conocidas de antígeno correspondientes al
anticuerpo, con el objeto de construir una curva de calibración. Las muestras desconocidas
se colocan dentro de los pozos. Los antígenos en solución difundirán hacia fuera del pozo
en un patrón circular rodeando al pozo. El anticuerpo está presente en exceso y la difusión
del antígeno continuará hasta que se forme un precipitado antígeno-anticuerpo en forma
de anillo estable. Habrá complejo Ag-Ac en toda la zona circundante al pozo dentro de la
línea de precipitina. En esta línea es donde está presente el mayor número de complejos,
ya que en ese punto el antígeno y el anticuerpo están en proporciones iguales.
METODOLOGÍA
1. Hemaglutinación
Para la prueba de hemaglutinación se dispuso de una lámina para ensayo de aglutinación RPR-
CARBON limpia y correctamente rotulada en la cual se colocaron 3 gotas de sangre, seguidamente
se adicionó un pequeño volumen de inmunoglobulina Anti-A en la primera gota, un pequeño
volúmen de inmunoglobulina Anti-B en la segunda gota y un pequeño volúmen de
inmunoglobulina Anti-D en la tercera gota. Empleando palillos estériles se mezclaron las gotas de
sangre con los anticuerpos, teniendo la precaución de no tocar las muestras entre sí y empleando
palillos diferentes para cada prueba con el fin de evitar los errores asociados a la contaminación
de los ensayos.
2. Antígenos Febriles
Para la prueba de antígenos febriles se dispuso de dos láminas para ensayo de aglutinación RPR-
CARBON con capacidad para 10 ensayos cada una, limpias y correctamente rotuladas en las cuales
se colocaron 200µL de suero proporcionado por la docente a cargo (516044 Suero TSH TMC)
distribuidos para 8 ensayos diferentes a razón de 25µL de suero por ensayo. Posteriormente se
adicionaron 25µL de los reactivos presentes en el kit de Antígenos febriles los cuales corresponden
a: Antígeno Brucella abortus, Antígeno Salmonella Flagellar a, Antígeno Salmonella Flagellar b,
Antígeno Proteus 0x19 1-2, Antígeno Francisella tularensis, Antígeno Salmonella Flagellar d
(TificoH), Antígeno Salmonella Group (Tifico O) y Antígeno Proteus 0x19, a los ensayos
correspondientes. Empleando diferentes palillos estériles para cada ensayo se procede a mezclar
suavemente para evidenciar reacciones de aglutinación. Los controles positivo y negativo se
realizaron aplicando 25µL de cada reactivo correspondiente suministrado en el kit y 25µL de
cualquiera de los antígenos anteriormente mencionados.
RESULTADOS
1. Hemaglutinación
Luego de unos minutos tras aplicar los anticuerpos monoclonales Anti-A y Anti-B a los hematíes,
se logró observar una hemaglutinación, debido a que en la membrana de estas células se
encontraban presentes los antígenos A y B, los cuales permitieron la formación de un complejo
Antígeno-Anticuerpo. No obstante, al aplicar el anticuerpo Anti-D no se evidenció aglutinación, lo
cual se interpreta como la ausencia del antígeno D en la membrana de los glóbulos rojos. El
resultado final de la prueba es una persona con grupo sanguíneo AB y Rh +. (Figura 1.)
Figura 1. Prueba de Hemaglutinación realizada con inmunoglobulinas Anti-A, Anti-B y Anti-D

donde se observa aglutinamiento únicamente en los ensayos para Anti-A y Anti-B.
2. Antígenos febriles
Una vez realizados los ensayos se evidenció la reacción de aglutinamiento en los ensayos
correspondientes a control positivo y a Proteus 0x19 mientras los demás ensayos incluyendo el
control negativo no presentaron aglutinamiento debido a la ausencia de anticuerpos que
reaccionaran con los antígenos de estudio, por lo cual se determina que en el suero proporcionado
se encuentran anticuerpos específicos para el Antígeno Proteus 0x19.
3. Inmunodifusion radial
5mm de diámetro el halo
Corresponde a concentracion 606.0 mg/d
Es paciente adulto y los valores estándar para adulto son concentraciones entre 600 y 1650 mg/d
CONCLUSIONES
● La prueba de hemaglutinación es una técnica muy sencilla de realizar, que se usa para
obtener resultados rápidos y confiables, además de ser un método sensible y específico.
● Las reacciones de aglutinación con antígenos febriles son pruebas diagnósticas que cada
vez van cayendo más en desuso debido a su poco valor diagnóstico.
● Con ninguna de las reacciones febriles se puede hacer un diagnóstico definitivo de
cualquier enfermedad comprendida en ellas.
● Para todas las enfermedades febriles que abarcan existen pruebas más confiables y con las
que se pueden hacer diagnósticos definitivos.
● El uso inadecuado de estas pruebas o su mala interpretación generalmente derivan en el
uso injustificado de antibióticos.
REFERENCIAS
- http://inmunoeva.blogspot.com/2014/09/pruebas-de-aglutinacion.html
- http://cyrlab.com.mx/wp-content/uploads/2016/09/antigenos-febriles-con-controles.pd
- Widal, F. - Bull. Soc. Med. Hop. de Paris 13 (1896).
- Bennett, C.W. Clinical Serology, pág. 145, Charles Thomas Co. (1964).
- Huddleson, J.B. - J. Infect. Dis. 42:242 (1928).
- Forbes, B. A. (2009). Diagnóstico Microbiológico. Argentina: Editorial Médica
Panamericana.
- Jurado Jiménez, R., Arenas Muñoz, C., Doblas Delgado, A., y Rivero, A. (2010). Fiebre
tifoidea y otras infecciones por salmonellas. Actualización, 3497-3501.
- Antígenos Febriles. (2000). Wiener laboratorios, 3-6.
- Olivas, E. (2000). Manual de prácticas de Microbiología I y II y Parasitología. México:
Universidad Autónoma de Ciudad Juárez.

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INFORME No. 01 - PRUEBAS DE AGLUTINACIÓN

La aglutinación se basa en la reacción que se lleva a cabo entre un anticuerpo y un antígeno

Si el epítopo buscado existe en forma natural en la superficie de la célula se habla de aglutinación

Hemaglutinación para la determinación de grupos sanguíneos:

● Fundamento del método.

Prueba de Antígenos Febriles:

● Fundamento del método.

inmunodifusión radial (IDR)

● Principio: Un anticuerpo es incorporado en agarosa fundida, la cual es vertida dentro de

Figura 1. Prueba de Hemaglutinación realizada con inmunoglobulinas Anti-A, Anti-B y Anti-D

5mm de diámetro el halo

Corresponde a concentracion 606.0 mg/d

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