Faculté des Science

Département de Biologie
Mémoire de fin d’étude en vue de l’obtention du diplôme de Master

Domaine : Science de la Nature et de la Vie

Spécialité : Biochimie Appliquée

Filiére :biologie

Thème

Caractérisation phytochimique de parite aérienne et

des huiles essentielles de Lavandula stoechas L.
(Lamiaceae) de la région de Timezrit (Boumerdes)

Présenté par :

Melle TIACHADINE Wissam Melle MENDIL Malika

Devant le jury :

Mr. BELLOUT Y. MCB UMBB Président

Mme BENDIFALLAH L. MCA UMBB Promotrice

Mr. DAHMANI M. MAA UMBB Examinateur

Année Universitaire : 2016/2017

2
 Remerciements
Avant tout, nous remercions DIEU le tout puissant avoir donné le courage, la
volonté, et la force pour l’élaboration de ce travail.

Nous remercions Mme Fethia Fazouane professeur au département de Biologie

(UMBB).

Nous exprimons notre gratitude et notre profonde reconnaissance à notre

promotrice Mme Bendifallah Leila, Maitre de conférences au département de
Biologie (UMBB) pour les conseils quelle nous a prodigué et son suivi tout le
long de notre travail, sa patience.

Nous tenons aussi à remercier Mr Bellout Yacine, Maitre de conférences au

département de Biologie (UMBB) d’avoir accepter de présider le jury.

Nous exprimons notre gratitude à Mr Dahmani Mohamed, Maitre assistant au

département de Biologie (UMBB) d’avoir accepter d’examiner ce mémoire.

Nous remerciements vont également aux techniciens de laboratoire du CRD, la

technicienne Sara du laboratoire LTDPMBB (UMBB).

Enfin sans oublier tous ceux qui ont participé de loin ou de prés à la réalisation
de ce modeste travail.

Merci à tous.

3
 Dédicace

J’ai le grand honneur de dédier ce travail :

Au bon Dieu qui m’a donné la force et le courage de continuer et

qui m’a éclairé le chemin tout le long de ma vie.

A ceux qui m’ont donnée la vie, la lumière de mes yeux « mes très chers
parents « qui m’ont entourée de leur amour, leur soutien et leur affection et qui
m’ont énormément aidée pour ma réussite.

Avec toute ma fidélité et tout mon amour pour vous, mes parents, je ne
pourrai jamais égaler votre mérite et je prie Dieu de me les protéger.

A mes très chers frères (AMINE. ABDEALLAH)

A mes très chères sœurs (LIDIA. AMIRA).

Egalement à mes Grands-mères, grands-pères.

A mes oncles, mes tantes, cousins, cousines, et toute ma famille sons exception.

A touts mes amies.et A toute personne qui j’aime et qui m’aime.

A ma chère binôme : MALIKA.

Toute la promotion de biochimie 2016-2017.

A toute personne m’ayant aide ou soutenue.

Wissam

4
 Dédicaces
A l’aide de dieu tout puissant , qui m’a tracé le chemin de ma vie, j’ai pu réaliser ce travail
que je dédie :

A mes parents qu’ils trouvent ici toute ma gratitude pour leur soutien tout le long de mes
études :

A mon très cher père,qui fait le plus brave des hommes , et m’aidant à aller de l’avant vers le
meilleur , en connaissance de tous les sacrifices, les efforts, l’amour et la gentillesse qu’il ma
toujours apporté.

A ma très chère mère qui a été disponible à mes cotés pour m’avoir atteindre le stade où je
suis arrivé aujourd’hui, et qui m’a comblé d’affection, d’amour, de
tendresse, sa patience et ses encouragements.

Je ne saurais jamais vous remerciez pour votre soutien et confiance sans faille.Que vous
trouvez ici l’expression de ma gratitude.Que dieu vous bénisse et vous accorde une très
longue vie.

A mon très chères sœurs : Nissa, Hannen, Ghania, Souhila.

A mon très chers frères : Redouan, Mourad, Abdaraheman, Billel.

Mon cher Binom wissam pour leur patience dans les moments les plus difficiles, ainsi que
toutes leur familles

Mes chère amies Sabrine, Lynda, Selma .

Toute la promotion de Biochimie 2016-2017

A toute personne m’ayant aidé ou soutenue.

Malika

5
 Liste de abréviation

% : pourcentage

G : gramme

ml : Millilitre

N : Normalité (équivalent/litre

m : Métre.

OH : Le radical hydroxyle

C : carbone

HEs : Les huiles essentielles

S : stoechas

°C : Degrés Celsius.

Fig : figure

Tab : tableau

L : lavandula

Tab : tableau

min : minuté

UV : Ultraviolet

N :Normalité (équivalent /litre).

AFNOR : Association Français de Normalisation

CPG/SM : Chromatographie en Phasse Gazeuse/Spectrométrie de Masse (SPG/SM)

RI : Tempts de Rétetion

6
 sommaire

Liste des figures

Liste des tableaux

Liste des abréviations

Introduction…………………………………………………………………………………………………………1

Chapitre I : Synthèse bibliographique

I.1. - Généralités sur les plantes médicinales ……………………………………3

I .1.1.Phytotérapie ……………………………………………………………..3

I.1.2. Plante médicinale et aromatique…………………………………………3

I.1.3. Aperçu sur la famille des Lamiaceae…………………………………….3

I.2. Données sur Lavandula stoechas L …………………………………………3

I.2.1. Historiqu......................................................................................................3

I.2.2. Description botanique de Lavendula S……………………………………4

I.2.3. Classification ……………………………………………………………4

I.2.4.Répartition géographique de Lavandula stoechas…………………………5

I.2.5. Les espèces de lavandes le plus couramment utilisées en phytotérapie …6

I.2.6. Utilisation thérapeutique de Lavandula stoechas …………………………7

I.3.Composition photochimique des plantes ……………………………………..7

I.3.1. Métabolites primaires………………………………………………………7.

