SH Gta 04

I
FO
Guide technique d'accréditation de vérification
T de
(portée A) /validation (portée B) des méthodes
I
Biologie médicale FA
U E
SH GTA 04 - Révision 02 I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA
Comité Français d’Accréditation - 52 rue Jacques Hillairet, 75012 Paris - Site internet : www.cofrac.fr
Guide Technique d’Accréditation de vérification (portée A) /validation (portée B) des
méthodes de Biologie médicale
SOMMAIRE
1 OBJET ......................................................................................................................................... 7
2 REFERENCES ET DEFINITIONS............................................................................................... 8
2.1 Références ................................................................................................................................. 8
2.2 Définitions .................................................................................................................................. 8
3 DOMAINE D’APPLICATION ..................................................................................................... 10
4 MODALITES D'APPLICATION................................................................................................. 11
5 MODIFICATIONS APPORTEES A L’EDITION PRECEDENTE .............................................. 11
6 PROCEDURES ET ENREGISTREMENTS .............................................................................. 11 I
6.1 Maîtrise de la documentation – méthodologie ..................................................................... 11
FO
6.2 Procédure de vérification / validation de méthodes ............................................................ 12
I T
6.3
7 F A
Procédure de gestion de portée flexible ............................................................................... 13
ANALYSE DES RISQUES ........................................................................................................ 14
7.1
7.2 U E
Préambule ................................................................................................................................ 14
Méthodologie de l’analyse des risques ................................................................................. 15
8 VALIDATION / VERIFICATION SUR SITE DES PERFORMANCES D’UNE METHODE ET I Q
N
METHODES DE CALCUL DES CRITERES DES PERFORMANCES ................................................ 21
8.1 O
Description du processus ...................................................................................................... 22
R
8.2
8.3
C T
Description de la méthode ...................................................................................................... 22
Mise en œuvre.......................................................................................................................... 22
8.4 E
Maîtrise des risques ................................................................................................................ 23
L
8.5
E
Identification des performances à évaluer ........................................................................... 23
8.6
N
Vérification des niveaux de performances et méthodes de calcul .................................... 24
8.6.1
I O
Vérification / validation d'une méthode quantitative ..................................................................... 24
8.6.1.1
8.6.1.2
R S
Evaluation de la répétabilité ....................................................................................... 24
Fidélité intermédiaire (reproductibilité intra-laboratoire) ........................................ 26
8.6.1.3
8.6.1.4 V E Justesse ....................................................................................................................... 28
Exactitude ..................................................................................................................... 29
LA
8.6.1.5
8.6.1.6
Incertitude de mesure ................................................................................................. 32
Comparaison de méthodes ........................................................................................ 33
8.6.1.7 Etendue de mesure...................................................................................................... 36
8.6.1.8 Interférences et spécificité analytique ...................................................................... 37
8.6.1.9 Contamination .............................................................................................................. 38
8.6.1.10 Robustesse et stabilité des réactifs .......................................................................... 41
8.6.1.11 Intervalle de référence et/ou valeurs seuils .............................................................. 42
8.6.1.12 Déclaration d’aptitude ................................................................................................. 43
8.6.2 Vérification/Validation d’une méthode qualitative ........................................................................ 43
8.6.2.1 Variabilité inter-opérateurs ......................................................................................... 43
SH GTA 04 - Révision 02 2/168

8.6.2.2 Sensibilité, spécificité analytiques, justesse et fidélité ........................................... 44

8.6.2.3 Incertitude de mesure ................................................................................................. 45
8.6.2.4 Approche de la limite de détection ............................................................................ 45
8.6.2.5 Comparaison de méthodes ........................................................................................ 46
8.6.2.6 Interférences ................................................................................................................ 46
8.6.2.7 Contamination .............................................................................................................. 46
8.6.2.8 Robustesse .................................................................................................................. 46
8.6.2.9 Intervalle de référence et/ou valeurs seuils .............................................................. 46
8.6.2.10 Déclaration d’aptitude ................................................................................................. 46
9 EXEMPLES DE METHODOLOGIE D’ANALYSES DES RISQUES ET ADAPTATION DU I
FO
DOSSIER DE VERIFICATION / VALIDATION DE METHODES ......................................................... 47
9.1 Stratégie de vérification / validation de méthode pour la comparaison d’automates lors
de l’intégration, changement et déplacement d’automates ............................................................ 48
I T
9.1.1
9.1.2 F A
Précisions ........................................................................................................................................... 48
Analyse des risques ......................................................................................................................... 49
9.1.3 Stratégies de comparaison lors de l’intégration/changement de nouveaux automates et de
U E
déplacement avec démontage ou impact technique ................................................................................ 56
9.2
I Q
Cas d’une vérification/validation d’une méthode intégrant une matrice rare ................... 58
9.2.1 N
Principe ............................................................................................................................................... 58
9.2.2
R O
Exemples de matrices rares ............................................................................................................ 58
9.2.3
9.2.4 C T
Exemples de moyens pour vérifier/valider une méthode intégrant une matrice rare ............. 59
Extrait d’un DVM ............................................................................................................................... 61
L E
9.2.5 Guide pour le calcul des rendements d’extraction, effets matrices et performances du
E
processus d’extraction. ................................................................................................................................. 62
Cas d’une modification de méthode (non liée à l’étape de mesure ou relative au matériel)
9.3
N
pouvant impacter l’étape de mesure. ................................................................................................ 63
9.3.1 I O
Exemple d’une analyse des risques pour un automate sans réactif dédié .............................. 64
9.3.2
R S
Extrait de DVM pour un automate sans réactif dédié .................................................................. 65
9.3.2.1
9.3.2.2 V E Vérifications à effectuer .............................................................................................. 65
Exemple de conclusion ............................................................................................... 66
LA
9.4 Stratégie spécifique de validation pour une méthode adaptée .......................................... 66
9.4.1 Exemple de DVM pour une méthode adaptée ............................................................................. 67
9.5 Cas des méthodes multiparamétriques ................................................................................ 69
9.5.1 Exemple de dosage des IgE spécifiques par méthode immuno-enzymatique automatisée . 69
9.6 Cas des processus complexes .............................................................................................. 70
9.7 Cas des « paramètres calculés » ........................................................................................... 71
9.7.1 Exemple de calcul du risque lié aux marqueurs sériques de la trisomie 21 ............................ 71
9.7.2 Exemple de l’examen de dosage des bilirubines ......................................................................... 75
9.8 Cas des tests unitaires simples (TUS) .................................................................................. 75
9.8.1 Exemple d’un TUS réalisé sur un seul site ................................................................................... 75

9.8.2 Exemple d’un TUS réalisé sur plusieurs sites .............................................................................. 76

10 EXEMPLES DE SYNTHESES DE VERIFICATION / VALIDATION DE METHODES ............. 78
10.1 Exemple portant sur la détermination de la concentration des spermatozoïdes ............. 79
10.2 Exemple portant sur la vitalité des spermatozoïdes............................................................ 90
10.3 Exemple portant sur la calcémie (processus simple – méthode quantitative) ............... 103
10.4 Exemple portant sur la recherche d’anticorps érythrocytaires (Dépistage) ................... 112
11 TESTS STATISTIQUES A L’USAGE DE LA VERIFICATION/VALIDATION DE METHODES
136
11.1 Répétabilité, Fidélité intermédiaire : détermination de l’intervalle de confiance du CV 136
11.1.1 Qu’est-ce qu’un intervalle de confiance ? ................................................................................... 136
I
FO
11.1.2 Détermination d’un intervalle de confiance ................................................................................. 137
11.2 Choix du ou des tests statistiques adaptés ....................................................................... 139
11.3 Les tests paramétriques et épreuves de normalité............................................................ 140 I T
11.4
F A
Valeurs aberrantes ................................................................................................................ 143
U E
11.4.1 Principe du test de Grubbs ............................................................................................................ 143
11.4.2 Exemple............................................................................................................................................ 144
11.5
I Q
Comparaison de deux CV ..................................................................................................... 145
N
11.5.1 Principe ............................................................................................................................................. 145
O
11.5.2 Exemples.......................................................................................................................................... 145
R
11.6
T
Comparaison de deux moyennes ........................................................................................ 146
C
11.6.1 Comparaison de 2 moyennes de CIQ mA et mB obtenues à partir de deux échantillons de nA
L E
et nB valeurs (> 30 pour les deux échantillons) ....................................................................................... 147
11.6.2 Comparaison de 2 moyennes de CIQ mA et mB obtenues à partir de deux échantillons de nA
E
et nB valeurs avec au moins un des échantillons < 30 ........................................................................... 147
N
11.6.3 Comparaison d’une moyenne observée à une moyenne théorique ........................................ 149
11.7
I O
Comparaison de deux séries de résultats (séries appariées) .......................................... 150
S
11.7.1 Test t des différences ..................................................................................................................... 150
R
V E
11.7.1.1 Principe ....................................................................................................................... 150
11.7.1.2 Exemple de comparaison en utilisant un test t des différences .......................... 151
LA
11.7.2 Test de concordance entre deux instruments ............................................................................ 152
11.7.3 Droites de régression ..................................................................................................................... 154
11.8 Comparaison de n séries de résultats (n opérateurs ou n analyseurs)........................... 156
11.9 Vérification des concordances ............................................................................................ 159
11.9.1 Principe ............................................................................................................................................. 159
11.9.2 Exemple............................................................................................................................................ 160
11.10 Comparaison de deux pourcentages observés sur deux échantillons (variable
qualitatives) ........................................................................................................................................ 161
11.10.1 Principe ........................................................................................................................................... 161
11.10.2 Exemple .......................................................................................................................................... 161

12 BIBLIOGRAPHIE .................................................................................................................... 163

12.1 Références légales et réglementaires ................................................................................. 163
12.2 Références normatives générales ....................................................................................... 163
12.3 Documentation Cofrac / EA .................................................................................................. 164
12.4 Validation des méthodes ...................................................................................................... 164
12.5 Validation des méthodes en biologie médicale .................................................................. 165
12.6 Sites Internet .......................................................................................................................... 167
13 LISTE DES MEMBRES DU GROUPE DE TRAVAIL ............................................................. 168
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

AVANT-PROPOS
L'objectif de la présente révision de ce guide technique d'accréditation est d'expliciter

la stratégie du processus de vérification/validation de méthodes pour une meilleure
appropriation par les laboratoires. La stratégie se fonde sur une analyse des
risques permettant de définir des critères pertinents d’évaluation des
performances des méthodes au regard d’un contexte qui peut être plus ou moins
complexe. Comme tous les guides techniques, celui-ci ne contient aucune exigence
I
FO
de méthodologie et de calcul mais des approches illustrées au travers d’exemples
non exhaustifs pour guider au mieux les laboratoires dans la démonstration des
satisferont les besoins des patients et des cliniciens. I T

performances de leurs méthodes et ce pour réaliser des prestations de qualité qui
F A
U E
Dans tous les cas, la démarche des laboratoires doit être motivée par le service
médical rendu en vue d’une prise en charge adaptée du patient.
I Q
N
R O
Les approches contenues dans ce guide sont le fruit de la réflexion collégiale de
C T
biologistes médicaux issus de laboratoires privés et publics, de membres des
instances de la section Santé humaine (Comité de Section et Commission
L E
d’Accréditation), de représentants des sociétés savantes, des ordres professionnels
(ordre des pharmaciens section G), d’un représentant de fournisseurs de DM-DIV et
E
d’évaluateurs techniques (cf. liste présentée dans le chapitre 13 du présent
N document).
I O
R S
V E
LA

1 OBJET
La norme NF EN ISO 15189 définit les exigences particulières concernant la qualité et la
compétence, pour les laboratoires de biologie médicale ("LBM"). Quant à la norme NF EN ISO
22870, elle définit les exigences concernant la qualité et la compétence pour les examens de
biologie médicale délocalisés (EBMD).
Le présent guide technique explicite les exigences du paragraphe portant sur le processus
analytique et les thématiques associées aux normes NF EN ISO 15189 version 2012 et NF
EN ISO 22870:2017 ainsi qu’à la norme NF EN ISO 15189 version 2022 concernant la
vérification / validation des méthodes en biologie médicale, en se fondant sur les bonnes
pratiques dans ce domaine et les performances communément observées et acceptées (état
I
FO
de l'art). Le laboratoire peut compléter ces informations à partir des recommandations
proposées par la SFBC, le GFHT, la SFM, l’ANPGM, l’INCA, …
I T
Ce guide ne se substitue pas aux exigences et/ou normes applicables au sein du laboratoire.
F A
Les approches qu’il contient et que le laboratoire est libre d’appliquer, sont celles reconnues
par le Cofrac comme étant appropriées pour répondre aux exigences des normes NF EN ISO
U E
15189 et NF EN ISO 22870, ainsi qu’aux documents Cofrac SH REF 02 et SH REF 08. Dans
tous les cas, il appartient aux laboratoires de démontrer que les dispositions prises permettent
de satisfaire pleinement aux exigences normatives, sur la base des éléments développés dans
le présent document.
I Q
N
Ce guide s'adresse :
O
• aux laboratoires de biologie médicale accrédités ou en démarche d’accréditation
R
C T
• aux fournisseurs de dispositifs de diagnostic in vitro (DM-DIV) pour comprendre et
accompagner les laboratoires dans leur démarche ;
usage ;
L E
• aux évaluateurs du Cofrac, il constitue à ce titre une base d'harmonisation à leur
E
• aux membres des instances du Cofrac (Comité de Section, Commission
d'Accréditation Santé Humaine).
N
I O
R S
Le terme "laboratoire" utilisé dans le texte désigne le laboratoire de biologie médicale.
V E
Cela étant, il peut être utile aux laboratoires réalisant des analyses dans un cadre
médico-légal, les laboratoires de l'EFS exerçant des activités de qualification biologique
LA
des dons de sang, les cabinets d'anatomie et de cytologie pathologiques (ACP) ainsi que
tout autre laboratoire réalisant des analyses de biologie humaine.

2 REFERENCES ET DEFINITIONS
2.1 Références
Les références bibliographiques sont rapportées dans le chapitre 12 du présent document.
2.2 Définitions
Matrice : milieu faisant l’objet de l’examen/analyse (sérum, plasma, sang total, urine, LCR,
tissu, …).
Mesurage : obtention expérimentale d’une ou plusieurs valeurs que l’on peut raisonnablement
attribuer à une grandeur. Les mesurages ne s’appliquent qu’aux propriétés quantitatives. I
FO
Technique : Ensemble de procédés reposant sur des connaissances scientifiques et destinés
à la production.
I T
F A
Automate et automate référent : machine capable de produire des résultats d’analyses.
L’automate référent est celui auquel se réfère la structure en cas de comparabilité de plusieurs
automates.
U E
Méthode : ensemble ordonné de manière logique de principes, de règles, d’étapes qui
I Q
constitue un moyen pour parvenir à un résultat. Exemple : couple automate/réactif, méthode
manuelle de décompte d’éléments figurés, …
N
R O
Méthode quantitative : méthode dont le résultat fournit une valeur numérique d’une grandeur
T
constituée d’un nombre et d’une référence (10%, 22 mmol/L, …) ou d’un ratio.
C
L E
Méthode qualitative : méthode dont le résultat fournit un attribut ou une propriété d’une
analyse que l’on ne peut pas exprimer quantitativement. Exemples : identification macro et/ou
E
microscopique, résultats binaires (présence/absence, positif/négatif, …).
N
Méthode reconnue : méthode faisant l’objet de norme, d’instructions issues de consensus
I O
international ou de réglementation. Les méthodes commercialisées qui utilisent des couples
R S
automate/réactifs dédiés qui correspondent à des DM-DIV marqués CE au titre de la
réglementation en vigueur sont considérées comme des méthodes reconnues.
E
Méthode non reconnue : méthode adaptée ou développée par la structure (cf. SH REF 08).
V
LA
Vérification de méthode : confirmation par des preuves tangibles que les exigences
spécifiées sont satisfaites.
Validation de méthode : confirmation par des preuves tangibles que les exigences pour une
utilisation spécifique ou une application prévue sont satisfaites.
Processus analytique : ensemble des étapes qui aboutissent à l’obtention de résultats

d’examens.
Dans le cadre d’une approche processus, les données d’entrée du processus analytique
proviennent de l’étape pré-analytique et les données de sortie seront utilisées pour le
processus post-analytique (interprétation des résultats de l’examen de biologie médicale,
transmission des données…).

Les examens de biologie médicale peuvent être constitués d’un seul processus appelé
« processus simple », comme le dosage des protéines totales dans le sérum ou de
l’enchainement de plusieurs sous-processus, appelé « processus complexe », comme le cas
de l’ECBU.
Exemples :
- processus simple : dosage des protéines totales
Examen Principe de la méthode Technique automatisée
Automate
Dosage des protéines totales Spectrophotométrie (biuret) commercialisé avec ses
réactifs dédiés
- processus complexe : diagnostic biologique d’une infection urinaire I

Examen Principe de la méthode Techniques manuelles FO
Techniques automatisées
Mise en culture en vue
I T
du dénombrement
bactérien
Oeses calibrées
A
Ensemenceurs
F
Recherche, identification
et numération d’éléments
cellulaires, germes
Examen direct
microscopique avec ou U E
Analyse d’images ou
bactériens et autres sans préparation
I Q cytométrie en flux
éléments
Recherche, identification N
RO
Examen microscopique Examen microscopique et
de germes bactériens et
et coloration : Gram… coloration : Gram…
de cellules1
C T
Détermination
phénotypique :
Recherche, identification
L E - morphologie
- caractérisation
- Caractérisation
ECBU de germes bactériens
et/ou bactéries E Biochimique :
biochimique
(spectrophotométrie)
spécifiques : N colorimétrie
- Spectrométrie de masse
I O
identification bactérienne
- séro-agglutination
- immuno-enzymologie
- Biologie moléculaire
R S - immunofluorescence
Biologie moléculaire
V E - Méthode de diffusion
en milieu gélosé,
- Inhibition de croissance
en milieu liquide en
LA
inhibition de croissance présence de certaines
Etude de la sensibilité
en présence de concentrations
aux antibiotiques :
concentration d’antibiotiques, après
antibiogramme standard,
d’antibiotiques incubation
détermination des CMI
- Biologie moléculaire - Biologie moléculaire
- catégorisation SIR ou - catégorisation SIR ou
CMI … CMI …
Répétabilité : conditions qui comprennent la même procédure de mesure, les mêmes

opérateurs, le même système de mesure, les mêmes conditions de fonctionnement et le même
lieu, ainsi que des mesurages répétés sur le même objet ou des objets similaires pendant une
courte période. La répétabilité représente la variabilité de l'instrument de mesure.
1 Pour les laboratoires exécutant cette étape

Fidélité intermédiaire : conditions qui comprennent la même procédure de mesure, le même

lieu et des mesurages répétés sur le même objet ou des objets similaires pendant une période
étendue, mais qui peuvent comprendre d'autres conditions que l'on fait varier. La fidélité
intermédiaire représente la variabilité de la méthode. Ce terme est parfois appelé
improprement reproductibilité intralaboratoire, en particulier si ce paramètre est calculé à partir
de mesures réalisées sur des équipements identiques en miroir.
3 DOMAINE D’APPLICATION
Le domaine d'application du présent guide concerne le cadre spécifique de la « validation »
des méthodes en biologie médicale. Il est important de préciser que la grande majorité des
laboratoires adoptent des méthodes reconnues (portée flexible standard A). Dans ce cas,
la « validation » correspond à une vérification des performances du système analytique
I
FO
(analyseur et réactif), lors de la mise en application (routine) dans le laboratoire. Cette
vérification permet de confirmer la fiabilité des résultats obtenus (« aptitude à l'emploi »), en
I T
fonction des objectifs définis pour satisfaire les besoins cliniques. Cette vérification correspond
à un des éléments de la maîtrise du processus analytique (cf. document SH REF 02, §5.5.2),
et s’applique à l'ensemble des examens de la portée définie.
F A
Les laboratoires peuvent également employer des méthodes adaptées ou développées en
U E
interne (portée flexible étendue B). Dans ce cas, le laboratoire évalue, pour sa validation,
l'ensemble des critères de qualité de la méthode susceptibles d'en démontrer la maîtrise.
I Q
En lien avec le document SH REF 08 rév. 06 §7.1.1, les modifications non liées à l’étape de
N
mesure et relatives au matériel annexe ne sont pas considérées comme des adaptations de
O
méthode lorsqu’elles n’ont pas d’impact sur l’étape de mesure (portée flexible standard A).
R
C T
Ce document propose des approches pour chaque cas :
- la vérification sur site pour les méthodes adoptées (portée de type A),
- les vérifications pour les modifications sans impact sur l’étape de mesure (portée de
type A),
L E
E
- la validation pour les méthodes adaptées ou développées (portée de type B).
Il aborde également la gestion de la portée flexible incluant notamment la maîtrise des phases
N
pré-analytique, analytique et post-analytique.
I O
Pour rappel, seule la phase analytique est envisagée en termes de « validation » de
R S
méthode. La phase pré-analytique, essentielle, est abordée notamment au travers de la
maîtrise des risques dans le présent document, ce qui n’exclut pas la réalisation d’essais dans
V E
certains cas (type de conservateur, …). Les laboratoires doivent prendre cette phase pré-
analytique en considération et mettre en place des dispositions satisfaisant aux exigences
LA
d'accréditation et a minima respecter les instructions des notices d'utilisation si elles
sont spécifiques au fournisseur ou en valider les adaptations.
Il appartient au biologiste médical de se référer à la documentation technique du fournisseur

(notices, fiches techniques, références bibliographiques, …). Il évalue et apprécie ces
informations à la lueur de recommandations ou de textes réglementaires, des attentes du
prescripteur, des critères de performance proposés (SFBC, GFHT, EFLM Biological variation…).
Ce travail d'expertise est une partie intégrante du métier de biologiste médical. La
vérification / validation proprement dite est ensuite effectuée. Le champ et la profondeur de cette
évaluation dépendent des circonstances et de chaque cas particulier. Elle est initiale, puis se
poursuit dans le temps (changement de lots de réactifs [si effet de lot connu], extensions
analytiques, maintenance lourde, changement de version de logiciel, …).

4 MODALITES D'APPLICATION
Le présent guide technique d'accréditation est applicable à compter du 1er mai 2023.
Dans le domaine de la biologie médicale, et au jour de son approbation, ce guide technique
d'accréditation reflète l'état d'avancement des connaissances en termes de vérification /
validation des méthodes.
Dans ce document, les formes verbales suivantes sont utilisées.
Le terme « doit » exprime une exigence. Les exigences correspondent à la retranscription des
exigences de la norme d’accréditation, du prescripteur ou de la réglementation, ou relèvent
des règles d’évaluation et d’accréditation du Cofrac.
Le terme « devrait » exprime une recommandation de bonne pratique. L’organisme est libre
I
FO
de ne pas suivre la recommandation s’il peut démontrer que les dispositions alternatives qu’il
met en œuvre satisfont les exigences d’accréditation.
I T
Le terme « peut » exprime une permission ou une possibilité. La possibilité est généralement
libre d’appliquer ou non. F A

employée pour indiquer des moyens de satisfaire une exigence donnée, que l’organisme est
U E
5 MODIFICATIONS APPORTEES A L’EDITION PRECEDENTE
I Q
N
L’objet principal de cette révision est d’intégrer les exigences normatives par une approche
R O
basée sur une analyse des risques permettant de définir des critères pertinents d’évaluation
des performances des méthodes correspondant aux besoins des laboratoires. Des précisions
C T
ont été apportées sur la vérification des niveaux de performances et les méthodes de calcul.
En plus d’exemples de dossiers de vérification/validation de méthodes, des exemples de
L E
méthodologies d’analyses des risques conduisant à des adaptations du dossier de vérification
/ validation de méthodes ont été développés. Enfin, l’annexe sur les tests statistiques aborde
E
les bases de la réflexion pour choisir le test statistique le plus adapté au plan expérimental et
l’illustration de l’utilisation de ces tests par des cas pratiques des tests statistiques.
N
I O
Afin d’en faciliter la lecture, aucune marque de révision n’est indiquée.
R S
E
6 PROCEDURES ET ENREGISTREMENTS
V
6.1Maîtrise de la documentation – méthodologie
L A
L'élaboration de documents de vérification / validation est importante car si beaucoup
d'informations et de résultats sont collectés, ceux-ci doivent faire l'objet d’une exploitation
statistique des données et d’une synthèse dans un dossier cohérent et clair, avec une
acceptation formelle par un responsable désigné qui valide opérationnellement la technique.
Au préalable à cette déclaration d’aptitude, le laboratoire identifie les informations suivantes :

- Besoins du laboratoire (utilisation prévue de l’examen)
- Processus simple/complexe
- Analyse des risques globale et/ou spécifique (pré, per, post-analytique)
- Documentation fournisseur
- Etude bibliographique
- Type de méthode - reconnue (vérification)/adaptée ou développée (validation)
- Critères de performance attendus définis (état de l’art, données EFLM biological
variations, sociétés savantes, …)

- Echantillothèque
- Existence de CIQ/EEQ – modalités de comparaison inter-laboratoires/intersites
Le dossier de vérification / validation (comprenant notamment les données sources, telles que
les tickets analyseurs, les feuilles de paillasses de travail, les documents d’enregistrement
et/ou d’observation.) sera conservé pendant toute la durée d'utilisation de la méthode et sera
archivé conformément aux exigences d'accréditation (cf. SH REF 02 §4.13).
Conformément à la procédure de vérification / validation (cf. §6.2), le dossier contient les items
suivants :
• Présentation du processus analytique (étape(s), méthode(s), éléments à vérifier/valider),
• Maîtrise des risques spécifique si nécessaire,
• Détermination des niveaux de performances (paramètres) à vérifier (cf. §8.6),
I
FO
• Détermination des spécifications ou limites acceptables (objectifs à atteindre) de ces
critères (cf. §8.6),
• Revue bibliographique,
I
• Plan d'expérience et mise en œuvre expérimentale dans le laboratoire (cf. §8.6), T
document), F A
• Compilation et traitement statistique des données obtenues (cf. chapitre 11 du présent
spécifications (limites acceptables) initialement fixées.

U E
• Conclusion et décision quant à la validité opérationnelle de la technique, au regard des
I Q
Le document SH FORM 43 (synthèse de la vérification / validation) est mis à la disposition des
N
laboratoires sur le site internet du Cofrac pour la constitution de leurs dossiers. Si des
R O
documents de synthèse internes aux laboratoires sont utilisés, ceux-ci doivent comporter a
minima les points abordés dans le document SH FORM 43.
C T
6.2
E
Procédure de vérification / validation de méthodes
L
E
Afin de respecter les exigences des normes NF EN ISO 15189 & 22870, le laboratoire doit
N
rédiger une procédure générale de vérification / validation des méthodes précisant sa
démarche et conserve les données expérimentales établies sur site. Cette procédure aborde
les étapes suivantes :
I O
R S
1) Modalités de description du processus analytique : le laboratoire décrit, du prélèvement au
V E
compte-rendu, étape par étape, phase pré-analytique et prétraitement compris, les
différentes composantes de la méthode (manuelle/automatique, processus
simple/complexe, …).
LA
Le processus intègre les notions d’expression des résultats (unités, résultat brut versus
calcul ; cas de TQ/TP/INR) et de disponibilité de la valeur des signaux mesurés (DO, RLU,
ratio, …) ;
2) Définition du mesurande : le laboratoire identifie le triptyque analyte, matrice et unité. Pour

la réalisation d'un dosage d'un analyte dans différentes matrices, une vérification/validation
de méthode adaptée à chaque matrice (urine, sang, LCR, …) doit être conduite ;
3) Choix de la méthode : le choix doit tenir compte des performances analytiques de la

méthode, qu‘il convient de décrire ;

4) Analyse de la bibliographie : afin de définir les critères attendus de performance, en rapport

avec la pertinence clinique, et les limites acceptables. Une bibliographie précise et étayée
est préférable plutôt qu’une bibliographie très détaillée sans en extraire les éléments
essentiels ;
5) Analyse des points critiques spécifiques de la méthode et/ou de l’examen si nécessaire et

la maîtrise des risques associée : le laboratoire doit présenter l’ensemble du processus, les
risques encourus et les éléments de leur maitrise. Tout risque non maîtrisé fait l’objet d’une
revue à rapporter dans le protocole de vérification / validation (cf. étape n°7) ;
6) Décision du type de méthode - vérification (méthode reconnue)/validation (méthode

adaptée ou développée) - pour chaque méthode/étape/sous-processus (cf. SH REF 08) ;
I
FO
7) Définition du protocole de vérification / validation sur site en fonction des critères définis à
l’étape n°4 : Un plan d’expérience adapté et statistiquement valide est nécessaire. Le
I T
laboratoire définit les critères de performance à vérifier pour déclarer la mise en service de
F A
la méthode. C’est dans ce protocole que l’on trouve toutes les justifications concernant les
vérifications faites qui sont d’autant plus simples que le laboratoire suit stricto sensu les
étapes préconisées par le fournisseur ;
U E
8) Exploitation statistique des données issues du protocole : c’est lors de cette étape que l’on
I Q
doit retrouver, pour chaque critère de performance mesuré, sa conformité par rapport aux
objectifs préalablement choisis (cf. étape n°4) ;
N
R O
9) Concordance de méthode / d’analyseurs / de modules : lors du changement d’un analyseur,
d’une méthode, d’un réactif, …, le laboratoire doit comparer la nouvelle méthode à celle
qu’il remplace.
C T
En cas d’analyseurs en miroir, back up, EBMD, …, il est nécessaire d’établir une
L E
comparaison afin d’assurer la cohérence biologique des dossiers patients lorsque les
mêmes examens sont traités par plusieurs analyseurs.
E
10)
N
Prise en compte des transferts informatiques entre l’automate et le SIL et/ ou le
O
middleware. Les preuves du bon fonctionnement des interfaces doivent être conservées ;
I
11)
R S
Conclusion : une conclusion sur l’aptitude de la méthode doit être clairement établie
par un biologiste médical avec date et signature. Des commentaires peuvent être faits si
E
besoin pour améliorer la pertinence de ce document.
V
L6.3A Procédure de gestion de portée flexible
De la même manière, l'accréditation pour une portée flexible impose au laboratoire de disposer
d'une procédure dite de « gestion de la portée flexible » (ou encore « gestion des
changements techniques ») listant l'ensemble des opérations à réaliser pour maîtriser le
processus lors d'un changement (de méthode, de réactif, d’analyseur, lieu de réalisation, …)
pour une compétence déterminée (ou ligne de portée telle que décrite dans le document SH
INF 50). Le laboratoire doit mettre en place une procédure spécifique destinée à maîtriser les
changements de méthodes intégrant notamment la vérification / validation de méthodes, la
formation et l'habilitation du personnel, les locaux, la gestion des équipements, les contrôles
de qualité, … Cette procédure décrit l'ensemble des étapes en partant du besoin initial du
laboratoire (nouvel automate, évolution de méthodes, …) jusqu'à la mise à jour de la liste
détaillée des examens et la communication au Cofrac, avec les responsabilités associées à
chacune des étapes (cf. document SH REF 08).

Cette procédure de gestion de la portée flexible est destinée à passer en revue les processus
mis en jeu et les responsabilités associées lors de toute modification. Elle renvoie à la
procédure de vérification / validation de méthode et comporte a minima la maîtrise des
éléments suivants :
- Achats (cahier des charges, …),
- Processus pré-analytique (prélèvement, conditions de transport, tubes, …),
- Revue des contrats de prestations,
- Processus analytique,
- Liste des méthodes analytiques employées,
- Formation/habilitation/réévaluation du personnel et responsabilités (notamment pour
le processus de validation de méthodes),
- Conditions environnementales,
I
FO
- CIQ, EEQ,
- Informatique (connexion et paramétrage),
- Processus post-analytique :
1. Intervalle de référence et interprétations,
I T
2. Validation des résultats,
3. Biothèque et rajouts d’examens
F A
4. Gestion du compte-rendu
E
- Intégration des processus suivants dans le programme d’audit interne et la revue de
direction : U
1. Revue des méthodes révisées
I Q
N
2. Confirmation et autorisation d’emploi des méthodes reconnues
3. Ajout de méthodes dans la portée d’accréditation
4. Adaptation et développement de méthodes
- Information aux clients et au Cofrac R O
C T
7 ANALYSE DES RISQUES
L E
7.1 Préambule E
N
Pour respecter les exigences normatives portant sur la gestion des risques de la norme NF EN
I O
ISO 15189, le laboratoire doit mettre en œuvre une analyse des risques dans le but de réduire
R S
et/ou éliminer les risques identifiés. Le laboratoire peut consulter la norme NF EN ISO
22367:2020 « Laboratoire de biologie médicale – Application de la gestion des risques aux
V E
laboratoires de biologie médicale » afin d’identifier et de gérer les risques pour les patients, le
personnel de laboratoire et les prestataires de service qui sont associés aux examens de
laboratoire de biologie médicale.
LA
Les principaux risques dans un laboratoire sont de fournir des résultats à la mauvaise
personne, des résultats erronés, des résultats trop tardifs, des résultats inexacts ou des
résultats accompagnés d’une interprétation inappropriée pouvant avoir un impact sur le
diagnostic, la prise en charge ou le traitement médical du patient.
La gestion des risques de chaque processus comporte plusieurs étapes :
- l’identification des risques potentiels ;
- l’estimation du risque (par exemple : gravité, fréquence, détectabilité) et la
détermination du niveau de risque ;
- la maîtrise du risque (mise en place de dispositions, de moyens de maîtrise, …) ;
- la mesure de l’efficacité des actions mises en œuvre.
Les risques peuvent être identifiés par l’étude minutieuse des processus en mettant en
évidence les étapes sensibles, les défaillances ou les incidents lors de leur mise en œuvre.

L’estimation du risque permet de hiérarchiser / prioriser les actions de maîtrise à mettre en

place. Le laboratoire peut ainsi établir une échelle de criticité tenant compte notamment de la
fréquence, de la gravité et éventuellement la détectabilité des évènements indésirables afin
de les maîtriser (par exemple la méthode AMDEC). Le laboratoire s’appuie sur des actions
préventives destinées à les réduire ou à les éliminer.
L’efficacité des actions mises en œuvre pour la maitrise des risques est évaluée en particulier
à partir de l’étude de l’étendue des non-conformités et des réclamations, des audits internes,
de la veille documentaire et scientifique, …
L’efficacité de l’analyse des risques peut être évaluée, par exemple, à partir des analyses de
tendance (contrôles de qualité interne, évaluations externes de la qualité, …) de manière à
établir et mettre en place un mécanisme d’amélioration continue.
I
7.2 Méthodologie de l’analyse des risques FO
I
La maîtrise des risques dans le cadre de la vérification / validation de méthodes consiste àT
F
maîtriser. Les éléments mentionnés dans l’analyse des risques ci-dessous ne sont pas
A
identifier les caractéristiques de la méthode et les étapes critiques de la phase analytique à
U E
exhaustifs. Il appartient au laboratoire de l’adapter en fonction des situations particulières.
Une bonne appropriation de l’ensemble des processus pré-analytique, analytique et post-
analytique est indispensable avant d’établir le plan de vérification / validation et la stratégie
des expérimentations.
I Q
N
R O
La méthode qui a été retenue pour cette analyse des risques consiste en une analyse selon
les 5M avec (Cf. schéma 1 : Identification de risques selon la méthode 5M) :
o Matière : l’échantillon utilisé
o Milieu : l’environnement
C T
o Main d’œuvre : le personnel
L
o Matériel : l’équipement et le réactif E
o Méthode : la méthode utilisée
E
N
Afin d’identifier les risques du processus de vérification / validation de méthode, le laboratoire
I O
recherche les différentes causes. Il est proposé d’aborder les différents points critiques par un
pratiques. R S
questionnement. Ci-dessous sont mentionnés des exemples non exhaustifs de questions
V E Matière
LA
La matrice utilisée est-elle validée ou proposée par les fournisseurs ?
Les matrices utilisées sont-elles de natures comparables ? Est-il possible de choisir une matrice
représentative ?
Existe-t-il des recommandations concernant la qualité, le volume du prélèvement et le contenant

utilisé pour le prélèvement ?
Les prélèvements sont-ils réalisés par du personnel formé ?
Le délai et la température de conservation peuvent-il avoir un impact sur la stabilité de l’échantillon ?
La taille des cohortes peut-elle être adaptée au regard de la rareté de la matrice ?
La stratégie de contrôles, calibration… peut-elle être adaptée au regard du type de matrice ?

