FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

Escuela Académico Profesional de Farmacia y Bioquímica

Tema: PRUEBAS EN BACTERIAS GRAM (-) TOLERANTES

A LA BILIS: Escherichia coli, Salmonella spp.

Curso: Control Microbiológico

Docente: SANCHEZ, Evelyn Yuliana

Grupo: 5

Integrantes:

• HERBOZO MORALES, Cesar Gustavo

• INOCENTE LAURENCIO, Miriam Angela
• QUINCHO SEGURA, Roxana

Lima - Perú
2022
 • Escherichia coli
1.- Pruebas en bacterias Gram (-) tolerantes a las sales biliares. • Salmonella sp.
• Pseudomonas aeruginosa.
La tolerancia a la bilis: • Staphylococcus aureus.
• Candida albicans
• Es considerada una 27 característica muy
importante en probióticos, que les permite
sobrevivir, crecer y realizar sus actividades en
el intestino delgado
• El mayor constituyente orgánico de la bilis
1. ¿Quiénes son tolerantes
son las sales biliares y, en menor cantidad,
(resistentes) a las sales biliares?
el colesterol, fosfolípidos, y el pigmento
biliverdin. Gram (-) tolerantes 2. ¿Porque son resistentes a las
sales Biliares?
a las sales biliares.
Las sales biliares:

Son sintetizadas a partir del colesterol en el

hígado, y son almacenadas como aminoácidos
conjugados en la vesícula biliar

• DEPoseen
ENSAYO CUANTITATIVO ENTEROBACTERIAS Y OTRAS
propiedad antibiótica.
TEST DE AUSENCIA DE ENTEROBACTERIAS Y OTRAS BACTERIAS GRAM NEGATIVAS
• Tiene doble membrana celular,
BACTERIAS GRAM NEGATIVAS ENRIQUECIMENTO PRIMARIOendotoxinas.
Preparar tres tubos con diluciones que contengan 0.1 g,
ENRIQUECIMENTO PRIMARIO • Capa de lipopolisacaridos.
Salvo indicación prescrita, sembrar el volumen 0.01 g y 0.001 g del producto a examinar en 10 ml de Caldo
correspondiente a un 1 g de producto en 100 EE Maseel (CAT. 1202).
PREPARACIÓN DE LA MUESTRA Incubación a 30-35 °C // 24-48 horas
ml de Caldo EE Massel (CAT. 1002).
En una concentración 1:10 preparar la muestra Incubación a 30-35 °C // 24-48 horas AISLAMIENTO SELECTIVO
usando al menos 1g del producto a examinar en Caldo AISLAMIENTO SELECTIVO Realizar subcultivos en placas de Agar Bilis y Rojo Violeta
Soja Tripticaseína (TSB) (CAT.1224) y homogeneizar. Realizar subcultivos en placas de Agar Bilis y con Glucosa (VRNG) (CAT. 1092).
Rojo Violeta con Glucosa (CAT. 1092) Incubación a 30-35 °C // 18-24 horas
Incubación a 20-25 °C // 2-5 horas Incubación a 30-35 °C // 18-24 horas INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS El crecimiento de colonias constituye un resultado positivo.
Esta solución de stock puede suplementarse Anotar la menor cantidad del producto que da un resultado
El producto satisface el ensayo si no se
conneutralizantes y surfactantes. positivo y la mayor cantidad que da un resultado negativo.
observa crecimiento de colonias
Consultar la tabla 2.6.13.2 de la Farmacopea Europea
 2.Pruebas en Bacterias gram (-) tolerantes a la bilis: Escherichia coli

Microorganismo indicador de
malas prácticas higiénicas o
contaminación fecal durante la
Muestra equivalente a 1 ml de
fabricación o manipulación de La Farmacopea Europea,
producto a un volumen de Caldo TSB
fármacos. USP recomienda
Incubar entre 30 y 35° C durante 18
a 24 hs.
Ensayo
Aislar en Agar Mac Conkey.
Escherichia coli. Agar Macconkey

Incubar las placas entre 30° C y 35°

C durante 18 a 72 hs
Aislamiento selectivo.

Formulación g/l
Identificación de
CARACTERÍSTICAS Enterobacteriaceae de
DE LAS COLONIAS. las heces, la orina, aguas
residuales y alimentos.
Agar bacteriológico → 15 sales biliares

Cristal violeta → 0.001 peptona de gelatina Asimismo, es un medio

• Rojo o rosa; Lactosa → 10 rojo neutro selectivo y diferencial
• No mucoide; para el aislamiento de
• Redonda. Mezcla de peptona → 3 Cloruro de sodio bacterias Gram-negativas
entéricas.

Muestra: Mín. 10 g o 10 mL
 3. Pruebas en Bacterias gram (-) tolerantes a la bilis: Salmonella sp. Sembrar: Caldo TSB
Mezclar e incubar a 30-35 °C
Muestra y pre-
Composición: MgCl2: eleva la durante 18-24 h.
incubación
presión osmótica del medio;
Verde malaquita: inhibe los
organismos diferentes. Caldo Rappaport Vassiliadis:
Preparación Transferir 0,1 mL de caldo
Selección TSB a 10 mL a este caldo y
Resultado +: Aspecto Incubar.
Caldo
lechoso del medio o Prueba de
Rappaport
por la turbidez. selección
Vassiliadis Agar XLD: En placas Incubar
Subcultivo
a 30-35 °C durante 18-48 h.
Carácter selectivo: El pH bajo
(5,1 ± 0,2) alta presión
osmótica. Salmonella sp.

Crecimiento de colonias
Composición: Desoxicolato de
rojas
sodio: agente selectivo; Lisina: Prueba de
diferencia; lactosa y sacarosa: Agar de
confirmación Características
produce ácido en exceso; xilosa, lisina,
de colonia
indicador de H2S: origina desoxicolato Con o sin punto negro
colonias con centros de color .
Producto
negro.
contaminado
Resultado + Confirmación con agar
XLD.

Salmonella positiva a H2S: De Salmonellas negativas La salmonella se adhiere en la porción

rojo a amarillo con centros de a H2S: Rojo distal del intestino delgado del colon,
color negro. provocando una diarrea profusa.
 Bibliografía

1. Beuchat, L.R., J.E Corry, A.D King, Jr. And J.I Pitt (ed) 1986) Methods for the
mycological examination of food. Plenum Pres, New York European
Pharmacopoeia. 9.3.
2. Instrucciones de uso -medios en frascos listos para usar [Internet].
Legacy.bd.com. [citado el 5 de junio de 2022]. Disponible en:
https://legacy.bd.com/europe/regulatory/assets/ifu/hb/ce/ba/es-ba-257257.pdf
3. Cerra H, Horak C, Lagomarsino M, Torno G, Zarankin E. Manual de
microbiología aplicada a las industrias farmacéutica, cosmética y de productos
médicos [Internet]. Org.ar. [citado el 5 de junio de 2022]. Disponible en:
https://www.aam.org.ar/descarga-archivos/manual-microbiologia-aplicada.pdf
4. Instrucciones de uso -medios en placa listos para usar [Internet]. Www.bd.com.
[citado el 5 de junio de 2022]. Disponible en:
https://www.bd.com/resource.aspx?IDX=8783#:~:text=BD%20XLD%20Agar%20
(agar%20de,aislamiento%20de%20la%20especie%20Shigella.