UNIVERSIDAD MILITAR NUEVA GRANADA

Práctica 9. Caracterización de lípidos en muestras vegetales y animales

Identificación:
GL-AA-F-1
Guías de Prácticas Número
Revisión
de Laboratorio de
No.: 2
Páginas:
15

Fecha
Emisión:
2018/01/31

Laboratorio de:
BIOQUÍMICA

Título de la Práctica de Laboratorio:

CARACTERIZACIÓN DE LÍPIDOS EN MUESTRAS VEGETALES Y
ANIMALES

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

John Sadat Bernal

Guerrero Dr. Sc. Comité Asesor de
Laura Cerón Rincón,
María Claudia Sandoval Departamento de
M.Sc
Dr. Sc. Química
Marth Catalina Rozo M.
Sc. Directora Departamento de
Química
Docentes Departamento
de Química
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Práctica 9. Caracterización de lípidos en muestras vegetales y animales

Control de Cambios

Fecha de
Descripción del Cambio Justificación del Cambio Elaboración

Teniendo en cuenta los

cambios en el procedimiento,
Cambios en el marco teórico se debieron incluir algunos Julio 2019
aspectos adicionales en el
marco teórico

El procedimiento se modificó,
cambiando la extracción de Por algunas dificultades en el
lípidos a partir de la yema de laboratorio, y la ausencia de
huevo por extracción y algunos reactivos se debió Julio 2019
caracterización de lípidos de modificar el procedimiento
otras fuentes vegetales y
animales.

Se retomo la práctica y se ajustó reajuste del cronograma al julio 2022

a una sola sesión en el retorno a retorno a la presencialidad
la presencialidad

Se retira la actividad de Se retira la actividad de diciembre 2022

determinación de insaturaciones determinación de insaturaciones
y se incluye determinación de por la toxicidad del reactivo y se
lípidos en muestras de suelo. incluye la determinación en
muestra de suelo para orientar
mejor la practica hacia el
enfoque ambiental.

Se modifica la concentración de Al utilizar KOH más diluido, se

KOH puede hacer mejor la titulación y Julio 2024
realizar los cálculos de forma
más precisa.
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1. FACULTAD O UNIDAD ACADÉMICA: Facultad de Ciencias Básicas y

Aplicadas

2. PROGRAMA: Ingeniería Ambiental

3. ASIGNATURA: Bioquímica

4. SEMESTRE: Cuarto

5. OBJETIVOS:

● Caracterizar los lípidos presentes en diferentes muestras de lípidos de origen animal y

vegetal en función de su solubilidad en diferentes disolventes.
● Determinar la acidez de diferentes muestras de lípidos
● Establecer el contenido de lípidos en muestras de suelo de diferentes ubicaciones.

6. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL LABORATORIO:

DESCRIPCIÓN (Material, reactivo,

UNIDAD DE
instrumento, software, hardware, equipo) CANTIDAD
MEDIDA

Bureta 5 unidad

Baño maría a 50°C 1 unidad

Disolución de fenolftaleína 5 mL

KOH 0,01 M, estandarizado con ácido oxálico

(en la etiqueta debe estar la concentración con
150 mL
las cifras significativas correspondientes)

Mezcla etanol: éter etílico 1:1 270 mL

Cloroformo 30 mL

Éter etílico 80 mL

Etanol 80 mL

acetato de etilo 30 mL
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agua destilada 40 mL

hexano 125 mL

HCl concentrado 10 mL

MgSO4 10 g

Tubos de ensayo 60 unidades

Erlenmeyer de 100 mL o 125 mL 8 unidades

Agitador de vidrio 3 unidad

Pipeteador 3 unidad

Gradilla 3 unidad

Pipeta graduada 5 mL 8 unidades

Pipeta aforada 10 mL 4 unidad

Pinza para tubos de ensayo 4 unidad

Vasos de precipitados 100 mL 8 unidades

equipo de Soxhlet 2 unidades

plancha de calentamiento 2 unidades

Estos materiales son por sesión (4 grupos por sesión)

7. MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS, SOFTWARE, HARDWARE O

EQUIPOS DEL ESTUDIANTE:

DESCRIPCIÓN (Material,
UNIDAD DE
reactivo, instrumento, software, CANTIDAD
MEDIDA
hardware, equipo)

Bata de poliéster blanca. 1 unidad

Gafas de seguridad. 1 par

Guantes de nitrilo 2 pares

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Bayetilla 1 unidad

Toallas de papel Scott 10 unidades

Marcador tipo Sharpie 1 unidad

Cinta de enmascarar 1 rollo

Cuaderno de laboratorio 1 Unidad

Muestras (mantequilla, aceite de

coco, aceite de oliva, margarina, 100 g
manteca, aceite de canola, mezcla
de aceites, mantequilla rancia )

Muestra de suelo
2 g

8. PRECAUCIONES CON LOS MATERIALES, REACTIVOS, INSTRUMENTOS

Y EQUIPOS A UTILIZAR:

Antes de entrar al laboratorio lea la guía del trabajo en el laboratorio y elabore el respectivo
preinforme, tenga en cuenta todas las indicaciones dadas y escritas en la guía de la primera práctica
de laboratorio de bioquímica.