I.3.2. Métabolites secondaires……………………………………………………7

I.3.2.1. Alcaloïdes………………………………………………………………7

I.3.2.2. Polyphénoles……………………………………………………………7

I.3.2.3. Les saponines……………………………………………………………8

7
I.4.Les huiles essentielles ……………………………………....................................8

I.4.1. Historique ……………………………………………………………………8

I.4.2. Définition…………………………………………………………………………9

I.4.3. Localisation dans les plantes ……………………………………………………01

I.4.4.Activités des huiles essentielles ………………………………………………………..01

I.4.5.Méthodes d’extraction des huiles essentielles……………………………………00

I.4.5.1.Distillation en présence d’eau ………………………………………………….00

I.4.5.2.Autres méthodes…………………………………………………………………03

I.4.6.Conservation des huiles essentielles ……………………………………………..04

Chapitre II: Matériel et Méthodes

II.1. Matériels…………………………………………………………………………..05

II.1.1. Matériel non biologique ………………………………………………………05

II.1.2. Matériel biologique …………………………………… 15

II.1.2.1 : matériel végétal…………………………………………………………..05

II.2. Méthodes ………...……………………………....................................................05

II.2.1.Caractérisation de la région de récolte ………………………………….. ……06

II.2.2. Préparation de la plante ……………………………………………………...07

II.2.3. Screening phytochimique ……………………………………………………..08

II.2.3.1. Préparation de l’infusé à 5% ………………………………………………08

II.2.3.2.Tests d’identification ………………………………………………………..09

II.2.3.2.1. Identification des tanins totaux………………………………………….09

II.2.3.2.2. Identification des glucosides ……………………………………..........09

II.2.3.2.3. Identification des anthocyanes ………………………………….. …..09

II.2.3.2.4. Identification des leucocyanes ………………………………………...01

II.2.3.2.5. Identification des mucilages…………………………………………...01

II.2.3.2.6. Identification des iridoïdes……………………………………………01

II.2.3.2.7. Identification des coumarines………………………………………...01

8
 II.2.3.2.8. Identification de l’amidon……………………………………………01

II.2.3.2.9. Identification de quinone libre ………………………………………01

II.2.3.2.10. Identification de saponoside…………………………………………01

II.2.3.2.11. Identification de l’alcaloïde………………………………………….01

II.2.3.2.12. Identification des prothocyanidols …………………………………...01

II.2.3.2.13. Identification des flavonoïdes ………………………………………..00

II.2.3.2.14. Identification des protéines …………………………………………..00.

II.2.4. Huiles essentielles …………………………………………………………..00

II.2.4.1. Extraction par hydro distillation des huiles essentielles de lavandula stoechas
L. ………………………………………………………………………………………...00

II.2.4.2. Extraction par solvant …………………………………………... 03

II.2.4.3. Calcul de rendement………………………………………………………04

II.2.4.4.Caractérisation des huiles essentielles ….....................................................04

II.2.5.Analyse semi-quantitative par chromatographie en phase Gazeuse couplée à

laSpectroscopie de Masse
(CG/SM) ………………………………………………............04

Chapitre III. Résultats et discussion

III.1.Résultats de screening phytochimique de la plante de lavandula stoechas …06

III.2. Extraction et caractérisation de l’HE de la L.Stoechas ………………… …09

III.2.1. Extraction de l’huile essentielle ………………………………………...09

III.2.2.Caractérisation de l’huile essentielle……………………………………..30

III.2.2.1. Caractéristiques organoleptiques de l’huile essentielle du lavandula ..30

III.2.2.2. Chromatographie en phase gazeuse couplé à la Spectrométrie de Masse ...

Conclusion............................................................................................36

Référence bibliographique.................................................................37

Annexe.

Résumé

9
 Introduction
Les plantes sont une source immense de molécules chimique complexes exploités par
l’ homme dans plusieurs industries telle que l’industrie cosmétique, l’industrie agro –
alimentaire et l’industrie pharmacetique .

L’histoire des plantes aromatiques et médicinales est associée à l’évolution des

civilisations, dans toutes les régions du monde. L’ histoire des peuples montre que ces plantes
ont toujours occupé une place importante en médecinal dans la composition des parfums et
dans les préparations culinaires (Maan Bahadur et al., 2010).

En effet, une plante est dite médicinale lorsque l’un de ses organes par exemple la
feuille posséde des activités pharmacolgiques pouvant conduire à des emplois thérapeutiques.
La flore Algérienne est caractérisée par sa diversité florale : Méditerrunéenne, saharienne et
une flore paléotropicale estimée à plus de 3000 espéces appertenant à plusieurs familles
botaniques. Certaines de ces espéces sont endémiques ce qui a donné à la pharmacopée
traditionnelle une richesse inestimable (Gaussen, 1982).

Le genre Lavandula est un membre important de la famille des Labiateae

(Lamiaceae) et se compose d’environ 28 espéces, qui sont dans la plupart d’orgine
méditeranéenne (Barrett,1996 ; Maganga, 2004).

Les espéces de lavande sont d’une grande valeur marchande due à leur arome plaisant.
La matiére végétale et son huile essentielle sont principalement utilisées en parfumerie,
cosmétique et en industrie alimentaire. L’importance médicinale de la plante est bien
documentée et les extraits préparés à partir de cette plante sont energistrés dans beaucoup de
pharmacopées (Sultan et al., 2008).

Dans le cadre de la valorisation de la flore algérienne, on s’est interessé aux espéces de

la famille des Lamiaceae ou Labiateae. La plante sur laquelle a porté notre choix est une
espéce d’armoise «Lavandula stoechas L. », utilisée en médecine traditonnelle .
dépuis les tempes les plus réculés et est connue d’un point de vu scientifique .
L’objectif de ce travail consiste à étudier la plante Lavandu stoechas L. récoltée de la
montagne Timezrit en prenant en compte la caractérisation biochimique de la poudre, de
l’infusé et de l’huile essentielle. Pour ce faire, plusieurs volets seront considérés:
Dans le premier chapitre, sera abordée la synthèse bibliographique par la présentation de la
plante de Lavendula stoechas et les huiles essentielles.

