Guia de Actividades Bacteriologia

Guia de actividades Bacteriologia.
DIIAGNOSTICO
1. En los siguientes procesos infecciosos, cuál sería la toma de muestra adecuada? cómo la
tomaría? Qué medio de transporte utilizaría, si es que debe utilizar alguno? Cómo la
conservaría, a T° ambiente ó a 4C°?
- Vaginitis: Hisopado vaginal de alginato de calcio o dacron con medio de transporte. La
muestra se toma de la zona donde hay más exudado o fondo de saco vaginal posterior.
Se deben tomar dos muestras: una para microbiológico y otra para cultivo. Con
respecto al transporte, si se procesa antes de los 15min se utiliza transporte Stuart a
temperatura ambiente. Si o si la muestra debe ser procesada antes de las 3 a las 6hs,
conservándola a 35- 37ºc.
- Uretritis: Hisopado uretral en alginato de calcio o hisopado de dacron. Se toma la

muestra introduciendo el hisopo con movimientos de rotación hasta penetrar 2cm. Se
debe realizar transporte Stuart a temperatura ambiente. Se deben tomar dos muestras
(igual a vaginitis).
- Endocarditis: la muestra corresponde a hemocultivo, se conserva en frasco de

hemocultivo, obtenido de sangre intravenosa, a temperatura ambiente por 2hs. Se
deben tomar dos muestras, por 10ml cada una.
- NAC: la muestra corresponde a esputo tras una expectoración profunda, el volumen

de la muestra es de 2- 10ml. Se debe de enviar de inmediato al laboratorio, no superar
las 2hs. Si supera las 2hs, conservar a 4ºc.
- Neumonía asociado a respirador: aspirados traqueales (método más sencillo),

cepillado bronco alveolar, lavado bronco alveolar.
- Infección urinaria: en mujeres, la muestra debe ser orina chorro medio, al igual que los
hombres, se debe recoger sin interrumpir la micción. Se debe enviar al laboratorio
antes de que se supere la hora. Si se supera la hora se debe mantener la muestra a
4ºc, el limite son 24hs.
- Meningitis: la muestra corresponde a LCR, a partir de la punción lumbar en los

espacios L3-L4. Se deben enviar de inmediato al laboratorio, conservándola a
temperatura de 35- 37ºc, otra parte de la muestra debe incubarse en frasco de
hemocultivo. Del lcr se deben obtener tres muestras: una para bioquímico, otra para
microbiológico y la última para predominio celular.
- Faringitis: hisopado faríngeo en zonas donde haya exudado, se utiliza un hisopo de

algodón, frotando mucosa por detrás de úvula, entre pilar amigdalino y faringe
posterior. No presenta un transporte específico.
Bacteriología @medclases Josefina Llano

- Abscesos hepáticos: se realiza punción- aspiración con aguja y jeringa o también la
muestra se puede tomar vía percutánea. Se utiliza transporte de anaerobios a
temperatura ambiente.
- Celulitis pared abdominal: aspirado del borde de la lesión o biopsia, hemocultivos.
2- Que estructuras puedo observar en el examen microscópico en fresco?
El examen microscópico en fresco es ideal para observar microorganismos o tejidos biológicos

que requieren ser hidratados. Permite observar microorganismos vivos, y estudiar algunas
características como la movilidad bacteriana y la aglutinación. En líquidos orgánicos, se
observan elementos citológicos y la presencia o no de bacterias
3- Que coloraciones se usan en bacteriología y para qué sirven?
1) TINCIÒN GRAM: tiñe paredes bacterianas y sirve para clasificar las bacterias en gram +
y gram-
2) TINCION ZIEHL- NEELSEN: permite demostrar bacterias acido alcohol resistentes . Usa
colorante fucsina en presencia de calor, luego se decolora con etanol/ hcl. Debido a la
acido alcohol resistencia, la bacteria retiene sustancias hidrofóbicas y NO se decolora.
3) TINCION AZUL DE METILENO DE LOEFFER: Se utiliza en corynebacterium difteriae, tiñe
granulos metacromaticos, y le da una coloración rojiza (los granulos presentan reserva
de polifosfatos)
4) COLORACIÒN DE ESPORAS: a partir de la presencia del calor y la tinción verde de
malaquita o carbofuxina se evidencia la espora que no se destiñe, ya que retiene el
colorante.
4- Pasos del diagnóstico bacteriológico:
1- Toma de muestra: este paso se debe realizar de la forma más estéril posible, en el
recipiente adecuado, con el volumen adecuado y la mínima contaminación con
microbiota normal.
2- Transporte de la muestra: se debe realizar con mínima demora en procesamiento y
manteniendo la viabilidad del microbio.
3- Observación macro- microscópica (fresco- tinción)
4- Cultivo microbiológico
5- Identificación microbiológica a partir de prueabas bioquímicas o genéticas-
inmunológicas.
6- Pruebas de sensibilidad antibacteriana
5- Clasificación de los antibacterianos:
Bacteriostáticos Bactericidas
Detiene el crecimiento bacteriano Generan la lisis bacteriana
Inhibidores de la síntesis de la pared B- LACTAMICOS

