ENZIMAS I (CLASES 15, 19, 26 Y 27/05)

1) Introducción a las enzimas

Con la excepción de un pequeño grupo de moléculas
de RNA catalítico, todos los enzimas son proteínas.
Su actividad catalítica depende de la integridad de su
conformación proteica nativa (si se desnatura, disocia
o pierde alguna estructura, pierde su actividad
catalítica).
Algunas enzimas no requieren para su actividad más
grupos químicos que sus residuos aminoácidos.
Otros requieren un componente químico adicional
llamado cofactor. El cofactor puede ser uno o varios
iones inorgánicos tales como Fe +2, Mg+2, Mn+2 o Zn+2 o
una molécula orgánica o metal-orgánica compleja
denominada coenzima. Las coenzimas actúan como
transportadores transitorios de grupos funcionales
específicos.
Una coenzima o ion metálico unido covalentemente o
de manera muy fuerte a la proteína enzimática se
denomina grupo prostético.
Una enzima completa y catalíticamente activa junto
con su coenzima y/o iones metálicos se denomina
holoenzima.
La parte proteica del enzima se denomina apoenzima
(es inactiva) o apoproteína. NADH aporta con iones hidruro (H con carga negativa,
con los dos electrones). Participa en las reacciones
oxido-reducción.
Así, si esta reducido para un estado oxidado y
viceversa.

Transformaciones mediadas por enzimas

Transformación de moléculas complejas en moléculas
simples y viceversa.
 ↓ ΔG, ↑ K, ↑ velocidad
ΔG = - R T ln (k)

 Prácticamente todas las reacciones químicas que

tienen lugar en los seres vivos están catalizadas por
enzimas.
excepción: Ribozimas, ácido ribonucleico

 Las enzimas son catalizadores específicos: cada

enzima cataliza un tipo de reacción, y casi siempre
actúa sobre un único sustrato o sobre un grupo
muy reducido y específico. (deben ser similares
estructuralmente)

En una reacción catalizada por un enzima:

1. La sustancia sobre la que actúa la enzima se llama
sustrato.
2. El sustrato se une a una región concreta de la
enzima, llamada centro activo, sitio activo o sitio
catalítico, el que comprende:
(a) Un sitio de unión formado por los residuos de
aminoácidos que hacen contacto directo con el
sustrato y con el producto.
Propiedades generales de enzimas (b) Y por los residuos de aminoácidos directamente
 Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones implicados en el mecanismo de la reacción.
químicas en los seres vivos (también funcionan in 3. Una vez formados los productos la enzima puede
vitro). comenzar un nuevo ciclo de reacción.
 Las enzimas son catalizadores, es decir, sustancias
que, sin consumirse en una reacción, aumentan Otras características son:
notablemente la velocidad de ésta, sin afectar el 1. Mayores velocidades de reacción: Son típicamente
equilibrio de la reacción. 106 a 1012 veces más rápidas que aquellas de la
reacción no catalizada.
2. Condiciones de reacción más “suaves”: Ocurren
 No hacen posible o realizables las reacciones bajo condiciones relativamente “suaves”:
imposibles, sino que solamente aceleran las que temperaturas bajo 100ºC, presión atmosférica y pH
“espontáneamente” (termodinámicamente) cercano a neutro.
pueden producirse.
3. Mayor especificidad de reacción: Muestran un alto
grado de especificidad respecto de sus sustratos y sus
 Ello hace posible que en condiciones fisiológicas
productos; raramente se generan productos laterales.
tengan lugar reacciones que sin catalizador
(enzimas) requerirían condiciones extremas de 4. Capacidad de ser reguladas: Su actividad varía en
presión, temperatura y pH, o necesitarían respuesta a la concentración de sustancias distintas a
demasiado tiempo para alcanzar el equilibrio. los sustratos.
(la célula depende de su entorno, tiene vías activas
con su enzima, si se modifica su entorno puede apagar
Disminuyen la Ea, ΔG < 0 del complejo de transición
unas enzimas o encender otras para aprovechar su
(inversa y logarítmicamente proporcional a la entorno; o sea, la enzima pierde o aumenta su
constante de velocidad de la reacción)
actividad. Este depende de la concentración y la En la figura el sustrato posee un enlace N-H el cual
constante de disociación) puede formar un puente H con O ó H, también tiene
una carga negativa que puede formar un puente
Las enzimas tienen un enorme poder catalítico
salino o interacción electroestática con una carga
Actividad molecular o número de recambio: positiva, tiene una zona hidrofóbica que puede
Número de moléculas de sustrato convertidas a reaccionar con otras zonas hidrofóbica. Existe
producto, por unidad de tiempo, por una molécula de complementariedad entre las superficies por las
enzima. distintas interacciones.
Estéreo-especificidad: acomodación en el espacio y
respetando las distancias, especificidad espacial.
El sustrato se acomoda en el sitio activo a través de
estos dos conceptos.
No es una superficie lisa, son cadenas laterales que
interaccionan con las distintas regiones de los
aminoácidos.

Ejemplo de unión del sustrato a residuos de aá del

sitio activo

Valor de intensificación: cuando acelera la enzima la

reacción

Complementariedad y estéreo-especificidad entre

Enzima y Sustrato

Sitio activo formado por los residuos aminoacídicos y

distintas partes de la cadena polipeptídica.
Enzima proteasa, actúa sobre enlace peptídico.
Hidrolisis (corte) en el lado carboxilato de un residuo
aromático.
La enzima se une y luego procede a la catálisis del
enlace peptídico. Luego se forma el intermediario
principal, que corresponde al estado de transición que
es el más energético dando formación al oxianión (es
el estado intermediario)
Complementariedad: la forma del sustrato es
El oxianión está estabilizado por la reacción y
complementaria a la enzima. Esta complementariedad
necesita menos energía para existir.
se puede dar por cargas, no cargas, entornos apolares,
entornos polares.
 puede presentar interacciones similares a las del
grupo amina de la primera reacción.
La “inespecificidad” se da por el parecido estructural
con el sustrato o con los productos generados.