Exemple montrant que l’analyse des risques peut conduire à un moyen de vérification de la
méthode qui est adapté au type de spécimen.
DOSAGE DE GLUCOSE en lien avec la taille des cohortes

5M Points critiques Echelle de Eléments à Moyens de maîtrise / Suivi de la maitrise
criticité* maîtriser Documents avec les références du risque
(non du SMQ du laboratoire
critique,
peu
critique,
critique)
Sérum ou Peu Performance de la - Disposition : procédure de Suivi des CIQ et EEQ
Plasma critique méthode de dosage vérification des méthodes
(échantillons)
- Application : tests statistiques

robustes avec n≥30 I
FO
Matière
LCR Critique Performance de la - Disposition : procédure de

I T
Suivi des CIQ et EEQ
méthode de dosage vérification des méthodes qui
précise la conduite à tenir en
F A
Matière (échantillons)
fonction des caractéristiques de la

matrice
U E
- Application : vu l’impossibilité de
faire les essais avec des effectifs
importants, choix d’un moyen
I Q
alternatif : dilution des sérums
N
pour être dans une gamme
identique à la concentration du
Milieu
R O LCR
Les conditions environnementales (température, hygrométrie, luminosité, vibrations, stérilité …)

peuvent-elles avoir un impact sur le résultat ?
C T
L E
Les conditions de conservation des échantillons et des réactifs (enceintes, …) et de prétraitement
des échantillons (centrifugeuse, pipettes, …) sont-elles maîtrisées ?
E
N
*L’échelle de criticité est à définir par la structure selon une méthodologie qu’il lui faut décrire.
I O
R S
Exemple montrant que l’analyse des risques peut conduire à une précision des éléments à
par des moyens différents.

V E
maîtriser selon l’organisation du laboratoire. Ainsi, le même point critique peut être maîtrisé
LA TEMPÉRATURE DE CONSERVATION DES PRÉLÈVEMENTS (15/30°C)
5M Points Echelle de criticité* Eléments à Moyens de maîtrise / Suivi de la maitrise du

critiques (non critique, peu maîtriser Documents avec les risque
critique, critique) références du SMQ du
laboratoire
Dégradation Peu Critique Température Disposition : placer les tubes Audits internes
du mesurande ambiante du dans le couloir où la
site température ne dépasse
Milieu
périphérique jamais ces limites ; stock

limité 100 tubes.
Dégradation Peu Critique Température Mesure de la température Alarmes de la centrale

du mesurande ambiante du avec sonde de surveillance de surveillance
Milieu
plateau
technique

Main d’œuvre
Le personnel est-il formé, habilité ?
Est-il nécessaire de mettre en place des critères spécifiques ou une formation spécifique liés au type
de matrice, à l’examen, à l’équipement … ?
Est-il nécessaire de mettre en place une formation spécifique pour les référents techniques ?
Les critères de maintien de compétences du personnel sont-ils adaptés (complexité de la méthode,

fréquence, …) ?
I
FO
Exemple montrant une analyse des risques mettant un œuvre un moyen de maitrise qui est
en adéquation avec le point critique identifié.
I T
COMPÉTENCE DU PERSONNEL sur le poste technique automatisé
FA
5M Points
critiques
Echelle de
criticité*
(non
Eléments à maîtriser
Documents avec les
U E
Moyens de maîtrise /
références du SMQ du
Suivi de la maitrise du
risque
Q
critique, peu laboratoire
Compétence
critique,
critique)
Critique Habilitation du
N I
- Mise à disposition des Maintien des
pour réaliser
les dosages et
vérifier
personnel technique
R O documents utiles
- Question spécifique dans
le questionnaire
compétences basé a
minima sur la présence
au poste sans anomalie
analytiquement
les résultats
C T d’habilitation « … » (Avec
grille de correction
(entretiens annuels)
Main d’ œuvre
enregistrée dans le SMQ)
L E - Habilitation après
réalisation de XX* séries de
dosages et de vérification
E analytique des résultats

obtenus sans erreur.
N
O
* La précision des moyens de maîtrise (XX) se retrouve dans les dispositions.
I
R S Matériel
L’installation répond-elle aux exigences des fournisseurs (environnement, qualification …) ?
V E
Existe-t-il une source potentielle de contamination (inter-réactifs, inter-échantillons…) ?
LA
La nature de l’échantillon a-t-elle une influence sur les performances de l’automate (viscosité,
hémolyse, …) ?
Existe-t-il des procédures dégradées ?
Existe-t-il un planning de maintenances ?
L’équipement nécessite-t-il une connexion/paramétrage informatique ?
Le réactif utilisé bénéficie-t-il d’un marquage CE ?
Les stocks de réactifs/consommables sont-ils gérés (dates de péremption, traçabilité des lots, …) ?
Est-il nécessaire de reconstituer les réactifs ?

Exemple montrant que l’analyse des risques peut aboutir à un suivi de la maîtrise du risque
adapté : une revue bibliographique, expérimentale ou les deux. Pourvu que la performance
soit établie, le laboratoire peut se baser sur son expérience ou marquage CE (garantie
fournisseur).
PERFORMANCE DES RÉACTIFS

5M Points Echelle de Eléments à Moyens de maîtrise / Suivi de la maitrise du
critiques criticité* maîtriser Documents avec les risque
(non critique,
peu critique,
laboratoire
I
FO
critique)
Performance Critique Qualité du réactif, Marquage CE Suivi des fiches
Matériel
réactif conservation, techniques

reconstitution…
I T
Performance Critique Qualité du réactif,
F
Période probatoire à chaque A
Comparaison des
Matériel
réactif conservation, livraison performances selon les

reconstitution…
U E livraisons, exploitation
résultats CIQ
Performance Critique Qualité du réactif,

I Q
- Marquage CE Suivi des fiches
réactif conservation,
reconstitution… N
- Période probatoire à techniques
O
chaque livraison Comparaison des
Matériel
performances selon les
T R livraisons, exploitation
résultats CIQ
E C
E L Méthode
S’agit-il d’une vérification ou d’une validation de méthode ?
N
S’agit-il d’une méthode qualitative ou quantitative ?
I O
S’agit-il d’un processus simple ou complexe ?
R S
Le principe de la méthode est-il influencé par l’échantillon (nature, volume, dilution …), par le
V E
prétraitement, par les conditions de conservation … ?
Les méthodes employées sont-elles comparables ?
LA
Est-il pertinent de déterminer la limite de quantification, de détection ?
Composition du/des réactifs ?
Quid des interférences ?

Exemple : montrant que l’analyse des risques justifie les performances à vérifier/valider.
MÉTHODE QUALITATIVE PAR RAPPORT À UN SEUIL MESURÉ
5M Points Echelle de Eléments à maîtriser Moyens de maîtrise / Suivi de la maitrise du

critiques criticité* Documents avec les risque
(non références du SMQ du
critique, laboratoire
peu
critique,
critique)
Interprétation Critique Incertitude de mesure Procédure de détermination Suivi des incertitudes
des résultats des incertitudes
I
Méthode
(digoxinémie)
FO
Interprétation Non Incertitude de mesure - Bibliographie du
I T
des résultats critique fournisseur confirmant que
l’incertitude au seuil est
négligeable au regard du
FA
Méthode
E
contexte clinique
- Expérience antérieure du
laboratoire
U
I Q
N
R O
Les résultats de l’analyse des risques permettent au laboratoire de dimensionner son plan
d’expérimentation en déterminant les critères (reproductibilité, répétabilité, exactitude, …) à
évaluer et les performances associées à ces critères.
C T
L E
Les laboratoires réalisent les analyses des risques de l’ensemble de leurs processus (pré- per
post analytique, informatique, …). En outre les dossiers de vérification / validation de méthodes
E
font apparaître les éléments spécifiques de l’examen (exemples : délais pré-analytiques,
composition des réactifs, …). Cette analyse prend tout son sens pour les analyses qualitatives
N
en particulier pour l’estimation des incertitudes.
I O
R S
V E
LA

Guide Technique d’Accréditation de vérification (portée A) /validation (portée B) des méthodes de Biologie médicale
Matière Milieu Main d’œuvre Schéma 1 :

(Echantillon) (Environnement) (Personnel)
Identification de
I risques selon la
FO
Identification de la matrice du méthode 5M
prélèvement
Nature intrinsèque du prélèvement
Conditions ambiantes
Lieu de stockage des
I T
Formation du personnel
Maintien de compétences
Conditions de prélèvement
Contenant du prélèvement
Volume du prélèvement
échantillons
Conditions de réalisation du
prétraitement F A…
Prétraitement
Délai et température de conservation
Interférences
Conditions de conservation
des échantillons
U E
Matrice rare
…
I Q
…
N
R O Service médical
C T rendu
E
EL
Vérification
Vérification ou Validation
ou Validation Performance de l’instrument et de la méthode
Installation « physique » de l’équipement Conduite à tenir en cas de panne
Conduite à tenir en cas de panne Principe de méthode
Principe de méthode impacté impacté Les contrôles CIQ et EEQ sont-ils adaptés ?
Maintenances Effet matrice sur la justesse et/ou l’exactitude
Effet matrice sur la justesse et/ou l’exactitude Comparaison éventuelle avec méthode de
Qualification initiale
Utilisation correcte du matériel Connexions N
Maintenances
informatiques
Connexions informatiques Technique automatisée ou
Technique automatisée ou manuelle manuelle référence ou ancienne méthode utilisée
Contamination
Influence de la nature de l’échantillon sur la I
Marquage
O CE
Marquage CE
Gestion desdesstocks
Qualitatif ou quantitatif
Méthode qualitative ou quantitative
Processus simple ou complexe
Incertitudes de mesure
Stockage des données brutes
performance S
Gestion
Reconstitution
Reconstitution
R ……
stocks
desdes
réactifs
réactifs
Processus
Impact
Impact de la
simple
denature
Entendue
ou complexe
la nature
des des
de
Entendue de mesure
échantillons Détermination des points critiques spécifiques
échantillons
mesure de la méthode
V E Sensibilité/spécificité
Sensibilité/spécificité Validation et rendu du résultat
…
LA
Matériel
(Equipement et Réactif) Méthode

8 VALIDATION / VERIFICATION SUR SITE DES

PERFORMANCES D’UNE METHODE ET METHODES DE
CALCUL DES CRITERES DES PERFORMANCES
Le formulaire SH FORM 43 est constitué de plusieurs feuillets :
- les premiers feuillets sont destinés à l’identification du ou des processus à
vérifier/valider et à la présentation du processus de vérification / validation,
- les feuillets suivants reprennent les critères de performance que le laboratoire évalue
afin de réaliser sa vérification / validation de méthode.
I
FO
Pour un processus complexe, les feuillets sont dupliqués autant de fois que nécessaire pour
aborder chacun des sous-processus.
I T
Le présent chapitre se propose d’illustrer les principales étapes définies dans le §6.2 et de
vérifier les critères de performances.

F A
décrire les principes méthodologiques de calcul ou des recommandations permettant de
des réactifs, … U E
Le nombre de déterminations à prévoir dépend de la cadence de l'analyseur à valider, du coût
I Q
En général, l'effectif est de 30 pour permettre d’appliquer les règles statistiques relatives aux
N
grands échantillons. Un nombre d'essais inférieur est argumenté en fonction de critères
pertinents (rareté de la matrice, coûts des analyses, durée d'analyse, …). La valeur statistique
O
des résultats obtenus sera d'autant plus réduite que les effectifs seront faibles. Les calculs et
R
C T
tests employés devront tenir compte de ces effectifs (cf. chapitre 11 du présent document).
La responsabilité de l’élaboration des dossiers de vérification / validation des méthodes et celle

E
de la déclaration d’aptitude des méthodes appartiennent à la direction du laboratoire.
L
E
Dans le cadre de son accréditation, le laboratoire doit pouvoir mettre à disposition du Cofrac
les éléments suivants :
N
I O
- la procédure de vérification / validation de méthode décrivant les lignes directrices et les
modalités du processus pour la vérification / validation des méthodes ;
R S
- les dossiers de vérification / validation des méthodes. Ces dossiers constituent des
enregistrements dont les différentes versions doivent être gérées. Ils comprennent les
V E
éléments de preuve de bibliographie, les choix et spécifications, les calculs et les conclusions
approuvées sous la responsabilité d’un biologiste médical quant à l'aptitude de la méthode.
LA
Le dossier de vérification / validation peut reprendre des données accumulées par le
laboratoire (CIQ, EEQ, …) avant la demande d’accréditation, seuls les éléments manquants
sont complétés par une étude expérimentale.
En cas de modification de technique ou d'un couple analyseur/technique il est souhaitable,

dans la mesure du possible, de pouvoir disposer simultanément de la nouvelle et de l'ancienne
technique pour pouvoir pratiquer des essais de comparaison en parallèle. En cas
d’impossibilité, il est souhaitable de prévoir une échantillothèque adaptée à ces essais afin de
pouvoir assurer une comparaison des deux techniques.

8.1 Description du processus

Ce chapitre illustre les étapes à suivre pour constituer les dossiers de vérification/validation et
explicite la manière de compléter la synthèse (cf. SH FORM 43).
Le laboratoire décrit l’examen réalisé en termes de sous-processus (voir exemples dans le
chapitre 10 du présent document). Les paragraphes « Description de la méthode », « Mise en
œuvre », « Evaluation des performances de la méthode » seront dupliqués en fonction des
besoins, en cas d’étapes multiples pour un processus complexe.
8.2 Description de la méthode
DESCRIPTION DE LA METHODE
I
FO
Analyte/Mesurande : cf. §6.2 du présent guide
Principe de la Méthode : Cette information peut être retrouvée sous le terme
de « principe général des techniques » dans le SH
INF 50 (colonne « principe de la méthode »)
I T
Type d'échantillon primaire :
Type de récipient, additifs :

congelé/fixé …
F A
Préciser la matrice : urine, sang total, ADN, tissu
Préciser le type de contenant : tube/additif/présence
écouvillon…
U E
ou non d’un séparateur, flacon/milieux de transport,
Prétraitement de l'échantillon : Modalités de

I Q prétraitement de l'échantillon
(centrifugation, dilution, acidification, alcalinisation,
extraction …) :
N
Unités :
Critères d’interprétation2 :
R O
Mode d’expression du résultat (unités, ratio, …)
Intervalles de référence : origine et définition par
critères démographiques ; valeurs seuils, …
Marquage CE (Oui/Non) :
Codage C.N.Q. (s'il existe)3 : C T
Préciser ce qui relève du marquage CE
Consulter le site de l’ANSM, pour l’année en cours
Equipement (instrument, analyseur, etc.) :

L E et pour les années précédentes
marque, modèle, référence
Référence du (des) réactif(s) :
E référence fournisseur, version notice
N
Matériau d'étalonnage (références) :
Type d'étalonnage, nombre de niveaux et
Nature et raccordement métrologique
Type d'étalonnage (linéaire, non linéaire), préciser
valeurs :
I O le nombre de niveaux et les valeurs des niveaux
8.3 R
Mise en œuvre
S
V
MISE EN ŒUVREE
LA
Opérateur(s) formé(s) ayant participé à la
Identité des principaux opérateurs du laboratoire
vérification / validation de méthode :
Procédure de vérification / validation -
Référence et version de la procédure utilisée
mode opératoire :
Procédure de gestion de la portée flexible : Référence et version de la procédure utilisée
Période d’étude4 : Préciser Du : xx/xx/xx au xx/Xx/xx
Préciser si reprise des résultats antérieurs
Date de 1e utilisation5 : Préciser xx/xx/xx (ex : mise en route de l’analyseur)
Rappel : Dans le cadre de la portée flexible, la vérification / validation précède toujours l’autorisation
d’aptitude de la méthode.
2 Indiquer les valeurs de référence si différentes en fonction de l’anticoagulant. Tenir compte du sexe, âge…
3 Lorsque les tables de codage de l'ANSM ne mentionnent pas le réactif concerné, le laboratoire indique "non codé par l'ANSM".
4 Certains résultats peuvent provenir de périodes antérieures dans le cas d’une méthode déjà utilisée (cf. § 5.5.1.2/5.5.1.3 SH
REF 02). Dans ce cas, le laboratoire justifie du maintien des performances de la méthode.
5 La date de 1e utilisation peut être antérieure dans le cas d’une méthode déjà utilisée

8.4 Maîtrise des risques

Lorsque le laboratoire identifie des spécificités qui n’ont pas été développées dans l’analyse
des risques globale (exemple de risque global : identification des spécimens), il est alors
attendu dans le paragraphe 8.4, une maîtrise des risques spécifiques (exemple de risque
spécifique d’un examen : délais pré-analytiques, composition des réactifs, …). Il est possible
de présenter les éléments suivant le modèle basé sur une analyse 5M. (cf. § 7.2 du présent
document).
8.5 Identification des performances à évaluer

L’identification des critères des performances à évaluer est basée sur l’analyse des risques. I
Les bonnes pratiques en matière de performances à évaluer sont largement décrites dans les
référentiels internationaux. Le laboratoire peut également s’inspirer des guides disponibles FO
(guides internationaux : CLSI, FDA, EFLM, … ; guides nationaux : SFBC, QUAMIC, GFHC…)
afin de déterminer les performances évaluées dans son plan d’expérimentation. I T
Tableau des principaux critères de performance à évaluer lors d’une vérification / F A
validation de méthode :
U E
CRITERES A EVALUER I Q
N
Fidélité (répétabilité et fidélité intermédiaire)
Incertitudes/facteurs de variabilité et évaluation
R O
Justesse/exactitude (approche)
Spécificité/sensibilité analytique
C T
Limite de détection
L E
Comparaison avec méthode déjà utilisée au laboratoire ou autre méthode du laboratoire (appareil
E
en miroir6, EBMD) et analyse des discordances 7
Intervalle de mesure
N
(Limite de quantification et limites de linéarité)
O
Interférences (lipémie, hémoglobine plasmatique, bilirubine, médicaments, …)
I
Robustesse
R S
Contamination entre échantillons (si pertinent)
Stabilité réactifs (après ouverture, embarqués)

E
Intervalle de référence (valeurs usuelles)
V
Le dossier doit conclure sur l'avis d'aptitude8 de la méthode ou du système analytique.
LA
Le choix des critères et les modalités d’évaluation (essai et/ou étude bibliographique) résultent
de l’analyse des risques.
Le dossier de vérification / validation peut renvoyer à d'autres documents (bibliographie,

notices fournisseurs, documents internes au laboratoire, etc.), correctement référencés et
accessibles.
6
Appareils en miroir : privilégier les appareils utilisant des techniques de principes analytiques identiques sinon il est possible
d’utiliser des codes examens différents pour le même paramètre ou d’utiliser un facteur de correction (pour les techniques
linéaires) de manière transitoire. Une stratégie d’uniformisation des techniques pour un même paramètre est privilégiée lorsqu’elle
répond aux besoins des usagers.
7
Par exemple : étude des faux positifs et des faux négatifs.
8
En cas de dépassement des spécifications choisies a priori par le laboratoire, celui-ci justifie l’acceptation des écarts pour pouvoir
conclure à l’aptitude de la méthode et l’enregistre.

La trame du SH FORM 43 ou des documents internes développés par les laboratoires est
destinée à répondre aux différents cas rencontrés en biologie médicale. Les laboratoires
seront attentifs au choix des critères pertinents à rapporter, sachant que l’ensemble des
critères présentés dans SH FORM 43 reste une proposition à adapter à chaque examen.
Le choix des essais repose sur l’assurance du service médical rendu. Exemples : la limite de quantification
de certains éléments ou encore la limite de détection d’une molécule peuvent se justifier dans certains
contextes. Un argumentaire justifiant de l’absence d’essai est attendu.
8.6 Vérification des niveaux de performances et méthodes de calcul

Le laboratoire établit les niveaux de performance obtenus de sa méthode. Il les compare aux
I
FO
données de référence attendues dont il dispose (fournisseur, bibliographie, sociétés savantes,
…) et conclut quant à l’acceptabilité de sa méthode en fonction de ses besoins vis-à-vis du
critère testé. Les échantillons utilisés sont précisés.
I T
Les niveaux de performances requis sont établis au regard de leur intérêt pour une prise en
charge adaptée du patient.
F A
8.6.1 Vérification / validation d'une méthode quantitative
U E
8.6.1.1 Evaluation de la répétabilité
I Q
N
L'essai de répétabilité consiste à analyser un même échantillon dans les conditions
R O
suivantes : même opérateur, même lot de réactifs, même instrument, même étalonnage dans
un délai le plus court possible. L'objectif est de caractériser la meilleure performance possible,
T
dans des conditions optimales et de vérifier le bon fonctionnement du système
(instrument/réactif) pour l’analyte concerné. L'évaluation de la répétabilité est indispensable
C
L E
lors de l'installation d'un nouvel analyseur afin de connaître les performances initiales.
Lorsque la matrice influence l’étape de mesure, ce calcul est répété pour chacune des
E
matrices (sérum, urine, LCR, …) soumises à analyse, en utilisant des échantillons biologiques
N
ou des échantillons du contrôle interne de qualité (CIQ). Pour un même analyseur, ce calcul
I O
est effectué pour chaque analyte à mesurer et à plusieurs niveaux de concentration.
Il peut être nécessaire de réitérer des essais de répétabilité pour vérifier le bon fonctionnement
R S
du système notamment après une intervention importante (panne, maintenance, …).
Les résultats obtenus sont comparés aux CV annoncés par le fournisseur et/ou à d’autres
E
critères (sociétés savantes…).
V
LA
REPETABILITE
Applicable ; non applicable (à justifier)
CV (%) retenu
Nombre de Ecart- CV CV (%) par le
Echantillons Moyenne Conclusion10
valeurs (N) type (%) fournisseur laboratoire
(cf. source9)
Type de Niveaux
matrice testés
(plasma,
sérum, CIQ,
…)
Argumentaire de la conclusion :
9 Sociétés savantes, publications (SFBC, GEHT, EFLM, QUALAB, CLIA…). Préciser la référence utilisée.
10 Conforme/non conforme

Méthode de calcul :
Il est recommandé d'utiliser au minimum 2 niveaux de concentration, en choisissant, si

possible, un niveau proche de la (des) zone(s) décisionnelle(s). Ces niveaux sont choisis en
fonction des valeurs physiopathologiques. Le nombre de déterminations à prévoir dépend de
la cadence de l'analyseur à valider, du coût des réactifs, … En règle générale, l'effectif est de
30 pour une interprétation statistique optimale. Un nombre d'essais inférieur est argumenté en
fonction de critères pertinents (rareté de la matrice, coûts des analyses, durée d'analyse, …).
La valeur statistique des résultats obtenus est d'autant plus réduite que ces effectifs sont
faibles (les calculs et tests employés tiennent compte de ces effectifs). Toute valeur écartée
est justifiée.
L'exploitation des résultats consiste à calculer la moyenne (m), l'écart-type (s) et le coefficient
I
FO
de variation (CV) des valeurs expérimentales de chaque série.
(𝑠)
𝐶𝑉 (%) =
(𝑚)
× 100
I T
F A
Le CV calculé permet une évaluation de la répétabilité de la méthode exprimée en %. La
U E
définition et le mode d'expression de la fidélité figurent dans la norme ISO 5725-2. Lors de la
vérification, le CV calculé est comparé au CV limite admissible, préalablement choisi
(fournisseurs, sociétés savantes, …).
I Q
En pratique :
N
R O
- Choix du CV des limites acceptables de répétabilité :
o CV du fournisseur : les CV qui figurent sur les fiches techniques sont des données
C T
indicatives relatives utilisées pour le dossier de marquage CE selon la réglementation en
vigueur. Ces CV ne sont pas systématiquement des consignes car parfois obtenus dans
L E
des conditions environnementales particulières. Il est donc conseillé de s’adresser au
fournisseur qui peut fournir un CV des limites acceptables.
E
o CV des matrices déjà validées/vérifiées.
o Une approche théorique établit une relation entre la répétabilité (R) et la fidélité
N
intermédiaire (Fi) : R x 1,3 = Fi (publication ABC 57 n°6 de novembre – décembre 1999).
I O
Cette approche est à utiliser avec précaution car le CV de répétabilité ne montre pas
R S
toujours cette relation avec le CV de la fidélité intermédiaire. A l’inverse, en l’absence de
spécifications de répétabilité, le laboratoire pourra utiliser cette relation : Fi x 0,75 = R.
V E
o Sources bibliographiques mentionnant un CV des limites acceptables de répétabilité.
o Les données d’expérimentation, propres du laboratoire, obtenues avec un équipement
LA
révisé et conforme peuvent servir de référence si et seulement si le CV obtenu répond
effectivement aux besoins du laboratoire.
- Choix de valeur : Le choix des valeurs étudiées devrait tenir compte des seuils de décision
clinique.

- Pertinence :
o La répétabilité est utile pour valider/vérifier le processus analytique instrument / méthode

/ réactif elle sert aussi de référence en cas d’incident de l’instrument ou de modification du
système analytique (exemple : changement d’une cellule de mesure, revalidation après
intervention curative ou panne etc…). Dans le cadre d’une méthode adaptée/développée,
quand elle est techniquement réalisable, la répétabilité est un élément essentiel pour
apprécier la stabilité de la méthode.
o Sur la base d’une analyse des risques, le laboratoire peut également déterminer si la
répétabilité d’une matrice de référence (type CIQ) peut servir d’élément documentaire de
I
validation/vérification d’une autre matrice (Par exemple : Au regard des caractéristiques
FO
chimico-physique et du principe de méthode, peut-on se référer aux performances de
répétabilité obtenu pour le glucose dans la matrice plasma pour le DVM du glucose d’une
ponction articulaire ?)
o
I T
Dans le cadre d’une méthode reconnue, sur la base d’une analyse des risques, il est
A
possible de focaliser les répétabilités sur les paramètres représentatifs dits « sentinelles ».
F
U E
I Q
8.6.1.2 Fidélité intermédiaire (reproductibilité intra-laboratoire)
Il est souhaitable que les niveaux testés pour évaluer la fidélité intermédiaire soient identiques
N
à ceux testés en répétabilité (cf. établissement de la robustesse §8.6.1.10).
R O
L'essai de fidélité intermédiaire (reproductibilité intra-laboratoire) consiste à analyser un même
C T
échantillon dans des conditions différentes en faisant varier au moins un des facteurs :
l'opérateur, le temps, les lots de réactifs, les étalonnages, … Il permet notamment de
L E
paramétrer les critères d’acceptation des antériorités en combinaison avec les variations
biologiques (delta-check, critères de repasse…).
E
N
Lorsque les résultats obtenus sont supérieurs aux limites de référence / admissibles
préétablies, le laboratoire vérifie si les différences observées, compte tenu du nombre de
I O
valeurs et du niveau de concentration des échantillons, sont significatives et les confronte à
S
l’impact sur la décision médicale.
R
V E FIDELITE INTERMEDIAIRE
CV (%) retenu
LA
Nombre de CV (%) par le
Echantillons Moyenne Ecart-type CV (%) Conclusion11
valeurs (N) fournisseur laboratoire
(cf. source10)
Type de Niveaux
matrice testés
(plasma,
sérum, CIQ,
…)

Classiquement, la fidélité intermédiaire est évaluée à l'aide des coefficients de variation

calculés à partir des résultats des CIQ. L'essai est réalisé au cours de séries successives, en
général 1 à 2 par jour, d'échantillons de Contrôle Interne de Qualité (CIQ) quotidiens.
La fidélité intermédiaire est établie sur au moins 15 jours avec 30 déterminations et à deux
niveaux minimums. Une autre stratégie peut être employée et justifiée par le laboratoire sur le
plan statistique.
Les modalités de calcul sont identiques à celles de la répétabilité, avec calcul de la moyenne
(m), de l'écart-type (s) et du coefficient de variation (CV) sur les valeurs expérimentales de
chaque série ; le CV calculé est comparé au CV des limites acceptables de fidélité
intermédiaire choisi au préalable (Fournisseur, SFBC, EFLM dont les valeurs peuvent évoluer
I
FO
dans le temps et en fonction des pathologies, …).
Note : la répétabilité et la fidélité intermédiaire (reproductibilité intra-laboratoire) apparaissent

I
donc comme deux évaluations différentes de la fidélité. Elles dépendent des conditions T
constituent une manifestation de la robustesse de la méthode (cf. §8.6.1.10).
F A
spécifiées que l'on fait varier. Des résultats d'évaluations proches de ces 2 niveaux de fidélité
U E
Rappel :
I Q
-
N
Le CIQ valide le processus analytique. Les bornes fournisseurs, si elles sont disponibles sont à
-
R O
considérer comme une référence pour cette évaluation.
Selon la loi Normale 5% des points de CIQ sont des points compris entre 2S et 3S et 1 point pour
C T
300 est compris entre 3S et 4S. Les points qui ne font partie de la répartition correspondante à la
loi Normale ne sont pas rejetés sans argumentation (se référer à l’article « Recommandations pour
L E
la mise en place et le suivi des contrôles de qualité dans les laboratoires de biologie médicale »,
Ann Bio Clin 2019 ; 77 (5) : 577-97).
E
N
En pratique :
I O
-
R S
Choix des valeurs de CIQ : il devrait, dans la mesure du possible, tenir compte des seuils de
-
E
décision clinique (par exemple : proche du cut-off en sérologie ou zone grise pour les marqueurs
V
cardiaques).
Choix des niveaux : les niveaux souhaitables devraient être proches du ou des seuils
LA
décisionnels et si possible représentatifs de l’intérêt clinique de l’examen et ou adaptés à la
population ciblée par le laboratoire.
- Nombre de valeurs : le CV de fidélité intermédiaire d’un nouveau dossier de vérification /
validation de méthodes peut être celui établi lors d’une période relativement courte d’évaluation
des performances analytiques avant l’adoption de l’examen. La fidélité intermédiaire est suivie et
appréciée sur du plus long terme de façon à inclure un maximum de variations (par exemple : lots
de réactifs, lots de CIQ, calibrations, personnel utilisateur, facteurs externes variables …)

8.6.1.3 Justesse
La justesse est l’étroitesse de l'accord entre la moyenne d'un nombre infini de valeurs
mesurées répétées et une valeur de référence (ou valeur vraie).
Dans les laboratoires, les matériaux de référence certifiés sont peu utilisés en pratique
courante ; il est donc difficile de parler stricto sensu de « valeur vraie » et par là-même de
justesse.
Une approche de la justesse peut être envisagée en comparant la moyenne de plusieurs

dosages d'un même échantillon à une valeur cible, assimilée à la « valeur vraie ». L'écart
observé correspond au biais. Le biais peut être évalué à partir des résultats obtenus avec des
échantillons de contrôle titrés ou des valeurs observées dans des programmes de contrôle
interne couplés à une comparaison inter-laboratoire (externalisation des CIQ).
I
Dans certains domaines (pharmacologie, toxicologie) l’utilisation de matériaux non certifiés,
FO
raccordés au SI soit par raccordement interne soit par raccordement externe est un moyen
acceptable pour approcher la justesse. I T
F A
La valeur assignée peut être biaisée, et devrait, idéalement, être déterminée grâce à une
U E
méthode de référence dont les résultats sont traçables au SI ou aux étalons internationaux.
La connaissance de la valeur vraie repose actuellement sur les valeurs assignées associées
I Q
aux échantillons de contrôle. Ce sont des valeurs consensuelles (moyenne de l’ensemble des
N
participants (si les seuils de décision pour l’examen concerné sont standardisés selon
des méthodes, des analyseurs ou des fournisseurs).

R O
recommandations HAS, …) ou un consensus, ou moyenne par groupe de pairs en fonction
T
La commutabilité des échantillons, c’est-à-dire leur capacité à se comporter comme des
C
L E
échantillons réels (échantillons de patient) quelle que soit la méthode utilisée, doit être prise
en compte. En effet, les effets de matrice engendrés par les différents traitements subis par
E
les échantillons de contrôle durant leur préparation (lyophilisation, congélation, ajout de
conservateur, surcharge, mélange, …) peuvent être à l’origine de biais qui ne sont pas
N
retrouvés avec des échantillons patients.
I O
R S JUSTESSE (à partir des CIQ externalisés)
Echantillons V
de E
Nombre
valeurs
Valeurs
Labo
Cible
(groupe
Biais
(%)
/groupe
Moyenne
générale
(toutes
Biais (%)
/ moyenne
Biais (%)
limite10
Conclusion11
LA
de pairs) générale
(N) de pairs techniques)
Echantillon
CIQ niveau 1
Echantillon
CIQ niveau 2
La justesse, quantifiée par le biais, est estimée en comparant la moyenne obtenue (m) lors de
l'étude de fidélité intermédiaire (reproductibilité intra-laboratoire), établie avec des échantillons
de CIQ, à la valeur cible attendue (généralement la moyenne des participants et/ou du groupe
de pairs, ou la valeur assignée), assimilée à la valeur « vraie » (v) de l'échantillon testé.