01
Dans le premier chapitre, sera abordée la synthèse bibliographique par la présentation de la
plante de Lavendula stoechas et les huiles essentielles.

Le deuxiéme chapitre traitera les méthodes d’extraction des huilles essentielles et

détermination de leur composition chimique de Lavandula stoechas.

Les résultats et leurs discussion seront abordés dans le troisiéme chapitre. Et enfin, nous
achèverons ce modeste travail avec une conclusion les perspectives.

00
Chapitre II Matériel et méthodes

Chapitre II: Matériel et Méthodes.

But et objectifs :

L’objectif de ce travail est d’identifier les composés phytochimiques de la lavande

Lavandula stoechas L. récoltée de la région de Timezrit (Boumerdes) et d’extraire son huile
essentielle dans le but de déterminer ses composants chimiques.

Le présent travail à été réalisé au niveau du laboratoire de Biologie des Populations et des
Organismes (B.P.O) à l’université M’Hamed Bougara –Boumerdes (Faculté des sciences) et
de Biochimie de la Faculté des Sciences de l’Ingénieur de l’UMBB. La CPG/SM est fait au
Centre de Recherche et Développement de Sonatrach- Boumerdes (CRD).

II.1. Matériels :

II.1.1. Matériel non biologique : voir annexe 01.

II.1.2. Matériel biologique :

II.1.2.1 : matériel végétal

Notre étude a porté sur la partie aérienne (feuilles, fleures, tiges) de Lavandula stoechas
L. ssp. Stoechas récoltée dans la région de Timezrite (Boumerdes).

Figure 7 : La partie aérienne : Lavandula stoechas L. de la région de Timezrit (Boumerdes)

II.2. Méthodes :

Les différentes étapes de l’expérimentation sont mentionnées dans la figure 5.

16 02
 Matière végétale

Matière végétale fraiche + Matière végétale sèche : à l’abri de la lumière

sèche solaire et à la température ambiante

Extraction de l’huile essentielle par Broyage Mécanique : obtention d’une

distillation à la vapeur d’eau poudre fine

Analyse semi
Screening (tests)
quantitative
phytochimique

Analyse par
chromatographie en phase
gazeuse

Figure 7 : Schéma récapitulatif des différentes étapes de l’expérimentation.

II.2.1.Caractérisation de la région de récolte :

Les caractéristiques de la région de récolte Timezrit, sont notées dans le tableau 3 (Fig. 6,7).

Tableau 3: Caractérisation de la région de récolte

Région Timezrit
Willaya Boumerdes
Distance entre Alger et Timezrit 68Km
Altitude 747m
Les coordonnées géographiques en DMS Latitude nord : 36°40’
(degrés, minutes, secondes) Longitude ouest de 3°48'
Climat Méditerranéen avec Hiver chaud

03
 Figure 8 : Lieu de collecte du lavandula stoechas L.Timezrit (Rwafia)

Timezrit

Timezrit

Timezrit

Figure 9 : carte administrative de wilaya de Boumerdes (https://fr .wikipedia.org wiki

(Boumerd%C3%A8s).

II.2.2. Préparation de la plante :

La récolte de la plante est faite le 27 novembre 2016. C’est la partie aérienne qui a fait
l’objet de ce travail (feuilles, fleurs, tige). La plante doit passer par deux étapes avant de
passer aux analyses biochimiques. Il s’agit du séchage, du broyage et de la conservation.

04
  Séchage

Le séchage est un procédé consistant à abaisser la teneur en eau contenue dans la plante.
Notre plante est séchée à l’air libre à l’abri de la lumière pour préserver au maximum
l’intégrité des molécules, en évitant les altérations et la prolifération des micro-organismes.

 Broyage

Cette opération a été faite après le séchage de la partie aérienne de la plante, une quantité de la
plante a été concassées ensuite broyées dans un broyeur électrique en poudre très fine pour les
tests de screening et la grande quantité pour l’extraction des huiles essentielles (Fig. 10-11).

Figure 10: Plante séchée Figure 11 : Poudre de la lavande

 Conservation :

La conservation de la poudre végétale obtenue se fait à l’abri de l’air, de l’humidité et de la

lumière afin d’éviter tout risque de dégradation ou de dénaturation. Son stockage se fait dans
un flacon en verre hermétiquement fermés à 4°C pour évite la contamination.

II.2.3. Screening phytochimique :

Le screening phytochimique est un test qualificatif qui permet de mettre en évidence les
métabolites primaires et secondaires de notre plante basée sur des réactions de coloration
et/ou de précipitation. Ces tests s’effectuent soit sur la poudre soit sur l’infusé à 5% afin de
mettre en évidence la présence ou l’absence des métabolites primaires ou secondaires.

II.2.3.1. Préparation de l’infusé à 5% :

5g de poudre végétale a été mélangée avec 100 ml d’eau distillée chaude. Le mélange est
filtré après 15 à 20 min. puis on ajuste à 100ml d’eau distillée (Fig. 12,13).

05
 Figure 12 : Poudre végétale Figure 13 : Infusé à 5%

II.2.3.2.Tests d’identification

On a réalisé différents tests pour rechercher les métabolites secondaires de notre plante
exemple les tanins totaux, les flavonoïdes, les coumarines, les quinones libres, les
saponosides...etc.

II.2.3.2.1. Recherche des tanins totaux

A 5 ml d’infusé, on ajoute quelques gouttes d’une solution de FeCl3 a 5%. La réaction

positive donne une couleur bleu- noire en présence de tanins.

a. Tanins catéchique

Pour 5 ml d’infusé, on ajoute 2,3ml de réactif de Stiansy (Annexe 02). La réaction positive
donne une coloration rouge.

b.Tanins galliques

A 5 ml d’infusé, on ajoute 2 g d’acétate de sodium et quelques gouttes de FeCl3. La

couleur bleu foncé indique la réaction positive.