Tenga un especial cuidado con el manejo de los disolventes orgánicos: no use mechero y protéjase
con gafas de seguridad durante toda la sesión. Es indispensable consultar las fichas de seguridad
de los reactivos a usar y conocer que hacer en caso de alguna emergencia. Todo el material debe
estar perfectamente seco. Use gafas de seguridad.

9. MARCO TEÓRICO

Los lípidos son un grupo de biomoléculas heterogéneas caracterizadas por su escasa solubilidad
en agua y considerable solubilidad en disolventes orgánicos, propiedades físicas que reflejan la
naturaleza hidrofóbica de sus estructuras. Siendo un grupo de compuestos bastante heterogéneo,
los lípidos se clasifican en: acilgliceroles, fosfolípidos, esfingolípidos, ceras, terpenos y esteroles.

Los acilgliceroles están constituidos por glicerol esterificado con ácidos grasos. Los más abundantes
son los triacilgliceroles, llamados también triglicéridos o lípidos neutros, cuya función principal es
servir para almacenamiento de grasas. Los diacil y monoacilgliceroles no existen en cantidades
apreciables en la naturaleza, pero son intermediarios importantes en varias reacciones biosintéticas.

Los triacilgliceroles existen en forma sólida o líquida, dependiendo de la naturaleza de los ácidos
grasos que los componen. La mayoría de los triacilgliceroles de origen vegetal son líquidos (aceites)
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a temperatura ambiente, pues contienen gran proporción de ácidos grasos insaturados, como oleico,
linoléico y linolénico. Los triacilgliceroles de origen animal contienen mayor proporción de ácidos
grasos saturados, como palmítico y esteárico, por lo que son sólidos o semisólidos a temperatura
ambiente y reciben el nombre común de mantecas.

Las diferentes muestras de grasa pueden contener diferentes cantidades de ácidos grasos.
Adicionalmente, las grasas se vuelven rancias con frecuencia durante el almacenamiento y esta
rancidez está causada por hidrólisis química o enzimática de los ácidos grasos y el glicerol. La
cantidad de ácidos grasos puede determinarse volumétricamente al titular la muestra con hidróxido
de potasio. La acidez de las grasas y aceites puede expresarse como índice de acidez, el cual se
define como mg de KOH requeridos para neutralizar los ácidos grasos libres presentes en 1 g de la
muestra. La cantidad de ácidos grasos libres presentes o el índice de acidez de una muestra de
grasa, es un parámetro útil, que sirve como indicador de la edad y la extensión de su deterioro.

Para calcular el índice de acidez, se deben calcular os mg de KOH necesarios para neutralizar 1 g
de muestra. Para ello, se debe emplear la siguiente fórmula:

Acidez = (Volumen de titulación (L)-Volumen blanco(L)×M KOH×PM KOH / g de muestra

Donde M KOH es la molaridad del KOH estandarizado empleado en la titulación y PM es el

peso molecular del KOH en mg/mol.
Los suelos son una matriz compleja susceptible de entrar en contacto con diferentes compuestos
de carácter lipídico provenientes de aguas de residuo tanto de origen casero como industrial. Para
poder cuantificar el contenido de estos compuestos en esta matriz el procedimiento que
convencionalmente se utiliza conlleva la extracción solido liquido por el método Soxhlet utilizando
una mezcla de hexano -MTBE y posteriormente se determine el % de lípidos presentes.

10. PREGUNTAS PREVIAS

El docente escogerá de estas preguntas dos para la elaboración del preinforme.

1. Investigue como es la reacción de transesterificación de un triglicérido y su relación con la

obtención de biodiesel.
2. Investigue cuales son los pasos a seguir en un proceso de obtención de biodiesel y el impacto
ambiental de este proceso.
3. Explique con sus palabras que significa el termino lípido saponificable
4. De los siguientes lípidos identifique cuales son saponificables y ejemplifique la reacción con
uno de ellos.
a. Ácido linolénico
b. Limoneno
c. Campesterol
d. Tripalmitina
e. Cera de carnauba
5. Investigue los métodos analíticos para establecer la calidad de un aceite
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11. PROCEDIMIENTO:

11.1. DETERMINACION DE LIPIDOS EN UNA MUESTRA DE SUELO

Para esta determinación los estudiantes deben traer alrededor de 1 g de muestra de suelo de dos
diferentes ubicaciones una en casa y otra cerca a la carretera y se seguirá la norma modificada SM
55-20 E como se indica a continuación.