Elle est exprimée en pourcentage de la valeur cible, selon le calcul suivant :
(𝑚 − 𝑣) × 100
𝐵𝑖𝑎𝑖𝑠 (%) =
𝑣
Le concept de justesse et les méthodes d'évaluation du biais sont développés dans la norme
ISO 5725-4.
Le Z-Score n’apporte pas à lui seul une idée de la justesse mais il informe sur la position du
résultat du laboratoire par rapport à un groupe d’utilisateurs (pairs, méthodes…).
Rappel :
Une justesse est obtenue avec une valeur de référence constituée par :
I
FO
- Un matériau de référence certifié (MRC) ;
- Un étalon raccordé au SI ;
- Un raccordement à une valeur consensuelle (par exemple : externalisation CIQ, …).
I T
F
possible. Dans ce cas, l’absence de justesse dans le dossier de méthodes est argumentée. A
Pour certaines techniques, la mise en place d’un CIQ externalisé ou l’utilisation d’un MRC n‘est pas toujours
U E
8.6.1.4 Exactitude
I Q
N
L’exactitude est définie comme l’étroitesse de l'accord entre une valeur mesurée et la valeur
O
vraie d'un mesurande. Comme la justesse, l’exactitude devrait être vérifiée à partir d’une valeur
de référence mesurée à partir d’une méthode de référence. A ce jour, les laboratoires évaluent
R
laboratoires d’échantillons.
C T
l’exactitude à partir des résultats des Evaluations Externes de la Qualité ou l’échange inter-
L E
Une étude d’exactitude correspond à la comparaison du résultat d’un seul dosage en aveugle
E
sur chaque système analytique d'un échantillon inconnu à une valeur cible consensuelle.
L'écart observé correspond à l’inexactitude (erreur d’exactitude).
N
I O
Le plan de participation aux EEQ prend en compte le nombre de participants.
R S
Il est rappelé qu’une analyse des résultats obtenus lors des campagnes d’EEQ est nécessaire
à l’octroi ou au maintien de l’accréditation (cf. SH REF 02).
V E
LA
EXACTITUDE (à partir des contrôles externes ponctuels : EEQ/CNQ)
Contrôles quantitatifs ; Contrôles qualitatifs
Cible Cible Biais (%) Biais (%) / Biais

Valeur
Echantillons11 (groupe (toutes / groupe toute (%) Conclusion11
Labo
de pairs) techniques) de pairs technique limite10
11 les échantillons testés correspondent aux EEQ/CNQ

Pour la méthode de calcul :
Le laboratoire peut établir l’inexactitude d’une méthode à partir des résultats des EEQ
(analysés une seule fois) en comparant la valeur trouvée à la valeur cible attendue
(généralement la moyenne des participants et/ou du groupe de pairs), assimilée à la valeur
« vraie » (v) de l'échantillon testé. L’écart observé quantifie l’inexactitude. L'évaluation de
l'inexactitude est d'autant plus pertinente que le nombre d'échantillons d'EEQ est élevé.
L’inexactitude est exprimée en pourcentage de la valeur cible, selon le calcul suivant :
(𝑥 − 𝑣) × 100
𝐼𝑛𝑒𝑥𝑎𝑐𝑡𝑖𝑡𝑢𝑑𝑒 (%) =
𝑣
I
FO
Avec : x : valeur trouvée pour l'EEQ et v : valeur cible
Ces valeurs permettront un calcul d’une valeur moyenne et de sa dispersion nécessaire pour
le calcul d’incertitude.
I T
Rappel :
F A
La norme ISO 5725 utilise deux termes « justesse » et « fidélité » pour décrire l'exactitude d'une méthode
E
de mesure. La « justesse » se réfère à l'étroitesse de l'accord entre la moyenne arithmétique d'un grand
nombre de résultats d'essai et la valeur de référence vraie ou acceptée. La « fidélité » se réfère à
l'étroitesse de l'accord entre les résultats d'essai. U
I Q
La norme ISO 3534 propose une autre approche d’estimation de l’exactitude par le biais du profil
d’exactitude. N
R O
Une approche recevable peut être l’approche statistique adossée aux retours d’EEQ. Dans ce cas, le calcul
C T
des z-scores prend en compte la dispersion des résultats autour d’une valeur assignée. Les limites de
recevabilité à +/- 2 en z-scores correspondent à un niveau de significativité suffisant (Intervalle de confiance
à 95%) pour statuer sur l’existence ou pas d’un biais d’exactitude. Le postulat sous-jacent est qu’il y a une
E
distribution normale des résultats dans l’exercice d’EEQ avec un nombre suffisant de participants.
L
E
En pratique :
N
- I O
L’inexactitude est calculée avec des valeurs d’EEQ. Or, il n’est pas toujours possible d’obtenir des
R S
EEQ dans la matrice dosée. Si la matrice de l’échantillon n’a pas d’impact sur la méthode
initialement validée, alors la matrice de référence de l’EEQ peut être utilisée.
-
V E
En cas d’absence d’EEQ, il est possible d’appliquer le logigramme ci-dessous. Le choix du
laboratoire partenaire pour l’organisation de la CIL peut se porter si possible sur un ou plusieurs
LA
laboratoires accrédités de préférence utilisant la technique ou équivalent ou une autre technique
reconnue.
- Il n’est pas rédhibitoire de faire partie d’un groupe de pairs réduit. L’utilisation du groupe utilisant
plusieurs techniques est envisageable et peut conduire à une comparaison inter-laboratoire.
- En cas d’absence d’EEQ, il existe d’autres moyens tels que :
o La confrontation avec la clinique (par exemple : sexe fœtal, rhésus fœtal, IgE spécifiques,
Test d’activation, Bilharziose…)
o Le raccordement direct au SI (par exemple : poudre de référence avec un certificat
d’analyse …)
o L’utilisation d’un étalon OMS
o L’utilisation de matériaux de référence (par exemple pour les : métabolites, des
médicaments, …)

Logigramme sur la détermination de l’exactitude
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
E
EL
N
I O
R S
V E
LA

8.6.1.5 Incertitude de mesure

L’évaluation de l’incertitude de mesure est une exigence de la norme NF EN ISO 15189. De
plus, les composantes d’incertitude de la phase analytique pour chaque mesurande doivent
être établis. Un calcul d’incertitude doit en outre être déterminé pour les paramètres
quantitatifs (cf. SH REF 02). Le laboratoire peut suivre les lignes directrices pratiques pour
l’estimation de l’incertitude de mesure du document Spécification technique XP ISO/TS
20914:2020.
La démarche est de définir le mesurande et d’analyser le processus de mesure :

- identifier les facteurs susceptibles d'influencer le résultat de mesure ;
- identifier, parmi ceux-ci, ceux dont l'influence est considérée comme non significative,
en précisant les raisons de cette décision (preuve ou élément connu)
- apporter la preuve de la maîtrise des facteurs qui ont une influence significative sur les I
résultats.
FO
INCERTITUDE DE MESURE (niveaux, choix du mode de calcul, interprétation) :
Méthodologie choisie : analyse des risques (absence d’interférence résiduelle) I T
Incertitudes calculées
F A; calcul
Exigence de
performances
Mode de calcul (cf. SH GTA 14) :
Quantification de l'incertitude
Formule utilisée
Niveau 1 en valeur absolue ± U ou
U E Référence
Exigences en fidélité,
(niveau 1) :
I Q
Niveau 1 en valeur absolue ± U%
Niveau 2 en valeur absolue ± U ou
justesse et incertitude
(niveau 2) :
N
Niveau 2 en valeur absolue ± U% justesse et incertitude
(niveau xxx) : O
Niveau xxx en valeur absolue ± U ou
Niveau xxx en valeur absolue ± U%
R
justesse et incertitude
Méthode de calcul : C T
Argumentaire de la conclusion (impact sur la zone décisionnelle ?) :
L E
Le document SH GTA 14 a été rédigé pour aider les laboratoires à procéder à la détermination
E
de l’incertitude de mesure des résultats.
N
I O
L’incertitude doit être réévaluée régulièrement. La périodicité peut être définie en fonction d’un
délai ou la survenue d’un évènement particulier (dérive du biais d’inexactitude, CV de fidélité
R S
intermédiaire, vieillissement d’un automate, …). Elle est à évaluer en fonction des besoins
cliniques et l’interprétation biologique du dossier patient. Elle est confrontée aux exigences de
V E
performance du laboratoire qui peuvent être calculées à partir de données de sociétés
savantes ou de publications faisant autorité, et tenant compte des fidélités et biais limites.
LA
Rappel :
- Pour les résultats avec un seuil décisionnel, le laboratoire définit sa propre incertitude.
- L’incertitude peut également être liée à la variabilité inter-opérateurs (ex : table de Rümke en
hématologie).
Le résultat de l’incertitude est pris en compte dans l’interprétation voire dans la prestation de
conseil (cf. schéma des étapes de détermination et utilisation des incertitudes de mesure).

Etapes de détermination et utilisation des incertitudes de mesure :
Exigences normatives
-
Principe de mise en œuvre
Détermination l’incertitude de mesure

I
FO
I T
Confrontation aux exigences de performances F A
-
U E
Le laboratoire s’appuie sur sa connaissance des principes
des méthodes, des performances des pairs, … et au regard
des besoins de ses usagers.
I Q
N
R O
C T
Intérêt de calculer les Incertitudes
L E -
Le laboratoire détermine l’intérêt en fonction de la gamme,
E
de la linéarité de la méthode, des seuils décisionnels, …
N
I O
S
ER
Influence des incertitudes sur les résultats
-
Le laboratoire adapte les interprétations et détermine les
V prestations de conseil en fonction des incertitudes.
LA
8.6.1.6 Comparaison de méthodes
Dans le cadre d’appareils en miroir, la comparabilité des résultats doit être assurée, lors de la
vérification ou la validation initiale, et de façon continue (cf. NF EN ISO 15189 :2012 § 5.6.4
et NF EN ISO 15189 :2022 §7.3.7.4).
Différents exemples de comparaison de méthodes entre des analyseurs en fonction des

changements sont développés dans le chapitre 9 du présent document.

Si des différences significatives sont observées, le biologiste médical formalise la conduite à

tenir :
- Rejet de la méthode si elle ne correspond pas au cahier des charges initial,
- Utilisation transitoire et documentée d'un facteur de correction (attention aux
problèmes d'interprétation des résultats de comparaisons inter-laboratoires avec les
EEQ ou les CIQ externalisés),
- Information des cliniciens prescripteurs,
- Adaptation des intervalles de référence (en dernier recours si la méthodologie de calcul
des intervalles est maîtrisée)
Remarques :
- Après établissement du graphique des différences (différences observées en fonction du
niveau de concentration), les valeurs discordantes éventuelles devront être exploitées par le
I
FO
laboratoire afin de mener une analyse des causes et une analyse d’impact sur les divergences
constatées entre les 2 méthodes testées.
- Changement d'analyseur : en cas d'impossibilité d'évaluer le nouvel analyseur en parallèle
du précédent (par exemple manque de place pour positionner les 2 analyseurs dans le
I T
laboratoire), le laboratoire établit dans sa procédure de gestion de portée flexible les
opérations réalisées a minima avant d'effectuer des examens pour les patients.
F A
COMPARAISON DE METHODES :
Applicable ; non applicable (à justifier) U E
Données bibliographiques (fournisseurs,
I Q
publications,…) :
N
Références bibliographiques
Méthode précédente, autre méthode utilisée dans le
laboratoire, appareil en miroir ou back-up, EBMD :
Nombre de mesures :
O
Appareils en miroir : préciser les références des
appareils comparés
R
Préciser le nombre de mesures
Intervalle de comparaison adaptée à l’étendue des
mesures du laboratoire :
C TPréciser les valeurs minimum et maximum de
l’étendue des mesures
Méthode d'exploitation des résultats :
Equation de la droite de régression : L E Droite des moindres rectangles, moindres carrés,

passing et bablok …
Y = ax + b
E
Diagramme des différences et/ou des rapports : Indiquer le nombre de déviants après les avoir
Argumentaire de la conclusion : N vérifiés et documentés
I O
R S
V E
Pour comparer les résultats d'une méthode Y (à tester) avec ceux d'une méthode X (utilisée
dans le laboratoire ou prise comme référence), on analyse au moins 30 échantillons de
patients couvrant de façon homogène l'étendue du domaine physiopathologique rencontré et
LA
répartis si possible selon les recommandations de l'article « Quality specifications and
allowable limits for validation of methods used in clinical biochemistry (p.685-95),1999”.
Ces échantillons, frais de préférence, sont analysés en simple par les 2 méthodes, dans un
délai le plus court possible. Les résultats sont examinés au fur et à mesure, et il est vérifié si
les discordances (écart entre les deux méthodes) sont jugées supérieures aux limites
préétablies calculées comme suit :
𝐿𝑖𝑚𝑖𝑡𝑒𝑠 𝑑𝑒 𝑠𝑢𝑖𝑣𝑖 = ±√(3𝜎𝐹𝐼 𝑡𝑒𝑐ℎ𝑛𝑖𝑞𝑢𝑒 𝑡𝑒𝑠𝑡é𝑒 )² + (3𝜎𝐹𝐼 𝑡𝑒𝑐ℎ𝑛𝑖𝑞𝑢𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑎𝑟𝑎𝑖𝑠𝑜𝑛 )²
Avec σ FI : écart-type de la fidélité intermédiaire (FI) obtenue à partir des CIQ.
Si σ FI technique testée = σ FI technique de comparaison = σ

Alors Limites de suivi = ± 4.24 σ pour chaque niveau de concentration (cf. figure 1)
Pour chacun des couples retenus xi (méthode X) et yi (méthode Y) :

• Calculer les différences xi - yi
• Calculer les rapports yi / xi
Etablir les graphiques des différences, (xi – yi) fonction de xi et (yi / xi) fonction de xi, et reporter
les limites retenues en valeur absolue ou relative sur ces graphiques (cf. figures 1, 2 et 3
suivantes).
I
FO
I T
F A
U E
Figure 1 I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
S
ER
Figure 2
V
LA
n = 98
r = 0,989
y = 1,04 x - 0,03
Figure 3

Noter le nombre d'échantillons discordants identifiés, et rechercher la cause de la discordance

si elle subsiste après contrôle (aspect, fibrine, hémolyse, ...) et faire une analyse d’impact en
fonction de la clinique, l’état de l’art… (Cf. Chapitre 9 du présent document).
Le calcul du coefficient de corrélation ne s'applique qu'à des variables indépendantes pour

démontrer un lien entre deux variables x et y. Ce n'est pas le cas lors d'une comparaison de
techniques. La valeur du coefficient de corrélation n'a donc pas d'intérêt pour la
comparabilité des deux méthodes. Les données pertinentes sont apportées par l'équation
de la droite de régression dont la pente et l'ordonnée à l'origine exprimeront la similitude des
méthodes comparées (similitude optimale avec pente égale à 1 et ordonnée à l'origine égale
à 0). Il est possible de comparer la pente obtenue à 1 et l’ordonnée à l’origine à 0 à l’aide d’un
calcul statistique.
I
FO
8.6.1.7 Etendue de mesure
L’étendue de mesure comprend la limite de détection, la limite de quantification et la limite
supérieure de linéarité.
I T
F A
Limite de détection : Il s'agit du plus petit signal exprimé en quantité ou en concentration qui
peut être distingué avec une probabilité donnée d'un blanc de réaction réalisé dans les mêmes
U E
conditions (en chromatographie, la limite de détection peut être déterminée comme étant égale
au triple de l'écart-type obtenu à partir du signal correspondant à la ligne de base mesuré 10
fois).
I Q
N
L'étude de la limite de détection est basée sur l'analyse statistique de la différence de signaux
observés entre les blancs et les échantillons.
R O
C T
Limite de quantification : La limite de quantification correspond à la plus petite valeur mesurée
exprimée en concentration, fournie avec un niveau de fiabilité acceptable et d'incertitude
connue.
L E
E
La limite de quantification est la plus petite valeur qui peut être fournie pour un échantillon de
patient.
N
Limite de linéarité
I O
R S
Après la dilution d'un échantillon de concentration très élevée, les résultats obtenus
permettront de vérifier l’existence d’une relation linéaire entre les dilutions effectuées et les
utilisées).
V E
concentrations observées (s'assurer de l'adéquation du diluant nécessaire et des pipettes
LA
La limite supérieure de linéarité et la limite de quantification permettent de définir le domaine
de mesure de la méthode.
ETENDUE DE MESURE (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour :
troponine, micro albumine, plaquettes, PSA, TSH, …)
Limite de détection : Etude bibliographique (sources Etude expérimentale (valeurs)
et valeurs)
Limite de quantification : Etude bibliographique (sources Etude expérimentale (valeurs)
et valeurs)
Limite supérieure de linéarité : Etude bibliographique (sources Etude expérimentale (valeurs)
et valeurs)

Limite de détection :
Pour l'estimer, on peut effectuer 30 mesures répétées des blancs (matrice dépourvue de
l’analyte à doser, « calibrateur » zéro, diluant) dans une même série, et on calcule l'écart-type
(sb) exprimé en concentration de ces 30 mesures.
Une autre méthode d’estimation est de calculer le rapport signal/bruit.
La limite de détection peut être calculée selon la formule suivante en absence de bruit de fond
:
𝐿𝑖𝑚𝑖𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑑é𝑡𝑒𝑐𝑡𝑖𝑜𝑛 = 3 × 𝑆𝑏
Pour les méthodes qualitatives, la limite de détection correspond au seuil de positivité.

I
Limite de quantification :
La limite de quantification peut être estimée selon la formule suivante en absence de bruit de FO
fond :
I T
𝐿𝑖𝑚𝑖𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑞𝑢𝑎𝑛𝑡𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑡𝑖𝑜𝑛 = 10 × 𝑆𝑏
F A
E
La limite de quantification peut également être évaluée à l'aide de dilutions d'un étalon ou de
l'échantillon de Contrôle Interne de Qualité le plus bas (différent de 0) avec le diluant, selon le
U
schéma : 100 + 0 ; 90 + 10 ; ….10 + 90 ; 0 + 100 soit 11 échantillons mesurés chacun 10 fois
dans une série unique.
I Q
N
On calcule, pour chaque série de mesures des différentes dilutions, l'écart-type (s), le
O
Coefficient de Variation (CV) et l'écart de la moyenne (m) à la valeur théorique (réalisation d'un
profil de « précision » ou profil de fidélité). A partir de la courbe des CV en fonction des
R
T
concentrations (courbe d'Horwitz), est déterminée la concentration correspondant
généralement à un CV de 10 % et représentant la limite de quantification.
C
L E
8.6.1.8 Interférences et spécificité analytique
E
Une méthode « sélective » ou « spécifique » permet le dosage d’un analyte sans interférence
N
dans une matrice complexe. Des substances dites « interférentes » altèrent le signal de
mesure pouvant entraîner des résultats erronés.
I O
Il peut être nécessaire d’établir un plan d’expérimentation en fonction des interférences les
R S
plus probables. Dans le cas d’une méthode adaptée/développée, une étude expérimentale
pertinente est effectuée afin d’établir l’influence de substances présentes dans la matrice et
V E
potentiellement interférentes.
La surveillance des interférences est à réaliser de façon continue (recherche active).
LA INTERFERENCES (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour : Hémolyse, turbidité,
bilirubine, médicaments, … - à prendre en compte dans les facteurs de variabilité - à évaluer
si nécessaire)
Applicable ; non applicable
Hémolyse Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)
Turbidité Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)
Bilirubine, ictère Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge (module LIH)
Médicaments Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge
… Préciser les données fournisseur ou essai de surcharge

Les recommandations :
La présence dans les liquides biologiques de substances endogènes (bilirubine, hémoglobine,

lipoprotéines, …) ou exogènes (médicaments) peut être à l’origine d’interférences et conduire
à des résultats erronés. L’influence de ces substances est variable en fonction des examens
et des méthodes de mesure. Un protocole d’évaluation de ces influences est proposé par la
SFBC.
Ce protocole consiste à évaluer l’influence de la substance interférente en surchargeant avec
celle-ci un échantillon de concentration connue.
Exemple pratique : le pourcentage de récupération nommé test de surcharge
Le pourcentage de récupération permet d’identifier, pour un échantillon donné ou un type de matrice donné
I
FO
et à un niveau de concentration donné, la présence d’interférence potentielle lors du processus d’analyse.
Le taux de récupération correspond à la différence (en pourcentage) entre la concentration mesurée d’un
échantillon fortifié (Cf) et la concentration initiale mesurée du même échantillon non fortifié (Ci), divisée par
I T
la concentration de la substance ajoutée (Ca). Ce rapport tient compte de la transformation chimique qui
s’est produite, s’il y a lieu. Un minimum de cinq essais est demandé pour l’évaluation d’une méthode
d’analyse.
F A
Méthode de calcul de la récupération :
U E
Dans la zone quantifiable de la méthode, analyser cinq échantillons réels. Ajouter une concentration d’au
moins 50 % et d’au plus 100 % de la concentration réelle de la substance à doser.
I Q
Récupération (%) = (Cf – Ci) / (Ca) * 100
N
Avec un seuil d’acceptabilité fixé à 10%.
R O
C T
Il est envisageable, par exemple pour une validation de dosage des protéines dans un liquide articulaire
par une méthode automatisée non validée par le fournisseur, d'ajouter à un échantillon de liquide articulaire
récupération ou de taux de recouvrement.

L E
de concentration connue, une quantité de sérum de concentration connue et de calculer le taux de
E
Ce test permet en effet de valider l'effet matrice et participe à l'évaluation de la justesse de la
méthode.
N
I O
R S
E
8.6.1.9 Contamination
V
Il existe de nombreuses sources ou possibilités de contaminations, il appartient au laboratoire
LA
de procéder à une analyse des risques détaillée et documentée qui s’appuie sur une bonne
compréhension du système analytique, du processus analytique complet ainsi que les phases
pré et post analytiques. Cette approche peut conditionner le plan d’expérimentation et
l’exploitation statistique des résultats.
Des phénomènes de contamination peuvent être observés lors de l'utilisation de systèmes

analytiques, notamment au niveau des systèmes de pipetage des échantillons (contamination
inter échantillons) et de distribution des réactifs (contamination inter-réactifs).
Contamination inter échantillons :

Une étude de contamination inter-échantillon est à effectuer pour tous les systèmes
automatisés de manière bibliographique ou expérimentale. Elle porte surtout sur les analytes
qui peuvent être affectés par ce phénomène en raison des variations physiologiques
observées en pratique courante (β-HCG, Antigène HBs, …).

L’étude est répétée en cas de doute sur le fonctionnement du système automatisé, et en

particulier du système de lavage et/ou de décontamination.
Compte tenu de l'importance clinique de certains examens, le niveau de la contamination

devrait être proche de zéro ou susciter la définition de règles de revue systématique à chaque
fois qu’un échantillon présente une valeur susceptible de contaminer l’échantillon suivant et
de produire un résultat erroné.
Contamination inter-réactifs :
Le phénomène de contamination inter-réactifs peut se produire sur un analyseur lorsque le
système de distribution est commun à tous les réactifs.
I
FO
CONTAMINATION (étude expérimentale indispensable en portée B)
(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour les paramètres sensibles)
I T
Inter échantillon pour les paramètres sensibles (par
exemple : Ag HBS, βHCG) :
Inter réactif si nécessaire (par exemple : LDH et
l’essai de surcharge
F A
Préciser les données fournisseur ou les résultats de
Préciser les données fournisseur ou les résultats de

ALAT, cholestérol et phosphate, lipase et
triglycérides, …) :
l’essai sur site
U E
I Q
Méthode de calcul et les recommandations :
N
Contamination inter échantillons :
R O
Une étude des contaminations inter-échantillons peut être effectuée de la façon suivante :
C T
Après rinçage de l'appareil, un échantillon à valeur élevée (ou positif fort) est analysé 3 fois
consécutivement (H1, H2, H3, de moyenne mH) suivi d'un échantillon à valeur basse
L E
également analysé 3 fois (B1, B2, B3). Les séquences (H1, H2, H3, B1, B2, B3) peuvent être
répétées plusieurs fois (5 fois) afin d'établir la moyenne des B1 (mB1) et la moyenne des B3
E
(mB3). La différence statistiquement significative entre les 2 moyennes pourra être établie à
N
l'aide d'un test « t » de Student avant de procéder au calcul du pourcentage de contamination
inter échantillons.
I O
R S
Remarque : en technique micro-plaque, assimilable à du quantitatif, il est préférable de
disposer les échantillons positifs et négatifs en fonction de la structure du peigne de lavage.
V E
Le pourcentage de contamination entre les échantillons est calculé selon la formule suivante :
(𝑚𝐵1 − 𝑚𝐵3)
LA
𝐶𝑜𝑛𝑡𝑎𝑚𝑖𝑛𝑎𝑡𝑖𝑜𝑛 (%) = × 100
(𝑚𝐻 − 𝑚𝐵3)
Compte tenu de l'importance clinique de certains examens, le niveau de la contamination

devrait être proche de zéro ou entraîner des règles de « repassage » argumentées.
Remarque : Cette méthode de calcul ne peut pas s'appliquer à des techniques qualitatives.
Dans ce cas, il est possible de vérifier, en alternant des échantillons positifs et négatifs, que
les échantillons négatifs restent négatifs, il en est de même pour les échantillons positifs.
Contamination inter réactifs :

Une étude de contamination inter-réactifs peut être effectuée de la façon suivante en biochimie
(contamination lors de la mesure de l'activité de la LDH par des réactifs ALAT) :
Après rinçage de l'appareil, l'activité de la LDH est mesurée n fois (par ex n=10), en série sur
un échantillon de sérum. La valeur moyenne de la LDH (évaluée en série) est calculée.

Dans une deuxième étape l'activité de la LDH est établie sur le même sérum mais en
alternance (ALAT, LDH, [n fois]). La valeur moyenne de la LDH (évaluée en alternance avec
ALAT) est calculée. La différence statistiquement significative entre les 2 moyennes est établie
à l'aide d'un test « t » (cf. annexe 3), mettant en évidence une contamination inter-réactifs.
Rappel de quelques exemples de contaminations :
- Du système analytique :
o Aiguille commune à plusieurs dosages ;
o Lavages spéciaux (détergents, ultrasons, …) ;
o Ordre de réalisation des tests ;
o Pollution (par exemple : cuvette réactionnelle mal vidée ou mal lavée) ;
I
FO
o Homogénéisation échantillons avec création d’aérosols.
- De la phase pré-analytique :
I T
o Milieu de transport ou de conservation (par exemple effet aérosol lors du débouchage ou
de la centrifugation) ;
o Cheminement pré analytique (paillasses intermédiaires) ; F A
o Centrifugation ;
U E
o Pré-traitements (fluidifiants, liquéfiants, acidifiants) ;
o Projections ;
I
o Contamination cutanée du préleveur ou du prélevé.Q
N
- De la phase post-analytique :
R O
o En cas de rajout d’analyse si le tube est passé sur des systèmes qui potentiellement
T
auraient pu contaminer (aliquotage).
C
- Péri-analytiques :
L E
o Contamination ambiante (CO2) ;
E
o Contamination environnementale (ex : biologie moléculaire / PCR, “marche en avant”) ;
o Par la qualité de l’eau (osmosée, distillée).
N
I O
En pratique :
R S
-
V E
Le choix des paramètres qui font l’objet d’une expérimentation est basé sur une bonne
connaissance du système analytique et des réactifs.
LA
- Les indices statistiques de contamination obtenus sont à interpréter au regard de la
signification clinico-biologique.
- Une alternative peut consister à comparer une “série neutre” et une “série contaminée” avec
la limite de 2,8 x CV reproductibilité.
Par exemple : Dosage d’HCG à 3 UI/L. Répéter ce dosage 10 à 15 fois pour obtenir une moyenne.
Ensuite, on dose un HCG fort en alternance avec cet HCG à 3 UI/L 5 fois de suite. Les 5 faibles qui
suivent les forts seront comparés à la première série d’HCG à 3 dont on a déterminé la moyenne. Ils
doivent être inférieurs à la limite de 2,8 x CV reproductibilité.

8.6.1.10 Robustesse et stabilité des réactifs
Robustesse
La robustesse d’une méthode d’analyse est une mesure de sa capacité à ne pas être affectée
par des variations faibles, mais délibérées, des paramètres de la méthode. La robustesse
fournit une indication sur la fiabilité de la méthode dans les conditions normales d'utilisation.
Ces variations, faibles, correspondent à l’écart d’un paramètre opératoire par rapport à sa
valeur nominale définie dans la méthode. Certains paramètres peuvent avoir une influence
comme par exemple :
- la température d'incubation : vérifier que l'incubateur atteint bien le point de consigne
sans dépassement supérieur lors de la stabilisation,
- les effets de bords sur microplaques : vérifier l’influence éventuelle sur la qualité des
résultats de la position de l'échantillon en différents emplacements de la plaque,
I
FO
- la composition d'une phase mobile en CLHP (pH, teneur en solvant, …).
Stabilité des réactifs

I T
Dans le cas de réactifs fabriqués par le laboratoire, les conditions de stabilité (température,
F A
durée de conservation, …) sont établies. Pour les réactifs correspondants à des DM-DIV, le
laboratoire note les préconisations relatives à la stabilité des réactifs définies par le fournisseur
l’analyseur, …).
U E
(température et durée de conservation avant/après ouverture, conservation embarquée sur
ROBUSTESSE et STABILITE des REACTIFS I Q

N
(étude expérimentale indispensable en portée B)
Applicable
R O
; non applicable
Eléments critiques testés (t°, pH, position sur un
support, …)
C T Préciser les données fournisseur ou essai sur site
L E
Stabilité des réactifs après ouverture, embarqués, … Préciser les données fournisseur ou essai sur site
Les recommandations : E
N
La robustesse :
I O
S
L’évaluation de la robustesse nécessite d’identifier les paramètres (pH, température, …) ayant
un effet significatif sur la performance de la méthode. L’évaluation de la robustesse n’est
R
V E
indispensable que pour les méthodes développées en interne.
L’évaluation de la robustesse peut être une mesure de la reproductibilité des résultats obtenus
LA
dans des conditions opératoires normales, entre laboratoires, entre opérateurs, …, comparée
à la répétabilité de cette même procédure d’analyse appliquée dans des conditions opératoires
de type répétabilité (même opérateur, même série). Plus le rapport entre ces deux expressions
de la fidélité est proche de 1, plus la méthode sera robuste.
Une alternative pour évaluer la robustesse consiste à appliquer le protocole expérimental de

Plackett-Burman. Les laboratoires peuvent se reporter aux références bibliographiques pour
exemples de calcul (Young, Eurachem, Plans d’expérience SFSTP).
La stabilité des réactifs :

Dans le cadre d'une validation de méthode, une évaluation de la stabilité des réactifs est à
réaliser. Elle consiste à évaluer par exemple la stabilité des réactifs « sensibles » ou
« embarqués » à bords des analyseurs.

Dans ce cas, on peut analyser un étalon de niveau de concentration élevée en tant

qu‘échantillon inconnu à intervalle régulier entre J1 et Jn. Le nombre d'analyses entre ces
deux dates est fonction de la durée de conservation attendue pour obtenir un minimum de 10
résultats.
Des limites de stabilité théoriques (Lst (en %), par exemple ±10 %) adaptées à chaque analyte
(en rapport avec limites acceptables pour le CIQ par exemple) sont établies.
Les valeurs correspondant à (+ Lst) en % du taux théorique de l'étalon utilisé sont calculées.
Chaque mesure de l'étalon v devrait être comprise dans l'intervalle [ v – Lst (%) ; v + Lst (%)].
La limite de durée de stabilité est obtenue comme suit :

La limite de durée de stabilité correspond à la dernière valeur de l'étalon comprise dans
I
FO
l'intervalle [v – Lst %; v + Lst %].
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
L E
8.6.1.11 Intervalle de référence et/ou valeurs seuils
E
L’intervalle de référence et les seuils de décision médicale sont définis et documentés par le
laboratoire, en fonction de l’âge, du sexe, ... et devront être adaptées à l’usage des résultats
N
par les cliniciens en pratique courante.
I O
Dans le cas d’un développement de méthode, le laboratoire peut être amené à définir ses
S
propres intervalles de référence ou les seuils de décision médicale correspondants.
R
V E
INTERVALLES de REFERENCE et/ou valeurs seuils en fonction des données
LA
démographiques (étude expérimentale indispensable en portée B)
Valeurs de référence Préciser les données fournisseur ou les résultats des

essais pratiqués
Si la distribution de la population est gaussienne, le calcul peut se faire de la manière suivante :

• après une période d'utilisation permettant d'obtenir un nombre de valeurs significatif (n
> 100),
• à partir de patients exempts de pathologie (si possible),
• en écartant les valeurs aberrantes,
• en écartant toutes les valeurs > m + 2s et < m – 2s,

• en recalculant la moyenne (moyenne tronquée) mt et l'écart-type (écart-type tronqué)

st à partir des valeurs ainsi retenues,
Les valeurs de référence seront données par l'intervalle [ mt – 2st ; mt + 2st ].
Les valeurs de référence (ou intervalle de référence) peuvent également être déterminées par
d'autres méthodes statistiques notamment non paramétriques (CLSI).
8.6.1.12 Déclaration d’aptitude

Une conclusion argumentée, à partir des limites acceptables définies au préalable, doit
finaliser l’acceptation de la méthode (par une personne compétente et habilitée à cet effet, cf.
NF EN ISO 15189 :2012 §5.5.1.3 et NF EN ISO 15189 :2022 §7.3.2 et 7.3.3).
I
DECLARATION d’APTITUDE
FO
Conclusion :
Autorisée par : I T
Signature
FA
U E
I Q
Rappel : La confirmation des performances de la méthode est nécessaire dans la pratique quotidienne.
Pour maîtriser pleinement une méthode, l'utilisation, la gestion et le suivi des contrôles internes de qualité
N
(CIQ) et des évaluations externes de la qualité (EEQ) sont indispensables. Leur exploitation statistique
O
permet de vérifier et de confirmer notamment la fidélité et la justesse de la méthode.
R
C T
8.6.2 Vérification/Validation d’une méthode qualitative
L E
Dans le cadre d’une technique qualitative, la vérification/validation expérimentale est plus
E
réduite, et s'appuie fortement sur des études de risques (méthode des 5M), sur l’habilitation
des opérateurs, ou sur l'étude des performances des Evaluations Externes de la Qualité ou
N
d’un échange inter-laboratoires d’échantillons.
I O
S
Le laboratoire établit les critères de performance de la méthode utilisée. Il les compare aux
limites acceptables dont il dispose (fournisseur, bibliographie, sociétés savantes, …) et conclut
R
quant à l’acceptabilité de sa méthode en fonction de ses besoins vis-à-vis du critère testé.
V E
Toute discordance avec les performances annoncées par le fournisseur ou avec les
performances de la précédente méthode sera investiguée.
LA 8.6.2.1 Variabilité inter-opérateurs

La variabilité inter-opérateurs constitue un indicateur de la maîtrise de la réalisation des
méthodes non automatisées. Un moyen d’assurer cette maîtrise repose sur la vérification de
la compétence des opérateurs (habilitation). Des critères objectifs pourront être établis, par
exemple, par l’intermédiaire d’une analyse de la robustesse.
VARIABILITE INTER-OPERATEURS
Opérateur évalué 1 Essai sur site – résultats de la variabilité
Opérateur évalué 2
…

Les recommandations :
La variabilité inter-opérateurs constitue un indicateur de la maîtrise de la réalisation des

méthodes non automatisées. Le laboratoire peut utiliser la variabilité inter-opérateurs (CV) et
la comparer à la variabilité intra-opérateur d’un référent. Un rapport proche de 1 montre la
concordance obtenue pour n opérateurs (cf. robustesse - §8.6.1.10). La notion de
concordance pour des résultats non chiffrés (exemple : présence/absence) tient compte de la
prise en charge du patient et l’impact clinique.
Une autre possibilité pour quantifier la variabilité inter-opérateurs est l’analyse de variance
appliquée aux résultats obtenus par les n opérateurs (cf. analyse de variance - §11.8).
I
FO
8.6.2.2 Sensibilité, spécificité analytiques, justesse et fidélité
Les concepts de sensibilité et de spécificité sont utilisés pour les tests dichotomiques (oui/non,
I T
positif/négatif, etc.). Les sensibilités/spécificités s’entendent d’un point de vue analytique et ou
F A
diagnostiques. Dans les deux cas, la détermination du seuil est cruciale pour séparer les
populations. Le laboratoire peut se référer aux données bibliographiques ou établir lui-même
les performances pour obtenir le meilleur service médical.
U E
La valeur prédictive positive (VPP) est la probabilité que la maladie soit présente lorsque le
I Q
test est positif. La valeur prédictive négative (VPN) est la probabilité que la maladie ne soit
pas présente lorsque le test est négatif.
N
R O
A partir des VP (vrais positifs), FP (faux positifs), VN (vrais négatifs) et FN (faux négatifs), il
est possible de calculer une approche de la fidélité et de la justesse d’une méthode, lorsque
disponible :
C T
le recrutement est suffisant et qu’une méthode de référence / diagnostic définitif est
L E 𝑉𝑃
E
𝐹𝑖𝑑é𝑙𝑖𝑡é (%) =
𝑉𝑃 + 𝐹𝑃
× 100
N 𝑉𝑃 + 𝑉𝑁
I O𝐽𝑢𝑠𝑡𝑒𝑠𝑠𝑒 (%) =
𝑉𝑃 + 𝑉𝑁 + 𝐹𝑃 + 𝐹𝑁
× 100
R S
Une méthode qualitative est d’autant plus fidèle et juste que les valeurs obtenues seront
E
proches de 100 lorsqu’elles sont exprimées en %.
V
En microbiologie, en particulier pour les tests d’identification ou les tests de sensibilité aux
LA
antimicrobiens, la notion de concordance est préférable aux notions de sensibilité et de
spécificité : concordance au genre et à l’espèce pour les identifications, concordance à la
classe de catégorisation sensible à dose standard (S), sensible à forte exposition (I) et une
catégorie résistante (R).
Remarque : Il est souvent très difficile pour les laboratoires d'obtenir des échantillons positifs (ou négatifs)
en nombre suffisant pour vérifier la spécificité et la sensibilité diagnostique d'une méthode en raison d'un
recrutement parfois insuffisant (techniques de RAI, de groupage, de sérologies, dépistage du paludisme,
des parasitoses digestives, ...). La vérification bibliographique critique prend donc ici toute son importance.