II.2.3.2.2. Recherche des glucosides

On ajoute quelques gouttes de H2SO4 à 2g de la poudre végétale. La réaction positive donne

une coloration rouge brique

II.2.3.2.3. Recherche des anthocyanes

Quelques gouttes d’ Hcl sont ajoute à 5 ml d’infusé. Une coloration rouge indique la
présence d’anthocyane.

06
II.2.3.2.4. Recherche des leucocyanes

Pour ce test, on ajoute à 2g de poudre végétale 20 ml de mélange (propanol et Hcl 1/4).

Le mélange est laissé 15 min dans un bain marie. La réaction positive donne une coloration
rouge.

II.2.3.2.5. Recherche des mucilages

1 ml d’infusé est ajouté à 5 ml d’éthanol absolu. Le mélange est laissé 10 min. on

remarque l’apparition d’un précipité floconneux indiquant la réaction positive.

II.2.3.2.6. Recherche des iridoïdes

2 ml d’infusé sont chauffés en présence de quelques gouttes d’ Hcl concentré. La

réaction positive donne une coloration bleue.

II.2.3.2.7. Recherche des coumarines

2g de poudre végétale et 20 ml d’alcool éthylique sont laissés bouillir à reflux 15 min

puis filtrer. On ajoute 5 gouttes de KOH 10% à 5 ml de filtrat. La réaction positive donne la
formation des troubles.

II.2.3.2.8. Recherche de l’amidon

Quelques gouttes d’I2 sont ajoutées à 2g de poudre végétale. Une coloration bleu-violet
correspond à un résultat positif.

II.2.3.2.9. Recherche de quinone libre

2g de poudre sont humectés par 2 ml d’Hcl et 20ml de chloroforme. Après 3 heures, le

mélange est filtré puis agité en présence de 5ml d’ammoniaque ½ (Annexe 02). La réaction
positive donne une coloration rouge.

II.2.3.2.10. Recherche de saponoside

Quelques gouttes d’acétate de plomb sont ajoutées à 2ml d’infusé. Le test positif se lit
sur la formation d’un précipité blanc

II.2.3.2.11. Recherche de l’alcaloïde

Quelques gouttes de réactif de dragendorff sont ajoutées à 2ml d’infusé.

Le test positif se lit sur la formation d’un précipité orange ou coloration rouge oronge

II.2.3.2.12. Recherche des prothocyanidols :

Pour 2 ml d’infusé, on ajoute 2ml d’Hcl. Le mélange est laissé 5min dans un bain
marine. La réaction positive donne une coloration rouge.

07
II.2.3.2.13. Recherche des flavonoïdes :

On mélange 5ml d’infusé, 5ml d’Hcl ,1ml d’alcool isoamylique et un coupon de zinc. La
réaction positive donne une couleur rouge.

II.2.3.2.14. Recherche des protéines :

On mélange 1 ml d’infusé, 1ml d’acétate de sodium (NaOH) à 2M et quelques gouttes de

sulfate de cuivre. La couleur violette indique la réaction positive.

II.2.4. Huiles essentielles :

II.2.4.1. Extraction par hydro-distillation des huiles essentielles de Lavandula stoechas

 Principe :

L’hydro-distillation est la méthode la plus employée pour extraire les huiles essentielles
selon Clevenger. Dans ce procédé, la matière première à traiter est entièrement
immergée dans l’eau, les extraits végétaux sont chauffés jusqu’à ébullition ; les huiles
essentielle s’évaporent alors avec les vapeurs dégagée, puis sont condensées et séparées
de l’eau.

 Mode opératoire :

50g de poudre est introduite dans un ballon bi-cols de 1000ml, imprégné de 530ml d’eau
distillée, l’ensemble est porté à ébullition pendant 3heures en ajoutant l’eau distillée de temps
en temps pour éviter la dessiccation du mélange (Fig.15).

Les vapeurs chargées d’huiles essentielles traversant le réfrigérant se condensent et sont

récupérées dans une fiole propre.

-une phase organique huileuse et très odorante, appelée « huile essentielle », contenant la
majorité des composés odorants.

-une phase aqueuse, odorante, appelée « eaux aromatiques », qui n’en contient que très peu.

Mais dans notre cas, on n’a pas obtenu ces deux phases, les huiles essentielle n’ont pas été
séparées de l’eau aromatique et ce la est dû à la nature et à la composition de ces huiles
essentielles ; ce qui nécessite des extractions par solvant volatils éther di éthylique.

Les étapes de l’hydrodistillation des huiles essentielles de la lavande sont récapitulées et sont
présentées dans la figure 14.

08
 Matériel végétal Lavandula stoechas

Extraction d’huile
Phase
essentielle
d’extraction
Condensation (huile
essentielle + eau)

) Séparation de l’huile
essentielle par l’éther
Phase de
di éthylique
décantation
Huile essentielle+ éther
di éthylique

Phase de
Filtration
filtration

Phase L’huile essentielle +

d’évaporation éther di éthylique

L’huile essentielle de Lavandula stoechas

Figure 14 : Différentes étapes d’extraction de l’huile essentielle de Lavandula stoechas.

09
Figure 15 : Appareil expérimental de Clevenger (original)

La séparation entre la phase organique (huile essentielle) et la phase aqueuse (l’eau

aromatique) est en rajoutant l’éther diéthylique ou bien l’hexane (15 ml dans chaque ampoule
on agite puis on laisse décanter).

Enfin, la phase organique est récupérée après filtration sur sulfate anhydre de sodium et
mise dans un pilulier ouvert pour permettre l’évaporation du solvant puis conservée au
réfrigérateur à 4°C (Fig.16).

Figure 16 : séparation de l’HE de Lavandula stoechas (original).

21
II.2.4.2. Calcul de rendement.

Le rendement en huile essentielle est définit comme étant le rapport entre la masse
d’huile essentielle obtenue et la masse de la matériel végétale (Bourkhis et al. 2001)

RHE =MHE/MS .100

RHE : rendement extraits fixes en g /100g de matière sèche.

