Microbiologia

MICROBIOLOGÍA
Aguas de Uso y Consumo

2º Salud Ambiental
Jesús Cabado
Imanol Moreno
MATERIAL:
- Filtros.
- Rampa de filtrado milipore.
- Embudos.
- Pinzas.
- Probetas.
- Pipetas (10 ml y 1 ml).
- Autoclave.
- Campana de flujo laminar.
- Baño María.
- Estufa.
- Filtros de 0,45 micras.
REACTIVOS:
- Solución Tampon fosfato.

- Disolución NaCl a 0,9 %.
- APHA
MUESTRA:
- Agua de Plentzia.
- Agua de Amurrio.
- Agua de Trápaga.
- Agua de grifo.
Primer día
- Preparar el material necesario.
Se envolvió con papel de aluminio el material necesario:

- Pipetas de 10 ml.
- Pipetas de 1 ml.
- Probetas.
- Placa filtrante.
- Embudos.
- Disoluciones.
- Medio de cultivo.
Una vez que estaba todo envuelto se colocó en las cestas de autoclave y se autoclavó
junto con los medios de cultivo.
- Preparar medios de cultivo.
APHA:
- Suspender 23,5 gramos en un litro de agua destilada.

- Calentar y agitar hasta la disolución total.
- Esterilizar a 121 ºC (en el autoclave) durante 15 minutos.
- Preparación de disoluciones.
Solución Tampón fosfato:
Solución A: Pesar 3,4g de KH2PO4 y disolverlo en 70ml de agua destilada. Ajustar el

ph. a 7,2 con NaOH y 1N y enrasar a 100ml con agua destilada.
Solución B: Pesar 8,11 g de MgCL 2 6H2O, disolverlos en agua destilada y enrasar a
100ml.
Mezclar 1,25ml de disolución A con 5ml de disolución B y diluir a 1l con agua
destilada. Agitar y dispensarlo en botellas de 500ml.
Disolución NaCl a 0,9 %:
Preparar una disolución de NaCl al ,9%. Dispensarla en botellas ½ litro.

Una vez preparadas las disoluciones auto clavarlas junto con los embudos, filtros y
carcasas de la rampa de filtración de agua.
- Ver funcionamiento del autoclave y autoclavar.
En el autoclave la esterilización se produce mediante vapor de agua a alta presión y

temperatura. Esto hace que se coagulen las proteínas de los microorganismos lo que
conlleva a la muerte de los microorganismos y la destrucción de las esporas.
Este método se emplea para esterilizar la mayoría de los cultivos y materiales.
En el autoclave se alcanzan temperaturas superiores a 100 ºC sin que hiervan las
soluciones gracias al aumento de presión. Normalmente se trabaja a una temperatura de
121 ºC y una presión de 1 atmósfera sobre la presión ambiental durante 15-20 min.
Manejo del autoclave:
1. Comprobar que el vapor y el vacío están cerrados.

2. Llenar de agua destilada el autoclave hasta la rejilla.
3. Colocar el material en las cestas e introducir estas en el autoclave.
4. Cerrar la tapa y comprobar.
5. Seleccionar el tiempo (15 minutos), la presión (1 atmósfera) y la temperatura
(121 ºC).
6. Poner en marcha el interruptor general.
7. Transcurrido el tiempo se apaga. Abrir el autoclave cuando las agujas que
indican la presión y la temperatura hayan bajado.
Esquema del autoclave:
Segundo día
- Filtración e incubación de las aguas.
Escogimos el agua de Plentzia, Aerobios mesófilas, m –FC
 Extraemos 10ml de agua de plentzia y enrasamos hasta 100ml (agua destilada y

NaCl.
 Esterilizamos Embudo y placa filtrante de la rampa milipore y las pinzas con
ayuda del mechero bunsen.
 Colocamos el filtro de papel (0,45 micras) con ayuda de las pinzas.
 Abrimos la llave de paso y vertemos los 10 ml de agua.
 Quitamos el embudo y sacamos el papel de filtro para colocarlo en una placa de
petri con el m-fc
 Introducir en la estufa a 44ºC
Aerobios mesófilas agua potable, PCA
 Cogemos 10ml de agua de agua de grifo y enrasamos hasta 100ml (agua

destilada y NaCl).
 Esterilizamos Embudo y placa filtrante de la rampa milipore y las pinzas con
ayuda del mechero bunsen.
 Colocamos el filtro de papel con ayuda de las pinzas.
 Abrimos la llave de paso y vertemos los 10 ml de agua.
 Quitamos el embudo y sacamos el papel de filtro para colocarlo en una placa de
petri PCA.
 Introducir en la estufa a 37ºC.
Preparación APHA
 Vertemos 1 ml de agua de grifo sobre una palca de petri y cubrimos con APHA
en la campana de flujo laminar. No se pudo realizar porque no se solidifico el
APHA.
Tercer día
- Ver los resultados.
MUESTRA RESULTADO
Aerobios mesófilas PCA La muestra sale negativa.
Aerobios mesófilas en APHA No se pudo realizar la valoración, ya que

el medio de cultivo no se coció lo
suficiente y no se solidificó.
Coliformes – E-Coli (Trapaga y Plentzia) Se encontraron algunas colonias aisladas.

Eran pocas colonias (< 30) por lo que las
colonias no eran contables. Habría que
utilizar una concentración menos diluida.
Coliformes – E-Coli Aparecieron muchas colonias pero no

presentaban una coloración azul oscuro/
violeta. Para confirmar se añade a las
colonias una gota de reactivo Kovacs para
revelar la prueba del Indol. A los pocos
minutos las colonias Indol positivas
adquieren una coloración rojo cereza. No
ocurrió este cambio de color, por lo que
no se pudo verificar que el resultado fuese
E-Coli. No se podían contar las colonias
porque había demasiadas (> 300). Habría
que utilizar una concentración más diluida
de la muestra.

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- Solución Tampon fosfato.

- Preparar el material necesario.

Se envolvió con papel de aluminio el material necesario:

- Preparar medios de cultivo.

- Suspender 23,5 gramos en un litro de agua destilada.

Solución Tampón fosfato:

Solución A: Pesar 3,4g de KH2PO4 y disolverlo en 70ml de agua destilada. Ajustar el

Disolución NaCl a 0,9 %:

Preparar una disolución de NaCl al ,9%. Dispensarla en botellas ½ litro.

- Ver funcionamiento del autoclave y autoclavar.

En el autoclave la esterilización se produce mediante vapor de agua a alta presión y

Manejo del autoclave:

1. Comprobar que el vapor y el vacío están cerrados.

- Filtración e incubación de las aguas.

Escogimos el agua de Plentzia, Aerobios mesófilas, m –FC

 Extraemos 10ml de agua de plentzia y enrasamos hasta 100ml (agua destilada y

Aerobios mesófilas agua potable, PCA

 Cogemos 10ml de agua de agua de grifo y enrasamos hasta 100ml (agua

- Ver los resultados.

Aerobios mesófilas PCA La muestra sale negativa.

Aerobios mesófilas en APHA No se pudo realizar la valoración, ya que

Coliformes – E-Coli (Trapaga y Plentzia) Se encontraron algunas colonias aisladas.

Coliformes – E-Coli Aparecieron muchas colonias pero no

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