Exemple en pratique :
La surveillance de la dérive d’une méthode de PCR en temps réel peut être réalisée par le suivi du Ct
(nombre de cycles qu’il faut pour atteindre de seuil de détection) d’un contrôle interne à une valeur proche
du seuil.
SENSIBILITE et SPECIFICITE ANALYTIQUE

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A)
Vrais positifs Spécificité, sensibilité, VPN, VPP
Faux positifs
I
FO
Vrais négatifs
Faux négatifs
I T
8.6.2.3 Incertitude de mesure
F
Dans le cas des méthodes qualitatives, Le laboratoire procède à une analyse du processus,
A
prenant en compte l'intégralité du processus analytique. Elle consiste :
U E
afin d'établir les éléments de variabilité du processus. Cette analyse doit être réalisée en
• I Q
à identifier et inventorier tous les facteurs susceptibles d'influencer le résultat, au même
titre que dans le cas des méthodes quantitatives ; N
•
•
R O
justifier l'influence jugée non significative de certains facteurs ;
montrer comment sont maîtrisés les facteurs dont l'influence est significative, de
T
manière à minimiser les risques et les erreurs.
C
L E
A l'issue de cette analyse, une estimation des principales composantes d'incertitude est
conduite ainsi que leur impact sur les résultats. S'il persiste des facteurs d'influence
E
significative ne pouvant être totalement maîtrisés, leur impact sur le résultat doit être évalué
N
et le cas échéant faire l'objet d'une information au prescripteur si elle est importante pour la
validité des résultats.
I O
Remarque :
R S
V E
Pour les analyses dont le résultat repose sur la détermination de données quantitatives, l’incertitude
de mesure peut être estimée (par exemple sur la base d’échantillons négatifs ou positifs autour
d’un seuil).
LA
8.6.2.4 Approche de la limite de détection
Le terme « limite de détection » est utilisé pour décrire la plus petite valeur de mesurande dont
une procédure analytique peut indiquer la présence avec un niveau de confiance spécifié. Elle
est également appelée « concentration détectable minimale ».
LIMITE DE DETECTION (étude expérimentale indispensable en portée B)

Limite de détection : LD trouvée ou référence bibliographique

8.6.2.5 Comparaison de méthodes

Le laboratoire peut comparer les résultats d’une méthode en cours de vérification, soit à la
méthode précédemment utilisée, soit à la méthode automatisée (ex : recherche de sang dans
les selles, cytologie urinaire, ...). Il évalue alors l’impact des discordances éventuelles.
Lors de la mise en place d’une nouvelle méthode, le laboratoire peut échanger des
échantillons positifs/négatifs avec un autre laboratoire pour vérifier la concordance des
résultats obtenus avec la méthode en cours de vérification/validation.
8.6.2.6 Interférences
Le laboratoire effectue a minima une étude bibliographique des interférences potentielles
décrites dans la notice fournisseur. Des essais de surcharge pourront être réalisés.
I
8.6.2.7 Contamination
FO
inter-réactifs (ex : méthodes de biologie moléculaire).
I T
Le laboratoire évalue et maîtrise les potentiels cas de contamination inter-échantillons et/ou
F A
8.6.2.8 Robustesse
Voir tableau de performance en §8.6.1.10. U E
I Q
8.6.2.9 Intervalle de référence et/ou valeurs seuils
N
R O
L’intervalle de référence et les seuils de décision médicale sont définis et documentés par le
laboratoire, en fonction de l’âge, du sexe, ... et devront être adaptés à l’usage des résultats
C T
par les cliniciens en pratique courante. En outre, le laboratoire définit une conduite à tenir en
cas de résultats « douteux » (ni positifs, ni négatifs).
L
Voir tableau de performance en §8.6.1.11. E
E
N
8.6.2.10 Déclaration d’aptitude
I O
Une conclusion argumentée, à partir des limites acceptables définies au préalable, doit
finaliser l’acceptation de la méthode.
précisées. R S
Les conséquences des vérifications / validations sur le service médical rendu peuvent y être
V E
LA
Conclusion :
Autorisée par :
Signature
Rappel : Comme pour les méthodes quantitatives, la confirmation des performances de la méthode est
nécessaire dans la pratique quotidienne. Pour maîtriser pleinement une méthode, l'utilisation, la gestion et
le suivi des contrôles internes de qualité (CIQ) et des évaluations externes de la qualité (EEQ) sont
indispensables. Leur exploitation statistique permet de vérifier et de confirmer notamment la fidélité et la
justesse (ou exactitude) de la méthode.

9 EXEMPLES DE METHODOLOGIE D’ANALYSES DES RISQUES

ET ADAPTATION DU DOSSIER DE VERIFICATION /
VALIDATION DE METHODES
Il est rappelé que cette annexe est constituée d’exemples d’analyses de risques et/ou de dossiers
de vérification / validation de méthodes partiels dont pourront s’inspirer les laboratoires. Dans
tous les cas, il appartient aux laboratoires de démontrer que les dispositions prises
I
FO
permettent de satisfaire pleinement aux exigences d’accréditation pour le service médical
rendu.
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

9.1 Stratégie de vérification / validation de méthode pour la comparaison

d’automates lors de l’intégration, changement et déplacement
d’automates
Ce chapitre identifie les adaptations possibles et pertinentes du processus de vérification /
validation de méthode dans le cas d’intégration, de remplacement ou de déplacement
d’automates.
9.1.1 Précisions
Dans cette hypothèse, le laboratoire dispose de données antérieures. L’analyse des risques
I
peut se baser sur le dossier de vérification / validation de méthodes initial et sur le suivi de la
méthode.
La maitrise de la comparaison entre les résultats obtenus avec l’ancienne méthode et ceux
obtenus avec la nouvelle est l’objectif principal de cette analyse des risques. FO
I T
Que compare-t-on ?
F A
• Comparaison de résultats d’examens rendus par les automates d’un plateau technique
pour lesquels les examens sont réalisés indifféremment sur un groupe d’automates.
U E
• Comparaison de résultats d’examens rendus par des automates entre différents
plateaux techniques indépendants mais pour lesquels un même patient est susceptible
I Q
d’être pris en charge pour un même examen par les différents plateaux techniques du
N
même laboratoire (antériorités et valeurs de références identiques).
• Sur la base d’une analyse des risques basée sur le service médical rendu, la
R O
comparaison des résultats n’est pas toujours nécessaire lorsque les automates sont
différents (marques, gammes, modèles, séries différentes) et utilisent des principes de
C T
méthodes ou des matrices différentes. Les résultats obtenus des différents automates
ne seront pas toujours comparables. Toutefois, le laboratoire doit s’assurer que les
L E
résultats sont concordants (même interprétation clinique) et différencier les résultats
obtenus sur les comptes-rendus (gestion des antériorités, codes analyses, valeurs de
E
référence, information aux prescripteurs, …) ; Les EBMD entrent le plus souvent dans
ce cas de figure.
N
Comment compare-t-on ? I O
R S
Il existe plusieurs stratégies de comparaison :
• Une des stratégies peut être de définir un automate référent qui est choisi dans le
V E
panel des automates disponibles. Le choix de l’automate référent se fait soit de
manière indifférenciée, quand la comparabilité des résultats du groupe d’automates
LA
concernés du laboratoire peut être prouvée, soit selon les critères de choix
argumenté du laboratoire (exemple : l’automate référent pourrait être celui qui
présente le biais de justesse ou d’exactitude le plus faible (Biais, Z-Score ou IET)
par rapport au groupe de pairs). Il est aussi possible de choisir l’automate qui traite
le plus d’examens ou celui qui, en lien avec la stratégie d’EEQ du laboratoire,
bénéficie le plus d’évaluations externes.
• Une autre stratégie pourrait être de les comparer deux à deux (comparaison par
couple de chaque automate selon la norme NF ISO 5725-6).
• Une autre stratégie pourrait être la comparaison par groupe d’automates (nombre
d’automates > 2)
En fonction des stratégies utilisées, il existe plusieurs tests statistiques disponibles (cf.
modalités de comparaison ci-dessous).

9.1.2 Analyse des risques
D’une manière générale, la vérification / validation de méthode et la stratégie de

comparaison devront donner lieu systématiquement à une analyse des risques structurée,
hiérarchisée et suivie qui devrait tenir compte des éléments développés ci-dessous :
Etape 1 : Analyse documentaire : valeurs usuelles, standardisation, etc...

Lors de l’intégration d’un nouvel automate dans le laboratoire ou de nouveaux automates, il
est essentiel que le biologiste intègre dans l’analyse des risques permettant l’élaboration de
son plan d’expérience conduisant à la vérification / validation des méthodes, les données du
fournisseur et notamment les données issues du ou des dossier(s) de qualification réalisé(s)
I
FO
par ce dernier. En effet, le fournisseur doit produire un rapport contenant les résultats des tests
effectués au laboratoire permettant de valider le bon fonctionnement de chaque analyseur
(tests de répétabilité sur les tests les plus sensibles...). La qualification est indispensable avant
I T
que le biologiste ne commence les dossiers de vérification / validation de méthodes, qui sont,
F A
eux de sa responsabilité. Lors d’un déplacement d’automate, il est recommandé que le
laboratoire contacte le fournisseur pour évaluer l’impact du déplacement avec lui.
Etape 2 : Le choix des examens

U E
Analyse des risques : qu’est ce qui a changé ? - Se focaliser sur ce qui est modifié (cf.
Exemples dans le tableau au §9.1.3)
I Q
N
En initial, de manière générale, tous les paramètres sont évalués, sauf cas particuliers
argumentés (par exemple allergie, …).
R O
Dans le cadre d’un déménagement d’automate, Il est possible de choisir tous les paramètres
C T
ou de choisir un ou plusieurs paramètres représentatifs (sentinelles) en particulier.
Dans le cadre d’une comparaison d’automates, si le laboratoire choisit de limiter les
L E
paramètres à explorer il s’assure que les examens choisis sont représentatifs de : l’ensemble
des systèmes de pipetage (mono et multi réactifs), des températures d’incubation utilisées,
E
des systèmes de mesure (par exemple différentes longueurs d’ondes utilisées pour les
N
lectures) et des principes réactionnels. Pour des caractéristiques équivalentes le choix entres
paramètres prendra en compte également la criticité et la fréquence de l’examen.
I O
Dans le suivi au long cours, Il est possible de choisir tous les paramètres ou de choisir un ou
S
plusieurs paramètres représentatifs (sentinelles) en particulier.
R
V
- CIQ
E
Etape 3 : Outils utilisés pour la validation et le suivi
LA
La stratégie est à définir pour le choix des CIQ pour chaque examen.
L’analyse des résultats de CIQ par rapport aux bornes des CIQ (fournisseurs ou tiers) en
s’assurant de détecter des dérives et des décalages.
- EEQ ou méthode alternative

Une analyse des résultats d’EEQ par confrontation aux groupes des pairs est réalisée.
S’il n’y a pas d’EEQ, le laboratoire doit mettre en œuvre d’autres moyens afin de démontrer
sa performance en matière d’exactitude. (Cf. 9.6.1.4 et Article D.6221-20 code de la santé
publique.)
- Moyennes mobiles patients si pertinent et possible (cet outil peut être difficile à utiliser
pour les automates en établissements de soins)

Etape 4 : Critères de performances (exemples dans le tableau au §9.1.3)

Le laboratoire pourra choisir un ou plusieurs critères de performances : performances
analytiques (répétabilité/reproductibilité, nombre de points de CIQ rejetés, efforts de
calibration, robustesse du paramètre (sigma), interférences, contaminations etc.…) selon leur
disponibilité et leur facilité d’obtention notamment si l‘équipement bénéficie d’un logiciel dédié
aux contrôles qualité.
Etape 5 : Modalités de comparaison en initial
- Matériels : CIQ, EEQ, échantillons patients, échantillons surchargés …
- Paramètres : en initial, de manière générale, tous les paramètres sont évalués, sauf
I
FO
cas particuliers argumentés (par exemple allergie, …)
- Le nombre et les niveaux d’échantillons : Une réflexion doit être initiée pour que le
I T
laboratoire s’assure de couvrir la gamme de mesures, lorsque nécessaire, pertinent et
possible. D’autres facteurs sont notamment pris en considération :
F A
• Les linéarités haute et basse qui sont fixées (bridées) par le logiciel de
l’instrument,
• Les volumes d’échantillon disponibles (LCR, pédiatrie),
• La conservation des échantillons (Gaz du sang), U E
I Q
• La variété et le nombre d’échantillons disponibles selon le recrutement et la
patientèle (âge, sexe, pathologie, ...),
N
R O
• Les valeurs des ratio signal /seuil pour les techniques semi quantitatives
avec un cutt-off, type sérologie ou les valeurs proches des seuils de
décision clinique,
C T
• Analyse critique en termes de suivi cinétique pour les examens, type
• Etc...
L E
marqueurs, séroconversion, …
E
- N
Les outils statistiques : la comparaison de méthode ou de système analytique a pour
I O
but de permettre l’interprétation et la prestation de conseil pour le diagnostic, et le suivi
des patients.
R S
En fonction des différentes situations (circonstances, comparaison en initial ou en phase de
V E
suivi), les méthodes statistiques à privilégier sont différentes. Le tableau ci-dessous reprend
quelques exemples non exhaustifs :
LA

Circonstance Eléments à comparer Précaution Tests statistiques

Nouvelle méthode introduite Résultat patients et EEQ passés en Valeur couvrant (si possible) la Diagramme des différences / des rapports / de BLAND
au laboratoire double sur ancienne et nouvelle gamme de mesure ALTMAN
méthode. Régression linéaire (et non corrélation)
Phase de suivi - même CIQ, Distribution normale à vérifier*
I
Comparaison des moyennes / Test t de Student
FO
méthode utilisée sur 2 Comparaison de moyenne par Variances non différentes Après Comparaison des variances / Test f de Snedecor ou
équipements ; Méthode niveaux de contrôles. Fisher-Snedecor ?
récente sur un des Si n trop petit ou normalité non vérifiée tests non
équipements
Echantillons : n < 30
I T
paramétriques : test de Wilcoxon
Phase de suivi et en initial -

même méthode même
équipement selon un facteur
Série appariée de résultat patients :
étude des différences
Valeur couvrant (si possible) la
gamme de mesure ;
Distribution normale F A
Test t des différences
d’influence (Ex Pneumatique) ;

Echantillons : n < 30
Phase de suivi - même CIQ,
des différences à vérifier *
Si n ≥ 30 l’hypothèse de U E
Comparaison des moyennes / test t de Student OU
méthode utilisée sur 2 Comparaison de moyenne par
I Q
normalité n’est plus nécessaire Comparaison de la différence aux limites de suivi norme ISO
équipements ; Méthode
éprouvée (analyse de tendance
niveaux de contrôles ou de patients.
N 5725-6 :1994 : 2.8 écart-type du CV de reproductibilité
consolidé (a minima le CV le plus péjoratif, CV90 ou CV50, CV
à long terme)
Echantillons : n ≥ 30
R O élargi…)
Phase de suivi - même

méthode utilisée sur plus de 2
équipements ;
CIQ,
Comparaison de moyenne par
niveaux de contrôles ou de patients
C T
Si n ≥ 30 l’hypothèse de
normalité n’est plus nécessaire
Analyse des variances par niveau de CIQ
Comparaison au f de la variable de Fischer-Snedecor
Méthode éprouvée (analyse de

E
EL
tendance à long terme)
Echantillons : n ≥ 30
Phase de suivi - même EEQ, résultats patients à contrôler Distribution normale à Comparaison de la différence aux limites de suivi norme ISO
méthode utilisée sur plus de 2 Moyenne de CIQ par niveaux
N vérifier* sauf si n ≥ 30
Le facteur d’étendue est
5725-6 :1994
O
équipements ; Méthode Différence exprimée par n automates : Vmax-Vmin
éprouvée.
S I fonction du
nombre d’analyseur, il doit être
capé pour interprétation
1) à la première étape, on compare la différence obtenue au
2,8 SD du CV de reproductibilité consolidé
2) si première étape n'est pas validée, on utilise le facteur
E R médicalement justifiée. d'élargissement du tableau de la Norme 5725 à la place du

2,8. Par exemple pour 4 systèmes comparés le facteur
V d'élargissement est à 3,6 alors Vmax- Vmin inf ou égale à 3, 6-

x SD (Cf. Tableau 1 – Facteurs d’étendue critique)
LA
3) Troisième étape, si l'étape 2 montre un résultat supérieur au
facteur d'élargissement x SD, rechercher l'impact clinique
(TCL, RCV ETa etc)
*Pour vérifier la distribution normale le laboratoire peut utiliser l’aspect des histogrammes ou des tests tel que le coefficient d’aplatissement ou le coefficient d’asymétrie
facilement accessible sur Excel.

Etape 6 : Modalités de comparaison en continu (confirmation au long cours) et

indicateurs de suivi
- Matériels : CIQ, EEQ, échantillons patients, échantillons surchargés
- Paramètres : en fonction de l’analyse des risques, dans le suivi au long court, Il est
possible de choisir tous les paramètres ou de choisir un ou plusieurs paramètres
représentatifs (sentinelles) en particulier : criticité clinique, robustesse des méthodes,
représentativités des techniques analytiques (cf. Tableaux d’exemples ci-dessous)
- Outils statistiques : (cf. tableau ci-dessus de l’étape 5). La mise en œuvre d’un suivi
continu de la comparabilité pourra être réalisé de différentes manières ou de plusieurs
I
FO
manières complémentaires :
• Comparaison de point à point par couple de systèmes (Norme 5725-6 §4.1.2)
• Comparaison de n systèmes (5725-6 §5.2)
• Comparaison de 2 moyennes de CIQ I T
• Comparaison du nombre de points de CIQ “rejetés” ou repassés
F
• Comparaison des résultats de justesse (CIQ) et d’exactitude (EEQ)
A
• Comparaison de résultats de patients
U E
Le choix d’une méthode ou de la combinaison de plusieurs méthodes dépend des moyens
I Q
dont dispose le laboratoire et de la puissance statistique de chaque méthode.
N
R O
En cas de différence analytique significative, l’absence de différence cliniquement significative
doit être mise en évidence à l’aide d’un critère sélectionné, par exemple, conformément à la
1- Approche clinique
C T
hiérarchie de la conférence de consensus de Milan (2014) :
L E
2- Approche variation biologique (RICOS, EFLM biological variation database)
3- Approche état de l'art qui répertorie les performances actuelles des automates.
- Autres indicateurs de suivi E

N
• les analyses rétrospectives de la fréquence des études d’impact avec impacts
I O
cliniques significatifs,
R S
• la détection des tendances,
• le monitoring des performances en lien avec l’évolution des besoins des
V E
usagers…
La comparabilité en continu s’inscrit également dans le cadre du suivi des indicateurs. La
LA
fréquence du suivi des comparabilités repose sur une argumentation documentée. Sa mise en
œuvre régulière est en adéquation avec la pertinence clinique et avec le risque sur les résultats
pour le patient.
Une dérive peut amener à remettre en cause l’analyse des risques et à prendre les mesures
efficaces pouvant conduire à la révision du DVM.

Tableau 1 extrait du §5.2.2.1 de la norme NF ISO 5725-6:1994
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
Note 1 : Les critères de comparaisons analytiques basés sur l’utilisation de l’écart type ou le CV
L E
nécessitent une attention particulière car plus l’écart type choisi est faible plus l’hypothèse
d’absence de différence significative est difficile à obtenir. L’utilisation d’un critère trop restrictif
E
ou peu adapté pourrait conduire à un nombre important de “fausses” alertes sans pertinence
significative.
N
On peut par exemple utiliser un CV long terme ou un CV 90 (CV au 90ième percentile d’un groupe
de pairs).
I O
R S
V E
Note 2 : Moyens pour détecter et suivre les performances analytiques : Comparaison des
performances analytiques des analytes (par exemples : CV, biais, Eta Erreur Totale admissible,
Sigma, incertitude, fréquence de calibration.)
LA

Les objectifs de performance retenus par le laboratoire devraient être cohérents par rapport aux
besoins du clinicien afin de garantir une prise en charge adaptée du patient dans le contexte.
Des approches basées sur l’erreur Totale admissible, le RCV (référence change value), le TCL
(Total change Limit) ou d’autres peuvent être choisies en fonction des cas de figure et de leur
pertinence.
Note 3 : Exemple simple de suivi de la comparabilité de plusieurs automates.

Cette méthode simple est basée sur les CIQ en mettant en place (carte de contrôle ou logiciel)
des limites acceptables communes aux différents analyseurs qui réalisent l’examen.
Etape 1 :
I
-
FO
Détermination des limites acceptables : la différence entre les valeurs des points de
CQI de deux systèmes pour un examen ne doit pas dépasser 2,8 SD obtenus à l’aide
d’un CV consolidé.
I T
-
F A
La valeur maximale – la valeur minimale est inférieure à 2,8 x SD (NF ISO 5725-6:1994)
(cette valeur ne pourra en aucun cas dépasser les limites de concordance clinique telle
que l’Erreur totale admissible, TCL, RCV etc…).
-
U E
Mise en place sur la carte de contrôle ou au niveau du logiciel de suivi des CQ de la
moyenne et des limites basses et hautes des CQI.
-
I Q
Point de vigilance : Naturellement l’écart type choisi doit être adapté au suivi des
N
performances analytiques sans mettre en péril la capacité de détection de tendance.
l’objectif commun.
R O
Par exemple si les points de CQ évoluent constamment au-delà de 1 écart type de
Sécurité : Lorsqu’une confrontation aux groupes des pairs est disponible, il est
-
C T
recommandé de confirmer ces valeurs avec celles du groupe des pairs (moyenne
sensiblement identiques, Ratio des CV inf à 1,5 par exemple et z-score)
L E
E
Si le suivi de la comparabilité se fait sur plus de 2 systèmes réalisant un même examen, un
facteur d’élargissement pourra être utilisé en seconde intention (NF ISO 5725-6:1994 CH
5.2.2.1 tableau 1)
N
Extrait :
Pour 3 systèmes : 3,3 I O
R S
Au niveau des valeurs de CQI, la différence Vmax – Vmin est donc significative si elle dépasse
3,3 X écart-type du CV de fidélité intermédiaire réel.
V E
Pour 4 systèmes 3,6
Pour 5 systèmes 3,9
LA
Pour 6 systèmes 4,0 et pour 7 systèmes 4,2 etc.
La même vigilance est à apporter au calcul de cette valeur limite, en veillant à ce que cet objectif
soit inférieur à l’indicateur d’impact clinique potentiel. Par exemple en se limitant aux bornes du
fournisseur du CQI.
Etape 2 :
o La fréquence de suivi de la comparabilité des résultats patients réalisés sur
plusieurs systèmes analytiques est conditionnée par la criticité biologique du
paramètre, de sa « capabilité » ou robustesse et les contextes particuliers.

o Le suivi peut ensuite se faire directement sur le Levey-Jennings :

L’ensemble des points de CQI évoluent à l’intérieur de ces limites et aucune
moyenne n’évolue au-delà de 1 écart-type.
Exemple conforme :
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
Etape 3 : Utilisation de la stratégie du consensus de Milan en cas de dépassement pour la
recherche de l’étude d’impact clinique appliquée aux dossiers patients concernés.
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

9.1.3 Stratégies de comparaison lors de l’intégration/changement de nouveaux automates et de déplacement avec démontage
ou impact technique
I
FO
Déplacement avec démontage ou impact
Intégration/changement de nouveaux technique prévisible (*)
Déplacement sans impact technique (*)
automates (*)
Exemple : ajout d’un nouvel automate au sein

Exemples : déplacement d’automate
nécessitant un démontage ou déplacement I T
Exemples : déplacement d’automates pour
d’un parc d’automates pré-existant considéré comme critique à confirmer avec le
fournisseur
F A
EBMD ou déplacement sur roulettes
Etape 1
E
Analyse des données bibliographiques et données fournisseurs, notamment les différents systèmes de pipetage, de mesure, les différents
types de techniques mise en œuvre, la criticité médicale des paramètres et les performances …
U
Analyse documentaire
moléculaire)
I Q
Comprendre l’approche des fournisseurs pour la détermination des cut off pour les techniques avec ou sans zone grise (sérologie, biologie
Gestion du changement à réaliser dans tous les cas N

En validation initiale : tous les paramètres
R O
Tous les paramètres font l’objet d’une analyse
des risques, sur tous les paramètres ou sur
Du fait des connaissances antérieures acquises
quant aux performances du (des) automate(s),
En validation au long cours : sur tous les
paramètres ou sur un échantillonnage
C T
un échantillonnage représentatif établi par
l’analyse des risques
les essais peuvent être réalisés sur un
échantillon représentatif de paramètres établi
sur la base d’une analyse des risques (exemple
Etape 2
représentatif établi par une analyse des risques
E un paramètre par module et par méthode,
EL
Choix des examens paramètres les plus critiques, …).
En validation au long cours : sur tous les

N paramètres ou sur un échantillonnage
I O représentatif établi par une analyse des risques
Etape 3
R S
Cf. les étapes 3 et 5 de l’analyse des risques ci-dessus.
Outils utilisés
V E
LA

Avant mise en production : Avant mise en production : Avant mise en production :

- Répétabilité (n=10 à 30 sur 2-3 niveaux - Répétabilité (n=10 à 30 sur 2-3 niveaux - Répétabilité par le fournisseur ou le
disponibles, le nombre de répétition à réaliser disponibles, le nombre de répétition à réaliser laboratoire (n=10 à 30 sur 2-3 niveaux
sera fonction de l’activité du laboratoire) sauf sera fonction de l’activité du laboratoire) disponibles, le nombre de répétition à réaliser
pour les paramètres dont les données de - Reproductibilité : n=15 au minimum, 2 à 3
I
sera fonction de l’activité du laboratoire).
FO
répétabilité ont été recueillies dans le dossier niveaux selon analyse des risques (volume,
de qualification par le fournisseur si disponibles coût, conditionnement du réactif, délai …) Le laboratoire devrait demander au fournisseur
- Reproductibilité : n=15 au minimum, 2 à 3 - Autres critères de performance connus et les tests de qualification.
Etape 4
niveaux selon analyse des risques (volume,
coût, conditionnement du réactif …)
définis avant déplacement ne seront pas à
refaire avant mise en production
I T
Critères de
performances
- Incertitude de mesure : méthode CQI/EEQ ou
CQI /étalon lorsque ces données sont
disponibles (alternative de première intention), F A
ou à défaut une estimation de l’intervalle de
confiance (2 x ET de reproductibilité)
- Si pertinent : contamination, limites de U E
détection, de quantification et limite supérieure
de linéarité, interférences, … : selon analyse I Q
des risques
N
*Comparaison sur la base d’échantillons
R O
Comparaison de méthode : nombre Comparaison de méthode si nécessaire selon
Etape 5
patients / CIQ / EEQ / autres (n =30 dans la
mesure du possible, sinon argumenter le
C T
représentatif d’échantillons couvrant la
gamme de mesures, résultats avant
l’analyse des risques : nombre représentatif
d’échantillons couvrant la gamme de mesures,
Modalités de nombre de comparaisons réalisées) avec
E
déménagement/après déménagement sur
la base d’échantillons patients / CIQ / EEQ
résultats avant déménagement/après
déménagement sur la base d’échantillons
EL
comparaison en initial résultats de l'automate référent ou autre
stratégie de comparaison (voir chapitre patients / CIQ / EEQ
spécifique : étape 5 de l’analyse des risques)
N
Comparaison des performances analytiques à long terme comme :
Etape 6
Comparaison en
Justesse O
Paramètres statistiques de suivi des EEQ (Inexactitude)
I
continue
Et Suivi de
Calcul des incertitudes de mesure
Comparaison des CV
R S
Comparaison des “moyennes patients mobiles”, si pertinent
performances
E
Comparaison du nombre de calibrations, du nombre de points de CQ rejetés (DPMO) ...
V
(Cf chapitre étape 6 analyse des risques)
LA
(*) Dans l’urgence, lors d’un échange standard d’automate (remplacement par un automate identique en tout point) ou lors d’un déplacement d’automate, les étapes 2 et 4
peuvent être décalées dans le temps, en choisissant selon une analyse des risques pertinente (basée sur l’expérience) les paramètres et critères de performances à valider en
premier intention : choix des paramètres sentinelle et sensibles, critères de performances les plus critiques (répétabilité et comparaison sur des paramètres les plus sensibles
et/ou les plus critiques...)

9.2 Cas d’une vérification/validation d’une méthode intégrant une matrice

rare
9.2.1 Principe
Le principe est de commencer par une analyse de l’impact de cette matrice « rare » par rapport
à la matrice qui a fait l’objet de la vérification initiale.
Si les caractéristiques physico-chimiques ou autres (viscosité, pH...) de cette matrice
n’influencent pas directement le principe de méthode et que la gamme de mesure est
comparable, il n’est pas utile de refaire de manière exhaustive le dossier expérimental.
Le laboratoire est alors amené à réaliser les vérifications adaptées pour compléter la
I
vérification initiale. Par exemple, le laboratoire effectue un test de répétabilité et compare la
performance de cette répétabilité aux résultats obtenus au moment de la vérification initiale.
En l’absence de différence significative, les liquides sont considérés comme comparables.
FO
Dans le cas des matrices dont la rareté ne permet pas d’effectuer la totalité des vérifications,
I T
le laboratoire peut choisir de compléter son dossier de vérification au fur et à mesure du
déroulement de son activité.
Il s’agit par exemple : F A

particulièrement chyleux ou hémolysés,
U E
- d’une étude des interférences qui est réalisée à l’occasion de certains prélèvements
spécimens aux concentrations particulièrement élevées. I Q

- d’une étude de la contamination qui est réalisée à l’occasion de l’obtention de certains
N
R O
Sans changement du principe de méthode (points de calibration, prise d ‘essai, ...) le
laboratoire revendique une portée identique à celle de la vérification / validation initiale.
C T
Si le laboratoire est amené à faire une préparation du prélèvement pour que les
caractéristiques de la matrice soient équivalentes à celles de la matrice validée
L E
précédemment, le laboratoire réalise les vérifications appropriées de sa méthode de
préparation. C’est le cas par exemple d’une dilution de liquide de ponction, d’une extraction
E
d’acide nucléique ou d’une fluidification d’expectoration.
N
Une vérification préalable du prétraitement devrait être réalisée, par exemple en utilisant des
échantillons de concentration connus enrichis avec l’additif, ainsi qu’une surveillance
I O
particulière continu de manière à objectiver l’absence d’influence du pré-traitement sur l’étape
de mesure.
R S
Comme ces préparations ne constituent pas à elles seules une méthode, qu’elles ne sont pas
V E
spécifiques d’une famille et qu’elles ne fournissent pas de résultats, elles n’impliquent pas
systématiquement le passage d’une portée flexible standard (portée A) en portée flexible
étendue (portée B).
LA
Toutefois, le laboratoire met en place les dispositions adaptées pour que la possibilité de
préparer ces spécimens soit intégrée dans le cadre de la gestion de la portée, par exemple
dans la procédure de validation/vérification des méthodes.
9.2.2 Exemples de matrices rares

1) Examen quantitatif : dosage des protéines dans le liquide ascite
2) Examen qualitatif : estimation des cellules et recherche et identification des cristaux
dans le liquide articulaire.
• Liquide céphalo-rachidien :
Même viscosité que les urines, concentrations attendues du même ordre de grandeur que
dans les urines. Des CIQ sont disponibles.

• Liquide amniotique :
Il a même viscosité que les urines, les concentrations attendues sont fonction des paramètres
à doser. La stratégie de CIQ est à argumenter en fonction des concentrations attendues des
mesurandes.
• Liquides de dialyses :
Si les caractéristiques physico-chimiques des liquides de dialyse se rapprochent de l’urine, les
valeurs recherchées sont proches de celles du sang. Par conséquent, il est légitime de
comparer les critères de performance (CV) obtenus sur liquides de dialyse avec ceux obtenus
dans le sang.
I
FO
• Liquide d’ascite, pleural ou péricardique :
Ces liquides ont les mêmes caractéristiques que le sang.
I T
• Liquides articulaires :
F A
Compte tenu de la viscosité importante de ce liquide par rapport au sérum, l’impact sur le
U E
pipetage devrait être maitrisé. La répétabilité permet d’estimer l’impact de la viscosité.
Les concentrations (glucose, protéines, acide urique) sont du même ordre de grandeur que
celles mesurées dans une matrice sanguine.
I Q
• N
Liquide péritonéal :
R O
La viscosité se rapproche de celle des urines. Le laboratoire vérifie si les concentrations
de dialyse ou d’ascite). C T
mesurées sont de l’ordre de celles mesurées dans le sang (ce qui n’est pas le cas d’un liquide
L E
L’absence d’impact de la viscosité est vérifiée à l’aide d’une répétabilité dès lors que les
critères de vérification de méthode sont proches de celles constatées dans le sérum.
•
E
Liquide de kyste :
N
I O
La viscosité semble un élément qui impacte significativement la prise d’essai. Les
R S
concentrations (amylase par exemple) sont parfois en dehors des limites de linéarité. La
vérification devrait être particulièrement soignée au regard de ces risques.
9.2.3 V
E
Exemples de moyens pour vérifier/valider une méthode intégrant une
L
•
A matrice rare
3 moyens non spécifiques :
Rappel : dans le cas où une étape de préparation de l’échantillon est nécessaire, la vérification
couvre l’étape de préparation de l’échantillon.
o « Approche par dilution » : afin de vérifier l’absence d’effet matrice (par
exemple pour valider des matrices riches en inhibiteurs, sur une matrice rare
contenant naturellement l’analyte à mesurer) - Procéder par dilutions
successives d’un échantillon avec une autre matrice, typiquement celle pour
laquelle la méthode est déjà validée et dont l’effet matrice est absent. L’objectif
étant de faire progressivement tendre la composition de la nouvelle matrice
vers celle de la matrice documentée. Après dosage des échantillons dilués, en
tenant compte du facteur de dilution et après vérification de l’effet de la dilution

(par exemple dilution au ½ = résultat au ½), en traçant la fonction reliant la

concentration mesurée à la concentration théorique doit être une droite de
pente 1 (0,8 à 1,2). Cette approche est toutefois limitée par la sensibilité de la
méthode à valider et est conditionnée par une différence de concentration de
l’analyte entre l’échantillon de la matrice à valider et l’échantillon servant de
diluant.
o « Méthode des ajouts » : Procéder par ajout successifs, sur une matrice
vierge de l’analyte à mesurer d’étalon de concentration connue et vérifier que
l’on retrouve la concentration attendue avec une différence acceptable (biais
défini avec matrice de référence).
I
FO
o « Méthode par étalon interne » (utilisable notamment en chromatographie
couplée à la spectrométrie de masse où l’étalon interne est un analogue
deutéré au comportement chromatographique identique à l’analyte) » :
I T
Procéder par ajout successifs, dans la matrice à étudier, de concentration
F A
connue d’étalon interne et vérifier que l’on retrouve la concentration attendue
avec un différence acceptable par rapport à la matrice de référence. La limite
conventionnelle de recouvrement est de +/- 20%.
U E
• Techniques de pharmacologie et de toxicologie :
I Q
N
R O
En dehors des méthodes citées plus haut, d’autres méthodes peuvent être utilisées
durant la phase de développement de la méthode de dosage :
o C T
Méthode par infusion post colonne (chromatographie liquide couplée à la
L E
spectrométrie de masse) : Cette approche consiste à infuser en continu
l’analyte en parallèle de l’analyse chromatographique d’une matrice vierge
E
extraite. Cette méthode permet de visualiser sur le chromatogramme une
N
baisse ou une augmentation de la « ligne de base » qui indique une
I O
suppression ou une augmentation de l'ionisation de l'analyse en raison de la
présence d’interférents co-élués. L’objectif est de vérifier que les modifications
R S
de la ligne de base ne se trouvent pas à proximité du temps de rétention de la
molécule à doser. Cette méthode permet en outre d’apporter les modifications
V E appropriées à la méthode chromatographique pour limiter l’influence de l’effet

matrice.
LA o Méthode par dopage post extraction : Méthode consistant à comparer la

mesure des concentrations d’un échantillon de la matrice vierge à étudier dopée
après la phase d’extraction avec une référence (un solvant de comportement
neutre également dopé).
o Un exemple plus détaillé sur le calcul des rendements d’extraction, effets

matrices et performances du processus d’extraction est développé ci-
après au §9.2.5

9.2.4 Extrait d’un DVM
Extrait de description de la méthode
Analyte/Mesurande : Chimie : AMYLAS AU CT GLU LDH PT TG Urée

FR
Marqueurs tumoraux : ACE AFP CA125 CA
153 CA199 PSA
Principe de la Méthode : Technique sur automate R
Type d’échantillon primaire : Liquide articulaire + pleural + ascite
I
FO
Type de récipient, additifs : Aucun additif
Prétraitement de l’échantillon : Traitement en cas de liquide visqueux :
Hyaluronidase poudre :
- Référence H3884 fournisseur
- A conserver à -20°C I T
Prétraitement pour la viscosité : F A
hémolyse
- Mettre une « pointe » de poudre U E
- Recueillir le liquide dans un tube à
I Q
- Laisser agir pendant 30 minutes sous
agitation
N
- Centrifuger 10 min à 2000 tours/min
Unités :
Critères d’interprétation :
R O
Identique à celles du sang
Données bibliographiques
C T
(notamment d’après Grancher et al. Editions
BioMérieux 2006)
Marquage CE (Oui/Non)
Codage C.N.Q. (s’il existe) :
L
/ E
Oui

Référence du réactif : E Analyseur 1, Analyseur 2 et Analyseur 3
Idem sang
Matériau d’étalonnage (références) :
N Idem sang
valeurs : I O
Type d’étalonnage, nombre de niveaux et (portée
Vérification A) /
Idem sang
Validation (portée B) d'une
Réf : FORM_MAT_006 02/N
R S méthode de biologie médicale
V E
Explication du lien EVALUATION
de la matriceDES PERFORMANCES
rare avec la matriceDEhabituelle
LA METHODE
LA Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) :

LIQUIDES DE PONCTION
La matrice des LIQUIDES (articulaire, ascite et pleural) n'est pas reconnue par le fournisseur ROCHE ; la
validation de méthode reste néanmoins en portée A (comme le SANG) car le laboratoire s'est assuré de la
même couleur, même viscosité et même pH que le sang :
- pour la couleur : pas ou peu de différence avec le sang
- pour la viscosité : un pré-traitement pour les liquides visqueux est réalisé à l'aide de HYALURONIDASE
(cf chapitre "DESCRIPTION DE LA METHODE")
- pour le pH : il est sensiblement le même que le sang (1 à 2 de différence maximum) et le pré-traitement
par la HYALURONIDASE n'influence pas ou peu le pH
REPETABILITE COBAS Cc 8000

REPETABILITE BIOCHIMIE
(CV calculé par tableur )
Ac Urique Amylase Cholesterol
Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide
Articul. Ascite Pleural Articul. Ascite Pleural Articul. Ascite Pleural
SH GTA 04 - Révision 02Ac urique Ac urique Ac urique Amylase Amylase 61/168
Amylase Cholesterol Cholesterol Cholesterol
n 15 15 15 15 15 15 15 15 15
n-1 14 14 14 14 14 14 14 14 14
Moyenne 68,09 28,81 36,19 16,07 17,00 40,00 1,14 1,05 1,15
Extrait d’un exemple de répétabilité pour des paramètres de biochimie
Glucose LDH Protéines

Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide Liquide
Articul. Ascite Pleural Articul. Ascite Pleural Articul. Ascite Pleural
Glucose Glucose Glucose LDH LDH LDH Protéine Protéine Protéine
N 15 15 15 15 15 15 15 15 15
Moyenne 1,78 1,22 0,82 294,27 4069,73 786,73 43,56 50,59 42,41
CV calculé 0,6 0,7 0,7 0,5 2,3 0,4 0,5 0,5 0,6
Critère 4,1 4,1 4,1 4,9 4,9 4,9 2,3 2,3 2,3
EFLM
Acceptation OK OK OK OK OK OK OK OK OK
La répétabilité des paramètres biochimiques et marqueurs tumoraux dans les liquides I

FO
(articulaire, ascite et pleural) est inférieure aux données de la EFLM pour le sang.
Extrait d’un exemple d’effet matrice (méthode de dilution pour les protides)
I T
PROT [g/l]
CVrepro
automate
Cw EFLM
F
Différence significative A
Sang 1
Pour
1,65
Liq.
2,8
Sang 2
Pour Liq. AScite
9
U E Sang 3
Pour Liq. Pleural
Dosage Pur
mélange
Articulaire
46,1
mélange
I
50,2Q mélange
42,4
Mélange
61,2 N
62,3 57,8
Sang + Liq
% effet
74,5
1%
Pas d’effet
74,7
R O 0%
Pas d’effet
72,4
1%
Pas d’effet
Conclusion
matrice
C T matrice matrice
L E
Les performances des dosages de protides dans le liquide articulaire, le liquide d’ascite et le
E
liquide pleural sont comparables à celles du sang. Aucun effet de matrice n’est retrouvé pour
les protides dans ces matrices.
N
I O
Exemple d’incertitudes de mesure
R S
Dans le cas du dosage des protides, les performances d'incertitude de mesure sont assimilées
V E
à celles du sang car les domaines de mesure sont équivalents (cf. rapport de chaque
paramètre dans le sang).
A Guide pour le calcul des rendements d’extraction, effets matrices et

L9.2.5 performances du processus d’extraction.
3 préparations différentes sont à réaliser (le volume final doit être identique)
A : Dopage des molécules d’intérêt et des étalons internes dans la phase mobile (si possible).
B : Extraction de la matrice puis dopage des molécules d’intérêt et des étalons internes.
C : Dopage des molécules d’intérêt et des étalons internes dans la matrice puis extraction.
Pour l’estimation finale, chaque série est réalisée au moins 5 fois, plusieurs quantités sont
habituellement testés (idéalement faibles, moyennes et fortes). Les séries sont à reproduire
en condition de répétabilité ou de fidélité intermédiaire en fonction de la robustesse a priori de
la méthode.

