UV Vis Spectroscopy Virtual Lab Español

Espectrofotometría UV-Visible
Determinación de la concentración de dos colorantes en una solución mezcla
En este trabajo práctico se utilizará un simulador al que pueden acceder mediante este
link:
http://web.mst.edu/~gbert/Color_Lg/color.html?455
El instrumento en esta simulación es un espectrofotómetro de luz ultravioleta / visible de

doble haz. Compara la intensidad de la luz (I) que atraviesa una celda que contiene una
muestra (un colorante en este caso) con la intensidad (Io) que atraviesa una celda idéntica
que contiene solo el solvente (agua en este caso). La salida del instrumento puede
seleccionarse como T % [100 (I / Io)] o A [log10 (Io / I)].
En este experimento, el instrumento está configurado para escanear longitudes de onda de

luz en la región visible, 400 a 680 nanómetros (nm), y para registrar Transmitancia % o
Absorbancia cada 10 nm.
¿Cómo se usa el simulador?

1. Preparación de soluciones patrones y de colorantes
Las flechas al lado de los cuadrados coloreados en la parte superior derecha permiten la
preparación de soluciones de concentraciones conocidas de los colorante rojo y azul como
patrones. Se dispone de una solución madre de colorante azul, otra de colorante rojo y
agua destilada. Haga clic en las flechas para preparar la composición deseada, luego haga
clic en la botella con atomizador para volcar la solución a la siguiente cubeta vacía. Haga
clic en “dump solutions” para corregir errores o preparar nuevas soluciones. Esto no
afecta las soluciones en las cubetas # 0, # 4 y # 5. La cubeta # 0 contiene agua destilada
(se usa para el blanco), # 4 contiene colorante rojo o azul de concentración desconocida
(ppm), y # 5 contiene una mezcla de colorantes rojo y azul de concentraciones
desconocidas.
2. Uso del espectrofotómetro
Haga clic en una cubeta en la gradilla para enviarla a la celda vacía. Hay tres botones
blancos en el panel vertical en la parte posterior del instrumento. En esta simulación, solo
el botón izquierdo está operativo, para alternar entre los modos de TRANSMISIÓN y
ABSORCIÓN (al acercar el mouse aparece escrito “mode” en amarillo, hacer clic ahí).
Cuando el mouse está sobre una de las tres perillas, aparecen flechas amarillas que
muestran la dirección en que girará la perilla en respuesta al hacer clic con el mouse. Un
clic en la mitad inferior de la perilla lo gira más rápido que un clic en la mitad superior.
Haga clic en la tapa del compartimento de la celda para abrirla o cerrarla. Si hay una
cubeta en el compartimento de la celda, se devolverá a la gradilla.
Experiencia:
Determinación de la concentración de dos colorantes en una solución mezcla
A. Selección de las longitudes de onda de trabajo (Espectros de absorción)

1. Encienda el instrumento
2. Prepare dos soluciones. Una de colorante rojo realizando una dilución a la mitad y otra
de colorante azul también realizando una dilución a la mitad.
3. Seleccione el modo de trabajo en transmisión
4. Opere la perilla izquierda para llevar la LECTURA DE TRANSMISIÓN A 0.0.
5. Seleccione el modo de trabajo en absorción