Efecto del pH y Temperatura sobre la actividad

Las propiedades de los enzimas derivan del hecho de
ser proteínas y de actuar como catalizadores. Como
proteínas, poseen una conformación natural más
estable que las demás conformaciones posibles. Así,
cambios en la conformación suelen ir asociados en
cambios en la actividad catalítica. Los factores que
Especificidad de las enzimas influyen de manera más directa sobre la actividad de
un enzima son:
Las enzimas, a diferencia de los catalizadores
inorgánicos participan en reacciones específicas. Sin  pH
embargo, hay distintos grados de especificidad.  Temperatura
La enzima Sacarasa es muy específica: rompe el enlace  Coenzima, cofactores y grupos prostéticos
β-glucosídico de la sacarosa o de compuestos muy
similares. Así, para la enzima Sacarasa, la sacarosa es
su sustrato natural, mientras que la maltosa y la
isomaltosa son sustratos análogos.

“Inespecificidad” específica de las enzimas

Aumenta temperatura: no hay actividad porque se

desnaturaliza la proteína.
Disminuye temperatura: molécula en solución,
disminuye la velocidad de las moléculas y disminuye
sus interacciones entre ellas (menor actividad, en
reacción catalizada o no catalizada).
Las enzimas presentan un intervalo de temperatura
optima.

Sustrato natural: mayor eficiencia

Sustrato análogo: menor eficiencia Alto pH: la proteína se desnaturaliza
Bajo pH: la proteína se desnaturaliza

La quimotripsina (proteasa) rompe el enlace amido Zona media de pH: El sitio activo tiene residuos de
(peptídico) en el lado carboxilato, el sitio activo debe aminoácidos que son ácidos y bases débiles, si se
acomodar un grupo carboxilato y un grupo amido que necesita que un carboxilato este o no protonado va a
en presencia de agua produce hidrolisis y, debe depender del pH; por lo tanto, si se altera el pH esos
acomodar como producto un carboxilato y una amina grupos cambian su protonación y van a perder o
con carga en el cual el N presenta electrones aumentar su eficiencia por lo que hay una zona de pH
desapareados. donde tiene la protonación adecuada para la catálisis.

La quimotripsina también hidroliza enlaces ester, pero

con menor afinidad, ya que también se genera como
producto un carboxilato y un grupo con O que
también presenta electrones desapareados y que
Efecto del pH sobre la actividad → enlace ester
→ enlace glucosídico
→ enlace peptídico
→ enlace C-N

 Liasas: Adición de grupos a dobles enlaces o

formación de dobles enlaces por eliminación de
grupos.
→ Entre C y C
→ Entre C y O
→ Entre C y N

 Isomerasas: Transferencia de grupos dentro de

una molécula para producir isómeros.
El pH normal en el citosol de los hepatocitos es de 7,2,
así Glucosa-6- fosfatasa realiza catálisis a valores de  Ligasas: Formación de enlaces C-C, C-S, C-O y C-N
pH muy cercanos a su pH óptimo, lo que implica por reacciones de condensación acopladas a
actividad óptima. hidrólisis de ATP.

La pepsina es una enzima digestiva (estomago), su

ambiente es ácido y, por lo tanto, debe tener un pH
óptimo a valores muy bajos.
RESUMEN Introducción a las enzimas
Clasificación Internacional de Las Enzimas  La vida depende de la existencia de catalizadores
poderosos y específicos: los enzimas.
En función de su acción catalítica específica, las Prácticamente todas las reacciones bioquímicas
enzimas se clasifican en 6 grandes grupos o clases: son catalizadas por un enzima.
 Oxidoreductasas: Transferencia de electrones, Si  Con la excepción de unas pocas moléculas de RNA
una molécula se reduce, tiene que haber otra que catalítico, todas las enzimas conocidas son
se oxide proteínas. Muchas necesitan de coenzimas no
proteicos o cofactores para desempeñar su acción
 Transferasas: Transferencia de grupos químicos catalítica.
→ grupos aldehídos  Los enzimas se clasifican de acuerdo con el tipo de
→ grupos acilos reacción que catalizan. Todos los enzimas tienen
→ grupos glucósilos números y nombres formales del sistema E.C. y la
→ grupos fosfatos (quinasas) mayoría tienen también nombres comunes.

 Hidrolasas: Reacciones de hidrólisis. Transforman

polímeros en monómeros. Actúan sobre:
2) Funcionamiento de las enzimas y el equilibrio favorece a P. La posición y la dirección
de este equilibrio no están afectadas por ningún
El rasgo distintivo de una reacción catalizada catalizador.
enzimáticamente es que tiene lugar dentro de los
confines de una bolsa de la enzima denominada sitio Un equilibrio favorable no indica que la conversión S
activo. → P sea rápida. La velocidad de una reacción depende
de un parámetro totalmente diferente. Existe una
La molécula fijada en el sitio activo y sobre la que barrera energética entre S y P que representa la
actúa la enzima se denomina sustrato. La superficie energía requerida para el alineamiento de los grupos
del sitio activo de la enzima esta revestida con reactivos, la formación de cargas inestables
residuos aminoácidos con grupos sustituyentes que se transitorias, los reordenamientos de enlaces y otras
unen al sustrato y catalizan su transformación transformaciones que se requieren para que la
química. A menudo, el sitio activo recubre el sustrato reacción tenga lugar en cualquiera de las dos
y lo secuestra completamente de la disolución. direcciones. Esto viene representado por la “colina”
energética. Para que haya reacción las moléculas han
de superar esta barrera por lo que se deben llevar a
un nivel energético superior. En la cumbre de la colina
Los enzimas alteran las velocidades de reacción, energética existe un punto en el que la caída hacia el
pero no los equilibrios estado S o P es igualmente probable (en cualquier
caso, el camino es de bajada). Es lo que se denomina
el estado de transición.
El estado de transición es un momento molecular
fugaz en el que acontecimientos tales como rotura o
La función de un catalizador es aumentar la velocidad
formación de enlaces y desarrollo de cargas han
de una reacción. Los catalizadores no modifican los
llegado al instante preciso en el que el colapso hacia
equilibrios de reacción.
sustrato o hacia producto es igualmente probable.
La energía libre del estado basal de P es inferior a la
La diferencia entre los niveles de energía del estado
de S, por lo que ΔG’° de la reacción es negativo y el
basal y del estado de transición se denomina energía
equilibrio favorece a P.
de activación, Ea (ΔG‡).