Le rapport SB/SA = effet matrice

Le rapport Sc/SB = rendement d’extraction
Le rapport SC/Sa = performance du processus (parfois estimé à l’aide des deux précédents
calculs)
Les signaux S à utiliser sont souvent les aires chromatographiques des molécules d’intérêts
Am pour des rapports non normalisés ou les réponses instrumentales (Am/AEI) pour calculer les
rapports normalisés.
Si l’étalon interne est un analogue isotopique, il est inutile de calculer ses rapports propres.
S’il ne s’agit pas d’un analogue isotopique, il peut être utile de les étudier pour choisir le
meilleur candidat étalon interne.
I
FO
9.3 Cas d’une modification de méthode (non liée à l’étape de mesure ou
relative au matériel) pouvant impacter l’étape de mesure.
T
Dans le cadre des modifications non liées à l’étape de mesure et celles relatives au matériel
I
A
annexe (cf. SH REF 08), des réflexions sont à mener pour déterminer si la modification impacte
ou pas la phase analytique et donc la nature de la portée flexible (A ou B) qui s’applique.
F
Dans un premier temps, le laboratoire établit une analyse des risques liée à cette modification.
maitriser ce changement.
U E
Cette analyse aboutit à la détermination des moyens appropriés à mettre en place afin de
et/ou une approche bibliographique. I Q

Dans un second temps, il met en œuvre les moyens appropriés qui reposent sur des essais
N
Si, à l’issue de la mise en place de ces moyens, le laboratoire met en évidence un impact sur
R O
l’étape de mesure, la modification est alors considérée comme une adaptation de la méthode
et le laboratoire se doit de revendiquer une portée B (cf. logigramme ci-dessous).
C T
L E
Hypothèse :
La méthode employée est une
E méthode reconnue
N
I O
R S Mesure des performances avec la(les)
modification(s)
V E
LA Performances conformes aux
spécifications connues
Performances non conformes aux
spécifications connues
Confirmation de l’hypothèse : Infirmation de l’hypothèse :

La matrice n’influence pas la méthode La méthode est impactée par la
matrice
Portée A Portée B

9.3.1 Exemple d’une analyse des risques pour un automate sans réactif dédié
Rappel : selon le règlement européen 2017/746 relatif aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro, le laboratoire
doit justifier de la mise en service d'un dispositif modifié. Il doit justifier dans sa documentation que les besoins
spécifiques du groupe cible de patients ne peuvent pas être satisfaits ou ne peuvent pas être satisfaits ou ne peuvent
l’être au niveau de performances approprié par un dispositif équivalent disponible sur le marché.
La première étape consiste à déterminer les moyens à mettre en œuvre pour maîtriser le
changement de réactif.
Examen :
Dosage du Méthotrexate I
Description de l'adaptation ou du développement entrepris : FO
Description du
I
Méthode utilisant un couple automate / réactif de deux fournisseurs différents.
T
contexte de
l'exemple
choisi
Justification de l'adaptation ou du développement entrepris :
F A
Le fournisseur n’ayant pas commercialisé de réactif, il préconise l’utilisation de réactifs adaptés
E
pour fonctionner sur l’automate. Le réactif est marqué CE et l’automate également. La méthode
de lecture des densités optiques réactionnelles est simplement automatisée sur l’automate. Le
U
réactif ne subit aucune transformation et conserve donc toutes ses caractéristiques.
I Q
L’utilisation à bord de l’automate est paramétrée en fonction des données de la fiche technique
N
du fournisseur de réactif, (conservation, stabilité, ration réactif / échantillon, etc.)
R O
Analyse des risques liée à ce réactif
C T
L E PERSONNEL
Risques potentiels
E Applicable à l'exemple (Oui/Non),
si oui, merci de préciser les raisons
Impact
Min / Maj
N
Dans le cadre du changement proposé dans cet exemple, le risque que
I O
le personnel qui élabore et conduit le plan de validation ne dispose pas
d'une compétence spécifique et ne soit pas en nombre suffisant est-il non
avéré ?
S
R
le personnel qui met en œuvre les tests de validation ne dispose pas
avéré ?
V E
d'une compétence spécifique et ne soit pas en nombre suffisant est-il

non
LA
le personnel qui approuve les performances de la méthode ne dispose
pas d'une compétence spécifique et ne soit pas en nombre suffisant non
est-il avéré ?
le personnel qui met en œuvre la méthode ne dispose pas d'une
compétence spécifique et ne soit pas en nombre suffisant est-il avéré non
?
PRINCIPE DE MESURE
Applicable à l'exemple (Oui/Non), Impact
Risques potentiels si oui, merci de préciser les raisons Min / Maj
Oui
Tests de précision, de justesse et de
Dans le cadre du changement proposé dans cet exemple, le risque que corrélation avec la méthode de
les performances analytiques et cliniques du principe de mesure soient référence à vérifier in situ – si Majeur
impactées est-il avéré ? performances = celles fournisseur,
portée A, sinon, portée B (Cf.
logogramme plus haut)

MATERIEL ET OUTILS
(= risques liés aux moyens-ressources matérielles)
Applicable à l'exemple (Oui/Non),
Risques potentiels si oui, merci de préciser les raisons
Min / Maj

le laboratoire ne dispose pas des ressources matérielles suffisantes
non
pour mener à bien son adaptation ou son développement est-il avéré ?
(Ex: accès à la bibliographie, traitement statistique des informations, etc...)
MATIERE (REACTIFS / ECHANTILLONS)

Min / Maj
les performances des réactifs soient impactées est-il avéré ? non
(Ex : pas d'appui sur fiches techniques, tests incomplets...)
I
FO
l’emballage du réactif soit incompatible avec le système analytique est- non
il avéré ?
la matrice de l'échantillon diminue les performances de la méthode est- I T
il avéré ?
(Ex : caractéristiques chimiques, physiques interagissant avec le principe de
mesure...)
non
F A
MILIEU / ENVIRONNEMENT
U E
IQ
Min / Maj
Dans le cadre de votre exemple y-a-t-il un risque que l'environnement
ne soit pas approprié à l'adaptation ou au développement de la
N
Oui
En cas de requalification post-
méthode
(Exemple : Locaux inadaptés, moyens logistiques liés au management du projet
insuffisants, modalités de conservation, préparation des réactifs et/ou
R O intervention de l’automate, il faudra
vérifier le maintien de l’adéquation des
Majeur
échantillons inadéquates, environnement du traitement des données

inapproprié, etc ...)
C T performances
l’automate.
du réactif avec
9.3.2 Extrait de DVM pour unL

E
automate sans réactif dédié
E
N
9.3.2.1 Vérifications à effectuer
I O
Les vérifications ont été déterminées au regard de l’analyse des risques réalisée
S
préalablement en tenant compte en particulier des risques majeurs identifiés.
R
V E EXAMEN DE BIOLOGIE MEDICALE
LA
Identification du paramètre (comme identifié dans la liste détaillée des examens) :
Dosage du Méthotrexate
Processus simple ; Processus complexe (nombre de sous-processus : …)
DESCRIPTION DU PROCESSUS
Essais A/NA
Modalités de
Etapes et éléments à vérifier (argumentation) Bibliographie
vérification/validation :
B/NA

Précision intra-lot : Répétabilité A*
Répétabilité
Précision inter-lots : Fidélité intermédiaire et robustesse seront établies :

autant que possible, les calibrations et les lots de réactifs seront modifiés et A*
Methotrexate Reproductibilié
les maintenances effectuées.

Variabilité inter opérateurs : Technique automatisée déjà vérifiée par
NA Variabilité inter-
ailleurs. Une action manuelle concerne le remplissage des cassettes réactif.
opérateurs

La variabilité inter-opérateurs est prise en compte dans la fidélité

intermédiaire et la maîtrise des risques.

Justesse ; pas de CQI externalisé NA
Justesse

Exactitude A
Exactitude

Sensibilité et spécificité analytique : Voir fiche technique B Sensibilité et spécificité
analytique
L’incertitude de mesure sera évaluée au regard des premiers résultats des

EEQ puis revue ultérieurement après avoir obtenu un nombre de résultats A
Incertitudes
d’EEQ suffisant
Etendue de mesure : Voir fiche technique + vérification des alarmes
automate si dépassement du domaine de mesure. 
AB
Dilution automatique recommandée sera vérifiée (cf. préconisations dans la Etendue de mesure
fiche technique).
Comparaison des méthodes : un nombre significatif d’échantillons va
A*

Comparaison de I
FO
permettre de comparer cette méthode avec la méthode de référence
méthodes
Les indices HIL (hémolyse, ictère, lipémie) sont mesurés systématiquement 
NA
pour chaque échantillon. Aucune spécificité liée à l’utilisation de ce réactif. Interférences
Aucune spécificité liée à l’utilisation de ce réactif. NA

I T 
Contamination
Respect des recommandations fournisseur :
-Gestion automatisée des stocks
-Surveillance des températures de stockage par la centrale de température.
B
FA 
Robustesse et fiabilité
des réactifs
-Stabilité des réactifs à bord de l'automate gérée automatiquement.
Valeurs de références : Voir fiche technique
UBE 
Intervalle de référence
*Risques majeurs issus de l’analyse préalable
I Q
9.3.2.2 Exemple de conclusion N
R O
C T
L E
Les performances obtenues avec ce réactif sont satisfaisantes au regard des performances
décrites par les sociétés savantes et au regard des méthodes similaires utilisant des couples
E
automates/réactifs dédiés. La portée A est justifiée.
N
I O
Toute modification par rapport aux matériels et méthodes décrites dans ce dossier fait l’objet
d’un complément à ce dossier de vérification (par exemple en cas de changement de
S
composition du réactif ou de maintenance majeure sur l’automate).
R
V E
Méthode conforme utilisée à partir du JJ/MM/AAAA
Autorisée par : Dr BIO le jj/mm/aaaa
L9.4A Stratégie spécifique de validation pour une méthode adaptée

Il est rappelé que les adaptations doivent se faire dans le respect de la
réglementation (exigences générales en matière de sécurité et performances fixées dans
l’annexe I, article 5.5 du règlement européen 2017/746) ; elles ne sont privilégiées par rapport
à l’emploi de DM-DIV marqués CE que si le laboratoire démontre qu’elles sont justifiées par
un meilleur service médical.

Approche chronologique
Le laboratoire peut développer une stratégie basée sur un plan de développement de la
méthode, caractérisé par l’approche chronologique suivante :
1) Privilégier une analyse des risques et documentaire (publications…) préalable toujours
dans le contexte d’utilisation clinico-biologique de l’examen ;
2) Définir les critères de performance ou dispositions permettant de maitriser ces risques ;
3) Etablir les performances souhaitées pour ces critères ;
4) Formaliser le protocole de validation, en veillant bien à ne pas se limiter au seul
contenu du SH FORM 43 en fonction de l’analyse des risques et documentaires ;
5) Faire les essais ;
6) Compléter l’analyse des risques de la méthode en fonction des résultats obtenus des
essais de validation.
I
FO
Tous les paramètres de performances analytiques doivent être appréciés en reflet de
l’utilisation réelle de la méthode analytique. En effet, si un niveau de performance requis n’est
pas obtenu, le laboratoire en tient compte dans son interprétation et sa prestation de conseil.
I T
9.4.1 Exemple de DVM pour une méthode adaptée
F A
E
Adaptation du dosage du rétinol plasmatique par chromatographie (laquelle) (BM-BB02) par
rapport à la méthode du fournisseur en modifiant la calibration en 1 point versus calibration en
U
6 points par dilution du calibrant fournisseur dans albumine et dilution au 1/2 systématique des
échantillons patients dans albumine.
I Q
N
1) Justification de l’adaptation de la méthode au regard des besoins des usagers : Le
O
laboratoire s’appuie sur la bibliographie récente qui indique que la carence en vitamine
R
CT
A correspond à un dosage inférieur à 0,35µg/L et que la quantification d’un surdosage
excessif est inutile. Ceci implique d’être performant au seuil et de connaitre la limite de
quantification.
L E
E
2) Le laboratoire établit les critères de performance :
N
[x]1.Répétabilité
[x] 2. Fidélité intermédiaire
I O
[x] 4. Justesse
[x] 5. Exactitude
R S
[_] 3. Variabilité inter-opérateurs
V E
[_] 6. Sensibilité et spécificité analytique
[x] 7. Limite de quantification
LA
[x] 8. Incertitudes
[x] 9. Etendue de mesure
[_] 10. Comparaison de méthodes
[x] 11. Interférences
[x] 12.1. Contamination inter-échantillon
[_] 12.2. Contamination inter-réactif
[x] 13.1. Robustesse
[x] 13.2. Stabilité
[x] 14. Intervalles de référence
[_] 15. Discordances

3) Les niveaux de performances sont spécifiques et ils sont justifiés.
Exemple : Le critère de performance de reproductibilité est égal à 15% ("15% R.S.D"),

issu de Peters FT et al. Validation of new methods. Forensic Science International 165
(2007) 216–224) car le CVw et CVg RICOS ont été déterminés chez des patients sains,
après analyse des publications.
4) Le protocole est mis en œuvre, y compris sur l’étendue de mesure :

Exemple :
I
FO
ETENDUE DE MESURE
Limite supérieure de linéarité Application de Peters FT et al. Validation of new
methods. Forensic Science International 165 (2007)
216–224 et des recommandations du SH GTA 04 rev 01:
I T
* "Lower limit of quantification" pour la limite de
quantification: dilution successive du CIQ level I dans de
F A
l'Albunorm 5g/100 mL au 1/10e, 1/12e et 1/15e et 10
déterminations de chaque niveau, critères retenus CV%
et biais inférieurs à20%
U E
Au 1/15ème, soit 0,10 μmol/L le CV obtenu est de 6,0%
et le biais moyen de 12,3%. Aucun intérêt clinique de
I Q
quantifier plus bas, la limite de quantification retenue est
donc de 0,10 μmol/L
N
* "Lower limit of quantification (LLOQ)" pour la limite de
linéarité :
R O 1) Surcharge à 10 μmol/L à partir d'une solution

éthanolique d'alpha-rétinol à 1 mg/mL dans de
l'Albunorm 5g/100 mL (soit 5,7 μL dans 2 mL)
C T 2) puis dilution au 9/10e jusqu'au 5/10e dans de

l'Albunorm 5g/100 mL et 10 déterminations de chaque
E
niveau, critère retenus CV% et biais inférieurs à 20%
E L Pour la surcharge à 10 μmol/L, le CV obtenu est de 6,5%

et le biais moyen de -6,1%. Aucun intérêt clinique de
N quantifier plus haut (toxicité au-delà de 4,5 μmol/L), les

dilutions inférieures ne présentent pas de CV ou biais >
Commentaire I O 20%, la limite de linéarité retenue est donc de 10 μmol/L

Intervalle de mesure déterminé : 0,1 à 10 μmol/L
S
ER
Conclusions Caractéristiques analytiques compatibles avec les
pratiques du quotidien, convient aux besoins du
V laboratoire
LA
5) L’analyse des risques de la méthode est complétée en fonction des résultats obtenus
des essais de validation.
Extrait :
ANALYSE DES RISQUES
5M Points Echelle de Eléments à Moyens de Niveau de

critiques criticité maitriser maitrise maitrise
Méthode Seuil de F1 x G5 = 5 Incertitude au Calcul de 5/5
carence seuil l’incertitude

9.5 Cas des méthodes multiparamétriques

Certaines méthodes multiparamétriques peuvent bénéficier d’un DVM commun. C’est le cas
de méthodes immunoenzymatiques pour la recherche de certains allergènes (AB01) en portée
A mais également de méthodes multiplex en bactériologie (MG05).
L’analyse des risques comporte une base commune liée à la technologie et des spécificités
liées à chaque paramètre. La notion de paramètres sentinelles permet d’apprécier
globalement les risques liés à la technologie.
Les spécificités liées à chaque paramètre peuvent être abordés à travers des études
bibliographiques et/ou expérimentales.
Le laboratoire peut constituer son DVM de la manière suivante : I

FO
1) Le laboratoire justifie sa démarche en se basant par exemple sur la description de la
méthode, mais également sur la bibliographie.
2) Il réalise ses essais avec des paramètres « sentinelles » ou avec l’ensemble des I T
paramètres.
F A
de la méthode par différents moyens : prise en compte des fiches techniques,
U E
3) Pour les paramètres qui ne seraient pas évalués directement, il s’assure de la maîtrise
ANSM. I Q
possibilité de s’apercevoir des dérives de méthode et prise en compte des alertes
N
O
9.5.1 Exemple de dosage des IgE spécifiques par méthode immuno-enzymatique
R
automatisée
C T
1) Justification de la démarche basée sur la bibliographie :
L E
- Pour une accréditation raisonnable et efficace des tests biologiques en allergologie.
Sarrat A. et al. ; Groupe de travail « accréditation IgE » du Réseau des Biologistes de
E
l’Allergie des centres hospitaliers « AllergoBioNet ». Ann Biol Clin (Paris). 2013; 71 (3)
: 325-32
N
- - Accreditation of allergen specific serum immunoglobulin E in view of EN ISO 15189;
I O
Lambert C. et al. ; Groupe de travail « accréditation IgE » du Réseau d’Immuno-
S
Allergologie Biologique Hospitalière « AllergoBioNet » Allergy. 2015;70(2):180-6
R
V E
2) Les performances communes sont établies avec un nombre de spécificités réduit (e1,
t3, d1) dans un DVM « classique » :
LA
FIDELITE INTERMEDIAIRE
Echantillons Nombre Moyenne Ecart- CV

de valeurs (kUA/L) type optimum CV retenu :
(kUA/L) CV (%) Conclusion
fournisseur SFBC (%)
(%)
CIQ (e1) niveau

30 2,64 0,140 5,3 4 12 Conforme
1 - bas
CIQ (t3) niveau

30 8,69 0,633 7,3 5 12 Conforme
2 - moyen
CIQ (d1) niveau

30 23,76 1,611 6,8 5 12 Conforme
3 - haut

3) La gestion des autres spécificités figure dans l’analyse des risques.
MAITRISE DES RISQUES

(extrait)
Moyens de maitrise (formation du

personnel, vérification expérimentale,
Echelle
jeux d’essai, …) / Documents
5M Points critiques de Eléments à maîtriser
(procédure, instruction,
criticité
enregistrement, …) avec les
références du SMQ du laboratoire
Composition des ++++ Connaissance des différents Fiches fournisseurs
réactifs antigènes (peptides, protéines,
glycoprotéines, mélanges…)
Performance prévue ++ Acceptation à réception des Revue des données de performance
I
FO
des réactifs réactifs fournisseur,
Matériel (réactifs)
Marquage CE
Suivi
performances
des
des
+++ Suivi des alertes
T
Veille de réactovigilance fournisseur et
ANSM
I
réactifs
Spécificité/sensibilité
des réactifs
+++ Bibliographie
Suivi des EEQ
F A
Procédure « Interprétation et prestations
de conseil »
(exemples :lait
vache,
venin
de
arachide,
d’hyménoptère…) U E
I Q
N
9.6 Cas des processus complexes
R O
C T
Un processus analytique est dit complexe quand plusieurs étapes s’enchainent, que chacune
puisse donner lieu à un résultat ou pas. Chaque étape correspond à un sous-processus.
Exemples : L E
•
E
N
Enchainement d’étapes qui ne peuvent être dissociées ou qui ne donnent pas de
résultats en tant que tel. Il s’agit, en général des étapes de pré-traitement. Exemple de
I O
la biologie moléculaire en microbiologie avec un premier sous-processus de lyse
S
cellulaire, un second d’extraction et un troisième d’amplification.
R
•
E
Articulation de plusieurs DVM simples, qui correspond à une check-list associée à une
V
maitrise des risques spécifiques à l’examen : exemple de l’ECBU en microbiologie
avec un premier sous-processus, l’examen direct, un second, l’ensemencement et la
LA
•
culture, un troisième l’identification et le dernier, l’antibiogramme
Certains processus complexes comportent des sous-processus intermédiaires non

rendus mais qui contribuent à l’interprétation. C’est le cas du pH qui contribue à
l’analyse des cristaux urinaires.
Dans ces cas, le laboratoire peut rédiger autant de DVM que de sous-processus. Il peut
également ne formaliser qu’un seul dossier en s’inspirant du modèle de formulaire SH FORM
43.
L’analyse des risques peut être globale ou propre à chaque sous-processus lorsque les
risques sont différents et spécifiques à chacun.

Outre les aspects purement techniques, le risque se situe dans la cohérence de l’organisation
documentaire et dans la cohérence avec la procédure de vérification / validation de méthode.
9.7 Cas des « paramètres calculés »

Pour certains examens, la méthode comporte un calcul. Le cas échéant, une vérification de
certaines performances peut s’avérer nécessaire. Cette démarche est justifiée par le service
médical rendu.
Que vérifier ?
- La méthode de calcul
Dans le cas d’un calcul complexe ou d’un logiciel, une vérification du paramétrage peut
I
s’avérer nécessaire. En l’absence de changement, il est inutile de refaire la vérification. Mais
FO
une nouvelle vérification est utile devant une source de régression (modification de
paramétrage, changement de version). Il est alors utile de réaliser la vérification des calculs
via un test de jeu de données.
- La maitrise d’un logiciel I T
F A
Certains calculs utilisent des données multiples intégrées dans un logiciel. L’analyse des
risques liés au logiciel de calcul et la comparaison des méthodes constituent des éléments
E
d’intérêts (ex : calcul du risque lié aux marqueurs sériques de la trisomie 21).
U
Pourquoi vérifier ces performances ?
I Q
Pour les analyses comportant un calcul comme pour les autres, l’incertitude de mesure aux
N
seuils décisionnels peut être utile à l’interprétation ou encore à la prestation de conseil. (Ex :
prises).
R O
ratio du TCA à certains niveaux pour lesquels des décisions cliniques ou biologiques seront
C T
9.7.1 Exemple de calcul du risque lié aux marqueurs sériques de la trisomie 21
L E
E
N
Le dossier présente une analyse des risques du logiciel (cf. extrait ci-dessous).
Le dossier présente également les performances à estimer (cf. extrait sur le critère
comparaison ci-dessous).
I O
R S
V E
LA

MAITRISES DES RISQUES DU LOGICIEL
Échelle Moyens de maitrise (formation du personnel, vérification

de expérimentale, jeux d’essai, …) / Documents (procédure,
5M Points critiques criticitéi Éléments à maîtriser
instruction, enregistrement, …) avec les références du
SMQ du laboratoire
F G C
Mise sur prises onduleur de l’automate et des 2 PC
Environnement
électrique 1 3 3
Fluctuations électriques
ayant le logiciel I
FO
Milieu
Détérioration du Accès de la pièce Pièce fermée par digicode tous les jours hors horaires
matériel contenant l’ordinateur d’ouverture du secteur
1 4 4
central et sécurité
I T
Logiciel Conformité du logiciel
F A
Utilisation du logiciel d’évaluation des risques marqué
CE, spécifiquement adapté aux réactifs utilisés (arrêté
du 23 juin 2009)
U E
Mise à jour de la dernière version par le fournisseur et
I Q
suivi via la liste des équipements critiques
La mise en place d’une nouvelle version est tracée
N
dans le cahier de vie de l’automate.
2 3 6
O
Jeu de données réalisé à chaque changement de
Matériel (équipements : PC, imprimantes, réseau et logiciel)ts)
Télémaintenances T R version logiciel (Fiche analyse)
Traçabilité des interventions auprès de la DSN par
E C bastion Wallix
L
Accès au logiciel
E
Droits d’accès limité aux besoins des différents types
d’utilisateurs
Equipements Evolutivité des matériels et Procédure achats
(PC, 1 3 3 N
correspondance avec les Rédaction dans le CCTP d’Appels d’Offres
imprimantes)
I O
besoins du laboratoire
Informatique
embarquée
R S Fonctionnement du
système ou des connexions
Vérification de la conformité du logiciel de calcul de
risque via un jeu de données à tester (Fiche analyse)
V E
2 4 8
informatiques Vérification de l’intégrité des données transmises
(saisie du dossier jusqu’à l’édition des comptes rendus)
par le biologiste (Fiche analyse)
LA
Traçabilité des contrôles de la justesse de la
transmission informatique (Mode opératoire) et tracé
dans le formulaire dédié
Réseau Support viable de Procédure informatique
sauvegarde des données Sauvegarde automatique des données brutes
automates sur le réseau du laboratoire de façon
quotidienne sur serveur dédié et sur le disque « C » du
Connexion bidirectionnelle PC maitre
efficace entre logiciel et
2 4 8
l’automate Traçabilité des contrôles de la justesse de la
transmission informatique (Moe opératoire) et tracé
dans le formulaire dédié
Connexion bidirectionnelle via une étiquette code barre
spécifique reconnue par le logiciel
Procédure dégradée en cas de coupure informatique

MAITRISES DES RISQUES DU LOGICIEL
Échelle Moyens de maitrise (formation du personnel, vérification

de expérimentale, jeux d’essai, …) / Documents (procédure,
5M Points critiques criticitéi Éléments à maîtriser
instruction, enregistrement, …) avec les références du
SMQ du laboratoire
F G C
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

Calcul du risque
Concordance clinique
Référence Trimestre
échantillon
Méthode A Méthode B concerné
Oui Non
1 5811 9221 x Concordance clinique < 1/50
2 10000 10000 x Méthode A
3 10000 10000 x Méthode B OUI NON
4 5109 2779 x OUI 1
5 3774 5915 x NON
6 10000 10000 x
7 5595 6060 x
8 7318 10000 x
9 10000 10000 x
10 2780 1980 x Concordance clinique entre 1/50 et 1/1000
11 921 569 x Méthode A
13 10000 10000 x OUI 17
14 661 558 x 2e NON 3
15 1110 755 x 2e
16 4674 2555 x 2e
17 10000 10000 x
18 5667 6113 x
19
20
2575
9407
4422
10000
x
x Concordance clinique > 1/1000
I
FO
21 3210 2120 x Méthode A
23 10000 10000 x OUI 69
24 10000 10000 x NON 3
T
25 10000 10000 x
26
27
28
29
10000
658
10000
1013
10000
976
10000
1788
x
x
x
x 6 discordances dont 2 au 2e trimestre = 6,4 %
A I
30
31
10000
10000
8157
10000
10000
7219
x
x
x
Méthode A
RAS (1/1110)
Méthode B
DPNI (1/755) F
E
32 15 (2e trim)
33 23 28 x 2e 45 DPNI (1/990) RAS (1/2505)
1260 2229 x DPNI (1/964) RAS (1/1018)
U
34 2e 49
35 10000 16218 x 2e 64 (2e trim) DPNI (1/781) RAS (1/1196)
36 920 670 x 65 RAS (1/1010) DPNI (1/927)
37
38
485
10000
888
232
10000
82
x
x
x
90 RAS (1/1258)
I QDPNI (1/971)
N
39
40 10000 10000 x
41 10000 10000 x
42
43
44
4859
10000
1301
10000
10000
1114
x
x
x
x
R O
T
45 990 2505
46 7945 5064 x
C
47 10000 10000 x
48 10000 10000 x
E
49 964 1018 x
50 5441 9615 x
51
52
53
54
55
923
344
814
9634
10000
968
159
449
10000
10000
x
x
x
x
x E L
56
57
10000
8489
10000
10000
x
x
N
58
59
9304
10000
102
10000
10000
169
x
I
x
x O
S
60
61 10000 10000 x
3360 4454 x
ER
62
63 1246 1468 x 2e
64 781 1196 x 2e
65 1010 927 x
66
67
68
2933
9134
760V 2970
10000
345
x
x
x
LA
69 10000 10000 x
70 547 697 x
71 6664 7390 x
72 2187 1410 x
73 5835 10000 x
74 10000 10000 x
75 10000 10000 x
76 2120 1750 x
77 6761 10000 x
78 10000 10000 x
79 10000 10000 x
80 4409 2772 x
81 267 453 x 2e
82 121 137 x
83 2806 2134 x
84 208 342 x
85 10000 10000 x
86 10000 10000 x
87 7394 4991 x 2e
88 9604 10000 x
89 3144 6176 x
90 1258 971 x
91 10000 8500 x
92 609 471 x
93 2896 5042 x 2e

En termes de performances, il est également important aussi dans ce cadre de vérifier

l’absence de fluctuations importantes du pourcentage de dossiers à risque mis en évidence
par le laboratoire par le suivi d’indicateurs qualité définis.
9.7.2 Exemple de l’examen de dosage des bilirubines
Certains examens résultent de calculs comme, le calcul la bilirubinémie directe à partir des
dosages de bilirubine totale et indirecte. Dans ce cas, le laboratoire s’assure que les
performances annoncées pour la procédure analytique et confirmées pendant le processus de
vérification sont appropriées à l’utilisation prévue des résultats d’examen.
Il ne s’agit pas de vérifier la méthode de calcul (en l’occurrence une soustraction) mais de
déterminer certaines performances utiles telles que, par exemple, les incertitudes ou les limites I
FO
de détection de cet examen qui résulte d’un calcul.
9.8 Cas des tests unitaires simples (TUS) I T

Les tests unitaires simples sont soit manuels
F A
(bandelettes urinaires, tests
immunochomatographiques) soit automatisés. Les risques
sont liés non seulement aux spécificités techniques des
aspects organisationnels du laboratoire dans laquelle ils
E
liés à ces tests unitaires simples
méthodes, mais également aux
U
sont mis en œuvre : techniques
différentes, utilisateurs variés, plusieurs sites …
I Q
N
Le dossier de vérification d’un TUS fait apparaitre à la fois les spécificités liées aux méthodes
et les spécificités organisationnelles.
R O
C T
9.8.1 Exemple d’un TUS réalisé sur un seul site
E
La vérification ne fait pas apparaitre d’éléments spécifiques à l’organisation.
L
Extrait du DVM :
E
N
EXAMEN DE BIOLOGIE MEDICALE
I O
R S Bandelette urinaire
V E
Processus simple ; Processus complexe (nombre de sous-processus : 6)
LA
Modalités de vérification :
1. Répétabilité
2. Fidélité intermédiaire (essai)
3. Variabilité inter-opérateurs (essai)
4. Justesse
Sous- 5. Exactitude (essai)
processus 1 : Éléments à vérifier 6. Sensibilité et spécificité analytique (biblio)
Recherche de (argumentation) 7. Incertitudes
nitrites 8. Etendue de mesure (biblio)
9. Comparaison de méthodes(biblio)
10. Interférences (biblio)
11. Contamination (biblio)
12. Robustesse et fiabilité des réactifs (biblio)
13. Intervalle de référence (biblio)

Modalités de vérification :
14. Répétabilité
15. Fidélité intermédiaire (essai)
16. Variabilité inter-opérateurs (essai)
17. Justesse
18. Exactitude (essai)
Sous-
Éléments à vérifier 19. Sensibilité et spécificité analytique (biblio)
processus 2 :
(argumentation) 20. Incertitudes
glycosurie …
21. Etendue de mesure (biblio)
22. Comparaison de méthodes(biblio)
23. Interférences (biblio)
24. Contamination (biblio)
25. Robustesse et fiabilité des réactifs (biblio)
26. Intervalle de référence (biblio)
I
FO
… … …
9.8.2 Exemple d’un TUS réalisé sur plusieurs sites

I T
F A
Cet exemple est celui d’un laboratoire multisites qui utilise sur plusieurs sites des bandelettes
U E
urinaires pour détecter une leucocyturie. Dans ce cas, les vérifications des performances de
la méthode sont réalisées sur un site et l’absence de dérive de la méthode est vérifiée sur
l’ensemble des sites.
I Q
ARGUMENTAIRE DU DOSSIER DE VERIFICATIONN
La bandelette urinaire permet de doser
R O
Contexte organisationnel :
C T
- pH, nitrite, corps cétoniques, protides, glucose et leucocytes
E
- Le plateau technique est le site référent qui réceptionne chaque lot et chaque
expédition de bandelettes pour l’ensemble du laboratoire et les répartit aux sites
secondaires L
E
- Réalisation des bandelettes urinaires sur les sites secondaires dans un contexte
N
d’urgence et/ou après le passage du dernier coursier.
Conséquence :
I O
-
-
R S
Le site référent a pour mission de vérifier la méthode pour l’ensemble du processus
Les variabilités en lien avec les sites secondaires (variabilité inter opérateurs,
transport inter sites des bandelettes, conservation des bandelettes sur les sites
V E
secondaires) sont maitrisées à travers des comparaisons réalisées sur les sites
secondaires
LA

