COLORACOONES

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I.2. Procedimiento experimental

I.2.1. Examen en fresco-levaduras.
 Tomamos una lamina de portaobjeto, limpiamos y desengrasamos con
alcohol, esterilizamos el asa de siembra mediante el flameado del mechero
hasta que se ponga roja y enfriamos.
 Con el asa de siembra colocamos una gota de la muestra a observa en la
lamina del porta objeto y cubrimos con el cubre objeto sobre la gota.
 Llevamos al microscopio y utilizamos el primer objetivo de 10X para el
rastreo de la muestra y luego el de 40X para poder observar de manera
detallada la levadura encontrada en la muestra.
I.2.2. Coloración o tincion simple-levaduras.

alcohol.
 Colocamos con el asa de siembra esterilizada una gota de la solucion
salina en el portaobjeto, luego tomamos una alicuota de la muestra de
levadura y mezclamos con la solución salina esteril.
 Extendemos en la lamina (fontis) dejandolo ni muy gruesa ni muy fina.
 Procedemos a secarlo pasando por la llama del mechero y luego
fijamos haciendo un pase de tres a cuatro veces en la flama del
mechero, teniendo el cuidado de no dejarlo mucho tiempo para que no
se mueran los microorganismo por exceso de temperatura.
 Una vez fijada la muestra, cubrimos con dos a tres gotas del colorante
azul de metileno y dejamos actuar por un minuto, ser puntual con el
tiempo ya que si lo dejamos mucho tiempo el colorante la muestra
puede cristalizarse y esta dificultaria la observación.
 Lavamos la preparación con agua destilada, evitar que el chorro de
agua caiga directamente sobre el frontis, hacerlo de manera inclinada.
 Secamos con la flama del mechero y llevamos a observarlo en el
microscopio usando el lente de inmercion conjuntamente con el aceite
de inmercion.
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I.2.3. Coloración o tincion simple-yogurt

alcohol.
 Colocamos con el asa de siembra esterilizada una gota de la solucion
salina en el portaobjeto, luego tomamos una alicuota de la muestra de
yogurt y mezclamos con la solución salina esteril.
 Extendemos en la lamina (fontis) dejandolo ni muy gruesa ni muy fina.
 Procedemos a secarlo pasando por la llama del mechero y luego
fijamos haciendo un pase de tres a cuatro veces por la flama del
mechero, teniendo el cuidado de no dejarlo mucho tiempo para que no
se mueran los microorganismo por exceso de temperatura.
 Una vez fijada la muestra de yogurt, cubrimos con dos a tres gotas del
colorante azul de metileno y dejamos actuar por un minuto, ser puntual
con el tiempo ya que si lo dejamos mucho tiempo el colorante la
muestra puede cristalizarse y esta dificultaria la observación.
 Lavamos la preparación con agua destilada, evitar que el chorro de
agua caiga directamente sobre el frontis, hacerlo de manera inclinada.
 Secamos con la flama del mechero y llevamos a observarlo en el
microscopio usando el lente de inmercion conjuntamente con el aceite
de inmercion.
I.2.4. Coloración compuesta: Tinción GRAM-yogurt
 Realizamos todo el procedimiento para la preparacion del forntis
tomando en cuenta los puntos correspondientes para un calentamiento
moderado y asi no calcinar a los microorganismos en la muestra del
yogurt.
 Cubrimos con solución cristal violeta por un minuto, tener presente la
exactitud del tiempo.
 Transcurrido el tiempo lavar con agua destilada poniendo de manera
inclinada el porta objeto sin que el chorro caiga directamente en la
muestra, escurrimos los restos de agua que quedaron.
 Cubrimos la muestra con el mordiente lugol dejandole actuar por un
minuto.
 Volver a lavarlo con agua destilada.
3
 Agregar alcohol acetona hasta que la muestra no arrastre colorante y

luego volver a lavarlo con agua destilada.
 Escurrimos bien los restos de agua que quedaron y colocamos el
contracolorante safranina por un minuto.
 Lavamos con agua destilada por un tiempo prolongado, escurrimos
bien.
 Secamos con la ayuda del mechero y lo llevamos al microscopio
utilizando el objetivo de inmersion en conjunto con el aceite de
inmersion, tener presente que el lente debe estar dentro de la muestra y
aceite para mayor observación.
Precauciones
Para obtener una buena lámina de Gram, es necesario tomar en cuenta ciertas
precauciones tanto en su preparación como en su observación bajo el microscopio
con el objetivo de inmersión.
 Extendido: Este paso es importante ya que la preparación debe ser fina y no
gruesa. Si se coloca demasiada muestra del cultivo bacteriano, el extendido
quedará muy grueso y una vez teñido, sin la ayuda del microscopio se
observará una gran mancha coloreada, pero vista bajo el microscopio, con el
objetivo de inmersión, se observará una masa oscura de estructuras que no
pueden ser distinguidas en forma individualizada y el proceso de
identificación de la morfología, arreglos y estructuras tipo endosporas, etc. se
dificulta.
 Fijación: Si el extendido bacteriano no se fija adecuadamente, las células
bacterianas se pierden durante el proceso de tinción que involucra varios
lavados y trae como consecuencia la ausencia de bacterias teñidas. Por el
contrario un sobrecalentamiento puede ocasionar la aparición de artefactos
y la ruptura de la morfología de las células bacterianas. Antes de colocar la
lámina en la platina determine en cuál lado de la lámina
portaobjeto está localizado el extendido.
 Observe varios campos hasta encontrar aquél que permita una identificación
de la morfología, estructura y reacción al Gram.
4
II. RESULTADOS
Muestra Examen en fresco Coloración simple
Utilizando el objetivo 10X Mediante este método se

para rastreo del pudo observar con más
microscopio, se ubicó a las detalle la morfología de las
levaduras donde levaduras ya que
observamos de manera presentaban la forma
panorámica pequeñas esférica y que estaban
bolitas suspendidas. agrupadas sin movimiento
LEVADURA Cuando observamos con el ya que al aplicar esta
objetivo 40X se pudo ver coloración se tiene que
con más detalle que tenían fijarlo
la forma de pequeñas
esferas traslucidas y que
estaban suspendidas
realizando movimientos
muy irregulares
(movimiento browniano).
Coloración simple Método GRAM
YOGURT
Tabla1
Tabla de resultados a partir de los dos Erlenmeyer
5
III. CONCLUSIÓN

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I.2. Procedimiento experimental

I.2.2. Coloración o tincion simple-levaduras.

I.2.3. Coloración o tincion simple-yogurt

 Agregar alcohol acetona hasta que la muestra no arrastre colorante y

Utilizando el objetivo 10X Mediante este método se

Coloración simple Método GRAM

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