La velocidad de una reacción refleja esta energía de

activación: a una energía de activación más elevada
corresponde una reacción más lenta. Las velocidades
de reacción pueden aumentarse incrementando la
temperatura y/o la presión, mediante las que se
aumenta el número de moléculas con energía
suficiente para superar la barrera energética. De
modo alternativo, es posible disminuir la energía de
activación añadiendo un catalizador. La catálisis
aumenta las velocidades de reacción disminuyendo
las energías de activación.
Energía de activación (Ea), relacionada con el cambio
de Energía libre del estado de transición (ΔG‡); No es
lo mismo que: Cambio de la energía libre estándar del
sistema (ΔG´º). G = energía libre de Gibbs….
“espontaneidad” de una reacción…

El equilibrio entre S y P refleja la diferencia en energía

libre de sus estados basales. En el ejemplo que se
muestra la energía libre del estado basal de P es
inferior a la de S, por lo que de la reacción es negativo
 V = velocidad de la reacción
k = constante de velocidad

Variaciones de energía durante una reacción

enzimáticamente catalizada (azul) y una no catalizada
(negro)

Las enzimas tienen por única misión es acelerar la

interconversión de S y P. No se gasta enzima en el Relación entre la constante de velocidad k y la energía
proceso y el punto de equilibrio no queda afectado. de activación, ΔG‡, es inversa y exponencial.
No obstante, la reacción alcanza el equilibrio de una Una energía de activación menor significa una
manera mucho más rápida cuando se halla presente el velocidad de reacción mayor.
enzima adecuado ya que incrementa la velocidad de la
reacción. ΔH > 0: reacción que absorbe calor (endotérmica)
(ruptura de enlaces)
Cualquier reacción puede consistir en varias etapas ΔH < 0: reacción que libera calor (exotérmica)
que suponen la formación y desintegración de (formación de enlaces)
especies químicas transitorias denominadas Mientras más alto es el valor de H, más fuerte es el
intermedios de reacción. Un intermedio de reacción enlace
es cualquier especie producida en el transcurso de la
ΔS > 0: sistema en desorden
reacción que tenga un tiempo de vida químico finito.
ΔS < 0: sistema en orden

ΔG > 0: proceso NO espontaneo (endergónico,

Las velocidades de reacción y los equilibrios requiere energía)
tienen definiciones termodinámicas precisas ΔG < 0: proceso espontaneo (exergónico, libera
energía)
Equilibrios de reacción → ΔG’°
Velocidad de reacción → Ea (ΔG‡) Keq ≫ 1, ΔG° es grande y negativa. (eq. hacia los
productos)
Keq ≪ 1, ΔG° es grande y positiva. (eq. hacia los
reactantes)

Constante de equilibrio ΔG solo nos indica en qué momento se encuentra la

reacción con respecto a su equilibrio, pero no nos da
ningún indicio de la velocidad de la reacción.
  Cambio de energía libre estándar a pH 7,0 ΔG°`:
Es el cambio o variación de energía libre en
condiciones estándar y a pH 7,0.
Unos pocos principios explican el poder
catalítico y la especificidad de los enzimas

a) Reordenaciones de los enlaces covalentes durante

una reacción catalizada por un enzima. Entre
sustratos y grupos funcionales de los enzimas
tienen lugar reacciones químicas de muchos tipos.
Los grupos funcionales catalíticos de los enzimas
pueden formar enlaces covalentes transitorios con
un sustrato, activándolo para la reacción, o bien
puede transferirse transitoriamente un grupo del
Las enzimas son excelentes catalizadores porque sustrato a la enzima. En muchos casos, estas
aceleran la velocidad de reacción entre 5 a 17 órdenes reacciones solo tienen lugar en el sitio activo de la
de magnitud. enzima. Las interacciones covalentes entre enzimas
y sustratos hacen disminuir la energía de activación
(por lo que aceleran la reacción), proporcionando
un camino de reacción alternativo y de menor
energía.

b) Interacciones no covalentes entre la enzima y el

sustrato. Gran parte de la energía requerida para
disminuir la energía de activación procede
generalmente de interacciones débiles no
covalentes entre el sustrato y el enzima. El factor
que diferencia realmente a los enzimas de la
mayoría de los catalizadores no enzimáticos es la
formación de un complejo ES especifico. La
CONCEPTOS interacción entre enzima y sustrato en este
 Condiciones estándar (°): 298 K (25°C); complejo esta mediada por las mismas fuerzas que
reactantes y productos están a concentración estabilizan la estructura proteica, entre ellas
molar (Procesos en Química y Física) puentes de hidrogeno e interacciones iónicas e
hidrofóbicas. El establecimiento de cada
 Condiciones estándar transformadas (`): interacción débil en el complejo ES viene
Condiciones estándar a pH 7,0 (Reacciones acompañado por la liberación de una pequeña
bioquímicas) cantidad de energía libre que estabiliza la
interacción. La energía procedente de la
 Cambio de energía libre ΔG: Cambio de energía interacción enzima-sustrato se denomina energía
de un sistema que experimenta una de fijación, ΔGB. Su significado se extiende más allá
transformación a presión (P) y temperatura del de una simple estabilización de la interacción
constante (T) enzima- sustrato. La energía de fijación es la
principal fuente de energía libre utilizada por los
 Cambio de energía libre estándar ΔG°: Es el enzimas para disminuir la energía de activación de
cambio o variación de energía libre en las reacciones.
condiciones estándar, es decir a concentración
1M y 25°C
Hay dos principios fundamentales que están
interrelacionados y que proporcionan una explicación
general de como los enzimas aprovechan la energía de
unión no covalente:
1. La mayor parte del poder catalítico de los enzimas
procede en último término de la energía libre liberada
al formarse los múltiples enlaces débiles e
interacciones entre un enzima y su sustrato. Esta
energía de fijación contribuye tanto a la especificidad
como a la catálisis.
2. Las interacciones débiles están optimizadas en el Modelo de Ajuste Inducido (Koshland)
estado de transición de la reacción; los sitios activos Tanto la enzima como el substrato sufren una
de los enzimas son complementarios no a los alteración en su estructura por el hecho físico de la
unión.
sustratos, sino a los estados de transición a través de
Está mucho más de acuerdo con todos los datos
los que pasan los sustratos al ser convertidos en
experimentales conocidos hasta el momento.
productos durante una reacción.
Une al sustrato, pero además es perfectamente
complementario al estado de transición por lo que
Las interacciones débiles entre enzima y sustrato requiere de menos energía (mayor velocidad).
son óptimas en el estado de transición
Las enzimas eran estructuralmente complementarias
a sus sustratos, de modo que se acoplaban del mismo
modo que una llave y una cerradura. Esta idea de que
una interacción especifica (exclusiva) entre dos
moléculas biológicas esta facilitada por superficies
moleculares con formas complementarias, ha influido
en la bioquímica, pero la hipótesis de la “llave y
cerradura” puede ser engañosa cuando se aplica a la
catálisis enzimática. Una enzima totalmente
Estabilización del Estado de Transición
complementaria a su sustrato sería un enzima muy
La teoría del Ajuste Inducido se amplía en la
deficiente.
actualidad
definiendo la acción enzimática.
Unión del sustrato al sitio activo en una enzima
El Centro Activo enzimático, en realidad, solo
 aminoácido de unión del sustrato; aminoácido acomoda
involucrados en la catálisis (se ajusta) al sustrato y acomoda al producto, pero es
 Complementariedad del sitio activo (cambios sólo es complementario al estado de transición.
conformacionales)
Figura a: Estado de transición es el momento en que
más energía tiene el sistema.
Figura b: Como el complejo ES es mucho más estable
Modelo de Llave y Cerradura (Emil Fischer) energéticamente, requiere menos energía que el
Substrato y enzima se acoplan de forma sustrato en si mismo y para poder generarse
estereospecífica, de la misma manera que una llave se productos ahora debe alcanzar una mayor energía del
ajusta a su cerradura. estado de transición que en la figura a. O sea, el ΔG
Modelo aceptado durante mucho tiempo; hoy se ahora requerido es mayor que el ΔG de la reacción no
considera insuficiente al no explicar varios fenómenos catalizada. Esto nos lleva a decir que la enzima no
(inhibición enzimática y otros…) debe acomodar totalmente al sustrato, si no que solo
lo suficiente para que exista la reacción.
Acomoda perfectamente a la enzima (muy energético, Figura c: En este caso, el sitio activo es totalmente
poco probable) complementario al estado de transición; sigue siendo
el estado de transición el estado más energético, pero
a su vez es menos energético que el estado de
transición de la reacción no catalizada, por lo que el
ΔG de la reacción catalizada es menos y aumenta la velocidad de la reacción.
Enzima imaginaria (varasa) diseñado para catalizar la rotura de una vara metálica.
(a) Para que se rompa la vara es preciso doblarla en primer lugar (estado de transición). En ambos ejemplos de
''varasa'', las interacciones magnéticas ocupan el lugar de las interacciones por enlaces débiles entre enzima y
sustrato.