- Penicilina
- Cefalosporinas

- Carbapenemicos
- Monobactam
GLUCOPEPTIDOS
- Vancomicina
Inhibidores de la síntesis de proteínas INHIBIDORES DE LA SUBUNIDAD 30S

- Tetraciclina
- Aminoglucosidos
INHIBIDORES DE ÑA SUBUNIDAD 50S
- Macrolidos
- Clindamicina
- Linezolid
- Cloranfenicol
Inhibidores de ácidos nucleicos INHIBIDORES DE ADN GIRASA
- Quinolonas
INHIBIDORES DE ARN POLIMERAZA
- Rifampicina (tuberculosis)
Metabolismo de ácido fólico - Trimetropina
- Sulfametixazol
6-Nombre los principales antibacterianos y su mecanismo de acción
-Beta lactamicos:
Inhiben la síntesis de peptidoglicano, principalmente en la etapa final donde actúan las

enzimas carboxipeptidasa y transpeptidasa. Son los más utilizados e inhiben el crecimiento
bacteriano
Ejemplos: penicilina- cefalosporinas- carbapenemicos- monobactam
-Aminoglucosidos:
Actúan a nivel de la subunidad 30s del ARN ribosomal, inhibiendo la síntesis de proteínas,
teniendo actividad microbicida.
Ejemplos: estreptomicina- gentamicina- amikacina

-Macrolidos:
Inhiben la síntesis de proteínas al unirse a la subunidad 50s de manera reversible.
Ejemplos: claritromicina- eritromicina- azitromicina
-Quinolonas:
Bloquean la subunidad a de la ADN girasa y la topoisomerasa IV bacteriana. De forma más

sencilla, inhiben la preparación del adn para l transcripción.
Ejemplos: ciprofloxacina- norfloxacina
7- Con que pruebas se puede determinar la sensibilidad a los antimicrobianos? Que es
la CIM y CBM?
Existen dos métodos para determinar la sensibilidad de los antibióticos:
- Método de difusión en agar.

- Método de dilución de antimicrobianos.
Métodos de difusión se utilizan discos de papel impregnados con distintos antimicrobianos,

estos se colocan en placa de Petri con un agar especial llamado mueller- hinton, inoculado con
la bacteria a probar. Al hacer contacto el antígeno con el antibiótico se crea una gradiente de
concentración, que es mayor en la zona que rodea el disco (en la zona donde la concentración
antibióticos es mayor no se creara la colonia bacteriana). La medición del halo permite
clasificar los antibacterianos en SENSIBLES, MODERADAMENTE RESISTENTES, RESISTENTES A
UN DETERMINADO ATB.
Este método es
CUALITATIVO.
Métodos de dilución destinada a determinar cuál es la mínima concentración del atb

necesaria para inhibir el desarrollo o ejercer un efecto lítico sobre una determinada cepa.
CIM concentración inhibitoria mínima. Es la concentración de antibiótico donde se logra

99% de efecto en donde el germen deja de desarrollarse.