MHE : quantité d’extrait récupérée exprimée en g.

MS : quantité de matière végétale sèche utilisée pour l’extraction exprimée en g.

II.2.4.3.Caractérisation des huiles essentielles

Propriétés organoleptiques :

L’évaluation des propriétés organoleptiques constitue généralement une partie des études
visant à analyser les facteurs qui affectent la qualité de l’huile essentielle. Dans le présent
travail, trois critères sont considérés pour évaluer la qualité organoleptique : l’odeur, la
couleur, l’aspect.

II.2.5.Analyse semi-quantitative par chromatographie en phase Gazeuse couplée à la

Spectroscopie de Masse (CG/SM) :

L’analyse de la composition chimique de l’huile essentielle de Lavandula stoechas est

réalisée par chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse (CG/SM).

Cette dernière est réalisée sur un chromatographe de phase gaz de type Hewlett-Packard (série
HP 6890) couplée avec un spectromètre de masse (série HP 5975).

Principe :
L’appareillage GC/SM permet de fournir un chromatogramme accompagné d’un
ensemble de spectre de masse correspondant à chaque pic chromatographique, ce qui permet
l’identification précise de la majorité des constituants séparés par la GC en comparant les
spectres de masse obtenus avec ceux des produits de référence contenus dans les
bibliothèques informatisées . Lorsqu’on soumet un composé moléculaire à cette analyse, on
déclenche plusieurs étapes (Pradeau et Cohen, 1992)

20
  Ionisation : les molécules dans l’échantillon se volatilisent sous l’effet du vide et
la température (200°C), il résulte un mélange d’ions issus de la fragmentation de
départ.
 Accélération : les ions formés se dirigent vers le dispositif de séparation sous
l’effet d’un champ magnétique augmentant leur énergie cinétique.
 Séparation : les ions seront distribués suivant leur rapport masse /charge.
 Détection : après séparation les ions sont recueillis par un détecteur sensible aux
charges électrique transportées.
 Traitement du signal : le signal de sortie de l’appareil conduit au spectre de
masse qui constitue la représentation conventionnelle de l’abondance des ions en
fonction de leur rapport masse/charge.

Les paramètres d’analyse et d’acquisition sont représentés dans le tableau 4.

Tableau 4 : condition opératoires des analyses en GC/SM.

Paramètres d’analyse

Type de l’appareil Chromatographie en phase gaz HP6890

Spectrométrie de masse HP5975
Colonne capillaire HP5ms (30 m de longueur, 0.25mm diamètre interne
0.25µm épaisseur de phase)
Température de l’injecteur 250°C
Température de détecteur 250°C
Gaz vecteur Hélium/Débit : 1ml/min
Volume injecté 1 µm-ratio 1/200

Programmation du four 2°C/min de 60 à 250°C, 250°C/5min

Durée de l’échantillon 100 min

Concentration de l’échantillon pure

22
Chapitre III Résultats -Discussion

III. Résultats et discussion

III.1.Résultats du criblage phytochimique de la plante Lavandula stoechas

Les résultats de l’étude phytochimique sont présentés dans le tableau 5.

Tableau 5 : Résultats de l’étude phytochimique de la plante L.Stoechas.

Substances Résultats positifs Résultats observés

Tanins totaux une couleur bleu- noire

(++)
Tanins catéchique une coloration rouge

( +)
Tanins galliques une couleur bleu foncé

( +++)
Glucosides une coloration rouge brique

( +++)
Anthocyanes Une coloration rouge

( ++)
leucocyanes une coloration rouge

( -)
Mucilages l’apparition d’un précipité
floconneux

(-)

2327
- : Test négatif

+ : Test faiblement positif

++ : Test positif

+++ : Test fortement positif

III.1.1.Recherche des tanins Totaux

L’apparition d’une coloration bleu-noire confirme la présence des tanins totaux chez la
plante L. stoechas. Les tanins présents sont de type gallique et catéchiques.

III.1.2.Recherche des glucosides

La plante étudiée présente des glucosides, une coloration rouge brique à été observée.

III.1.3.Recherche d’Anthocyanes

Le test est positif suite à l’apparition de coloration rouge indique la présent les anthocyanes.

III.1.4.Recherche des Leucocyanes

Le test est négatif suite à l’absence de coloration rouge lors du test caractéristique de ces
groupes de métabolites secondaires chez la plante L. stoechas.

III.1.5.Recherche des mucilages

La plante analysée ne renferme pas des mucilages la réaction caractéristique de ce type

de métabolite est négative, aucune précipité floconneux.

III.1.6.Recherche des iridoides

L’absence d’une coloration bleue après un chauffage indique l’absence totale des
iridoides

III.1.7.Recherche des coumarines

La plante étudiée présente des coumarines, la formation d’trouble caractéristique de ce

teste indique leur présence.

III.1.8.Recherche de l’amidon

Aucune trace de l’amidon n’a été révélée chez cette plante, une coloration bleu-violet
a été absente

III.1.9.Recherche de quinone libre

L’absence d’une coloration rouge indique l’absence totale de quinone libre chez L.
stoechas.

24
III.1.10.Recherche des saponosides

La plante étudiée présente des saponosides, la formation d’un précipité blanc

caractéristique de ce teste indique leur présence.

III.1.11.Recherche des alcaloïdes

La plante analysée ne renferme pas de alcaloïdes, la réaction caractéristique de ce type

de métabolite est négative, aucune coloration rouge oronge ou précipitation oronge.

III.1.12.Recherche des prothacyonidols

L’absence d’une coloration rouge indique l’absence des prothacyonidols chez

L.stoechas.

III.1.13.Recherche des Flavonoïdes

Dans ce test, l’apparition de la couleur rouge indique la présence les flavonoïdes chez la
plante L. stoechas.

III.1.14.Recherche des protéines

L’absence de coloration violette indique l’absence des protéines chez L.stoechas.