(b) Una varasa con una bolsa forrada con imanes complementaria en su estructura a la vara (sustrato), la estabiliza.
El doblamiento estará impedido por la atracción magnética entre la vara y la varasa. Para que se dé la reacción
(rotura), la vara debe alcanzar el estado de transición de la reacción, pero la vara se fija de manera tan fuerte al sitio
activo que no puede doblarse, ya que la curvatura de la vara eliminaría algunas de las interacciones magnéticas entre
la vara y el enzima. Un enzima así impide la reacción ya que lo que hace es estabilizar el sustrato.

(c) Una enzima con una bolsa complementaria al estado de transición de la reacción ayudara a desestabilizar la vara
dando lugar a la catálisis de la reacción. Las interacciones magnéticas proporcionan energía que compensa el
incremento de energía libre requerido para doblar la vara. Los diagramas de la coordenada de reacción (derecha)
muestran las consecuencias energéticas de la complementariedad con el sustrato frente a la complementariedad con
el estado de transición. El termino ΔGM diferencia entre las energías del estado de transición de las reacciones no
catalizada y catalizada, procede de las interacciones magnéticas entre la vara y la varasa. Cuando la enzima es
complementaria al sustrato (b), el complejo ES es más estable y tiene menos energía libre en el estado basal que el
sustrato solo. El resultado es un incremento de la energía de activación.

Muchas de estas interacciones se dan en partes de la vara distantes del punto de rotura; así, las interacciones entre
el enzima y partes no reactivas del sustrato proporcionan una cierta cantidad de la energía necesaria para catalizar su
rotura. Esta “factura energética” se traduce en una energía de activación neta inferior y una mayor velocidad de
reacción.
Sitio activo: ↓ complementariedad sustrato, ↑ complementariedad estado de transición, ↓ complementariedad producto
Para que una enzima catalice una reacción ha de ser
complementario al estado de transición de la
reacción. Ello significa que las interacciones optimas
entre sustrato y enzima solo pueden tener lugar en el La misma energía de fijación que aporta energía para
estado de transición. la catálisis también hace que el enzima sea especifico.
La especificidad se refiere a la capacidad de un
El principio importante subyacente es que las enzima de discriminar entre un sustrato y una
interacciones de fijación débiles entre la enzima y el molécula competitiva.
sustrato proporcionan una fuerza motriz sustancial
para la catálisis enzimática. Los grupos del sustrato En general, la especificidad proviene de la formación
que intervienen en estas interacciones débiles pueden de múltiples interacciones débiles entre el enzima y su
estar situados a cierta distancia de los enlaces que se molécula de sustrato especifica.
rompen o modifican. Las interacciones débiles
formadas únicamente en el estado de transición son Entre los factores físicos y termodinámicos principales
las que contribuyen al valor de ΔG‡, la barrera para una
que contribuyen de modo principal a la catálisis. reacción pueda ocurrir incluye:

La necesidad de múltiples interacciones débiles para (1) La entropía (libertad de movimiento) de las
impulsar la catálisis es una de las razones de que las moléculas en disolución, que reduce la
enzimas (y algunas coenzimas) sean tan grandes. Una posibilidad de que reaccionen entre ellas
enzima ha de aportar grupos funcionales para (2) La capa de solvatación del agua unida por
interacciones iónicas, enlaces de hidrogeno y otras puentes de hidrogeno que rodea y ayuda a
interacciones y ha de posicionar estos grupos de estabilizar muchas biomoléculas en disolución
forma precisa para que la energía de fijación en el acuosa
estado de transición sea optima. Se obtendrá una (3) La distorsión de los sustratos que ha de tener
correcta fijación si el sustrato se ubica en una cavidad lugar en muchas reacciones
(el sitio activo) donde se encuentre alejado del agua (4) La necesidad de conseguir un alineamiento
de forma efectiva. El tamaño de las proteínas refleja la adecuado de los grupos funcionales
necesidad catalíticos en el enzima.
de la existencia de superestructuras que permitan Se puede utilizar la energía de fijación para superar
mantener la interacción de grupos correctamente todas estas barreras.
posicionados y que mantengan al mismo tiempo
inalterable la cavidad del sitio activo. Temperatura: la temperatura hace que las moléculas
con energía cinética tengan una mayor energía
La energía de fijación contribuye a la cinética y una mayor vibración, lo que provoca que se
especificidad de reacción y a la catalisis muevan más y puedan colisionar más. Al tener más
¿Pueden explicarse cuantitativamente las enormes colisiones, es más probables que éstas ocurran en la
aceleraciones de velocidad conseguidas por los forma adecuada para que haya más reacción. Además,
enzimas en base a la energía? SI, como referencia se las colisiones tienen que ser en el ángulo y proximidad
usa la siguiente ecuación: adecuadas, o sea, deben ser colisiones efectivas o
productivas para que se genere la reacción.