MODALITES DE VERIFICATION
Risques liés à la méthode Modalité de vérification
- Reproductibilité Fidélité intermédiaire 10 passages de
contrôles
« principal »
Sur le site
- Justesse Exactitude 3 EEQ
- Comparaison Comparaison sur plusieurs urines 10 échantillons
avec méthode optique pendant une durée déterminée passés en parallèle
sur les 2 méthodes
- Limite de Etude bibliographique Fiche technique
détection
Risques liés à l’organisation du Modalité de vérification
laboratoire
- Comparaison inter Comparaison entre les opérateurs avec
I
2 urines par opérateur
FO
opérateurs des urines fraiches et avec les CIQ et sur chaque site
- Conservation des Passage des CIQ selon une stratégie 1 passage CIQ par
Sur chaque site
« secondaire »
bandelettes sur les sites définie : a minima mensuels et à chaque site

ouverture et fermeture de coffret sur le site
secondaire I T
- Transports inter sites Comparaison des résultats des patients
traités à la fois sur le site référent et le site
F A
Les 10 échantillons
passés sur le site
secondaire
U E référent sont répartis

et traités en parallèle
sur les sites
I Q secondaires
N
vocation à remplacer la stratégie de participation aux EEQ et CIQ.
R O
NB : La stratégie de vérification de méthode pour un TUS réalisé en multisites n'a pas
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

10 EXEMPLES DE SYNTHESES DE VERIFICATION / VALIDATION

DE METHODES
I
FO
I T
F A
U E
Il est rappelé que cette annexe est constituée d’exemples d’analyses de risques et de dossiers
I Q
de vérification / validation de méthodes dont pourront s’inspirer les laboratoires. Dans tous les
cas, il appartient aux laboratoires de démontrer que les dispositions prises permettent de
N
satisfaire pleinement aux exigences d’accréditation pour le service médical rendu.
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

10.1 Exemple portant sur la détermination de la concentration des

spermatozoïdes

Identification du paramètre :
Concentration des spermatozoïdes (ÉCHANTILLON –

ÉJACULAT)
I
FO
DESCRIPTION DU PROCESSUS I T
Etapes et éléments à vérifier Modalités
F
de A vérification /
(argumentation)
Etude expérimentale sur 3 niveaux : 30
passages
validation :
1.
U E
Répétabilité
Etude expérimentale sur 2 niveaux : 30
I Q 2. Fidélité intermédiaire
passages
Comparaison inter technicien selon la N
RO
3. Variabilité inter-opérateurs
méthode décrite dans l’OMS 2010
4. Justesse
C T
EEQ Biologie Prospective 2017 5. Exactitude
LE
Concentration 6. Sensibilité et spécificité
analytique
des
E
spermatozoïdes Méthode LT CV Biologie prospective 7. Incertitudes
(ÉCHANTILLON 2016
N
– ÉJACULAT)
I O
Documents fournisseur 8. Etendue de mesure
R S
Réalisée sur 20 échantillons :
Makler/Malassez
9. Comparaison de méthodes
V E 10. Interférences
11. Contamination
LA
12. Robustesse et fiabilité des
réactifs
Selon l’OMS 2010 13. Intervalle de référence
Argumentaire (le cas échéant) :

SOUS-PROCESSUS 1 :
Concentration des spermatozoïdes (ÉCHANTILLON – ÉJACULAT)
Portée A ; Portée B (à justifier)
Analyte / Mesurande : Comptage microscopique sur cellule calibrée
Principe de la Méthode : Méthode Manuelle de type Quantitatif - Microscopique
Type d'échantillon primaire : Sperme (éjaculat, état frais)

I
FO
Type de récipient, additifs : Flacon de recueil stérile (VR2M réf RCSP100)
Attendre la liquéfaction de l'échantillon de sperme (20 à

Prétraitement de l'échantillon :
I T
30 minutes) à température ambiante et homogénéisation
Unités : Nombre de spermatozoïdes /ml
F A
Valeurs de référence : ≥ 15 millions/mL (guide OMS
2010)
OUI U E
I Q
Codage C.N.Q. (s'il existe) : NA
N
R O
Cellule de Makler
Microscope optique OLYMPUS BX50 (n° F10-MIC-0003)
Référence du réactif :
C T
CIQ Accu-Beads®+
(Hamilton Thorne®)
Type d'étalonnage, nombre de niveaux et L E /
valeurs :
E /
N
I O MISE EN ŒUVRE
S
Opérateur(s) qualifié(s) et reconnu(s)
ER
compétent(s) ayant réalisé la XXXX XXXX XXXX XXXXX
vérification/validation de méthode :
V
Procédure de validation/mode opératoire : Procédure de Gestion de la portée flexible et Vérification
LA
/ Validation des méthodes
Procédure de gestion de la portée flexible : Procédure de Gestion de la portée flexible et Vérification

/ Validation des méthodes
Période d’étude : Du : 01/03/2015 au 30/03/2017
Date de 1ère utilisation : Méthodes utilisées dans le LBM depuis 2015


(Le laboratoire adapte les points critiques à maîtriser à partir du tableau ci-dessous pour chaque paramètre vérifié/validé)
Moyens de maitrise (formation du personnel, vérification

5M Points critiques
Echelle de
Eléments à maîtriser I
expérimentale, jeux d’essai, …) / Documents (procédure,
FO
criticité13 instruction, enregistrement, …) avec les références du
SMQ du laboratoire
Respect des règles d’identitovigilance du laboratoire avec les
I T
conduites à tenir en cas de problème et conduite à tenir en cas
Identitovigilance 3X1X2=6 Formation et information du personnel)

F A
de non-conformité constatée au cours du processus pré-
analytique
Procédure - « Réception des échantillons»
U E Procédure - « Réalisation des prélèvements »

Procédure - « Traitement d’une demande »
Q
Matière (échantillon)
Préparation du
3X1X2=6
N I
Information aux patients et demande d'informations
Enregistrement - « Instruction de recueil de sperme »
Enregistrement – « "Feuille de paillasse Spermogramme »
patient
O
(renseignements cliniques, préanalytiques ...)
R
Manuel de prélèvement dématérialisé
CT
Utilisation de flacons conformes aux prélèvements
Intégrité du flacon de Flacon de recueil stérile (VR2M réf RCSP100)
3X1X2=12 de sperme et vérification de l'intégrité à la réception
recueil Procédure - « Achats »
des commandes
Délai et température
3X1X1=3
L E
Information aux patients
de transport
E Manuel de prélèvement dématérialisé
N
Liquéfaction de l'échantillon de 20 à 30 minutes à
IO
Prétraitement 3X1X2=6 température ambiante et homogénéisation du Mode opératoire - "Spermogramme-spermocytogramme"
prélèvement
R S
V E
LA
13 Criticité=GOD=Gravité X Occurrence X Détectabilité

Procédure - " Gestion des locaux et sécurité du personnel »
I
Salles de prélèvement dédiées et adaptées
FO
Organisation des
locaux et du lieu de 3X1X2=6 Locaux inadaptés Paillasse située à proximité des salles de recueil sur un site
travail entièrement dédiée à l’activité spermiologie.
I T
Surveillance des zones de stockage et de la pièce technique
par des sondes reliées au logiciel Labguard 3.
A
Milieu
F
L’entretien des locaux est assuré par la Clinique de la
Conditions d'hygiène
3X2X2=12
Contamination des installations
Intrusion U E Sagesse
Procédure - « Confidentialité »
et sécurité
Elimination des déchets
I Q - La sécurisation des accès aux différentes zones (dispositif
N anti-intrusion) est assurée par des digicodes.
R O
Cellule endommagée (rayée-cassé-mauvais
Procédure – « Elimination des déchets »
Observation de la cellule avant de l'utiliser
CT
3X2X2=12
quadrillage) Stockage adapté
LE
Cellule de Makler 3X1X1=3 Bulle d'air quand chargement de la cellule Nouvelle goutte
E
Cellule sale ou mal nettoyée (risque de Stockage adaptée à la paillasse de spermiologie et nettoyage
2X2X2=8
N
(Equipements)
contamination entre deux patients) selon les recommandations du fournisseur entre deux patients
O
Matériel
Entretien et réglages
3X1X3=9
S I
Révision du microscope (maintenance annuelle)
Désinfection et nettoyage mensuels des oculaires
Enregistrement des maintenances dans Kalilab
et Désinfection/nettoyage du microscope sur un
R
du microscope
avec matériel adapté - Lecture adaptée (X20) enregistrement
Acceptation à
réception des
consommables et V E
3X2X1=6
Gestion des stocks avec traçabilité des lots et
Manuel - « Gestion des Commandes et du stock »
péremptions
LA
gestion du stock
Procédure - "Maitrise du système informatique"
Informatique du
3X2X2=12 Altération du fonctionnement ou du paramétrage Mode opératoire - « Résolution des problèmes
laboratoire (Hexalis)
informatiques »

Personnel formé et habilité

Procédure - « Recrutement et intégration »
I
Procédure - « Formation »
FO
Procédure - « Habilitation »
Procédure - « Habilitation spermiologie »
Réalisation de la
3X2X1=6 Erreur de lecture
I T
Enregistrement - « Habilitation spermio PMA»
concentration
F A
Mise en place d’un CIQ « Accu-beads + » (tous les 3 mois, 2
U E niveaux)
Enregistrement - «Contrôle des performances des
I Q opérateurs»
Mode opératoire - "Spermogramme-spermocytogramme"
N Revue annuelle ou tous les deux ans du système documentaire

Procédures à jour 2X2X2=8 Revue des documents qualité
O
Méthode
(Procédure « Rédaction et gestion des documents qualité »)

Procédures mal
appliquées
3X2X2=12
T R
Application correcte des procédures
Réalisation d'audits selon la procédure "Audits qualité" et selon
la fréquence définie dans le "Planning des audits "
E C
Main d’ œuvre
EL
Habilitation et Procédure - « Formation »
(Personnel)
maintien des Procédures formation, intégration et habilitation du

3X2X2=12 Procédure - « Recrutement et intégration »
compétences du personnel
personnel
N Mode opératoire - « Habilitation »
I O
R S
V E
LA

EVALUATION DES PERFORMANCES DE LA METHODE
Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) : sperme
REPETABILITE
Cellule de Makler
Microscope avec platine chauffante et contraste de phase
15-16/01/2015
Nombre
CV (%) retenu
par le I
FO
Ecart- CV (%)
Echantillons de valeurs Moyenne CV (%) laboratoire (cf. Conclusion15
type fournisseur
(N) source14)
Ricos minimal
Echantillon 1
I T
Sperme
normal :
patient n°XA
30 74.73 3.19 4.27 / 15.1
F A Conforme
Echantillon 2
Sperme bas :
patient n°XB
30 2.42 0.40 16.36 /
U E 15.1
Non
Conforme
Echantillon 3
Billes de I Q
latex : 18
30 20.91 0.73 3.49
N / 15.1 Conforme
M/mL
R O
T
Méthode validée en répétabilité pour les niveaux 1 et 3. Pour le
niveau 2 (valeur à 2.42M /ml, résultats supérieurs à l’objectif de performance. Cette valeur
C
L E
traduit une oligospermie sévère, ne modifiant pas la conduite thérapeutique à tenir).
Conforme et satisfaisant, au regard des spécifications du laboratoire. Acceptable cliniquement.
E
N
I O
R S
V E
LA
14 Sociétés savantes, publications (SFBC, GEHT, RICOS, QUALAB, CLIA…). Préciser la référence utilisée.

Cellule de Makler
Microscope avec platine chauffante et contraste de phase
Du 15/12/2014 au 23/12/2014
Du 05/01/2015 au 27/01/2015
CV (%) retenu
par le
Nombre
Ecart- CV (%) laboratoire (cf.
Echantillons de valeurs Moyenne
type
CV (%)
fournisseur source4) Conclusion4
(N)
Ricos
souhaitable
Echantillon
n°1
Billes de I
FO
latex lot
30 39.483 2.18 5.51 / 13.4 Conforme
130512351
35 +/- 5
I T
Echantillon
n°2 F A
Billes de
latex lot
131411181
30 20.300 1.86 9.16 /
U E 13.4 Conforme
18 +/- 2,5
M/mL I Q
Argumentaire de la conclusion : CONFORME -
N
le CV de fidélité intermédiaire est bien inférieur au
CV Ricos souhaitable.
R O
C T
L E Essai sur site – résultats de la variabilité
… E
N
La variabilité inter-opérateur répond aux besoins du laboratoire.
I O
Absence de variabilité inter-opérateur pour la concentration en spermatozoïdes (Cf. Extrait du
document « variabilité inter-opérateurs » ci-dessous)
R S
V E
LA

JUSTESSE (à partir des CIQ externalisés)

Nombre Moyenne
Cible Biais (%) Biais (%) Biais (%)
de Valeurs générale
Echantillons (groupe /groupe / moyenne Conclusion5
valeurs Labo
de pairs) de pairs
(toutes
générale Limite4
(N) techniques)
Echantillon
/ / / / / / / /
CIQ niveau 1
Echantillon
/ / / / / / / /
CIQ niveau 2
Argumentaire de la conclusion : Pas de CIQ externalisé

I
FO
Cible Cible Biais (%) Biais (%) /

Valeur Biais (%)
Conclusion5
Echantillons
Labo
(groupe
de pairs)
(toutes
techniques)
/ groupe
de pairs
toute
technique
limite4
I T
2017-1A 26.6 21.6
Argumentaire de la conclusion : Résultat
27.7
conforme.
23.1 4.0
F23.4A Conforme
U E
I Q
Applicable N
; non applicable (à justifier)
Vrais positifs
R O
Faux positifs
C T
Vrais négatifs
L E /
Faux négatifs E
Argumentaire de la conclusion : Non N applicable.
I O
R S
Méthodologie choisie : analyse des risques (absence d’interférence résiduelle) ; calcul
V E Incertitudes calculées Exigence de performances
LA
Mode de calcul (cf. SH GTA 14) : Méthode LTCV (%) – Biologie prospective ET Ricos souhaitable
+ / - 6.4 % 37.7 %
(niveau 1) :
(niveau 2) :
(niveau xxx) :
Les incertitudes évaluées sont
conformes à la spécification définie (Ricos souhaitable). Critère satisfait, adapté aux besoins
cliniques.


Limite de détection : /
Argumentaire de la conclusion : Non applicable

publications,…) :
Références 1 et 8 (Bibliographie)
I
Méthode précédente, autre méthode utilisée dans le
laboratoire, appareil en miroir ou back-up, EBMD :
Comparaison avec cellule de Malassez
FO
Nombre de mesures : 20 I T
Intervalle de comparaison adaptée à l’étendue des F A
3 à 170 M /ml
Méthode d'exploitation des résultats : U E

Diagramme des différences
I Q
Equation de la droite de régression :
N Y= 1.107X-2.807
RO
Diagramme des différences et/ou des rapports : 95% de points dans les normes de suivi
Argumentaire de la conclusion : Bonne commutabilité entre les 2 méthodes.
C T
L E
Applicable E
N
I O / /
R S
Limite de quantification : / /
V E
Limite supérieure de linéarité : / /
limite basse est de 0 M/mL. Il n’existe pas de limite haute.
Argumentaire de la conclusion : La
LA
Conforme aux attentes du laboratoire.

INTERFERENCES (étude expérimentale indispensable en portée B)

(étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour : Hémolyse, turbidité, bilirubine,
médicaments, … - à prendre en compte dans les facteurs de variabilité - à évaluer si nécessaire)
Hémolyse /
Turbidité /
Bilirubine, ictère /
Médicaments /
… I
FO
I T
FA
Inter échantillon pour les paramètres sensibles (par U E
Valeurs de sperme : 5 M/ml et 115 M/ml
exemple Ag HBS, βHCG, …) :
I Q
C = -0.58% - Absence de contamination
N
RO
ALAT, cholestérol et phosphate, lipase et /
Argumentaire de la conclusion : Méthode manuelle,
T
le niveau de contamination proche de 0 et le
nettoyage de la cellule à chaque comptage, préviennent de la contamination.
Répond aux besoins du laboratoire. C
L E
E
ROBUSTESSE et STABILITE des REACTIFS
N
I O
S
ER
Paramètres sensibles testés (t°, pH, position sur un /
support, …)
V
Stabilité des réactifs après ouverture, embarqués, /
LA
…

INTERVALLES de REFERENCE et/ou valeurs seuils en fonction des données démographiques (étude
expérimentale indispensable en portée B)
Valeurs de référence Valeurs de référence : ≥ 15 millions/mL (guide OMS

2010)
Enregistrement "Valeurs de référence pour les
spermogrammes et spermocytogrammes et leurs
sources bibliographiques"
Argumentaire de la conclusion : Valeurs adaptées à notre méthode et cohérentes (par expérience)

à notre population.
I
FO
Conclusion : méthode conforme utilisée à partir du 06/06/2017 (par rapport aux critères de
performance préétablis par le laboratoire).
I T
F
Autorisée par : Dr BIO - biologiste médical et référent du secteur AMP du laboratoire
A
U E
Signature
I Q
N
R O
Bibliographie :
C T
-
E
Référence 1 : OMS 2010: World Health Organization, « WHO laboratory manual for the examination and
L
processing of human semen », 2010, 5th ed., 271 pages (SAQ-EX024)
-
E
Référence 2 : « AMP », J. Lansac, F.Guérif, J. Gouneaud
-
consulté le N
Référence 3 : A. ABBARA, « Paramètres du spermogramme – Normes de l’OMS », 03 décembre 2010,
01/12/2012 sur le site internet : http://www.aly-
I O
abbara.com/echographie/biometrie/scores/spermogramme_normes_oms.html
-
S
Référence 4 : M. AUROUX, « Spermogramme, spermocytogramme, examens complémentaires »,
R
Feuillets de Biologie, 1993, volume 34, n° 192, p.51 à 58
-
-
V E
Référence 5 : Menkveld and Coll., 2001 – Human reprod., 16 :1165-1171
Référence 6 : Dr.Laurence LEVY-DUTEL, Isabelle BERTHAUT, Laurence BRUNET, Charlotte
LA
DUDKIEWICZ-SIBONY, Dr. Carole MINKER, Dr. Jérôme PFEFFER, « Le grand livre de la fertilité », p.80
- Référence 7 : Dr. Alexandra MESNER, Professeur, Catherine POIROT, « Le spermocytogramme en
images »
- Référence 8 : « Cahier de formation n°42 » (SAQ-EX025)

10.2 Exemple portant sur la vitalité des spermatozoïdes

Identification du paramètre :
Vitalité (ÉCHANTILLON – ÉJACULAT)

I
FO
Etude expérimentale sur 2 niveaux (1

I T
Modalités de vérification/validation16 :
niveau >58% et un niveau <58%) 10

passages
1. Répétabilité
F A
Etude expérimentale sur 20 spermes
avec des vitalités différentes et réalisée
par 3 opérateurs par sperme
2.
U E
Fidélité intermédiaire
Comparaison inter technicien selon la

méthode décrite dans l’OMS 2010 I Q 3. Variabilité inter-opérateurs
N 4. Justesse
Vitalité
(ÉCHANTILLON
EEQ Biologie prospective et Probioqual
2017 / 2018
R O 5. Exactitude
– ÉJACULAT)
C T 6. Sensibilité
analytique
et spécificité
2017/2018
Selon l’OMS 2010 L E
Méthode CIQ/EEQ : BP et Probioqual
7. Incertitudes
E
Etude réalisée sur 2 aliquots
8.
9.
Etendue de mesure
Comparaison de méthodes
N
Fiche technique document fournisseur 10. Interférences
I O
Lame à usage unique 11.
12.
Contamination
Robustesse et fiabilité des
S
Fiche technique document fournisseur
réactifs
ER
Selon l’OMS 2010 13. Intervalle de référence
V
LA
16
Note : Pour la vérification/validation de méthodes quantitatives, le renseignement des items 1, 2, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12 et 13
est attendu a minima. Pour la vérification/validation de méthodes qualitatives, le renseignement des items 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12 et
13 est attendu, a minima.
Le types de vérification (bibliographique ou essais) est à indiquer.
L’absence d’applicabilité de certains items (NA) doit être justifiée dans le corps du document.

SOUS-PROCESSUS 1 : vitalité (ÉCHANTILLON – ÉJACULAT)
Analyte / Mesurande : Vitalité des spermatozoïdes

Evaluation du pourcentage de spermatozoïdes
vivants et morts après coloration d'un frottis
Principe de la Méthode :
- colorimétrie I
Type d'échantillon primaire : Sperme (éjaculat)
FO
I
Flacon de recueil stérile (VR2M réf RCSP100) T
F A
Attendre liquéfaction de l'échantillon de sperme (20 à 30
minutes) à température ambiante et homogénéisation
Unités : %
U E
Valeurs de référence ≥ 58% de formes vivantes
(guide OMS 2010)
I Q
OUI N
Codage C.N.Q. (s'il existe) : NA

R O
T
EC
Equipement (instrument, analyseur, etc.) : /
Kit VitalScreen TM référence MT 281 fournisseur JCD
EL
Matériau d'étalonnage (références) : /
Type d'étalonnage, nombre de niveaux et /
valeurs :
N
I O
R S
MISE EN ŒUVRE
V E
compétent(s) ayant réalisé la
Procédure de validation/mode opératoire :
XXXX XXXX XXXX XXXX
Procédure de Gestion de la portée flexible et Vérification /
LA
Validation des méthodes
Mode opératoire "Spermogramme-spermocytogramme"
Procédure de gestion de la portée flexible : ANA-PR001 Gestion de la portée flexible et Vérification /

Validation des méthodes
Période d’étude : Du 30/04/2018 au 15/05/2018

Date de 1ère utilisation Méthode utilisée dans le LBM depuis 2018


(Le laboratoire adapte les points critiques à maîtriser à partir du tableau ci-dessous pour chaque paramètre vérifié/validé)
Moyens de maitrise (formation du personnel, vérification

5M Points critiques
Echelle de
Eléments à maîtriser I
expérimentale, jeux d’essai, …) / Documents (procédure,
FO
criticité18 instruction, enregistrement, …) avec les références du
SMQ du laboratoire
Respect des règles d’identitovigilance du laboratoire avec les
I T
conduites à tenir en cas de problème et conduite à tenir en cas
Identitovigilance 3X1X2=6 Formation et information du personnel)

F A
de non-conformité constatée au cours du processus pré-
analytique
Procédure - « Réception des échantillons »
U E Procédure - « Réalisation des prélèvements »

Procédure - « Traitement d’une demande »
Q
Matière (échantillon)
Préparation du
3X1X2=6
N I
Information aux patients et demande d'informations
Enregistrement – « "Feuille de paillasse Spermogramme »
patient
O
(renseignements cliniques, préanalytiques ...)
R
Manuel de prélèvement dématérialisé
CT
Utilisation de flacons conformes aux prélèvements
Intégrité du flacon de Flacon de recueil stérile (VR2M réf RCSP100)
3X1X2=12 de sperme et vérification de l'intégrité à la réception
recueil Procédure - « Achats »
des commandes
Délai et température
3X1X1=3
L E
Information aux patients
de transport
E Manuel de prélèvement dématérialisé
N
Liquéfaction de l'échantillon de 20 à 30 minutes à
IO
Prétraitement 3X1X2=6 température ambiante et homogénéisation du Mode opératoire - "Spermogramme-spermocytogramme"
prélèvement
R S
V E
LA
18 Criticité=GOD=Gravité X Occurrence X Détectabilité


Salles de prélèvement dédiées et adaptées
Organisation des
Paillasse située à proximité des salles de recueil sur un site
locaux et du lieu de
travail
3X1X2=6 Locaux inadaptés
I
entièrement dédiée à l’activité spermiologie.
FO
Surveillance des zones de stockage et de la pièce technique par
des sondes reliées au logiciel Labguard 3.
I T
Conditions d'hygiène
3X2X2=12
Contamination des installations
Intrusion F A
L’entretien des locaux est assuré par la Clinique de la Sagesse
Procédure - « Confidentialité »
et sécurité
Elimination des déchets
U E
La sécurisation des accès aux différentes zones (dispositif anti-
intrusion) est assurée par des digicodes.
I Q Procédure - « Elimination des déchets »

Milieu
N - Respect des recommandations environnementales transmises
R O par le fournisseur.
- Manuel : « Etalonnage des sondes de température et
Température
conservation
de
et d’utilisation des
2X2X2=8
C T
Non respectée
cartographie des enceintes »
- Procédure - « Métrologie »
réactifs E - Formation des techniciens à l’utilisation du logiciel Lab-Guard
EL
- Procédure - « Surveillance des températures des zones de
stockage »
N - Cf. Notices fournisseurs, fiche de stress, ...

Contamination inter-
échantillons
3X2X2=12
I O Lames non adaptées Utilisation de lames à usage unique
S
ER
Conditions
- Séparation si possible, du poste de validation du reste du
ambiantes, calme, 2X3X1=6 Poste non adapté
concentration plateau technique
V
LA

Equipements divers : - Contrôles métrologiques effectués annuellement, enregistrés

Contrôle dans Kalilab.
métrologique des
équipements I
- Surveillance de la température des enceintes et température
FO
(centrifugeuses, ambiante
pipette, microscope) - Obtention du certificat de conformité des pointes (stérilité) VWR
3X1X3=9
Lames dégraissées,
lamelles calibrées
Equipement non adapté et non contrôlé
I T
- Désinfection et nettoyage des oculaires avec matériel adapté
(22*22)
Pointes stériles
Entretien et réglage F A
Enregistrement des maintenances dans Kalilab et
Désinfection/nettoyage du microscope sur enregistrement dédié
du microscope
E - Lecture adaptée (X20)
Matériel (Equipements et réactifs)
U
I Q Enregistrement des maintenances dans Kalilab et
N Désinfection/nettoyage du microscope sur enregistrement dédié
Acceptation à
R O Gestion du stock dans Kalilab
CT
réception des Gestion des stocks avec traçabilité des lots et
3X2X1=6 Procédure « Achats »
consommables et péremptions
gestion du stock Manuel « Gestion des Commandes et du stock »
LE
- Vérification des péremptions des stocks (page d’accueil Kalilab)
par des tâches Kalilab indiquant à tous les acteurs de vérifier.
E - Respect des recommandations des fiches techniques.
N
I O
Qualité et stabilité des réactifs, Conditions de
Conservation des
1X2X1=2 Sconservation et d’utilisation des réactifs,
Fiches techniques fournisseurs et attestation de stress produits.
ER
réactifs (FT Vital screen TM Référence MT 281 JCD)
Homogénéisation
V
Informatique du
laboratoire (Hexalis) LA
3X2X2=12 Altération du fonctionnement ou du paramétrage
Procédure - « Maitrise du système informatique"
Mode opératoire - « Résolution des problèmes informatiques »

Personnel formé et habilité

Procédure « Recrutement et intégration »
Procédure « Formation »
I
Mode opératoire « Habilitation »
FO
Enregistrement « Habilitation spermiologie »
Utilisation technique
manuelle
3X2X1=6 Erreur de lecture
I T
Enregistrement « Habilitation spermio PMA »
F A
Variabilité inter-opérateurs (tous les 3 mois)
Enregistrement « Contrôle des performances des opérateurs »
U E Mode opératoire "Spermogramme-spermocytogramme"

Méthode
Réalisation d’EEQ
I Q Mode opératoire « Gestions des contrôles externes »
N Revue annuelle ou tous les deux ans du système documentaire

Procédures à jour 2X2X2=8 Revue des documents qualité
R O (Procédure « Rédaction et gestion des documents qualité »)
CT
Procédures mal Réalisation d'audits selon la procédure "Audits qualité » et selon la
3X2X2=12 Application correcte des procédures
appliquées fréquence définie dans le "Planning des audits "
Gestion de la portée
flexible
L E - Enregistrement « Check-list de validation d’une nouvelle
(Changement de
méthode, de réactif, 1X2X1=2 E
Non appliquée
technique »
revue d’une
N - Comparaison inter opérateurs
IO
méthode existante - Réalisation d’audits internes techniques et externes
…)
R S
V E
LA

- Réception des alertes ANSM par les biologistes et le service

qualité
Veille documentaire
et Réactovigilance
2X1X1=2 Non réalisée
I
- Procédure : « Rédaction et gestion des documents qualité »
FO
- Mode opératoire « Réacto-vigilance »
Déclaration d’une réactovigilance et enregistrement d’une NC.
I T
- Courrier postal, H’prim médecin, « Mesanalyses.fr » (serveur de
2X1X2=4 Transmission des résultats

F A résultats patients),
- Convention de preuve (réception des résultats par le
U E prescripteur)
- Procédure « Prestations de conseils »
IQ
- Courrier de la Biologie Médicale-personnalisé envoyés aux
3X3X1=9 Interprétation biologique prescripteurs
Résultats
N - Dossier de validation communiqué à tous les biologistes
R O - Analyse de la cohérence des résultats et des antécédents
CT
Mode opératoire « Spermogramme-spermocytogramme"
Enregistrement « Feuille de paillasse spermogramme »
LE
2X2X1=4 Commentaires
- Procédure « Validation biologique »
E - Harmonisation des avis et commentaires

Main d’ œuvre
N
(Personnel)
Habilitation et Procédure « Formation »

maintien des
compétences du
3X2X2=12
I O
Procédures formation, intégration et habilitation
Procédure « Recrutement et intégration »
personnel
R S du personnel
Mode opératoire « Habilitation »
V E
LA

Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) : sperme
REPETABILITE
Kit VitalScreen référence MT 281 lot n°FP17VI06
CV (%) retenu
Nombre
Ecart- CV (%) par le
Echantillons de valeurs Moyenne CV (%) Conclusion20
type fournisseur laboratoire (cf.
(N)
source19)
I
FO
Echantillon
Niveau bas 10 33.90 1.60 4.71 / 5.79 Conforme
03/05/2018
Echantillon
Niveau haut 10 78.27 3.28 4.19 / 5.79 I T Conforme
02/05/2018
Argumentaire de la conclusion : Pour
la répétabilité, les CV (%) obtenus sont inférieurs aux CV (%)
F A
limites d’acceptabilité fournis par le RICOS, spécifications minimales.
U E
I Q
Applicable N
R O
Kit VitalScreen référence MT 281 lot n°FP17VI06
Du 30/04/2018 au 15/05/2018
C T CV (%)
retenu par
Echantillons
Nombre
d’opérateurs(N)
Moyenne
L E Ecart-
type
CV
(%)
CV (%)
fournisseur
le
laboratoire
Conclusion
1 3 E
72,33 2,25 3,12 /
(cf. RICOS)
7.73 Conforme
2 3
N 64,33 0,76 1,19 / 7.73 Conforme
3 3
I O 29,50 0,50 1,69 / 7.73 Conforme
4
5
6
R S
3
3
3
60,83
28,50
79,50
0,58
0,29
1,80
0,95
1,12
2,27
/
/
/
7.73
7.73
7.73
Conforme
Conforme
Conforme
7
8
V E 3
3
45,33
34,17
0,29
2,57
0,64
7,51
/
/
7.73
7.73
Conforme
Conforme
LA
9 3 67,17 4,65 6,92 / 7.73 Conforme
10 3 67,33 1,76 2,61 / 7.73 Conforme
11 3 55,00 2,65 4,81 / 7.73 Conforme
12 3 70,17 4,80 6,85 / 7.73 Conforme
13 3 65,00 2,29 3,53 / 7.73 Conforme
14 3 40,33 3,06 7,57 / 7.73 Conforme
15 3 85,50 1,00 1,17 / 7.73 Conforme
16 4 66,33 1,53 2,30 / 7.73 Conforme
17 4 53,33 2,08 3,90 / 7.73 Conforme
18 4 72,00 2,65 3,67 / 7.73 Conforme
19 4 73,17 3,51 4,80 / 7.73 Conforme
20 4 30,00 0,50 1,67 / 7.73 Conforme

CV (%)
retenu par
Nombre Ecart- CV CV (%)
Echantillons Moyenne le Conclusion5
d’opérateurs(N) type (%) fournisseur
laboratoire
(cf. RICOS)
Moyenne des
Echantillons
8 39.2 1.493 3.16 / 7.73 Conforme
Vitalité
≤ 58%
Moyenne des
Echantillons
12 70.30 2.3 3.28 / 7.73 Conforme
Vitalité
> 58%
les CV (%) obtenus sont tous inférieurs aux CV (%) limites

I
FO
d’acceptabilité fournis par RICOS, spécifications minimales.

I T
F A
U E
I Q
Essai sur site – résultats de la variabilité
…
N
O
La variabilité inter-opérateur répond aux besoins du laboratoire.
Absence de variabilité inter-opérateur (Cf. Extrait du document « variabilité inter-opérateurs »
R
ci-dessous)
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA
Nombre Moyenne
valeurs Labo
de pairs) de pairs
(toutes
générale Limite4
(N) techniques)
Echantillon
/ / / / / / /
CIQ niveau 1
Echantillon
/ / / / / / /
CIQ niveau 2
Argumentaire de la conclusion : Pas de CIQ externalisé


Biologie Prospective et Probioqual 2017/2018
Cible
Cible Biais (%)
Valeur (mêm Biais (%) / Biais (%) /
(toutes limite :
Echantillons Labo techniqu même toute Conclusion
techniques) RICOS
% e) technique technique
% souhaitable
%
2017 1A 55 56.3 / -2.3 / 6.9 Conforme
2017 1B 64 64.1 / -0.16 / 6.9 Conforme
2017 2A 43 44.2 / -2.71 / 6.9 Conforme
I
FO
2017 2B 18 17.6 / 2.27 / 6.9 Conforme
Conforme
2018 1A 71 72 / -1.38 / 6.9
I T
2018 1B
18SP01
65 66.9 / -2.84 /
A
6.9
F
Conforme
Conforme
(Probioqual 2018)
82 81.57 / 0.52 /
U E
L’essai d’exactitude est conforme aux limites d’acceptabilité
6.9
proposées par RICOS souhaitable.

I Q
N
R O
T
C
Vrais positifs
L E
E
Faux positifs
N /
Vrais négatifs
I O
Faux négatifs
R S
V E
Argumentaire de la conclusion : Non applicable méthode qualitative
LA INCERTITUDE DE MESURE (niveaux, choix du mode de calcul, interprétation) :

Exigence de
performances
Méthode EEQ/CIQ – Biologie prospective
Mode de calcul (cf. SH GTA 14) : ET Ricos souhaitable
et Probioqual 2017/2018
Quantification de l'incertitude : 11.3% 15.4%

Les incertitudes évaluées sont conformes à la spécification définie (Ricos souhaitable). Critère
satisfait, adapté aux besoins cliniques.


/
Argumentaire de la conclusion : Non applicable. Méthode qualitative
OMS 2010
publications,…) :
I
FO
Méthode précédente, autre méthode utilisée dans le Etude comparative sur 2 aliquots (Cf. tableau çi-
laboratoire, appareil en miroir ou back-up, EBMD : dessous)
Nombre de mesures : 10 échantillons

I T
33 à 90 %
F A
Selon OMS 2010 : Table 2.1 Acceptable
Méthode d'exploitation des résultats : U E

differences between two percentages for a given
average, determined from replicate counts of 200
I Q
spermatozoa (total 400 counted)
N
RO
Equation de la droite de régression : /
Diagramme des différences et/ou des rapports :
C T /
L E
E
N
I O
R S
V E
LA
Tous les résultats sont conformes les uns par rapport aux autres
selon l’OMS 2010. Le laboratoire a donc décidé de réaliser un seul comptage sur un seul
aliquot.