La partie aérienne (feuilles, fleures et tiges) de L. Stoechas a subi des tests phytochimiques
qui ont révélé la présence de tanins totaux, tanins catéchiques et galliques, coumarines, de
flavonoïdes, de saponsides, des glucosides, d’anthocyane en variables quantités et l’absence
totale des alcaloïdes, mucilage, leucocyanes, iridoides et quinone libre, protéines.

Ces résultats sont en accord pour la plupart des substances, avec ceux obtenues par Warda
et al. (2009) ayant travaillé sur L. stoechas, cultivée en Maroc. En effet, ces auteurs signalent
la présence de flavonoïdes, d’anthocyanes, de tanins totaux, tanins catéchiques, de tanins
galliques, et l’absence d’alcaloïdes. Dans le travail d’Imelouane et al. (2006) qui porte sur le
criblage phytochimique de L. dentata du Maroc, ils révèlent la présence de coumarines, de
tanins galliques. Ceci s’explique par l’influence du milieu sur la composition en substances
bioactives produites par la lavande. Elle tient compte aussi de la saison de récole et la partie
utilisée.

III.2. Extraction et caractérisation de l’Huile Essentielle de L .stoechas

III.2.1. Extraction de l’huile essentielle

Le rendement en huile essentielle obtenu à partir de la partie aérienne de la plante est

noté dans le tableau 6.

25
Tableau 6: Rendement en HE de L. stoechas obtenu par hydrodistillation.

Temps Masse de plante () Masse de H.E extraite () Rendement

(min)
540min 150g 0.649g 0.43%

D’après les résultats regroupés dans le tableau 6, on remarque que le rendement en huile
essentielle est de l’ordre de 0.43%.

Le calcul de rendement en HE par rapport au poids total de la partie aérienne de la lavande a

donné un pourcentage de 0,43%. Ce rendement est comparable à ceux obtenus dans d’autres
travaux. En effet, Benabdelkader et al. (2011) ont montré que le rendement des HE, extraites
par hydrodistillation, à partir de 11 populations de L.stoechas poussant à l’état sauvage dans
les régions du Nord d’Algérie varie entre 0,34% et 1,63%, ce qui est similaire à notre
rendement. Par contre, notre résultat est inférieur à celui obtenu par Dob et al. (2006) évalué à
1,1%. De sa part Mohammedi (2010), a obtenu un rendement qui varie de 1% à 2% selon la
région de cueillette.

De même, Christos (2010) qui a travaillé sur L. stoechas de Grèce a trouvé un rendement
qui varie entre 0,06% et 1,46%, selon la période de cueillette. Aussi, Gören et al.( 2002) ont
obtenu la même valeur que notre rendement 1,33% en Turquie.

Il est bien connu que le rendement en métabolites secondaires des plantes tel que les huiles
essentielles dépend des facteurs génétiques, des parties utilisées des plantes, de mode
d’extraction, de saison et lieu de la collecte ( climat et les propriétés du sol ) (Benabdelkader
et al, 2011).

III.2.2.Caractérisation de l’huile essentielle

III.2.2.1. Caractéristiques organoleptiques de l’huile essentielle de Lavandula stoechas L.

Les différentes caractéristiques organoleptiques (aspect, couleur, odeur) de l’essence de la

lavande (L. Stoechas) ont été notées et présentés dans le tableau 7.

26
Tableau 7:propriétés organoleptiques d’huile essentielle des feuilles et fleurs de L S.

HE des feuilles et floreurs de Lavandula stoechas L.

Couleur Jaune pâle
Aspect Liquide, mobile, limpide
Odeur Forte, agréable et propre à la plante

Huile essentielle

A l’issue de l’ hydro distillation, l’huile essentielle obtenue de la partie aérienne de la

lavande est un liquide mobile limpide de couleur jaune avec odeur aromatique très puissante
et pénétrante et la viscosité peuvent aussi être pertinente pour juger la qualité d’une huile.

L’huile essentielle de L. stoechas obtenue par hydrodistillation a l’aspect d’un liquide

mobile, limpide de couleur jaune pâle. La couleur est fortement influencée par le mélange
complexe de composés volatils. Son odeur caractéristique est agréable parfumée. Ces
propriétés sont liées aux conditions climatiques et édaphiques de la région d’étude et de l’état
de la plante.

Les paramètres organoleptiques de nos HE sont en accord avec ceux répertoriés dans les
normes AFNOR (2000) (Tab.8).

Tableau 8: caractéristiques organoleptiques des HE de Lavandula stoechas selon AFNOR

Caractérisation organoleptique AFNOR (2000)

Aspect Liquide, mobile, limpide
Couleur Jaune pâle
Odeur Caractéristique

III.2.2.2. Chromatographie en phase gazeuse couplé à la Spectrométrie de Masse.

Les résultats de l’analyse chromatographique de la composition chimique de l’HE de L.

Stoechas par CG/SM en fonction de tempe de rétention et de teneur en composés volatils sont
présentés dans le tableau 9, et le spectre et sur les figures17 et 18.

Vingt deux (22) composés ont été identifiés dans l’HE de L. stoechas de la région de
Timezrite, qui représentent 81.19 % TIC (courant ionique total). On constate que l’HE est
27
riche en Monoterpènes, comme composés majoritaires : fenchone (34%), camphre (22.7%),
1,8 cineol (6.7%), linalyl acétate (5.8%), camphene (3.50%), linalol (1.88%) et le limonene
(1.01%). Le taux des autres composés est compris entre 0.08% (verbenone) et 0.9%( α -
pinene)

D’une manière générale, les 22 composés se repartissent comme suit :

 Neuf hydrocarbures monoterpéniques

 Deux éthers monoterpéniques
 Quatre alcools monoterpéniques
 Quatre cétones monoterpéniques
 Deux esters monoterpéniques
 Un aldéhyde monoterpénique

Abundanc e

T IC: L a v a n d e .D \ d a ta .ms

3e+07

2 .5 e + 0 7

2e+07

1 .5 e + 0 7

1e+07

5000000

1 0 .0 0 2 0 .0 0 3 0 .0 0 4 0 .0 0 5 0 .0 0 6 0 .0 0 7 0 .0 0 8 0 .0 0 9 0 .0 0
T ime -->

Figure 17 : les principaux composants identifiés dans l’huile essentielle de Lavandula

stoechas par la technique CG/SM sur colonne capillaire HP-5MS.