En primer lugar, una gran restricción en los

movimientos relativos de los dos sustratos que han de
reaccionar, o reducción de entropía, es uno de los
beneficios de su fijación a la enzima. La energía de
fijación mantiene los sustratos en la orientación
correcta para reaccionar, lo que es una contribución
muy importante a la catálisis ya que las colisiones
ΔG‡ debe disminuir para acelerar una reacción de
productivas entre moléculas en disolución pueden ser
primer orden en un factor de 10, en las condiciones
extremadamente raras.
que se encuentran normalmente en las células.
Los sustratos se pueden alinear sobre la enzima de En el sitio activo de las enzimas ocurre un
forma precisa, generando un gran número de acercamiento y orientación óptimo de los enlaces y
interacciones débiles entre ellos y grupos localizados átomos involucrados en la reacción.
de manera estratégica en la enzima, lo que mantiene
las moléculas de sustrato en las posiciones adecuadas.
Algunos estudios han demostrado que la restricción
del movimiento de dos reactivos puede producir
incrementos de velocidad de muchos ordenes de
magnitud. Para que una reacción química tenga lugar, las
moléculas de los reactantes deben chocar con una
energía y una orientación adecuadas. Por su parte, las
enzimas:
(1) Permiten que los reactantes (sustratos) se unan a
su
centro activo con una orientación óptima para que la
reacción se produzca.
(2) Modifican las propiedades químicas del sustrato
unido a su centro activo, debilitando los enlaces
existentes y facilitando la formación de otros nuevos.

En segundo lugar, la formación de enlaces débiles

entre enzima y sustrato también da lugar a la
desolvatación del sustrato. Interacciones enzima-
sustrato reemplazan la mayoría de, o todos, los
enlaces de hidrogeno que puedan existir en disolución
entre el sustrato y el agua.
En tercer lugar, la energía de fijación correspondiente
a las interacciones débiles formadas únicamente
durante el estado de transición de la reacción ayuda a
Figura a: Oxigeno realiza un ataque nucleofílico al C
compensar termodinámicamente cualquier distorsión,
para que salga el OR, con un valor de velocidad de 1.
principalmente en forma de redistribución electrónica,
Reacción no catalizada, moléculas separadas. (Enlaces
que debe experimentar el sustrato para reaccionar.
a reaccionar en moléculas separadas, colisiones al
Finalmente, la propia enzima puede experimentar un
azar).
cambio en la conformación cuando se fija el sustrato,
Figura b: Se mantiene el mecanismo de reacción, pero
también inducido por múltiples interacciones débiles
ahora las moléculas están unidas por un enlace simple
con el sustrato.
carbono. Se ha mejorado la proximidad entre las
moléculas (por la presencia de la unión del enlace El encaje inducido puede servir para disponer grupos
carbono). Esta mejora en la proximidad hace que la funcionales específicos de la enzima en la orientación
velocidad de la reacción aumente a 10 5. (Enlaces a adecuada para catalizar la reacción. El cambio de
reaccionar en la misma molécula, pero con libertad conformación también permite la formación de
rotacional). interacciones débiles adicionales en el estado de
Figura c: Se mantiene el mecanismo de reacción, pero transición.
ahora las moléculas están unidas por un enlace simple
carbono que está unido además a una estructura
cíclica. Con esto se mantiene la proximidad y además
Grupos catalíticos específicos contribuyen a la
las moléculas están fijas, ya que no es posible la
catálisis
rotación. Estas dos condiciones hacen que la velocidad
de la reacción aumente a 10 8. (enlaces a reaccionar en
Catálisis acido-base general:
la misma molécula, acercamiento óptimo sin
Muchas reacciones bioquímicas suponen la formación
rotación).
de intermedios cargados inestables que tienden a
descomponerse rápidamente en sus especies
reactivas
constituyentes, impidiendo así la reacción. Los
intermedios cargados se pueden estabilizar a menudo
transfiriendo protones a o desde el sustrato o
intermedio para formar una especie que se
descompone más fácilmente en productos. En las
reacciones no enzimáticas, las transferencias de
protones pueden utilizar solo los constituyentes del
agua u otros dadores o aceptores débiles de protones.
La catálisis que solo utiliza los iones H + (H3O+) u OH-
presentes en el agua se denomina catálisis acida o
básica especifica.
Si la transferencia de protones entre el intermedio y el
agua es más rápida que la descomposición del
intermedio en reactivos, el intermedio se estabilizara
de manera efectiva cada vez que se forma. En este
caso no se producirá catálisis adicional facilitada por
otros aceptores o dadores de protones.
No obstante, en muchos casos el agua no es
suficiente. El termino catálisis acido-base general se
refiere a transferencias de protones facilitadas por
otras clases de moléculas. En reacciones no
enzimáticas en disolución acuosa, esto se observa
solamente cuando la velocidad de descomposición del
intermedio inestable en reactivos es mayor que la
velocidad de transferencia de protones a o desde el
agua. Muchos ácidos orgánicos débiles pueden
suplementar al agua como dadores de protones en
esta situación, del mismo modo que bases orgánicas
débiles pueden servir como aceptores de protones.
Varias cadenas laterales de aminoácidos pueden
actuar de modo similar como dadores y aceptores de
protones, en el sitio activo de un enzima. Estos grupos
se pueden posicionar de forma precisa en el sitio
activo de un enzima para permitir la transferencia de
protones, generando incrementos de velocidad del
orden de 102 a 105. Este tipo de catálisis tiene lugar en
la gran mayoría de los enzimas. De hecho, las
transferencias de protones son las reacciones
bioquímicas más habituales.
 Los dos nuevos pasos han de ser más rápidos que la
reacción no catalizada. Diversas cadenas laterales de
aminoácidos, así como los grupos funcionales de
algunos cofactores enzimáticos, sirven como
nucleófilos para la formación de enlaces covalentes
con los sustratos. Estos complejos covalentes siempre
experimentan una reacción adicional con el fin de
regenerar la enzima libre. El enlace covalente formado
entre la enzima y el sustrato puede activar un sustrato
para una nueva reacción de una forma que es
normalmente específica para el grupo o coenzima
implicado.