6. Seleccione la longitud de onda a medir (comience por 400nm). Opere la perilla grande
en la parte superior (plataforma) del instrumento para establecer la longitud de onda
deseada. Alternativamente, haga clic en “set wavelength” y escriba el valor deseado.
7. Haga clic en la cubeta de referencia en la posición # 0 para enviarla al compartimento
de la celda. Lleve la lectura a 0.000 de absorbancia con la perilla de la derecha.
Alternativamente, esto se puede hacer con un clic en “AutoZero”. El instrumento debe
ponerse a cero de absorbancia con la solución de referencia en CADA longitud de onda.
8. Haga clic en el compartimento de la celda para quitar la cubeta de referencia. Haga clic
en la cubeta de la dilución del colorante rojo para enviarla a la celda. Registre la lectura
de ABSORBANCIA y la longitud de onda. Repita esto para medir la absorbancia del
colorante azul
9. Repita los pasos desde 6 hasta 8 para cada longitud de onda. Se deben testear desde
400 a 680 nm en intervalos de 10 nm.
Función de escaneo:
El simulador es capaz de escanear una muestra a longitudes de onda entre 400 y 680
nm. Sin embargo, las incógnitas (celdas 4 y 5) no se pueden escanear. Realice los pasos
1 y 2 anteriores, si aún no lo ha hecho. Haga clic en una muestra para enviarla al
compartimento de la celda. Haga clic en escanear.
Aparece una tabla que enumera las absorbancias a intervalos de 10 nm entre 400 y 680
nm. Esta tabla se puede imprimir desde el menú archivo en la barra de herramientas. El
escaneo se guarda para su posterior visualización con la visualización de todos los
escaneos.
Graficar los espectros de absorción para cada colorante. (Absorbancia vs. Longitud de
onda). Elegir como Longitud de onda de trabajo a aquellas donde se presentan los
máximos de absorción para cada colorante, preferentemente con absorción mínima
para el otro colorante)
B. Hacer curvas de calibración de las soluciones de colorantes (por separado) para

conocer la relación entre absorbancia y concentración para cada colorante a las longitudes
de onda seleccionadas
1. Preparar tres soluciones estándares del colorante rojo utilizando la solución madre, una
dilución al medio y una dilución al cuarto.
2. Setear en el equipo la primera longitud de onda seleccionada.
3. Llevar a cero con el blanco
4. Leer las absorbancias de los tres estándares
5. Graficar Absorbancia vs. Concentración (ppm) y obtener la ecuación de la recta.
6. Repetir el procedimiento para la segunda longitud de onda seleccionada
7. Repetir el procedimiento para tres soluciones del colorante azul utilizando la solución
madre, una dilución al medio y una dilución al cuarto a las dos longitudes de onda.
8. Al final de esta etapa de la experiencia, Ud. Deberá tener 4 representaciones de Beer.
Dos para cada colorante, cada una a cada longitud de onda.
C. Determinar las absorbancias de la muestra a las dos longitudes de onda seleccionadas

1. Seleccionar la longitud de onda,
2. llevar a cero con el banco y
3. leer la absorbancia de cada muestra (#4 y #5).
4. Repetir de 1 a 3 para la segunda longitud de onda.
D. Calcular la concentración de cada colorante en la solución mezcla

1. Reemplazarlos valores obtenidos en las Ecuaciones de Beer para ambas longitudes de
onda y despejar la concentración de cada colorante en cada muestra. Los resultados
pueden controlarse mediante “check results”.
Realice un informe con los datos experimentales obtenidos. Incluya:
Espectros de absorción, representaciones de Beer, Ecuaciones utilizadas y concentraciones
de colorante Azul y Rojo en las muestras #4 y #5.
Nota:
Comprobar sus respuestas dentro del laboratorio virtual (CHECK RESULTS) y enviar un
pantallazo de los resultados que salgan en su INFORME (Incluirlo en el apartado de
Resultados)

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Determinación de la concentración de dos colorantes en una solución mezcla

El instrumento en esta simulación es un espectrofotómetro de luz ultravioleta / visible de

En este experimento, el instrumento está configurado para escanear longitudes de onda de

¿Cómo se usa el simulador?

A. Selección de las longitudes de onda de trabajo (Espectros de absorción)

5. Seleccione el modo de trabajo en absorción

B. Hacer curvas de calibración de las soluciones de colorantes (por separado) para

C. Determinar las absorbancias de la muestra a las dos longitudes de onda seleccionadas

D. Calcular la concentración de cada colorante en la solución mezcla

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