Limite de détection : / /
Limite de quantification : / /
Limite supérieure de linéarité : / /
Argumentaire de la conclusion : Le domaine de mesures s’étend de 0 à 100% de formes vivantes
I
FO
I T
Hémolyse
Turbidité
/
/ FA
Bilirubine, ictère /
U E
Médicaments /I Q
N
O
Lors du séchage du frottis, des cristaux de nigrosine susceptibles
d’interférer avec l’interprétation des résultats se forment.
R
Lors d’une faible concentration en spermatozoïdes dans le liquide
C T
spermatique (< 5 Millions/ml) (cas d’une oligozoospermie), la dilution
(sperme/Eosine/Nigrosine) est trop forte d’où une lecture longue et
Autres
L E
aléatoire pour compter le peu de formes vivantes présentes : la
vitalité ne sera pas réalisée, le LBM se basera sur la mobilité pour
E
une décision thérapeutique.
N
I OCf. Fiche technique - Kit VitalSreen référence MT 281
R S
-Argumentaire de la conclusion : Répond aux besoins du laboratoire
V E CONTAMINATION (étude expérimentale indispensable en portée B)

LA
Inter échantillon pour les paramètres sensibles (par Méthode manuelle, lame à usage unique,
exemple Ag HBS, βHCG, …) : un échantillon par lame. Pas de risque de
contamination. Comme toute technique
manuelle, le personnel est sensibilisé au
risque d’interversion d’échantillon. Tout
est mis en œuvre au niveau
organisationnel et au niveau technique.
ALAT, cholestérol et phosphate, lipase et /
Argumentaire de la conclusion : Répond aux besoins du laboratoire


Paramètres sensibles testés (t°, pH, position sur un

/
support, …)
Réactifs conservés entre 2 et 8°C.
Durée de vie après ouverture : se
conformer à la date de péremption.
Stabilité des réactifs après ouverture, embarqués,
… Cf. Fiche technique - Kit VitalSreen
référence MT 281
I
Argumentaire de la conclusion : Répond aux besoins du laboratoire FO
I T
FA
U E
≥ 58% de formes vivantes (guide OMS 2010)
Valeurs de référence
I Q
N
Valeurs adaptées à notre méthode et cohérentes (par expérience)
à notre population.
R O
C T
Conclusion : méthode conforme utilisée à partir du 05/07/2018 (Par rapport aux critères de
performance préétablis par le laboratoire)
L E
E
Autorisée par : Dr XXXX
Signature N
I O
R S
Bibliographie :
- V E
Référence 1 : OMS 2010: World Health Organization, « WHO laboratory manual for the examination and
LA
processing of human semen », 2010, 5th ed., 271 pages (32-PMA-7DX-010-xx-BL)
- Référence 2 : A. ABBARA, « Paramètres du spermogramme – Normes de l’OMS », 03 décembre 2010,
consulté le 01/12/2012 sur le site internet : http://www.aly-
abbara.com/echographie/biometrie/scores/spermogramme_normes_oms.html
- Référence 3 : M. AUROUX, « Spermogramme, spermocytogramme, examens complémentaires »,
Feuillets de Biologie, 1993, volume 34, n° 192, p.51 à 58
- Référence 4 : Menkveld and Coll., 2001 – Human reprod., 16 :1165-1171
- Référence 5 : Dr. Alexandra MESNER, Professeur, Catherine POIROT, « Le spermocytogramme en
images »
- Référence 6 : « Cahier de formation n°42 » (32-PMA-7DX-011-xx-BL)
- Référence 7 : J. AUGER et P. JOUANNET (traducteurs), « Manuel de laboratoire de l’OMS.
Analyse du sperme humain et de l’interaction des spermatozoïdes avec le mucus cervical » -
1993 - Ed° INSERM

10.3 Exemple portant sur la calcémie (processus simple – méthode

quantitative)
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

Analyte / Mesurande : Calcium Total
Principe de la Méthode : Spectrophotométrie
NM-BAPTA
Type d’échantillon primaire : Plasma/sérum
Type de récipient, additifs : Héparinate de lithium,
Prétraitement de l’échantillon : Centrifugation : 2000 g à 20°C 10minutes
Unités : mmol/L
Intervalles de référence1 : 90 ans : 2,05 – 2,40 mmol/L
60 - 90 ans : 2,20 – 2,55 mmol/L
18 - 60 ans : 2,15 – 2,50 mmol/L
2 - 12 ans : 2,20 – 2,70 mmol/L
10j - 2ans : 2,25 – 2,75 mmol/L
<10jours :1,90 – 2,60 mmol/L
I
FO
Marquage CE (Oui/Non) : oui
Codage C.N.Q. (s'il existe) : BT
Equipement (instrument, analyseur, etc.) : Analyseur 6000 N°1
Référence du réactif : CA2 05061482 190
2013-10, V 3.0 Français
I T

C.f.a.s (2,74 mmoI/L) lot 167252 ver.1
SRM 956 c niveau 2
F A
Linéaire en 2points : H2O (blanc) et C.f.a.s (2,74 mmoI/L)
valeurs :
U E
MISE EN ŒUVRE I Q
N
compétent(s) ayant réalisé la
G.G.
R O
Procédure de gestion de la portée flexible :
C T
00ANAP01M001
00ANAP02
Période d’étude :
Date de 1ère utilisation :
L E 22 mai au 10 juin 2014
11 juin 2014
E
N
I O
R S
V E
LA


(le laboratoire adaptera les points critiques à maîtriser à partir du tableau ci-dessous pour chaque
paramètre vérifié/validé)
Moyens de maitrise (formation du
Echelle personnel, vérification
5M Points critiques de Eléments à maîtriser expérimentale, jeux d’essai, …) /
criticité1 Documents (procédure,
instruction, enregistrement, …)
Identitovigilance 5 Formation du personnel Procédure d’identitovigilance du
laboratoire 25PREP06M001
Préparation du 1 Information des patients et Instructions de prélèvement

patient préleveurs 00PREP01D002 (manuel de
prélèvement)
I
FO
Type de contenants 2 Formation des préleveurs - Vérification à la réception
Recommandé Héparinate de 245PREP04M001 (réception des
Li échantillons)
Acceptable sur tube sec ou
gel,
I T
- Instructions de prélèvement
00PREPP01D003 (fiche technique
Nature et volume 1
Non acceptable EDTA,
oxalate, citrate
Contrôle à réception
A
de prélèvement sanguin)
- Critères d’acceptation/de refus
F
25PREP01D001 v4 (Catalogue des
de l’échantillon
Délai et 1
sang
Gestion logistique (navettes,
U E
analyses, intranet de l’APHM)
- 28GRHP01E002 (fiche de
formation et d’habilitation des
Q
température avant enceintes de transport)
préleveurs)
traitement
analytique
Interférences 1 Formation des préleveurs N I
Prétraitement :
centrifugation, …
3
R O
Contrôle à réception
Conditions de Critères de centrifugation
T
centrifugation :
2000 g à 20°C 10minutes
C
25GRMP02M005D001
Vérification annuelle par prestataire
externe
Conditions de
conservation des
échantillons (t°, …)
1
L EMétrologie/suivi des
enceintes
Instructions de conservation
25PREP01D001 v4 (Catalogue des
Conditions de 2 E Sondes reliées au logiciel

Thermocontrol (OceaSoft)
analyses)
Procédure de suivi des températures
conservation
d’utilisation
et
des N (23°C +/- 5°C) 25GRMP02M006
Métrologie des équipements
réactifs (t°, …)
Exigences I O 1 Suivi des conditions
00GRMP03
Exigences / manuel d’utilisation du
S
Milieu
environnementales environnementales fournisseur
E R
pour le matériel
Qualité de l’eau
Enregistrements des conditions
environnementales
Surveillance de la résistivité de l’eau
V 5 Mesure de la résistivité /
(équipements)
stérilité (résistivité > 15 m Ω
LA
Surveillance des 5 CIQ/EEQ Enregistrements des maintenances
dérives Maintenance/métrologie des 00GRMP02M001 (utilisation et
Matériel
équipements maintenance des équipements)

Contamination 2 Respect des conditions Bibliographie
opératoires du fournisseur
1 A préciser par le laboratoire, par exemple 1 non critique – 5 très critique ;

Informatique 3 Jeux d’essais Enregistrements des jeux d’essai

embarquée Stockage et transmission Contrat de maintenance intégrité des
(paramétrage, des données données/jeux d’essais
étalonnage, 25GRMPO4M001
connexions,
archivage des
données)
Conservation et 3 Métrologie des enceintes Fiches fournisseur
conditions (cartographie et suivi des
d’utilisation températures)
Acceptation à 3 Acceptation à réception des Marquage CE
réception des réactifs Contrôlés à la réception
réactifs, gestion Gestion des stocks Procédure de gestion des stocks (y
des stocks compris acceptation) /Gestion des
fournitures 00GRMP01
Reconstitution des 4 Métrologie des pipettes Instructions de reconstitution

I
FO
réactifs, étalons, Respect du mode opératoire Maitrise métrologique des pipettes
contrôles de reconstitution et gestion 00GRMP03M002
des stocks (y compris Délai de reconstitution
acceptation)
T
(Recommandations fournisseurs)
I
Température de conservation
Limites de la
méthode (détection,
2 Bibliographie et/ou essai sur
site F A
(recommandations fournisseurs)
Documents fournisseur, résultats des
essais
quantification,
linéarité,
U E
00ANAP01 (vérif. Validation de
méthode)
Méthode
interférences, …)
IQ
Causes 2 Calculs 00ANAP05 (évaluation des
d’incertitude de incertitudes de mesure)
mesure
N Bibliographie (RICOS erreur totale)
Compétence et
maintien de
2 Procédure
O
formation/habilitation du
Enregistrements d’habilitation du
personnel
(Personnel)
R
d’ œuvre
compétence du personnel, plan de formation Gestion des ressources humaines

personnel
C T LBM 00GHP01
Fiches d’habilitation des techniciens
Main
25GRHP01E003 V 7
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) : sérum
REPETABILITE
Nombre CV (%) retenu
de Ecart- CV (%) par le
Echantillons Moyenne CV (%) Conclusion2
valeurs type fournisseur laboratoire (cf.
(N) source1)
Sérum PCC1 30 2.145 0.017 0.77 0.8 1.2 (SFBC) conforme
Sérum PCC2
Sérum Pool
30
30
3.321
1.777
0.021
0.018
0.64
1.01
0.8
0.8
1.2 (SFBC)
1.2 (SFBC)
conforme
conforme I
FO
Argumentaire de la conclusion : CONFORME
I T
A
Echantillons
Nombre
de
Moyenne
Ecart-
CV (%)
CV (%)
CV (%) retenu
par le
FConclusion4
Sérum PCC1
valeurs
41
(N)
2.17 0.028
type
1.293
fournisseur
0.8
E
laboratoire (cf.
source3)
U
1.6 (SFBC) conforme
Sérum PCC2 40 3.365 0.0376
1.118 0.9
I Q1.6 (SFBC) conforme
N
R O
C T
Essai sur site – résultats de la variabilité
…
L E
E
N
Nombre
de
Valeur
I O
Cible Biais (%)
Moyenne
générale
Biais (%) Biais (%)
Echantillons
valeurs
moyenne
Labo
S(groupe
de pairs)
/groupe
de pairs
(toutes
/ moyenne
générale limite1
Conclusion5
ER
(N) techniques)
Echantillon 1,7
CIQ niveau 1
89 2,171 2,183 -0,50 % / -0,87 %
(SFBC)
conforme
Echantillon
CIQ niveau 2
90
V 3,349 3,384 -1,00 % / -0,92 %
1,7
(SFBC)
conforme
LA


Cible Biais (%)
Echantillons Cible Biais (%)
Valeur (toutes / toute Biais (%)
BIORAD (groupe / groupe Conclusion2
Labo technique techniqu limite1
EQUAS de pairs) de pairs
s) e
Acceptable/
Cycle 12
2.09 2.16 2.13 -3.24 -1.88 2.3 toutes
échantillon 1
techniques
Acceptable/
Cycle 12
3.14 3.23 3.17 -2.79 -0.95 2.3 toutes
échantillon 2
techniques
Cycle 12 2.3
4.03 4.12 4.02 -2.18 0.25 conforme
échantillon 3 (SFBC)
Cycle 12
échantillon 4
1.43 1.46 1.45 -2.05 -1.38
2.3
(SFBC)
conforme
I
FO
Cycle 12
3,15 3,22 3,16 -2,17 -0,32 2,3 conforme
échantillon 12 (SFBC)
Cycle 13
échantillon 1
3,1 3,11 3,08 -0,32 0,65 2,3
(SFBC)
conforme
I T
pairs mais écart faible sans impact clinique (∆ <0.09 mmol/L)
F A
Argumentaire de la conclusion : conforme /toutes techniques. Echantillons 1 & 2 > limite acceptable/ groupe de

U E
Applicable
I
; non applicable (à justifier) Q
Vrais positifs N /
Faux positifs
Valeur prédictive négative
R O
Valeur prédictive positive
Argumentaire de la conclusion : technique quantitative
C T
L E
INCERTITUDES DE MESURE (niveaux, choix du mode de calcul, interprétation)
E Incertitudes calculées Exigence de performances

N
I O Calculée à partir de la fidélité
R S
Mode de calcul (cf. SH GTA 14) : souhaitable et biais souhaitable
(Ricos, 2014)
Exigence fournisseur : 6,3%
(niveau 1) :
V E
Quantification de l'incertitude 1.76 ± 0.098 mmol/L ou 1.76 ± 5.587 %
Quantification de l'incertitude 3.365 ± 0.130 mmol/L ou 3.365 ± 3.889 %
LA
(niveau 2) :
Argumentaire de la conclusion (impact sur la zone décisionnelle ?) : Incertitude calculée > erreur totale
souhaitable RICOS (2,55%). Incertitude de l’ordre de 5% sans impact sur l’interprétation des résultats est
désormais intégrée dans la procédure de validation.
Référence : Validation of methods for routine biochemistry analytes at analyzer series module c501
Biochemia medica, 2011, 21, 182-90 : erreur totale 6,3%
2 Conforme/non conforme, argumentaire de la conclusion


Limite de détection : LD trouvée ou référence bibliographique

Argumentaire de la conclusion : portée A
Données
bibliographiques
(fournisseurs,
Données fournisseur
I
FO
publications, …)
Méthodes comparées :
méthode précédente,
autre méthode utilisée
dans le laboratoire,
I T
Analyseur 1 (ancien appareil du laboratoire) versus Analyseur 2 6000 N°1
appareils en miroir ou
back-up, EBMD, …
Nombre de mesures : 41 FA
Intervalle de
comparaison adaptée à
l’étendue des mesures U E
De 1.4 mmol/L à 4.1 mmol/L
du laboratoire :
Méthode d'exploitation I Q
des résultats :
N
Droite des moindres rectangles
Equation de la droite
de régression : O
y = 0.98x + 0,0 ; r=0.997
R
0,4 C T
Diagramme des différences (normes de suivi SFBC)
L E
MODULAR-COBAS
0,2
E
0,0
N
1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5
I O -0,2
Exploitation des
résultats de S
ER
comparaison
-0,4
Analyseur n°1
(diagramme de
V
différences,
concordance
Diagramme des rapports
LA
catégorielle) :
1,05
MODULAR/COBAS
1,00
0,95 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0 4,5
0,90
0,85
0,80
Analyseur n°1


Limite de détection : NA
Limite de quantification : (Fiche technique fournisseur CA2 05061482 190 2013-10, V 3.0
Français)
LQ = 0,20 mmol/L
Limite supérieure de linéarité : (Fiche technique fournisseur CA2 05061482 190 2013-10, V 3.0
Français)
Limite de linéarité : 5,00mmol/L
Argumentaire de la conclusion : convient aux besoins du laboratoire
I
FO
I T
Hémolyse
Turbidité
A
(Fiche technique fournisseur CA2 05061482 190 2013-10, V 3.0 Français)
Pas d’interférence si indice H < 1000 soit 621 µmol/L d’hémoglobine
F
Bilirubine, ictère E
Pas d’interférence si indice L < 1000
U
Pas d’interférence si indice I < 60 soit 1026 µmol/L de bilirubine
Médicaments
I Q
Pas d’interférence décrite
N
R O
T
C
L E
Inter échantillon pour les paramètres sensibles (par /
exemple Ag HBS, HCG, …) :
E
Inter réactif si nécessaire (par exemple : LDH et /
N
ALAT, cholestérol et phosphate, lipase et
I O
Argumentaire de la conclusion : non pertinent pour le paramètre Ca
R S
V E ROBUSTESSE et STABILITE des REACTIFS
LA
Paramètres sensibles testés (t°, pH, position sur un /

support, …)
Stabilité des réactifs après ouverture, embarqués, /
…
Argumentaire de la conclusion : non indispensable en portée A
INTERVALLES de REFERENCE et/ou valeurs seuils

(étude expérimentale indispensable en portée B en fonction des données démographiques)
Fiche technique fournisseur CA2 05061482 190 2013-10, V 3.0 Français
Valeurs de référence
(cf tableau description de la méthode)

Conclusion : méthode conforme répondant aux critères retenus par le laboratoire et utilisée à partir
du 11 juin 2014
Autorisée par : AML Biologiste responsable technique

Signature :
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

10.4 Exemple portant sur la recherche d’anticorps érythrocytaires

(Dépistage)

Recherche d’Agglutinines Irrégulières Dépistage (RAID)
sur automate XX du site de XX N° série XX
Vérification en portée A
Vérification initiale réalisée du XX/XX/XXX au XX/XX/XXXX sur le site de XXXX
I
FO
DESCRIPTION DU PROCESSUS I T
Modalités de vérification/validation :
F A
Recherche
1. Répétabilité
2. Fidélité intermédiaire
U E
3. Variabilité inter-opérateurs
d’Agglutinines 4. Justesse
I Q
Irrégulières
Dépistage
5. Exactitude
N
(RAID)
sur automate
Éléments à
(argumentation)
vérifier
R O
6. Sensibilité et spécificité analytique
7. Incertitudes
XX du site de
XX N° série
C T
8. Etendue de mesure
9. Comparaison de méthodes
XXXXX
L E 10. Interférences
11. Contamination
E 12. Robustesse et fiabilité des réactifs

13. Intervalle de référence
N
I O
Pour chaque étape, le laboratoire procèdera à la vérification / validation des items attendus, et
R S
dupliquera autant que de besoin les pages 2 à 8 (évaluation des performances de la méthode) du
présent document. Si un autre élément du processus lui semble critique, il devra vérifier / valider cette
V E
étape et le préciser dans la conclusion argumentée. C’est cette vérification qui lui permettra de maitriser
ce point critique.
LA
Argumentaire (le cas échéant) :
1
Note : Pour la vérification/validation de méthodes quantitatives, le renseignement des items 1, 2, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12 et 13
est attendu a minima. Pour la vérification/validation de méthodes qualitatives, le renseignement des items 3, 6, 8, 9, 10, 11, 12 et
13 est attendu, a minima.
Le types de vérification (bibliographique ou essais) est à indiquer.
L’absence d’applicabilité de certains items (NA) doit être justifiée dans le corps du document.

SOUS-PROCESSUS 1 :
Recherche d’Agglutinines Irrégulières Dépistage (RAID)
sur automate XX du site de XX N° série XX
Analyte / Mesurande :
Dépistage d’anticorps (Ac) circulants dirigés contre des
antigènes (Ag) érythrocytaires (via un panel de
dépistage) autre que ABO
Principe de la Méthode : Hémagglutination dans microplaque avec lecture
I
FO
automatisée des agglutinats par caméra.
Les hématies-tests du panel pré-magnétisées sont mises
I T
en contact avec le sérum ou plasma du patient avec un
diluant à la surface d’un gel distribué au préalable dans
antiglobuline anti-IgG.
F A
les puits d’une microplaque où est adsorbée une
U E
Après une incubation de 20 minutes à 37°C, la
microplaque est placée sur une plaque aimantée. Les
I Q
hématies migrent rapidement (à travers le gel) au fond du
puits, tandis que les éventuels anticorps libres
N
plasmatiques restent à la surface et n’interfèrent pas avec
l’antiglobuline.
R O
Après agitation, les hématies libres forment un point au
C T
fond du puits (réaction négative), alors que les hématies
sensibilisées adhèrent à l’antiglobuline et forment une
couche cellulaire plus ou moins grande (réaction positive).
L E L’automate sécurise le lien échantillon – support
E réactionnel – résultat (lecture automatisée des

agglutinats par caméra) et assure la traçabilité des
N réactifs utilisés.
Type d'échantillon primaire :
I O Sang total
R S Tubes utilisables :
- Sang recueilli sur EDTA, citrate ou héparine et
V E
sur tube sec.
Centrifugation des échantillons (préconisation Centrifugation pour séparer les phases plasmatiques et
LA
fournisseur) = 5min – 2500g globulaire.
Unités :
Pas d’unité : analyse qualitative
Critères d’interprétation21 : Résultat qualitatif exprimé en termes d’intensité de
l’agglutinat : réaction sous la forme de croix sur échelle
discontinue de valeur, de « - à ++++ » et « ? » pour des
résultats « non-interprétables » (anticorps faible,
interférences liées à l’échantillon…).
Oui


L’automate est un système d’analyse entièrement
automatisé.
Ces équipements font l’objet d’étalonnage et de
Le logiciel embarqué permet l’obtention du résultat qui
vérification métrologique selon la « Procédure
est transféré au concentrateur de données puis vers SIL
générale de métrologie »
du laboratoire.
Instruments intermédiaires :
- Centrifugeuse d’échantillons primaires
- Enceinte thermostatée à 5°C +/-3°C pour le
stockage des réactifs
- Enceinte thermostatée à 5°C +/-3°C pour le
stockage des échantillons sanguins après
analyse
Informatique : I
FO
- SIL du laboratoire
- Concentrateur de données
I T
F A
Panel d’hématies-tests prêt à l’emploi
E
Supports réactionnels / Diluants
U
I Q
N
R O
C T
CIQ comprenant :
- Anti-RH1 (anti-D) de titre ≤4
L E - Anti-FY1 (anti-Fya) de tire ≤4
Pour le test de contamination : anti-RH1 (D)

E
N Pour la limite de détection : anti-RH1 (D) humain
I O
S
ER
Contrôle Qualité Interne (CQI) :
valeurs :
- CIQ quotidien (1fois par jour)
V Evaluation Externe de la Qualité (EEQ)
LA
- 4 par an pour la RAI

MISE EN ŒUVRE
compétent(s) ayant réalisé la Techniciens habilités du laboratoire, stagiaire IUT et
vérification/validation de méthode : cadre médico-technique du laboratoire du site.
« Procédure de choix et de vérification/validation d'une

méthode »
« Procédure de choix et validation des méthodes

d’analyses au LBM »
« Protocole de qualification d'un automate complet en I

FO
Immuno-Hématologie Erythrocytaire (IHE) »
I T
« Protocole de vérification/validation de méthode :
Recherche d’anticorps anti-érythrocytaires (RAI)
compatibilité (EDC) »
F A
dépistage et identification et Epreuve directe de
E
« Fiche simplifiée pour la vérification/validation de
méthode : RAI (dépistage et identification) »
U
I
érythrocytaires » Q
Mode opératoire « RAI : Dépistage d'anticorps anti-
N
O
« Protocole de validation du transfert informatique des
résultats d’analyses sur automates vers le logiciel
R
médico-technique »
C T
Procédure de gestion de la portée flexible :
L E « Procédure de gestion de la portée d'accréditation et
E de gestion du changement »
Période d’étude :
N
I O Sur le site,
Validation technique du XX/XX/XXX au XX/XX/XXXX
S
Date de 1ère utilisation :
ER
Sur le site de XXXX, 1ère utilisation le XX/XX/XXXX
V
LA


Moyens de maitrise
(formation du personnel,
vérification expérimentale,
Echelle
criticité22
laboratoire
Identité
Procédure nationale de
Identitovigilance « Gestion des identités
patients »
I
FO
« Procédure d'habilitation du
personnel LBM »
I T
F A
Procédure de « Prise de poste,
suspension et réhabilitation »
U E
Fiche « Critères
d'habilitation du
IHE »
et fiche
personnel
I
Formation et informationQ Procédure de « Maintien des
du personnel
N compétences du personnel
5
R O LBM »
Fiche de « Maintien des
C T compétences du personnel
LBM (hors biologistes) »
L E Procédure de « Gestion des

évaluations externes de la
E qualité au LBM »
N
I O Mode opératoire d’
S « Aide à la gestion des non

conformités des demandes
ER
Bons de demande d'examens et des
d’examens (prescription) prélèvements »
V Non-conformité à réception Mode opératoire de
LA
« Réception et enregistrement
des demandes d'examens IHE
au LBM»
Préparation du patient Information des patients et

préleveurs
Définir les modalités de « Manuel Prélèvement du
2 prélèvement. LBM »
Type de contenants Instructions de prélèvement

3 Formation des préleveurs
Critères d’acceptation/de refus
22 A préciser par le laboratoire, par exemple 1 non critique – 5 très critique ;


Moyens de maitrise
Echelle
criticité22
laboratoire
Nature et volume de Contrôle à réception « Manuel Prélèvement du
l’échantillon Tube de sang prélevé sur LBM »
tube EDTA.
3 Echantillons sanguins Mode opératoire de
I
FO
datant de moins de 72 « Réception et enregistrement
heures des demandes d'examens IHE
Volume suffisant au LBM »
Délai et température avant Gestion logistique
I T
Mode opératoire « Aide à la
traitement analytique
3
(navettes, enceintes de
transport)
F A
gestion des non conformités
des demandes d'examens et
des prélèvements »
Prétraitement : Conditions de U E
IQ
centrifugation, … centrifugation : Critères de centrifugation
Centrifugation de Mode opératoire de
3
N
l’échantillon primaire « Centrifugation des
Interférences
2500g
R O
pendant 5 minutes à
Formation des préleveurs

prélèvements avant analyse »
Instruction de formation du
C T
Contrôle à réception personnel
« Manuel Prélèvement du
L E LBM »
Mode opératoire de
E3
« Réception et enregistrement
N des demandes d'examens IHE

au LBM »
I O Mode opératoire d’« Aide à la
R S gestion des non conformités

des demandes d'examens et
V E des prélèvements »
LA


Moyens de maitrise
Echelle
criticité22
laboratoire
Conditions de Durée de conservation des Instructions de conservation :
conservation des échantillons après examen Instruction d’utilisation de
échantillons (t°, …) Reprise de travaux sur ces l’automate
Conservation des échantillons
I
FO
prélèvements – rajout Mode opératoire de « Rappel
d’examen Métrologie/suivi des des travaux non-conformes »
enceintes
Conditions
conservation
de
et
Enceintes thermostatées à
5°C +/-3°C pour le
I T
Mode opératoire de Gestion
des échantillons (conservation
d’utilisation des réactifs (t°,
…)
Ces équipements ont fait
stockage des échantillons
après analyse et pour le
stockage des réactifs
A
et destruction)
F
Procédure « Le circuit de
l’objet d’étalonnage et
vérification métrologique
selon la procédure
E
l’achat au LBM »
U
« Procédure de Gestion des
générale de métrologie
I Q Equipements Biomédicaux »
N « Procédure de Gestion de la
R O Maintenance Corrective des

Equipements Biomédicaux »
C T « Procédure de Gestion de la
Maintenance Préventive des
3
L E Equipements Biomédicaux »
E Contrats de maintenance
préventifs et curatifs
N Certificats d’étalonnage
(tachymétrie, gravimétrie,
I O température)
R S Enregistrements métrologiques
des enceintes réfrigérées : suivi
V E par le logiciel Labguard
Mode opératoire
LA
« Qualification des enceintes à
températures contrôlées »
Mode opératoire
« Maintenance et nettoyage du
matériel du laboratoire »
Mode opératoire « Conduite à

tenir en cas de panne d'un
matériel »
Milieu
Certificats d’étalonnage
(tachymétrie, gravimétrie,
température)


Moyens de maitrise
Echelle
criticité22
laboratoire
Exigences Conditions
environnementales pour le environnementales Exigences / manuel d’utilisation
matériel ou l’opérateur (statiques et/ou du fournisseur
dynamiques dans le temps) Instruction d’utilisation de
I
FO
Lecture à la lumière du jour l’automate
I T
environnementales : suivi par
le logiciel Labguard. La sonde
3
A
d’ambiance des laboratoires
F
est programmée sur 21°C +/-
3°C
U E
« Grille de qualification
I Q opérationnelle des locaux

transfusionnels »
N Procédure « Nature, utilisation
R O et gestion des contrôles

Milieu
internes de qualité au
Qualité de l’eau C T
Mesure de la résistivité /
laboratoire »
E
(équipements
stérilité
E L Traçabilité des vérifications

Matériel
/
Non applicable
N
O
)
S I
E R
V
LA


Moyens de maitrise
Echelle
criticité22
laboratoire
Surveillance des dérives Périodicité des
maintenances
Maîtrise des équipements Enregistrements des
(suivi métrologique, maintenances
Fiche « Opération de I
FO
raccordement, …)
maintenance »
Mode opératoire
I T
F A
matériel du laboratoire IHE »
Traçabilité métrologique
U E
« Procédure générale de
métrologie »
N IQ Cf. rapports de maintenance

préventive ou constat de
vérification
RO
3
CIQ/EEQ
La surveillance des dérives est
C T également effectuée par le

suivi des CIQ et EEQ
E LE Procédure « Gestion des

évaluations externes de la
qualité au LBM »
N
Matériel (équipements)
Procédure « Nature, utilisation
I O et gestion des contrôles

internes de qualité au
R S laboratoire »
V E Mode opératoire de « Gestion

des indicateurs qualité au
laboratoire »
LA Contamination Respect des conditions

opératoires du fournisseur
Bibliographie et/ou
enregistrement de l’essai sur
site
Instruction d’utilisation de
l’automate
Notice fournisseur
3
Procédure « Prise de poste,
« Critères et fiche d'habilitation

du personnel IHE »


Moyens de maitrise
Echelle
criticité22
laboratoire
Informatique embarquée 5 Paramétrage, étalonnage, Jeux d’essais des transferts
connexions, archivage des automates –Concentrateur de
Cf. Fiche de validation données, … données - SIL.
« Transfert informatique »
I
FO
réalisé le 27/10/2021 « Protocole de validation du
Non interprétation de transfert informatique des
l’automate nécessitant une résultats d’analyses sur
lecture par le technicien
(hémolyse, etc…)
I T
automates vers le logiciel
médico-technique »
F A
Enregistrements des jeux
d’essai
U E
Algorithmes décisionnels du
concentrateur de données
I Q Transfert automate
N
bidirectionnel du SIL vers
automate via le concentrateur
R O de données
T Mode opératoire « CAT en cas

de panne d'un matériel »
E C Mode opératoire « Conduite
E L tenir en cas de panne

informatique »
N Procédure « Fonctionnement
en mode dégradé dans le
I O LBM »
R S
V E
LA


Moyens de maitrise
Echelle
criticité22
laboratoire
Conservation et conditions Métrologie des enceintes Fiches fournisseur
d’utilisation (cartographie et suivi des Traçabilité métrologique
températures) « Grille de qualification
opérationnelle des locaux »
I
FO
environnementales. La sonde
I T
d’ambiance du laboratoire est
programmée sur un intervalle
Mode
A
de 21°C +/-3°C
F opératoire de
3
E
« Qualification des enceintes à
U
températures contrôlées »
I Q Mode opératoire de
N
matériel du LBM »
R O Procédure de « Prise de poste,
T suspension et réhabilitation »
EC
du personnel »
EL
N
I O
R S
V E
LA


Moyens de maitrise
Echelle
criticité22
laboratoire
Gestion des stocks 3 Acceptation à réception
des réactifs
Gestion des stocks
Procédure de gestion des
I
FO
stocks (y compris acceptation à
chaque livraison)
« Gestion des réactifs et
T
consommables au LBM »
I
F A
Procédure « Contrôle et
validation à réception des
réactifs et consommables »
U E
« Formulaire de contrôle à
réception de réactif, réactant et
I Q consommable »
N « Liste des réactifs et
R O fournisseurs critiques par

analyse et des fournisseurs de
T prestation pour le LBM »
EC
« Liste des analyses _
Matériel critique utilisé _
EL
Fournisseurs »
Mode opératoire
N « Réactovigilance »
I O Inventaire mensuel
R S Abonnement
V E
Reconstitution des
réactifs, étalons, contrôles
Métrologie des pipettes
Respect du mode
Traçabilité métrologique
Instructions de reconstitution
LA
/ opératoire de reconstitution Non applicable
et gestion des stocks (y
compris acceptation)
Limites de la méthode 5
(détection, quantification,
linéarité, interférences, …)
Données bibliographiques :
Notices, documents,
Méthode
spécifications du fournisseur
Causes d’incertitude de Calcul des incertitudes de

Méthode
mesure mesure (non quantifiable

pour les méthodes Non applicable : méthode
/
qualitatives) qualitative


Moyens de maitrise
Echelle
criticité22
laboratoire
Compétence et maintien Formation et évaluation
de compétence du des compétences du
personnel personnel, plan de
formation Enregistrements des
I
FO
compétences du personnel
« Procédure d'habilitation du
personnel LBM »
I T
Procédure « Prise de poste,
F A
U E
du personnel IHE »
« Maintien des compétences
I Q du personnel LBM (hors

biologistes) »
3
N
RO
« Suivi des compétences du
personnel LBM »
C T Attestation de formation
fournies par le fournisseur
E
Main d’ œuvre (Personnel)
E L Disponibilité du personnel
N pour assurer le respect de

la procédure (par exemple
Traçabilité de l’occupation des
postes de travail
I O tests à lecture subjective) Traçabilité de l’occupation des

postes dans le logiciel de
R S gestion du temps de travail
V E « Planning du service »
LA

Après analyses des points critiques, nous n’observons aucun risque résiduel.
Tous les points critiques relevés sont maîtrisés par les éléments indiqués et surveillés par le
laboratoire par le biais des Fiches de Non-Conformité.
Eléments de suivi mis en place :

- Surveillance des CIQ : « Nature, utilisation et gestion des contrôles internes de qualité
au LBM »
- Surveillance des résultats des EEQ : « Gestion de l'Evaluation externe de la Qualité du
LBM »
Eléments de dysfonctionnement et analyses de tendance :

- A travers les dysfonctionnements (FNC) : « Gestion des non-conformités, des
I
FO
réclamations clients et des dérogations »
- A travers les indicateurs : « Gestion des indicateurs qualité au laboratoire IHE »
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

Préciser le type et référence d'échantillon (échantillon contrôle, pool de sérum, …) : sang total
REPETABILITE
CV (%) retenu
Nombre
Echantillons de valeurs Moyenne CV (%) Conclusion24
type fournisseur laboratoire (cf.
(N)
source23)
CIQ 30 NA* NA* NA* NA* NA* Conforme
*méthode qualitative
I
FO
Méthode : 5 passages d’un même CIQ le même jour par le même opérateur dans les mêmes conditions sur 6 CIQ
différents
I T
Résultats :
Écha ntil l ons Opéra teur

Répétabi l i té
Da te Rés ul tat Concl us i on
F A
CQI UPR RH1
Yoa nn 20/04/2021
3+
4+
4+
3+
3+
3+
-
-
-
POS
POS
POS
U E
Conforme
Q
Lot 9171822
I
4+ 3+ - POS
4+ 3+ - POS
4+ 4+ -
N POS
RO
4+ 4+ - POS
SERA CQI D
Yoa nn 20/04/2021 4+ 4+ - POS Conforme
Lot 405000
4+ 4+ - POS
C T 4+
-
4+
3+
-
3+
POS
POS
LE
- 3+ 3+ POS
CQI UPR FY1
Yoa nn 20/04/2021 - 3+ 3+ POS Conforme
Lot 9171822
- 3+ 3+ POS
E -
-
3+
3+
3+
2+
POS
POS
SERA CQI FYA

N - 3+ 2+ POS
O
Yoa nn 20/04/2021 - 3+ 2+ POS Conforme
Lot 405000
S I -
-
-
3+
3+
-
1+
2+
-
POS
POS
NEG
ER
- - - NEG
CQI UPR NEG
Yoa nn 20/04/2021 - - - NEG Conforme
l ot 7111822
V -
-
-
-
-
-
NEG
NEG
LA
- - - NEG
- - - NEG
SERA CQI NEG
Yoa nn 20/04/2021 - - - NEG Conforme
Lot 405000
- - - NEG
- - - NEG
Performance attendue : répétabilité avec un maximum 1+ de différence entre les passages.

Conclusion : Répétabilité conforme aux performances attendues.