Catálisis por iones metálicos:

Los metales, tanto si están fuertemente unidos a la
enzima o son captados de la solución junto con el
sustrato, pueden participar de diferentes maneras en
la catálisis. Interacciones iónicas entre un metal fijado
a la enzima y el sustrato pueden ayudar a orientar a
Modo en que un catalizador supera la formación un sustrato para que reaccione o estabilizar estados
desfavorable de carga durante la rotura de una amida: de transición de la reacción que estén cargados. Esta
Aquí se muestra la hidrolisis de un enlace amida, la utilización de interacciones de fijación débiles entre el
misma reacción que catalizan la quimotripsina y otras metal y el sustrato es similar a algunos de los usos de
proteasas. la energía de fijación enzima-sustrato ya descrita.
La formación de carga resulta desfavorable y se puede Los metales también pueden facilitar reacciones de
evitar mediante la donación de un protón por parte de oxidación-reducción mediante cambios reversibles en
(catálisis acida especifica) o por parte de HA (catálisis el estado de oxidación del ion metálico. Casi una
acida general), donde HA representa cualquier acido. tercera parte de las enzimas conocidas requieren uno
De modo parecido se puede neutralizar la carga por o más iones metálicos para su actividad catalítica.
captación del protón por parte de OH - (catálisis básica
especifica) o B: (catálisis básica general), donde B:
representa cualquier base.

Catálisis covalente:
La catálisis covalente implica la formación de un
RESUMEN Funcionamiento de los enzimas
enlace covalente transitorio entre el enzima y el
 Las enzimas son catalizadores muy eficientes,
sustrato.
capaces de aumentar las velocidades de reacción
Consideremos la hidrolisis de un enlace entre los
en un factor de entre 105 y 107.
grupos A y B:
 Las reacciones catalizadas por enzimas se
caracterizan por la formación de un complejo
entre el sustrato y la enzima (complejo ES). La
fijación del sustrato se produce en una bolsa de la
En presencia de un catalizador covalente (una enzima enzima llamada sitio activo.
con un grupo nucleofílico X:) la reacción se transforma  La función de las enzimas y de otros catalizadores
en: consiste en hacer disminuir la energía de
activación, ΔG‡ de una reacción para incrementar
su velocidad de reacción. El equilibrio de una
reacción no se ve afectado por la enzima.
Esto altera la ruta de la reacción y solo produce  Una parte significativa de la energía utilizada para
catálisis si la nueva ruta tiene una energía de el incremento de la velocidad de las reacciones
activación inferior que la ruta no catalizada. enzimáticas proviene de las interacciones débiles
 (enlaces de hidrogeno, interacciones hidrofóbicas concentración de ese reactante. Situación que se da
e interacciones iónicas) entre enzima y sustrato. por ejemplo en aquellas reacciones en que un
El sitio activo de la enzima tiene una estructura reactante está en un gran exceso (H 2O en las hidrólisis,
tal que hace que algunas de estas interacciones etc)
débiles tengan lugar de modo preferente en el
estado de transición de la reacción, con lo que lo
En una reacción de primer orden la velocidad de la
estabilizan.
reacción es directamente proporcional a la
 Una de las razones del tamaño de las enzimas es
concentración de un sustrato: v = k [A]. Así, en la
la necesidad de que existan múltiples
reacción:
interacciones. La energía de fijación, ΔGB, puede
utilizarse para disminuir la entropía del sustrato o
para producir un cambio de conformación en la La velocidad de hidrólisis de la sacarosa es, en todo
enzima (encaje inducido). La energía de fijación momento, proporcional a la concentración de
es también la responsable de la exquisita sacarosa. Dicho matemáticamente, donde [A] es la
especificidad de las enzimas por sus sustratos. concentración de sacarosa a cada tiempo (t) y k es la
 Entre los mecanismos catalíticos adicionales constante de proporcionalidad o de velocidad.
empleados por las enzimas se cuentan la catálisis Ésta es una reacción de primer orden para A.
acido-base general, la catálisis covalente y la Por su parte, es de orden cero para el H 2O.
catálisis por iones metálicos. La catálisis suele
implicar la existencia de interacciones covalentes
transitorias entre el sustrato y la enzima, o Una reacción de segundo orden es aquella en que la
transferencias de grupos desde o a la enzima, con velocidad de reacción depende de la concentración de
el fin de adoptar un camino de reacción nuevo y dos sustratos (como en una reacción de
de menor energía. condensación):

O del cuadrado de la concentración de un sustrato

(reacción de dimerización):

3) La cinética enzimática como método para

comprender el mecanismo En la siguiente reacción:

Conceptos de Cinética Química

 Es de segundo orden para A
ORDEN DE REACCIÓN:  Es de primer orden para B
El orden de reacción con respecto a cierto reactante,  La reacción es de orden total 3
es definido como la potencia (exponencial) a la cual
está elevado su término de concentración en la Con las enzimas, las reacciones son:
ecuación de velocidad o tasa de rendimiento.
Por su parte, orden de reacción de la reacción, es Primer orden: dependiente de la concentración de
definido como la suma de las potencias sustrato.
(exponenciales) de todos los términos de Orden cero: independiente de la concentración de
concentración participantes de la ecuación de sustrato.
velocidad o tasa de rendimiento.
En una reacción de orden cero para un reactante, la
velocidad de la reacción es independiente de la Unidad de actividad enzimática (UI)
DEFINICION: es la cantidad de enzima necesaria para
transformar un micromol (μmol) de sustrato en
producto por minuto y bajo condiciones estándares de
pH y temperatura.

