MICROSCOPIA EN HONGOS, BACTERIAS Y

LEVADURAS

Avendaño Montoya María José - Nuñez Tapias Estefany Yulieth – Quintero Landaeta Stiven -
Peña Contreras Josue Alejandro

Laboratorio de Microbiología, Grupo A, Departamento de

Microbiología, Universidad de Pamplona

tercera morfología como son las que

RESUMEN: En el presente informe tienen forma de espirales denominadas
se evidenció el proceso realizado en el espirilos. A su vez cada categoría puede
laboratorio, empezando por subclasificarse con base a diferentes
identificar las partes del microscopio arreglos.
con sus respectivas funciones y Estas características pueden
practicar el manejo adecuado del determinarse examinando muestras al
mismo. Después se realizó una microscopio. Las células no teñidas
práctica donde se aprendió a montar son prácticamente transparentes, pero
muestras adecuadamente con las pueden observar al microscopio de luz
láminas ubicadas de manera correcta, haciendo preparaciones entre lámina y
cada vez enfocando en los diferentes laminilla o con microscopio
objetivos, por último, nos especiales.
concentramos en la observación de Si se tiñe una muestra del cultivo
organismos unicelulares como lo son extendida y fijada en una lámina porta
las bacterias los hongos y las objeto con un colorante dado, las
levaduras, cabe aclarar que al ver este células adquirían el color del colorante
tipo de microorganismos se evidencio añadido y podrá observarse la forma
el lugar en el cual permanecen. tamaño y el arreglo de las mismas. Este
tipo de coloración se conoce como
PALABRAS CLAVES: Microscopia, tensión simple.
Análisis, Identificación,
Microorganismos. MATERIALES
• Azas de
inoculación: Son
INTRODUCCIÓN
dispositivos
Una de las características más portátiles para
importantes de las bacterias es su la inoculación de
morfología, definida por el tamaño, la microorganismos (como
forma, el arreglo y la estructura. bacterias o levaduras), en
Existen bacterias en forma redondeada medios de crecimiento que
denominadas cocos, en forma pueden estar en placa o en
cilíndrica, denominada bacilos y una tubo antes de la incubación,
 multiplicación y almidón
crecimiento. • Safranina: Es un colorante
• Mechero de bunsen: es un biológico, de contraste que se
instrumento utilizado en utiliza en la Tinción de Gram
laboratorios para calentar para proporcionar un color
muestras y violeta más intenso a las
sustancias químicas. Está bacterias Gram+ y tiñe de rosa
constituido por un tubo vertical a las bacterias G- ; en histología
que va enroscado a un pie y en citología.
metálico con ingreso para el • Azul de lactofenol:
flujo de gas, el cual se regula a preserva e identifica a los
través de una llave sobre la componentes
mesa de trabajo. estructurales de los
• Microscopio: Es una hongos
herramienta que permite
observar MÉTODOS PREPARACIÓN DE
elementos que no pueden FROTIS PARA LA TINCIÓN
observarse o son invisibles a
simple vista, a través de lentes, • Limpiar bien las láminas (
visores y rayos de luz, que con agua jabón, papel,
acercan o agrandan la imagen luego desengrasar con
en escalas convenientes para su alcohol, dejando evaporar,
examinación y análisis. es esencial para ya que la
• Papel para limpiar lentes: grasa o aceite de los dedos
Papel de seda, utilizado para no permiten una buena
limpiar los lentes del elaboración de frotis)
microscopio sin rayarlos • Identificar la lámina con
Laminas o porta objetos nombre o numeración de
la muestra.
REACTIVOS • Colocar una gota de
• Azul de metileno: Reactivo solución salina estéril al
químico usado principalmente (0.85%) sobre la lámina o
en los laboratorios para tinción portaobjetos.
de levaduras, vino y mostos • Transferir una pequeña
• cristal violeta: es usado en cantidad de células desde
química como un el cultivo a la lámina con
indicador de pH para probar el asa de inoculación
los intervalos de pH de 0 a estéril, colocando una
1,0. En el extremo ácido de gota de solución salina en
su forma circular y
intervalo de medición, toma un homogenizar.
color amarillo. • Dejar secar al aire.
• Lugol: Reactivo • Realizar la fijación
utilizado para pasando el
reconocer la portaobjeto 2 o 3
presencia de veces sobre la llama
 del mechero.