28
 Tableau 9: L’analyse semi-quantitative de L. stoechas.

Les composés RI Teneur (%) Famille

Identifiés
α-pinene 6.17 0.8 Hydrocarbures monoterpéniques
β-pinene 7.54 0.42 8.14%
y-Terpinene 10.90 0.25
Caryphyllene 31.44 0.64
Sabinene 6.49 0.60
Camphene 6.62 3.50
Myrcene 8.008 0.9
Copaene 20.09 0.47
Limonene 13.26 1.01
1,8-cineol 8.05 7.6 Ethers monoterpéniques 7.7%
Eucalyptol 9.896 0.1
Borneol 31.8 0.5
Linalol 13.16 1 .88 Alcools monoterpéniques
α- terpineol 17.97 0.25 3.47%
Fenchol 13.602 0.84
Fenchane 12.859 34 Cétones monoterpéniques
Carvone 20.97 0.3 55.08%
Camphre 14.03 22.7
Verbenone 35.01 0.08
Linalyl acétate 21.7 5.8 Esters monoterpéniques
6.28%
Myrthenyl acétate 31.08 0.48
Murtenal 34.3 0.52 Aldéhyde monoterpéniques
0.52

Total 81.19%

29
 fenchone
camphre
1,8cineol
linalyl acétate
camphene
linalol
linanene
myrcene
fenchol
alpha-pinene
caryphyllene
sabinene
murtenal
béta-pinene
autres composés

Figure 18: Distribution en % des différents constituants de l’HE de L. stoechas.

L’huile essentielle de Lavandou stoechas analysée par CG/SM révèle la présence de trois
composés majoritaires fenchone, camphre et 1,8 cineol à des pourcentages de 34%, 22,7% et
7.6% respectivement. Le chemiotype ou race chimique de l’HE essentielle est le
fenchone/camphre > 1.8 cineol avec une prédominance des deux premièrs composés
(fenchone > camphre > 1.8cineol). Cependant, l’HE de L. stoechas de la région d’Aine fezza
(Tlemcen) a présenté le même chemiotype mais les proportions sont différentes (Mohammedi,
2010). Les résultats de Benabdelkader et al (2011) présentent une prédominance de fenchone
avec une variation allant de 16,6% à 50,22%, suivie du camphre et du 1,8 cineol à des même
proportions de 0,55% à 14,2%. D’autre part, ces mêmes auteurs signalent que la composition
des HE de L.stoechas algérienne peut être distinguée par la forte proportion de viridiflorol
(sesquiterpène) par rapport à des populations méditerranéennes, composé qui est absent dans
notre huile essentielle et celle de Dob et al (2006). Ces derniers ont observé la présence de
fenchone (31 .6%) et d’autre composés majoritaires comme le camphre (22.4%), α –pinene
(6,5%) et lavandula acétate (3%) mais le viridiflorol est absent.

L’huile essentielle de L. stoechas de la Turquie a un composé dominant qui est la pulegone

(40,37%), suivie du menthol (18,06%) et menthone (12,57%) (Gören et al, 2002). Alors que,
le travail de Bouzouita et al. (2005) sur L. stoechas de la Tunisie révèle la présence du même

31
chemotype que notre huile essentielle (fenchone, camphre, 1.8 cineol) avec une prédominance
du fenchone (68,2%). Un résultat similaire pour l’HE de la même plante en Grèce avec une
composition dominée par la fenchone (45,19%) et d’autre composée en proportions notable :
1,8 cineol (16,30%), camphre (9,90%).

L’espèce Lavandula stoechas L est une plante médicinale active, sa composition chimique

est complètement différente des autres lavandes. Dans la même espèce, le contenu
biochimique de l’HE trouvé dans les fleurs, la tige ou feuilles diffère d’une manière
significative selon les conditions de développement de la plante. La présence et la
concentration de certains constituants chimiques fluctuent également selon la saison et la
maturation de la plante (Chu et Kemper, 2001).

30
 Conclusion et perspectives

Du fait de la grande importance dirigée vers les substances naturelles bioactives issues des
plantes médicinales et afin de contribuer à la valorisation de la flore algérienne, la présente
étude avait pour objectif la réalisation du criblage phytochimique de la partie aérienne de la
plante Lavandula stoechas L. récoltée de la région de Timezrit (en montagne de Boumerdes)
et la caractériation chimique de ses huiles essentielles.

L’étude phytochimique de la partie aérienne de la lavande montre qu’elle est très riche en
coumarines, flavonoides, glocosides, tanins gallique. Elle est moyennement riche en tanins
totaux, tanins catéchique, anthocyanes et saponosides. De plus, cette plante médicinale est
dépourvue d’alcaloides, de quinones libres, de mucilage, de leucocyanes, d’iridoide et
d’amidon.

La détermination du rendement en l’huile essentielle, issue par hydrodistilation, a montré

une rentabilitè de 0,43%. Rendement qui peut différer selon la matière végétale, le cycle
végétatif, les facteurs climatiques, la nature du sol et le mode de récolte, de stockage et
d’extraction.

Les proprétes organoléptiques de l’HE de L. stoechas montre qu’elle présente l’espect d’un
liquide mobile, limpide de couleur jaune pâle avec une odeur.

L’analyse qualitative et semi qualitative de l’huile essentielle par GC/SM nous a permis
d’identifier et de quantifier 22 composés. Les 5 composés majoritaires sont le fenchone à
34%, le comphre à 22,7%, le 1,8-cineol à 7.6% , le linalyl acetate à 5,8%, le camphene à
3,5%, le linalol à 1,88% et le limonene avec un taux de 1,01%.