CMB concentración mínima bactericida. Es la más baja concentración de antibiótico que
elimina el 99, 9% de inoculo bacteriano inicial, luego de 24hs de incubación.
El CIM determina la concentración de antibiótico que se necesita para ejercer efecto sobra la
bacteria. En el caso de la imagen, en el tubo de ensayo se pusieron diluciones crecientes, de
derecha a izquierda de antibiótico, en cada tubo había la misma concentración de bacteria. En
el cuarto tubo, se observa la CIM, entonces la dilución de antibiótico que se utilizo es marcada
como CIM.
Con respecto a la CMB, es la concentración mínima que se necesita para generar LISIS
antigénica. Sirve para determinar si el antibiótico es o no bactericida, es por eso que en el
grafico la CMB se da recién en el SEXTO tubo de ensayo, eso significa que el antibiótico no es
bactericida ya que se utilizan altas concentraciones de atb, no siendo coherente para la
administración en humanos. Un antibiótico bactericida es coherente cuando la CMB es igual o
presenta una mínima diferencia con el CIM.
7- Nombre los 4 principales mecanismos de resistencia en los antibióticos:

9- Que son las betalactamasas y como se clasifican? Y que son los inhibidores de las
betalactamasas?
Betalactamasas: son enzimas catalíticas que actúan hidrolizando el enlace amidico del anillo
betalactamico. Ellas crean la resistencia contra penicilinas, cefalosporinas.

-Son los antibióticos más utilizados, inhiben el crecimiento bacteriano, actuando sobre la
síntesis de la pared bacteriana. Actúan sobre el peptidoglicano en la última fase donde se
produce el entrecruzamiento del péptidoglicano. En esta etapa actúan dos enzimas:
carboxipeptidasa y transpeptidasa (más importante), ambas se unen a una proteína de
membrana PBP.
10- A que se llama sinergismo, antagonismo e indiferencia antimicrobiana.
- Sinergismo: aumento de > o = a 100 de actividad bactericida de la combinación con

respecto a la actividad de los antimicrobianos en forma independiente a las 8hs de
incubación.
- Antagonismo: menor actividad de la combinación con respecto a la actividad de los
antimicrobianos en forma independiente.
- Indiferencia: igual actividad bactericida de la combinación con respecto a la actividad
de los antimicrobianos en forma independiente.

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- Uretritis: Hisopado uretral en alginato de calcio o hisopado de dacron. Se toma la

- Endocarditis: la muestra corresponde a hemocultivo, se conserva en frasco de

- NAC: la muestra corresponde a esputo tras una expectoración profunda, el volumen

- Neumonía asociado a respirador: aspirados traqueales (método más sencillo),

- Meningitis: la muestra corresponde a LCR, a partir de la punción lumbar en los

- Faringitis: hisopado faríngeo en zonas donde haya exudado, se utiliza un hisopo de

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- Celulitis pared abdominal: aspirado del borde de la lesión o biopsia, hemocultivos.

2- Que estructuras puedo observar en el examen microscópico en fresco?

El examen microscópico en fresco es ideal para observar microorganismos o tejidos biológicos

3- Que coloraciones se usan en bacteriología y para qué sirven?

4- Pasos del diagnóstico bacteriológico:

5- Clasificación de los antibacterianos:

Inhibidores de la síntesis de la pared B- LACTAMICOS

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Inhibidores de la síntesis de proteínas INHIBIDORES DE LA SUBUNIDAD 30S

6-Nombre los principales antibacterianos y su mecanismo de acción

Inhiben la síntesis de peptidoglicano, principalmente en la etapa final donde actúan las

Ejemplos: penicilina- cefalosporinas- carbapenemicos- monobactam

Ejemplos: estreptomicina- gentamicina- amikacina

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Inhiben la síntesis de proteínas al unirse a la subunidad 50s de manera reversible.

Ejemplos: claritromicina- eritromicina- azitromicina

Bloquean la subunidad a de la ADN girasa y la topoisomerasa IV bacteriana. De forma más

Ejemplos: ciprofloxacina- norfloxacina

7- Con que pruebas se puede determinar la sensibilidad a los antimicrobianos? Que es

Existen dos métodos para determinar la sensibilidad de los antibióticos:

- Método de difusión en agar.

Métodos de difusión se utilizan discos de papel impregnados con distintos antimicrobianos,

Métodos de dilución destinada a determinar cuál es la mínima concentración del atb

CIM concentración inhibitoria mínima. Es la concentración de antibiótico donde se logra

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7- Nombre los 4 principales mecanismos de resistencia en los antibióticos:

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10- A que se llama sinergismo, antagonismo e indiferencia antimicrobiana.

- Sinergismo: aumento de > o = a 100 de actividad bactericida de la combinación con

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