PROCEDIMIENTO PARA
TINCIONES SIMPLE
• Se sacaron 4 muestra
de proteus sp los
cuales se les agregó
las siguientes E-coli, (verde malaquita) vista 10x
tinciones: azul de
metileno, cristal
violeta, safranina.
• A la bacteria
saccharumyces sp
se le agregó la tinción de
Lugol.
• Con el gotero se les
Bacillus, (verde malaquita) vista 40X
adiciona a las muestras
mencionadas anteriormente
su reactivo
correspondiente, con un
gotero y dejar por 1 minuto.
• Cuando ya haya una
coloración se remueve el
exceso con agua en
manera de goteo.
• A continuación, se deja Entercoccus, (azul de metileno) vista
secar y se lleva al 10X
microscopio.

RESULTADOS

Klepsiella, (azul de metileno) vista 40X

Salmonella, (Azul de metileno) vista

10X

METODOS DE TINCIONES
COMPUESTAS

1. Realice el frotis con la técnica

adecuada y fíjelos al calor.
2. Vierta sobre el frotis Cristal Violeta y
déjelo actuar por 1 minuto.
3. Lave con agua de la llave a baja
presión y escurra.
4. Cubra ahora el frotis con Lugol y deje
actuar por 1 minuto.
5. Lave con agua de la llave a baja
presión y escurra. Bacillus compuesta
6. Cubra ahora con solución decolorante
por 30 segundos. Al analizar tinciones simples, de las colonias
7. Lave con agua de la llave a baja sembradas que posteriormente, fijamos en el
presión y escurra. portaobjetos, al aplicarle los colorantes
8. Cubra ahora con colorante de cristal violeta y safranina entre otros por el
contraste (Safranina) y deje actuar por 1 tiempo especificado, solo debíamos observar
minuto. su forma o morfología celular identificando,
9. Lave con agua de la llave a baja su estructura como: cocos, bacilos, espirilos,
presión y escurra. o lo que fueran, y debimos identificar si los
10. Permita que se seque al aire dejando microorganismos fueran Gram positivos y
la lámina en posición inclinada. demás. Al realizar la tinción compuesta se
11. Observe al microscopio con los lograría observar aparte de su morfología
siguientes objetivos: 10X – 40X – 100X celular, también identificar si eran Gram
utilizando este positivas y para poder lograr apreciar esto
último con aceite de inmersión. tuvimos que aplicar los colorantes con el
Interpretación: Microorganismos Gram tiempo indicado a cada uno de las muestras
positivos : Violeta fijadas. Aplicamos azul de metilo por 1
minuto, luego por un minuto, quitando el
sobrante del colorante en cada paso con agua
Microorganismos Gram negativos: Rojo
a baja presión, posteriormente después de
o rosado
teñidas la llevamos al microscopio y en el
objetivo de 10x, 40x y 100x con aceite de
inmersión, se lograría identificar si eran gran
positivas o gran negativas, pero no pudimos
por posibles problemas con el frotis o el
ANALISIS DE DATOS
microscopio o alguna falla con las muestras.
Conclusiones
Al terminar la práctica de laboratorio
pudimos concluir que cada tinción tiene su
método a realizar, en el caso dela tinción
simple es las rápido de hacer entre 1
a 2 minutos dependiendo del colorante
usado, la tinción compuesta lleva más
tiempo y por ende mucho más cuidado se
debe tener al momento de realizar la tinción
se usa más de un colorante para dicha
Klepsiella compuesta, (cristal violeta, tinción.
lugol, safranina) vista 40X