U ó UI = μmol/ min

Normalmente se expresa en relación con el volumen

de muestra (en litros, l): U/l ó UI/L Cuando [S]>>>0 (concentración saturante de
(los metabolitos normalmente se expresan en mg/dl) sustrato):
Toda la E está como complejo ES ([Et] = [ES]) y el
Actividad específica (A.E.): Señala la relación entre sistema alcanza su Vmax de catálisis. (esta condición
las Unidades y las proteínas totales (mg). permite conocer la Vmax de la enzima, constante
cinética característica de la enzima)
La velocidad puede determinarse midiendo la
aparición de los productos o la desaparición de los
reactivos.
Al medir la formación de producto (o desaparición del
Es un criterio de pureza de la muestra enzimática (a
sustrato) en función del tiempo se obtiene la llamada
mayor AE, más pura se encuentra la proteína con
curva de avance de la reacción, o simplemente, la
respecto a las proteínas totales que hay en la
cinética de la reacción.
muestra).
[S], pendiente negativa, está desapareciendo
[P], pendiente positiva, está generándose

A medida que la reacción transcurre, la velocidad de

Cinética enzimática
acumulación del producto va disminuyendo porque se
La cinética enzimática estudia la velocidad de las va consumiendo el sustrato de la reacción. Para evitar
reacciones catalizadas por enzimas. esta complicación se procede a medir en velocidad
La velocidad de una reacción catalizada por un enzima inicial de la reacción (V0).
puede medirse con relativa facilidad, ya que en La velocidad inicial de la reacción es igual a la
muchos casos no es necesario purificar o aislar la pendiente de la curva de avance a tiempos cercanos a
enzima. cero. De esta forma, la medida de V 0 se realiza antes
La medida se realiza siempre en las condiciones de que se consuma el 5% del sustrato total, de forma
óptimas de pH, temperatura, presencia de cofactores, que pueda considerarse la concentración de sustrato
etc. [S], esencialmente constante a lo largo del
experimento.
Cuando se utilizan concentraciones muy altas de
sustrato (“saturantes”), la velocidad de reacción Primer supuesto:
observada es la velocidad máxima posible del sistema Velocidad inicial (V0): en tiempos muy cercanos a
(Vmax = constante cinética). cero, la pendiente de la curva de avance de la reacción
sigue una tendencia lineal hasta que se consume el 5%
de [S], por lo que podemos considerar [S] constante
durante ese periodo de tiempo. Durante este periodo
de tiempo la velocidad es real, ya que mantiene la
linealidad.
V0 va desde t = 0 a t = consumo de 5% de [S]

Con [E] constante, es decir, la misma en cada una de

las determinaciones a diferentes [S].
Luego para cada [S] es posible calcular una velocidad
inicial (V0).
Esto se hace a tiempos lo suficientemente cortos
como para estar por debajo del consumo del 5% de [S]
= en condiciones de V0.

Si representamos V0 frente a la concentración inicial

de sustrato, [S]0, obtenemos la siguiente gráfica ([S] 0 =
[S] en condiciones de V0):
[S] aumenta cuando aumenta el tiempo
Además, en estas condiciones (velocidad inicial) no es
necesario considerar la reacción inversa, ya que la
cantidad de producto formada es tan pequeña que la
reacción inversa apenas ocurre. De esta forma se
simplifican enormemente las ecuaciones de velocidad.

Segundo supuesto:
Reacción inversa: Cuando se mide la velocidad de
reacción en V0 no es necesario considerar la reacción
inversa desde ES → E + P, ya que la formación de
producto es muy pequeña.

Cuando [S]0 (concentración de sustrato inicial) es

Por la tanto, para estudiar la cinética enzimática se pequeña, la velocidad inicial es directamente
mide el efecto de la concentración de sustrato sobre proporcional a la concentración de sustrato y, por
la velocidad en condiciones de velocidad inicial (V0) tanto, la reacción es de primer orden.
de la reacción, manteniendo la cantidad de enzima
constante. A altas [S]0, la enzima se encuentra saturada por el
sustrato, y la velocidad ya no depende de [S] 0. En este
punto, la reacción es de orden cero y la velocidad de
la
reacción tiende a alcanzar el valor de velocidad
máxima (Vmax).
 Los estudios sistemáticos del efecto de la
concentración inicial del sustrato sobre la actividad
enzimática comenzaron a realizarse a finales del siglo
XIX. Ya en 1882 se introdujo el concepto del complejo
enzima-sustrato como intermediario del proceso de
catálisis enzimática. En 1913, Leonor Michaelis y
Maud Menten desarrollaron esta teoría y propusieron
una ecuación de velocidad que explica el
comportamiento cinético de los enzimas.

Para explicar la relación observada entre la velocidad

inicial (V0) y la concentración inicial de sustrato ([S] 0)
Michaelis y Menten propusieron que las reacciones
catalizadas enzimáticamente ocurren en dos etapas:
En la primera etapa se forma el complejo enzima-
sustrato (ES) y en la segunda, el complejo enzima-
sustrato da lugar a la formación del producto,
liberando la enzima libre:

En este esquema, k1, k2 y k3 son las constantes

cinéticas individuales de cada proceso y también
reciben el nombre de constantes microscópicas de
velocidad. Según esto, podemos afirmar que:

Efecto de [S] y [E] Se puede distinguir entre enzima libre (E) y enzima
unido al sustrato (ES), de forma que la concentración
total de enzima, [Et], (que es constante a lo largo de la
reacción) es:

 Efecto [S]: se usa para determinación de

constantes cinéticas y para cuantificación de
metabolitos en muestras biológicas (glucosa,
urea, colesterol, etc.).
 Efecto [E]: se usa para determinar cte. catalítica,
eficiencia enzimática, y cuantificación de enzimas HIPÓTESIS DEL ESTADO ESTACIONARIO
(principalmente muestras biológicas en
bioquímica clínica) Este modelo cinético adopta la hipótesis del estado
estacionario, según la cual la concentración del
complejo enzima-sustrato [ES] es pequeña y ([S] << Km):
constante a lo largo de la reacción (tercer supuesto).
Por tanto, la velocidad de formación del complejo
enzima-sustrato (v1) es igual a la de su disociación
(v2+ v3):
Como los términos entre paréntesis son constantes,
pueden englobarse en una nueva constante, k obs, de
forma que la expresión queda reducida a:
Así, los tres supuestos para obtener la cinética
enzimática son:
con lo cual la reacción es un proceso cinético de
1) [S] constante a V0 (se ha consumido < del 5% de
primer orden.
[S])
 A concentraciones de sustrato elevadas
2) No hay reacción reversa en ES → E + P
([S] >> Km):
3) [ES] es constante en el estado estacionario

Además, como [ES] es constante, la velocidad de La velocidad de reacción es independiente de la

formación de los productos es constante: concentración del sustrato y, por tanto, la reacción es
un proceso cinético de orden cero. Además, tanto k3
como [Et] son constantes, y nos permite definir un
nuevo parámetro, la velocidad máxima de la reacción
(Vmax) es:

que es la velocidad (V0) que se alcanzaría cuando

toda la enzima se encuentra unida al sustrato.