En perspectives, nous recommandons d’approfondir les tests phytochimiques aux métabolites

primaires, et à l’étude de la partie souterraine de la lavande qui se développe en régions
montagneuses. Aussi, l’étude biologique telle que l’activité antioxydante et antifongique sur
les microorganismes cliniques et phytopathologiques.

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41
 ANNEXES

Annexe 01: Matériels non biologique

a-matériel utilisé :

Appareils Verreries et accessoires utilisées

-Fioles,
-Balance, -Eprouvette de 10 ml,
-Broyeur électrique, -Becher (petit et grands) ,
-Bain marie , -Ciseaux,
-Etuves réglées à 37°C, 35°C et -papier filtre,
45°C, -Papier aluminium,
- Hydrodistilateur (clivanger), -Tube à essai,
-CPG/SM, -Gante,
-Réfrigérateur,

b-Les réactifs chimiques utilisés

Réactifs Formule chimique

-Chlorure de fer anhydre FeCL3
- Hydroxyde de sdium NaOH
-Acide chlohydrique HCl
- Iode I2
-Chloroforme CHCl3
-Ammoniaque NH3
-Acide sulfurique H2SO4
- sulfate de cuivre CuSO4
- Hydroxyde de potassium KOH
-formol CH2O
- alcool isoamylique C5H12O
- acétate de plomb C4H6O4Pb
- propanol C3H8O
- acétate de sodium C2H3NaO2
- éthanol absolu C2H6O
- Ether di-éthylique C4H10O
- Zinc Zn

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Annexe 02 : Préparation des solutions

Préparation du la solution FeCl3 à 5%

Chlorure de fer anhydre 5g + 011ml d’eau distilié

Préparation de la solution du NaOH à 2M

1.8g d’NaOH +01ml d’eau distilié

Préparation de la solution de sulfate du cuivre

0g de sulfat de cuivre +01ml d’eau distilié

Préparation du mélange de réactif de stainy

Deux volumes de formol (6ml) + un volume d’acide chlorhydrique 0 N

(3ml).

Préparation de iode à 1%

0g de iode + 011ml d’eau distilié

Préparation de KOH à 10 %

01 g de KoH + 011 ml d’eau distillé .

Préparation de l’ammoinaque ½

31 ml de l’ ammoianque +61ml d’eau distillé

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Résumé
Dans la cadre de la valorisation de la flore spontanée algérienne, nous sommes
intéressées aux espéces de la famille des Lamiacées qui est l’une des familles les plus utilisées
comme source mondiale d’épices et d’extraits à fort pouvoir pharmacotique. La plante sur
laquelle a porté notre choix est la lavande spontannée Lavandula stoechas provenant de la
région de Timezrite (Boumerdes). Le présent travail a pour objectifs la détermination des
métabolites secondaires, les propriétés organoléptiques et chromatographiques des huiles
essentielles de L. stoechas. Les tests phytochimiques montrent une richesse en substances
naturelles telles que les tanins galliques, flavonoides, les coumarines et les glucosides.
L’extraction des HE a été effectuée par hydrodistilation. Les propriétés organoléptiques de
l’HE révèle qu’elle est liquide de couleur jeune pale et présente une odeur.L’analyse
quantitative et semi quantitative de l’HE par CG/SM nous a permis d’identifier et de
quantifier 22 composés majoritaires.

Mots clés : Lavandula stoechas, huiles essentielles, hydrodistilation, criblage phytochimique,

métabolites secondaire, Timezrite.

:‫ملخص‬

‫ اهتمامنا كان منصبا علي عائلة لمياسي و التي تعد من العائالت األكثر استعماال‬، ‫في إطار استغالل النباتات الجزائرية‬
‫و قد وقع اختيارنا على نبتة طبية "الحلحال" أصلها‬. ‫عالميا كمصدر التوابل و المستخلصات االقوي كاإلستعمال الصيدالني‬
‫ التحليل‬، ‫في هذا الصدد الهدف من هذا العمل هو الكشف عن المواد العضوية و الدراسة الحسية‬. ‫من منطقة تيمزريت‬
.‫الكروماتوغرافي لزيوت األساسية لنبتة الحلحال‬

‫استخراج‬.‫ غلوكزيدات‬، ‫ القولويدات‬،‫ الفالفونودات‬،‫التجارب الفيتوكيميائية أظهرت ثراء هذه النبتة بمواد فعالة العفص‬
‫الدراسة الحسية للزيت االساسي اظهرت هذه اآلخيرة على شكل سائل ذو لون‬. ‫الزيوت تمت بواسطة التقطير بالبخار‬
.‫ مركب أساسي‬22 ‫ سمح لنا بتحديد‬ϹG/ SM ‫التحليل النوعي و الشبه الكمي لهذه الزيت عن طريق‬. ‫اصفر باهت ورائحة‬

.‫ تيمزريت‬،‫ التركيب الكميائي‬،‫الدراسة الفيتوكميائية‬،‫ التقطير بالبخار‬،‫ الزيوت األساسية‬،‫ الحلحال‬:‫الكلمات األساسية‬

Abstract :

Within the framework of the valorization of the Algerian flora, one wase interested in the
species of the family of Lamiaceae whiche one of families is the used like world source of
spices and extracts whith appliance pharmacy.The plant to which our choice related is lavande
species ( lavandula steochas) coming from the area of timezrit. In this context, the aim of this
work is to determinate the secondary metabolic compostion and property organoléptical ,
chromatographie pur essential oil .

The phytochemicals tested show a richness of plant bay natural substances such as tanins
gallical, the Flavonoids, Coumarine, Alkaloids and glucosides .The extraction of essential oil
was carry out by hydridisttilation . The property organléptical study of the essential oil of
lavandula shows that is pale yellow, liquid, has a smell . In the end, the qualitative and
quantitative analysis of the oil by CG/SM allowed us to identify 22 major compounds .

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 Key words : lavandula stoechas, essential oil, hydrodisttilation,screnning
phytochimical,métabolite secondaire , timezrite .

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