1. A partir de la muestra que se tiene pese en la balanza analítica alrededor de 1 g de muestra

de suelo y colóquelo en un vidrio de reloj, posteriormente llévelo a sequedad en una mufla a
hasta peso constante posteriormente en un vaso de precipitados pese la masa restante y
anote en su cuaderno con las cifras significativas adecuadas.
2. Acidificar la muestra una vez llegue al laboratorio, con alrededor de 0,1 mL de ácido
clorhídrico (HCl) concentrado.
3. Añadir 1,25 g de Sulfato de magnesio monohidratado (MgSO 4.H2O).
4. Agitar hasta obtener una pasta suave y extender por los lados del vaso de precipitado para
facilitar su posterior extracción.
5. Dejar reposar de 10 a 20 minutos, hasta que se solidifique.
6. Eliminar sólidos y moler en un mortero de porcelana y posteriormente agregar el polvo a un
dedal de extracción de papel.
7. Limpiar el vaso de precipitado y el mortero con trozos de papel filtro humedecido con
disolvente y agregarlos al dedal.
8. Al matraz de extracción añadir 20 ml de disolvente, que consta de 80% de n-hexano y 20% de
éter metil tert-butílico (MTBE), proporción volumen/volumen.
9. Extraer en un aparato Soxhlet a una velocidad de 20 ciclos/h, durante 1 h posteriormente rota
evapore el disolvente del matraz en un baño de agua
10. Enfríe el matraz en un desecador durante al menos 30 minutos y luego pese.
11. Registre el peso y proceda a calcular el contenido de grasas y aceites.

11.2. SOLUBILIDAD DE LOS LÍPIDOS

Rotule 15 tubos para las 3 muestras escogidas 5 por cada muestra así:

Muestra Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3 Tubo 4 Tubo 5

aceite de agua etanol acetato de cloroformo éter etílico

canola etilo

Tome una pequeña porción de las diferentes muestras, y póngalas en los diferentes tubos de
ensayo. A cada una añádale 2 mL del disolvente correspondiente, agite y revise si se disuelve o no.

Luego caliente las muestras a 50°C por 5 minutos en el termostato y revise si hay algún cambio en
la solubilidad.
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11.3. DETERMINACIÓN DE ACIDEZ

11.3.1. Pese aproximadamente 2 g de una muestra de lípidos (aceite de coco, aceite de

almendras, mantequilla, etc.) y póngala en un Erlenmeyer. Registre en su cuaderno el peso
exacto de la muestra y rotule claramente el Erlenmeyer.

11.3.2. Añada 10 mL de una mezcla de disolventes etanol : éter etílico 1:1 y agite bien,
disolviendo la muestra de lípidos.

11.3.3. Adicione 2 o 3 gotas de disolución de fenolftaleína y mezcle nuevamente hasta que

quede una mezcla homogénea. Luego realice una titulación con KOH 0,01M, adicionando
el reactivo gota a gota dese la bureta, agitando constantemente el Erlenmeyer hasta que el
color rosado claro se mantenga por lo menos por 30 segundos.

11.3.4. Registre el volumen en su cuaderno. Realice este procedimiento por triplicado con
cada una de las muestras y repita con el blanco, que sólo contiene la mezcla de disolventes.

12. RESULTADOS ESPERADOS:

Con el desarrollo adecuado de la práctica de laboratorio se espera que el estudiante pueda

diferenciar algunos de los componentes de las muestras, que estén en capacidad de
distinguir las características de las muestras de grasas de origen animal y vegetal y que
puedan concluirlo a partir de los ensayos realizados en la práctica.

13. CRITERIO DE EVALUACIÓN A LA PRESENTE PRÁCTICA:

Esta práctica se evaluará con la entrega del informe en el formato adjunto. Asimismo, el
docente evaluará el pre-informe correspondiente, realizado en el cuaderno de laboratorio,
que debe incluir el procedimiento, un mapa conceptual del marco teórico, unas fichas de
seguridad cortas, así como también los datos obtenidos de la práctica. El docente estará en
libertad de realizar un quiz o evaluación corta antes de empezar la práctica, acerca del
contenido de esta guía de laboratorio.
El informe de laboratorio se evaluará siguiendo la rúbrica consignada en el contenido
programático.