Si introducimos el parámetro Vmax en la ecuación

general de la velocidad, (la fórmula obtenida
anteriormente), tenemos la expresión más conocida
de la ecuación de Michaelis-Menten:
La expresión (k2+k3)/k1 se ha sustituido por Km, o
constante de Michaelis. Por lo tanto, en el estado
estacionario, la velocidad de formación del producto
es:

(ecuación de una hipérbola)

La constante de Michaelis-Menten (Km) es un
parámetro cinético importante por múltiples razones.
Km es propia para cada enzima

Km = Σ de las ki donde se disocia [ES] / Σ de las ki

donde se genera [ES]

Para cualquier reacción enzimática, [Et], k3 y Km son Sí tenemos en cuenta que Km se define como
constantes. Vamos a considerar dos casos extremos: (k2+k3)/k1

 A concentraciones de sustrato pequeñas

 suponer grandes cambios en la velocidad de toda una
ruta metabólica.

En resumen, se puede decir de Km que:

Así:
 Km grande (k2 + k3 >>> k1), el complejo ES es  Es la concentración de [S] a la que se alcanza la
inestable pues predomina la tendencia a mitad de la velocidad máxima de reacción.
disociación (poca afinidad hacia el sustrato).  Nos da una indicación de la afinidad de la enzima
ES desaparece parcialmente en ambas por el sustrato.
direcciones, por lo que la enzima unida al  Para sustrato naturales es menor que para
sustrato no es estable, o sea, la enzima no tiene sustratos análogos.
afinidad por el sustrato  Corresponde a la suma de las constantes de
microscópicas de disociación / las constantes
 Km pequeña (k2 + k3 <<< k1), significa que el microscópicas de asociación
complejo ES es estable, ya que predomina la
tendencia a formarlo (gran afinidad hacia el Los valores de Km de muchas enzimas son próximos a
sustrato). las concentraciones fisiológicas de sus sustratos.
Se forma mucho ES ya que la enzima es muy afín
al sustrato En un sistema regulado, la concentración es similar a
Km ya que pequeñas variaciones afectan su velocidad
Por lo tanto, el valor de Km entrega una idea de la inicial.
afinidad del enzima por el sustrato; Km es dependiente de la temperatura.
 A menor Km, mayor afinidad del enzima por el
sustrato
 A mayor Km, menor afinidad por el sustrato. Dependencia de V0 en función de la [S]
Curva de saturación por sustrato (hipérbola)
La Km del sustrato natural es menor que la de los
sustratos análogos.
Esto es debido a que el sustrato natural aprovecha
todas las interacciones de la mejor forma posible para
formar el complejo ES.

Si dos sustratos para una misma enzima tienen

distinta Km, el que presente mayor Km tiene menor
afinidad por el enzima, y la reacción transcurre
siempre a menor velocidad para ese sustrato.
Salvo a concentración saturantes de sustrato, donde la
v = Vmax = k3 [Et], y no depende del valor de Km

Km es la concentración de sustrato para la cual la

velocidad de reacción es la mitad de la velocidad
máxima.
En efecto, si Km = [S], la ecuación de Michaelis-
Menten se reduce a: V0 = Vmax/2.

Los inhibidores pueden afectar tanto Vmax como Km,

ya que su función es disminuir la V 0.

Los valores de Km de muchas enzimas son próximos a Determinación experimental de los valores de Km y
los de la concentración fisiológica de sus sustratos, de Vmax:
forma que pequeñas variaciones en la [S] pueden
Gráfica de dobles recíprocos (o de Lineweaver-Burk) Tipos de ensayos enzimáticos
Método del punto final:
Se ponen en contacto los reactivos (que aportan el
sustrato, tampones, cofactores, sales etc), se pre-
incuban a la temperatura de reacción. Se inicia la
reacción agregando la muestra biológica (que aporta
la enzima) y se cronometra el tiempo de reacción. Al
cabo del tiempo determinado (tiempo fijo), se detiene
la reacción y se mide la cantidad de sustrato
desaparecido o la cantidad de producto formado.
Actualmente, ya no es frecuente este tipo de técnica
por varios inconvenientes:
Se grafica 1/V0 en el eje Y y 1/[S] en el eje X. - Suposición de reacción lineal en el intervalo de
tiempo medido.
La V0 se mide a tiempo muy pequeño para asegurar
- Suposición de cinética de orden cero.
que solo se ha consumido menos del 5% de la [S].
Se obtiene el valor de ΔA/min dividiendo el valor de
El corte en el eje Y corresponde a 1/Vmax. Con este
absorbancia medido por el tiempo de reacción
valor y la ecuación se puede obtener Km desde
(tiempo igual para todos los tubos).
Km/(Vmax*[S]).
No se tiene una visualización del desarrollo de la
Km también se puede obtener desde el intercepto con reacción.
el eje X donde se tiene – 1/Km.

Valores de Km para algunos sistemas Enzima-Sustrato

Método o ensayo Cinético:
Comienza igual que el anterior, hasta que se inicia la
reacción (Se ponen en contacto los reactivos (que
aportan el sustrato, tampones, cofactores, sales etc),
se pre-incuban a la temperatura de reacción. Se inicia
la reacción agregando la muestra biológica (que
aporta la enzima).

Este caso, consiste en medir la absorbancia en tiempo

real a través de mediciones en intervalos constantes
de
tiempo (seguimiento en el tiempo de la formación de
producto o desaparición de sustrato, cinética).

Esta técnica permite comprobar que realmente se

esta
en zona lineal (velocidad inicial) de la curva. Si a
medida
que transcurre el tiempo el ensayo se comienza a
alejar de la linealidad se puede despreciar las lecturas
finales necesarias.

Se obtiene el valor de ΔA/min directo del equipo. Se

tiene una visualización directa del desarrollo de la
reacción, se puede escoger el intervalo de tiempo en
que la reacción es lineal.