CV (%) retenu
Nombre
Echantillons de valeurs Moyenne
type
CV (%)
fournisseur laboratoire (cf. Conclusion5
(N)
source4)
CIQ 5 par CIQ NA* NA* NA* NA* NA* Conforme
Méthode : 5 passages d’un même CIQ en faisant varier le jour de passage sur 6 CIQ différents.
Résultats :
Fidélité Intermédiaire
I
FO
Échantillons Opérateur Date Résultat Conclusion
12/04/2021 3+ 3+ - POS
14/04/2021 3+ 3+ - POS
CQI UPR RH1
Lot 9171822
Yoann 15/04/2021 4+ 3+ - POS
I
conforme
T
20/04/2021
21/04/2021
12/04/2021
3+
3+
-
3+
3+
3+
-
-
3+
POS
POS
POS
F A
CQI UPR FY1
Lot 9171822
Yoann
14/04/2021
15/04/2021
20/04/2021
-
-
-
3+
3+
3+
3+
3+
3+
E
POS
U
POS
POS
conforme
21/04/2021
12/04/2021
-
-
3+
- I Q
3+
-
POS
NEG
14/04/2021 - -
N - NEG
RO
CQI UPR NEG
Yoann 15/04/2021 - - - NEG conforme
lot 7111822
20/04/2021 - - - NEG
21/04/2021
C
12/04/2021
14/04/2021
T -
4+
4+
-
4+
4+
-
-
-
NEG
POS
POS
LE
SERA CQI D
Yoann 15/04/2021 4+ 4+ - POS conforme
Lot 405000
20/04/2021 4+ 4+ - POS
E 21/04/2021
12/04/2021
4+
-
4+
3+
-
2+
POS
POS
N 14/04/2021 - 3+ 2+ POS
IO
SERA CQI FYA
Yoann 15/04/2021 - 3+ 2+ POS conforme
Lot 405000
20/04/2021 - 3+ 1+ POS
R S 21/04/2021
12/04/2021
-
-
3+
-
2+
-
POS
NEG
VE
14/04/2021 - - - NEG
SERA CQI NEG
Yoann 15/04/2021 - - - NEG conforme
Lot 405000
20/04/2021 - - - NEG
LA
21/04/2021 - - - NEG
Performance attendue : fidélité intermédiaire avec un maximum 1+ de différence entre les passages.
Conclusion : Fidélité intermédiaire conforme aux performances attendues

Mar
Sop
Aga Conforme
Ana
Cha
Méthode : 5 passages d’un même CIQ en faisant varier l’opérateur sur 6 CIQ différents.
Résultats
Variabilité inter-opérateur
Échantillons Opérateur Date Résultat Conclusion
I
FO
Marjorie 4+ 3+ - POS
Sophia 4+ 3+ - POS
CQI UPR RH1
Agathe 22/04/2021 3+ 3+ - POS Conforme
Lot 9171822
Anaïs 4+ 3+ - POS
I T
Charlène
Marjorie
Sophia
3+
-
-
3+
3+
3+
-
3+
3+
POS
F
POS
POS
A
CQI UPR FY1
Lot 9171822
Agathe
Anaïs
22/04/2021 -
-
3+
4+
3+
3+
U E POS
POS
Conforme
Charlène
Marjorie
-
-
4+
-
I-Q
3+ POS
NEG
CQI UPR NEG
Sophia - -
N - NEG
RO
Agathe 22/04/2021 - - - NEG Conforme
lot 7111822
Anaïs - - - NEG
Charlène - - - NEG
Marjorie
Sophia
4+
4+
C T 4+
4+
-
-
POS
POS
LE
SERA CQI D
Agathe 22/04/2021 4+ 4+ - POS Conforme
Lot 405000
Anaïs 4+ 4+ - POS
Charlène
Marjorie E 4+
-
4+
3+
-
2+
POS
POS
SERA CQI FYA
Sophia
N - 3+ 2+ POS
IO
Agathe 22/04/2021 - 3+ 2+ POS Conforme
Lot 405000
Anaïs - 3+ 2+ POS
R S
Charlène
Marjorie
-
-
3+
-
2+
-
POS
NEG
VE
Sophia - - - NEG
SERA CQI NEG
Agathe 22/04/2021 - - - NEG Conforme
Lot 405000
Anaïs - - - NEG
LA
Charlène - - - NEG
Performance attendue : variabilité avec un maximum 1+ de différence entre les opérateurs.

Conclusion : Variabilité inter-opérateur conforme aux performances attendues


Nombre Moyenne
valeurs Labo
de pairs) de pairs
(toutes
générale Limite4
(N) techniques)
NA, analyse qualitative

Valeur
Cible Cible Biais (%) Biais (%) /
Biais (%)
Conclusion5 I
FO
Echantillons (groupe (toutes / groupe toute
Labo limite4
de pairs) techniques) de pairs technique
EEQ Positif Positif positif NA* conforme
I T
F A
Méthode : Une approche de l’exactitude est réalisée par l’analyse des résultats d’EEQ
Conclusion : exactitude conforme aux performances attendues

U E
Critère de performance attendu : résultat identique au résultat attendu = 100% de concordance
I Q
N
R O
Vrais positifs
Applicable
159
C T
Faux positifs
L
2 E Fidélité
(VP/(VP+FP)*100 = 99%
Vrais négatifs E 220 Justesse
Faux négatifs N 19
((VP+VN)/(VP+VN+FP+FN))*100 = 95%
I O
Partie 1
R S
V E
Méthode : passage de 200 échantillons de spécificité connue (160 positifs et 240 négatifs) : comparaison entre le
résultat du dépistage sur automate et le résultat attendu en fonction de l’absence/présence d’anticorps dans le
LA
sérum du patient.
Résultats :
Fidélité : (VP/(VP+FP)*100 = 99%
Justesse : ((VP+VN)/(VP+VN+FP+FN))*100 = 95%
Critère de performance attendu : Une méthode qualitative est d’autant plus fidèle et juste que les valeurs sont
proches de 100%
Conclusion : Le dépistage RAI est une méthode juste et fidèle.

Partie 2
Stabilité des échantillons
Méthode : étude de la stabilité des échantillons par réalisation de l’analyse à J0, 24H à température ambiante, J7
à 5°C +/- 3°C (N°305584774,305585037,305584936,305584880,305585380,305592521,305592394 et CQI
réalisés sur le site)
Critère de performance attendu :100% de concordance : un test négatif doit rester négatif et un test positif doit
rester positif avec au maximum 1+ de différence entre les deux résultats
Résultats :
Stabilité des échantillons
J0 Conservation 24h à T° ambiante = J1 Conservation 7 jours à 5°C +/-3°C = J7
n° patient
Date Résultat Date Résultat Conclusion Date Résultat Conclusion
108424774 20/04/21 - - - NEG 21/04/21 - - - NEG conforme 27/04/21 - - - NEG conforme
108424740
108424707
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
I
FO
108424731
108424600
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
I T
NEG
NEG
conforme
conforme
A
108424750
108424758
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
- - -
- - - F NEG
NEG
conforme
conforme
108424898
108424871
108424901
20/04/21
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
- - -
NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
U
27/04/21
E - - -
- - -
- - -
NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
108424961
108424944
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
I
conforme
Q 27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
N
108425312
108425304
108425339
20/04/21
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
- - -
O
NEG
NEG
R
NEG
conforme
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
- - -
NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
108425321
108425401
108425380
20/04/21
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
C
- - -
T NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
- - -
NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
108430022
108430120
108430057
20/04/21
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
21/04/21
L E
- - -
- - -
- - -
NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
- - -
NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
108430081
108430065
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
E
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
108430031
108425363
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
NEG
NEG
N
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
108425266
108425240
20/04/21
20/04/21
-
-
-
-
-
-
I O NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
NEG
NEG
conforme
conforme
108425193
108424952
108425215
20/04/21
20/04/21
R
20/04/21
-
-
-
-
-
-
S-
-
-
NEG
NEG
NEG
21/04/21
21/04/21
21/04/21
- - -
- - -
- - -
NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
27/04/21
27/04/21
27/04/21
- - -
- - -
- - -
NEG
NEG
NEG
conforme
conforme
conforme
108425134
CQI : T-
CQI : Fya
CQI : D V E
20/04/21
14/09/21
14/09/21
14/09/21
-
-
4+
3+
-
-
-
3+
-
-
4+
-
NEG
NEG
POS
POS
21/04/21
15/09/21
- - -
- - -
15/09/21 4+ - 3+
15/09/21 2+ 3+ -
NEG
NEG
POS
POS
conforme
conforme
conforme
conforme
27/04/21
21/09/21
21/09/21
21/09/21
- - -
- - -
3+ - 3+
3+ 3+ -
NEG
NEG
POS
POS
conforme
conforme
conforme
conforme
LA
305584774 14/09/21 (+) 1+ (+) POS 15/09/21 (+) 2+ (+) POS conforme 21/09/21 (+) 2 (+) POS conforme
305584936 14/09/21 1+ 1+ 1+ POS 15/09/21 1+ 2+ 1 POS conforme 21/09/21 (+) 1+ 1 POS conforme
305584880 14/09/21 4+ 4+ (+) POS 15/09/21 4+ 4+ (+) POS conforme 21/09/21 4+ 4+ (+) POS conforme
305585380 14/09/21 - 3+ - POS 15/09/21 - 4+ - POS conforme 21/09/21 - 4+ - POS conforme
305592521 21/09/21 4+ 4+ - POS 22/09/21 4+ 4+ - POS conforme 28/09/21 4+ 4+ - POS conforme
305592394 21/09/21 4+ - - POS 22/09/21 4+ - - POS conforme 28/09/21 4+ - - POS conforme
108444783 04/05/21 2+ 2+ 2+ POS 05/05/21 2+ 2+ 2+ POS conforme 11/05/21 2+ 2+ 1+ POS conforme
108445194 04/05/21 1+ 3+ - POS 05/05/21 2+ 3+ - POS conforme 11/05/21 2+ 3+ - POS conforme
108447111 05/05/21 (+) 1+ - POS 05/05/21 1+ 1+ - POS conforme 12/05/21 1+ 1+ - POS conforme
Conclusion : Stabilité des échantillons conforme aux performances attendues.


Exigence de
performances
Méthode : Une analyse de risque est réalisée tout au long du processus

Critère de performance attendu : absence d’interférence résiduelle
Résultats : les éléments vérifiés lors de la validation de méthode montrent qu’il n’y a pas de risque résiduel.
Conclusion : incertitude de mesure conforme aux performances attendues.

(Étude expérimentale possible si pertinente en portée A)
I
FO
I T
Méthode : RAI dépistage sur automate réalisé sur une gamme de dilution préparée à partir de l’étalon de référence
anti-RH1 standard (INTS)
Critère de performance attendu : détection d’un anti-RH1 à 10ng/mL
F A
Résultats : détection de l’anti-RH1 entre 0,288 et 0,575ng/mL
Limite de détéction U E
Dilution Concentration en ng/mL
I Q Qwalys
0 920,000
N
RO
1 18,400 2+ 4+ -
2 9,200 2+ 3+ -
3
4 C T
4,600
2,300
1+
(+)
2+
1+
-
-
5
L E 1,150 (+) (+) -
6
7 E 0,575
0,288
-
-
(+)
-
-
-
N 8 0,144 - - -
I O 9 0,072 - - -
R S 10 0,036 - - -
E
Conclusion : Limite de détection conforme aux critères de performance attendu.
V
LA

Fiche technique fournisseur

publications,…) :
« Liste des documents externes et bibliographie »
Méthode précédente, autre méthode utilisée dans le Automate de référence comparé aux deux autres
laboratoire, appareil en miroir ou back-up, EBMD : automates du LBM
Nombre de mesures :
Site pilote :
• Au moins 20 échantillons dépourvu de tout allo « Protocole de vérification/validation de méthode :
anticorps avec l’ancienne méthode Recherche d’Anticorps anti-érythrocytaires (RAI)
• Au moins 20 échantillons de patient immunisés
(les spécificités des anticorps doivent regrouper
dépistage et indentification et épreuve directe de
compatibilité » I
FO
les systèmes les plus immunogènes (RH, KEL,
FY, JK et MNS), inclure des anticorps de faible « Fiche simplifiée pour la vérification/validation de
concentration réagissant uniquement avec les
hématies homozygotes pour l’antigène
I T
méthode : RAI dépistage et identification »
correspondant
F A
mesures du laboratoire : E
« Protocole de vérification/validation de méthode :
Recherche d’Anticorps anti-érythrocytaires (RAI)
U
dépistage et indentification et épreuve directe de
Critère de performance attendu :
I Q
compatibilité »
100% de concordance entre les méthodes
comparées en terme de positivité. N
« Fiche simplifiée pour la vérification/validation de
R Ométhode : RAI dépistage et identification »
Méthode d'exploitation des résultats :

Equation de la droite de régression :
C T NA, analyse qualitative
L E
Diagramme des différences et/ou des rapports : NA, analyse qualitative
E
N
Méthode : Etude de corrélation (comparaison de méthode) entre les automates.
Critère de performance attendu :100% de concordance en termes de positivité.
I O
Résultats : Sur 400 échantillons testés, 27 discordances décrites ci-dessous :
R S
V E
LA
• Parmi les 12 échantillons retrouvés pos sur l’automate de référence et neg en technique carte gel : 3 anti-
RH1 et 1 anti-JK1 en limite de méthode, 4 faux positifs, 1 anticorps anti-Cw dont la détection n’est pas
une obligation réglementaire en dépistage, 1 anti-MNS2, 1 anti-JK1 et 1 anti-FY1 de faible intensité.
• Parmi les 15 échantillons retrouvés neg sur l’automate de référence et pos en technique carte gel : 6
anticorps dont la détection n’est pas une obligation réglementaire en dépistage (2 anti-LE, 1 anti-P1, 2
anti-RH8, 1 anti-KEL3), 2 anti-MNS1 et 2 anti-RH3 de nature IgM , 1 faux positif, 1 anti-KEL1 et 1 anti-
MNS3, 1 anti-E et anti-C en limite de méthode.
Les discordances sont acceptables après analyse compte tenu du fait que chaque technique présente ses propres
limites de détection.
Conclusion : Comparaison de méthode conforme aux performances attendues



Hémolyse
I
FO
Fiche technique fournisseur :
ictère
« Manuel Prélèvement du LBM »
lipémie
« Gestion des non-conformités à réception des demandes d’examens »
I T
microtube
daratumumab
« Bon de demande d'examens »
F A
U E
I Q
Méthode : Si possible, réalisation d’une analyse de risque en testant des échantillons de patients particuliers
(hémolyse, traitement, microtubes)
N
Critère de performance attendu : absence d’interférence pour patients particuliers testés.
R O
Interférence
n° patient Particularité
T Date Résultat Conclusion
EC
108108442 Microtubes 12/04/2021 Conforme Pas d'interférence
EL
108416372 N Microtubes 12/04/2021 Conforme Pas d'interférence
I O
108416534 Plasma hémolysé 14/04/2021 Conforme Pas d'interférence
S
ER
V 108418260 Plasma hémolysé 15/04/2021 Conforme Pas d'interférence
LA 108423131
108434729
Plasma très hémolysé
Plasma très hémolysé

21/07/2021
23/04/2021
Conforme
Conforme
Pas d'interférence
Pas d'interférence
404289870 Traitement Daratumumab 15/04/2021 Conforme Pas d'interférence
Conclusion : l’hémolyse, les microtubes ainsi que le traitement par Daratumumab n’entrainent pas d’interférences
sur la RAID : résultat conforme aux performances attendues.


(Étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour les paramètres sensibles)
Méthode : L’absence de contamination a été vérifiée en analysant 8 échantillons positifs (CIQ anti-RH1) alternés
avec 8 échantillons négatifs
Performance attendue : absence de contamination inter échantillon (résultat négatif reste négatif et résultat positif
reste positif)
Résultats :
Ordre de
passage sur N°Patient Résultat Conclusion
I
FO
l'automate
9000800680 Positif
9000800698 Positif
I T
1
9000800701 Positif
9000800710 Positif
F A
9000800728 Positif
9000800736 Positif
U E
9000800744 Positif
I Q Conforme = pas de
9000800752 Positif
N contamination inter-
9000800761 Négatif
9000800779 Négatif
R O échantillons
9000800787 Négatif
9000800795 Négatif
C T
2
9000800809 Négatif
L
9000800817 Négatif
E
E
9000800825 Négatif
N
9000800833 Négatif
I O
S
Conclusion : L’étude montre l’absence de contamination inter-échantillons ce qui est conforme aux performances
attendues. Au-delà de l’étude, pas d’impact étant donné que chaque dépistage positif donnera systématiquement
R
lieu à une identification.
V E
LA


(Étude expérimentale indispensable en portée B)
(Étude expérimentale possible si pertinente en portée A pour les paramètres sensibles)
Paramètres sensibles testés (t°, pH, position sur un Fiche technique fournisseur
support, …) Respect des exigences fournisseurs
Stabilité des réactifs après ouverture, embarqués, Fiche technique fournisseur
… Respect des exigences fournisseurs
NA, respect des recommandations fournisseur.
Les fiches techniques des réactifs (en particulier celle des hématies) indiquent les conditions de conservation
(durée, température) : les réactifs sont utilisés selon les recommandations du fournisseur.
I
FO
I T
Applicable
; non applicable
F A
NA, analyse qualitative.
U E
I Q
N
O
R
Conclusion :
C T
L’ensemble de ce rapport permet de déclarer « conforme » la méthode de Recherche
XXXX à partir du XX/XX/XXXX

L E
d’Agglutinines Irrégulières Dépistage (RAID) sur automate XX N° série XXXXX sur le site de
Autorisée par : YYY YYYY – XX/XX/XXXX E

N
Signature
I O
R S
V E
LA

11 TESTS STATISTIQUES A L’USAGE DE LA

VERIFICATION/VALIDATION DE METHODES
La distribution des valeurs biologiques est définie par sa moyenne et sa variance (écart-type).
L’objet de cette annexe est de proposer des outils statistiques pour confronter les
caractéristiques des distributions.
L’objectif n’est pas de fournir des bases mathématiques mais d’illustrer avec des cas
d’application comment choisir le test statistique le plus adapté au plan expérimental.
11.1 Répétabilité, Fidélité intermédiaire : détermination de l’intervalle de

confiance du CV I
FO
11.1.1 Qu’est-ce qu’un intervalle de confiance ?
I T
F A
Au préalable de la comparaison de moyennes ou deux écart-types ou deux CV, il est important
de définir l’intervalle de confiance (IC). Le seuil de 95% IC fait aujourd'hui l'objet d'un
U E
consensus pour de nombreux domaines, il signifie qu'on admet un risque d'erreur de 5%. Un
intervalle de confiance à 95% est une plage de valeurs pour laquelle il est certain à 95% qu'elle
contient la vraie moyenne de la population.
I Q
N
Plus la taille de l’échantillon (n) est importante plus l’intervalle est fin avec un même degré de
confiance (Cf. Figure 1)
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA
Figure 1 : Impact de la taille de l’échantillon sur l’intervalle de confiance.

11.1.2 Détermination d’un intervalle de confiance
Intervalle de confiance
n > 30 échantillons Ecart type (n ≤ 30 échantillons)
𝑠 𝑠
Moyenne ICm = ± 𝑡 × ICm = ± 𝑡 × avec ddl = n-1
√𝑛 √𝑛
𝑠
Ecart type ICs = ± 𝑡 × Borne inférieure (coefficient KI) =
√2𝑛
𝑛−1
√2 1−𝛼
2
Borne supérieure (coefficient KS)

𝑛−1
=√ 𝛼
2 2 I
CV% ICCV% = ± 𝑡 ×
𝑠
√2𝑛 FO
Borne inférieure (coefficient KI) =
I T
𝑛−1
√2 1−𝛼
2
F A
Borne supérieure (coefficient KS)
U E =√
𝑛−1
2 2
𝛼
Pourcentage
IC% = ± t x √
𝑝(1−𝑝)
I Q
n = nombre d’échantillons,
𝑛
N
m = moyenne
s = écart type,
R O
CV coefficient de variation
C T
t = coefficient recherche dans la table t de Student en fonction du nombre de degré de liberté ddl=n-
1
2
L E
E
N
Exemple : Un laboratoire a réalisé un essai de fidélité intermédiaire pour valider sa méthode
I O
de dosage de l’Afanitib par LC-MS/MS. Il obtient une première série de 10 résultats pour le
niveau 40 ng/mL qui est utilisée pour établir le CV de la méthode :
S
ER
nb d’essai 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Résultats 49,91 43,96 45,87 38,05 34,14 35,10 36,39 42,15 42,75 37,38
V
LA
Valeur moyenne de cet échantillon : m = 40,27
L’écart type : s = 4,612
CV% = 11,5, pour une limite acceptable de 15% pour le CV% (EMA 2011) le laboratoire conclut
à la conformité.
Calcul de l’intervalle de confiance de ce CV% :

• Compte tenu de l’effectif de cet échantillon qui est inférieur à 30, le laboratoire
détermine :
𝑛−1
- la borne inférieure (coefficient KI ) : 𝐾𝐼 = √ 𝛼
𝐾ℎ𝑖2 1−
2
𝑛−1
- la borne supérieure (coefficient KS) : 𝐾𝑆 = √ 𝛼
𝐾ℎ𝑖2
2

9
L’intervalle de confiance pour la borne inférieure avec KI = √ = 1,825 est de 9,4% avec le
2,70
calcul suivant : 0,115 – (1,825 x 0,115). Soit la borne inférieure du CV% = 20,9 – 11,5 = 9,4.
9
L’intervalle de confiance pour la borne inférieure avec KI = √ = 0,716 est de 19,7% avec
17,53
le calcul suivant : 0,115 – (0,716 x 0,115). Soit la borne supérieure du CV% = 11,5 + 8,2 =
19,7.
Conclusion : La conformité ne peut être déclarée si on considère l’intervalle de confiance IC

95%.
• Le laboratoire poursuit son essai de fidélité et obtient les 21 valeurs supplémentaires I

FO
suivantes (n = 31).
IT
nb d’essai 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
Résultats 38,18 44,47 41,46 43,73 34,73 36,81 41,29 45,01 41,98 43,20 46,70
nb d’essai
Résultats
22
49,20
23
37,20
24
38,90
25
37,03
26
41,20
27
42,32
28
45,00
29
43,20 FA 30
41,30
31
42,30
Valeur moyenne de cet échantillon : m = 41,22 U E

I Q
N
CV% = 9,50, pour une limite acceptable de 15% pour le CV% (EMA 2011) le laboratoire conclut
à la conformité.
R O
Le laboratoire détermine l’intervalle de confiance de son CV% selon la formule suivante
T
EC
𝐶𝑉
ICcv = ± t.
√2𝑛
n = nombre d’échantillon
m = moyenne EL
s = écart type N
I O
t = 1.96 (car n > 30 t est déterminé sur table de t de Student en annexe pour un risque α =
R S
0.05, bilatéral et un degré de liberté ddl n-1)
L’intervalle de confiance du CV% = 9.50 ± 2.37 (1.96 x 1.21) soit [IC95% 7.13 -11.87]
V E
Pour une limite acceptable de 15% pour le CV% (EMA 2011) le laboratoire conclut à la
conformité.
LA
Remarque : Il est également possible d’estimer l’intervalle de confiance pour des effectifs n<30
en utilisant la table de t Student.
En reprenant les résultats pour les 10 résultats :
Valeur moyenne de cet échantillon : m = 40,27
CV% = 11,5
L’intervalle de confiance peut être estimé à 11.5 ± 5.82 (tα= 0.05 ddl = 9 = 2.262) : [IC 95% = 5.68-
17.32]

11.2 Choix du ou des tests statistiques adaptés
Le choix d’un test statistique dépend de plusieurs facteurs notamment (Cf. tableau
ci-dessous) :
- La nature des variables,
- Du type de comparaison
- De l’effectif de l’échantillon (n)
Types de tests non

Tests paramétriques
paramétriques
Variables quantitatives
I
FO
Conditions
Type de comparaison Type de test Vérifications
de l’effectif
une moyenne à une
moyenne théorique effectifs de
chaque série Test Z
S’assurer de
I T
deux séries non
appariées
(n1 et n2)
doivent être
supérieurs à
(loi normale
centrée
réduite)
la normalité
de la
distribution F A
Wilcoxon-Mann-Whitney
Si n1 et n2 > 10
Wilcoxon
Comparaison de
moyennes
deux séries
appariées
30
des valeurs
U E Si paires de différence non-nulle

> 20
une moyenne à une
moyenne théorique
I Q
Variances
Effectifs
Test T de N des
de deux séries non
appariées
de deux séries
d’une séries
< 30
R O
Student
populations
doivent être
identiques
appariées
Vérifier l’égalité de
C T
variances dans un
test t de Student
L E Test de
Comparaison
Comparaison de
deux moyennes par E Fisher
de variances
une analyse de
variance N
I O
Comparaison de Kruskal Wallis
S
plusieurs moyennes
par une analyse de
R variance
ANOVA /
MANOVA
Si effectifs des séries > 10
Comparaison de V E Variables qualitatives
LA
deux pour des séries Test 2 de Mac Nemar
pourcentages appariées Si Le nombre de paires
observés sur discordantes doivent être > 10
deux échantillons
Comparaison des
sensibilités ou Test de Fisher ou Test de 2 de
spécificités en % Pearson
de deux tests Les effectifs théoriques > ou = 5
qualitatifs

11.3 Les tests paramétriques et épreuves de normalité

Les tests paramétriques contrairement aux tests non paramétriques fonctionnent en
supposant que les données dont on dispose suivent un type de loi de distribution connu, en
général la Loi normale. Il est donc prudent de s’assurer d’une distribution
normale principalement si le nombre de données est inférieur 30.
Epreuves de normalité
Il existe plusieurs types de méthodes fin d’éprouver la normalité :

• Méthode approchée : elle consiste à vérifier si la distribution observée possède
les propriétés d’une distribution normale et notamment :
- une moyenne = médiane
- un coefficient d’asymétrie (skewness) égal à zéro I
FO
- un coefficient d’aplatissement (kurtosis ou γ2) égal à 3.
Formule pour le calcul du coefficient d’aplatissement :

I T
F A
pointue.
U E
Un coefficient de Kurtosis < 3 est témoin d’une distribution aplatie et > 3 d’une distribution
Remarques :
I Q
N
Un coefficient de Kurtosis < 3 est témoin d’une distribution aplatie et > 3 d’une distribution
pointue.
R O
Dans un tableur Excel, ces coefficients sont facilement accessibles à l’aide des fonctions
T
fx= COEFFICIENT.ASYMETRIE et fx= KURTOSIS(nombre1, [nombre2], ...)
C
E
Le tableur Excel fournit un coefficient d’aplatissements normalisé de Fisher et la valeur doit
L
E
être égal à 0. Ainsi un coefficient de Kurtosis normalisé compris entre -1 et +1 permet
d’accepter la distribution gaussienne.
N
I O
•
R S
Méthode graphique : elle consiste à vérifier si l’histogramme fréquences relatives suit
•
V E
l’allure d’une courbe en cloche.
Méthode analytique : en se utilisant un test de Khi2 de normalité pour les tests
paramétriques ou des tests de Kolmogorov-Smirnov ou test de Shapiro Wilk pour des
LA tests non paramétrique.
Exemple d’utilisation des méthodes approchée et graphique
Contexte : Un laboratoire vérifie sa méthode de dosage de calcium et il a obtenu une série

de 30 valeurs.
nb d’essai 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Résultats 2,1 2,13 2,13 2,14 2,14 2,15 2,15 2,15 2,15 2,16
nb d’essai 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Résultats 2,16 2,16 2,16 2,17 2,17 2,17 2,17 2,17 2,17 2,18
nb d’essai 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Résultats 2,18 2,18 2,18 2,19 2,19 2,19 2,19 2,2 2,21 2,21

La moyenne est égale à 2,169 et écart type 0,026 soit un CV% = 1,21
Les données de l’état de l’art sont les suivantes :
- RICOS : valeurs souhaitables Imprécision (fidélité intermédiaire) = 1,05% et biais
= 0,8%.
- SFBC : reproductibilité 1,6% et biais 1,7%.
• Méthode graphique : cette méthode est simple à mettre en œuvre par

l’établissement d’un graphique en utilisant par exemple les fonctions
FREQUENCE (tableau_données ; matrice classes) et LOI.NORMALE (x ;
espérance, écart type, FAUX) sur Excel.
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C
distribution suit donc une Loi normale.
T
L’histogramme des fréquences relatives suit l’allure d’une courbe en cloche, la
E
Il apparaît visiblement une valeur aberrante, le résultat 2,1.
L
•
E
Méthode approchée : En utilisant le module « utilitaire d’analyse » d’Excel, il
est possible d’obtenir les statistiques descriptives ci-dessous (encadré « En
N
pratique » ci-après)
I O
S Statistiques descriptives
ER
Moyenne 2,167
Erreur-type 0,00434569
V
Médiane 2,17
LA
Mode 2,17
Écart-type 0,02380235
Variance de l'échantillon 0,00056655
Kurstosis (Coefficient d'aplatissement) -0,037
Coefficient d'asymétrie -0,258
Plage 0,1
Minimum 2,11
Maximum 2,21
Somme 65,01
Nombre d'échantillons 30

Les propriétés de la distribution indiquent que :

- La moyenne et la médiane sont identiques ;
- Le coefficient d’asymétrie est égal à 0,05 en l’absence de la valeur 2,10

- Le coefficient de Kurtosis normalisé est (-0,037) est compris entre -1 et +1.
Tous ces critères permettent d’accepter la distribution gaussienne.

Méthode analytique utilisant le test de Shapiro Wilk (test non paramétrique). Ce test est
réputé robuste à partir d’un nombre de valeurs n=7. Cependant avec un nombre
d’échantillons inférieur à 20, il existe un risque d’accepter l’hypothèse de normalité alors
que cette dernière n’est pas remplie.
∑(𝑎1𝑥(𝑖))^2
W = ∑(𝑥𝑖−𝑥𝑚)^2
I
ai = coeffcient de Shapiro-Wilk
FO
xi = est le rang ième valeur
xm = moyenne I T
F A
En se basant toujours sur le contexte plus haut avec les 30 valeurs issues du dosage de
calcium.
Calcul de W = 0.950 (n = 30)
U E
Calcul de W = 0.994 (n = 29 avec élimination de la valeur 2.10)
Valeur W critique = 0.927 (95%) et 0.900 (99%) pour n = 30
I Q
Valeur W critique = 0.926 (95%) et 0.898 (99%) pour n = 29
N
R O
W calculé > W critique de la table de Shapiro : l’hypothèse de distribution normale des données est
normale.
C T
acceptée avec un risque de 5% d’accepter une distribution de données ne suivant pas une loi
L E
L’absence de normalité des données peut être liée à la présence de valeurs aberrantes.
E
Les tests paramétriques sont puissants à condition que les données suivent effectivement la
N
loi de distribution supposée. Ils sont en particulier très sensibles aux valeurs aberrantes
I O
et ne sont pas conseillés si des valeurs aberrantes sont détectées et conservées dans
l’échantillon.
R S
E
En pratique pour utiliser l’utilitaire d’analyse sur Excel :
V
Sur un classeur Excel, cliquer sur l’onglet « Fichier ».
LA
Sur les choix proposés à gauche, cliquer sur « Option ».
Dans la boîte de dialogue qui s’ouvre, cliquer sur « Compléments » et tout en bas dans Gérer
Compléments Excel, cliquer sur « Atteindre ».
Choisir ensuite Analysis ToolPak et Complement Solveur puis cliquer sur « OK ».
L’utilitaire d’analyse apparaît dans la barre d’outils de l’onglet « Données » :

11.4 Valeurs aberrantes
Question pratique :
Dans la série de mesures, existe-t-il des valeurs aberrantes qu’il est raisonnable
d’éliminer ?
La réponse peut être apportée par le test de Grubbs.
Il existe plusieurs tests mais le test de Grubbs est le plus efficace pour des faibles
effectifs compris entre 6 et 50. Pour n>50, le test de Dixon est particulièrement
adapté.
I
11.4.1 Principe du test de Grubbs FO
I T
F A
Le Test de Grubbs présente un grand intérêt parce qu'il permet le rejet de deux points
aberrants dans une série de mesures ou le rejet d'une ou de deux moyennes par rapport à
une moyenne générale.
U E
I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
Ces résidus sont comparés aux valeurs critiques à 5% et à 1% (cf. table de Grubbs).
V E
Lien pour calcul automatisé : http://graphpad.com/quickcalcs/Grubbs1.cfm.
LA

11.4.2 Exemple
Une série de mesures a donné les valeurs suivantes classées par ordre croissant :
nb d’essai 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Résultats 2,11 2,16 2,17 2,17 2,17 2,17 2,17 2,17 2,17 2,17
nb d’essai 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Résultats 2,17 2,17 2,18 2,18 2,18 2,19 2,19 2,19 2,19 2,20
nb d’essai 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30
Résultats 2,20 2,20 2,21 2,21 2,21 2,22 2,22 2,23 2,23 2,32
Existe-t-il une valeur aberrante ?
n = 30 I
FO
Moyenne = 2,191
Ecart-type = 0,034
•
(2.32−2.191) I T
G2.32 =
0.034
= 3,724
F A
G valeur critique (α = 0.01/DDL = 30) = 3,103
G valeur critique (α = 0.05/DDL = 30) = 2,745 U E
I Q
La valeur 2,32 est une valeur aberrante (avec p < 0.01)
N
Existe-t-il une deuxième valeur aberrante ? R O
• G2.11 =
(2.186 − 2.11)
= 3,03 C T
0.025
L E
E
La valeur 2,11 est une valeur aberrante (avec p < 0.05)
Remarque : N
I O
Après avoir détecté la ou les valeurs aberrantes, l’élimination est justifiée au regard de sa
R S
signification. Exemple : une erreur grossière due à une inversion d’échantillon peut être éliminée
si elle n’est pas liée au principe de la méthode. A contrario, il peut être préférable de conserver
E
une erreur aléatoire liée à la méthode pour mieux la caractériser.
V
Le test Q de Dixon :
LA
Il est possible pour de grande série d’utiliser le test Q de Dixon notamment pour des séries de
plus de 50 observations. Il se base sur la distance entre X la valeur suspectée d’être aberrante
et celle qui la précède.
Pour n< 10 :
- Si Xi >= médiane (X) alors Qobs = Xi+1 – Xi / Xn-X1
- Si Xi =< médiane (X) alors Qobs = Xi – Xi-1 / Xn-X1
Pour n > 10 :
- Si Xi >= médiane (X) alors Qobs = Xi+2 – Xi / Xn-X3
- Si Xi =< médiane (X) alors Qobs = Xi – Xi-2 / Xn-X3
Si la valeur Qobs > valeur critique au seuil de 0,05 (r0,95 de la table de Dixon), la valeur est
suspectée est aberrante.

11.5 Comparaison de deux CV
Question pratique :
Le laboratoire possède 2 systèmes analytiques pour réaliser le même paramètre

biologique.
Les mêmes CIQ sont analysés sur les deux systèmes. Les CV sont-ils statistiquement
différents ?
La réponse peut être apportée par le test de Fisher - Snedecor.
I
11.5.1 Principe FO
I
Pour comparer 2 CV, on compare en fait les variances s²A et s²B estimées à partir des 2T
F A
échantillons de taille nA et nB. On utilise le test F de FISHER-SNEDECOR. Ce test consiste à
calculer le rapport des deux variances s²A / s²B (F calculé). On établit l’hypothèse nulle H0, que
U E
les deux variances dont sont issues les échantillons étudiés sont identiques : les deux
variances sont égales et leur rapport est égal à 1. La valeur F est comparée à la valeur seuil
(F théorique) donnée dans la table pour nA-1 et nB-1 degré de liberté (Cf. table de F). La
I Q
particularité de la table de Fisher est d’être présentée pour une hypothèse H1 unilatérale. Dans
N
le cas de la comparaison de deux variances le rejet de H0 au risque de 5% est donnée par la
variance la plus grande se place au numérateur.

R O
table  = 0.025. Pour obtenir p, on doit donc multiplier par 2 la valeur obtenue. Sur la table, la
C T
Si F calculé < F théorique les 2 variances ne diffèrent pas significativement.
E
Si F calculé ≥ F théorique les 2 variances diffèrent significativement.
L
E
Condition d’utilisation du test : la variable x doit être distribuée dans les 2 populations selon
une loi normale indifféremment de la taille des échantillons.
N
11.5.2 Exemples I O
•
R S
Comparaison de deux CV différents avec les statistiques suivantes pour
V E l’examen CK (UI/L) :
Appareil A Appareil B
LA
n 21 21
Moyenne 157,79 161,96
Ecart-type 5,658 1,509
Variance 32,012 2,277
CV 3,586 0,931
F = sA2/sB2 (ddl1 = n-1 et ddl = n-2 et en nommant SA2 la variance la plus élevée.
Fcalculé > Fthéorique2.5% : SA2 diffère significativement de SB2 avec un p <0.05 (5%)

Rejet de l’hypothèse H0 : les deux variances sont identiques (la différence observée provient
des fluctuations d’échantillonnage).
L’hypothèse H1 bilatérale est retenue : les deux variances (les deux CV) sont différentes.
Conclusion : Les deux systèmes analytiques présentent des fidélités statistiquement

différentes.
• Comparaison de deux CV identiques avec les statistiques suivantes pour

l’examen CK (UI/L) :
Appareil A Appareil B
n
Moyenne
21
157,79
21
161,96 I
FO
Variance 5,570 2,277
CV 1,496 0,931
I T
Fcalculé = 2,45 F A
Fthéorique (α = 0.025 ; 20/20 DDL) = 2,46
U E
I Q
Fcalculé < Fthéorique2.5% : SA2 ne diffère pas significativement de SB2 avec un p <0.05 (5%)
N
provient des fluctuations d’échantillonnage).
R O
L’hypothèse H0 est retenue : les deux variances sont identiques (la différence observée
C T
Conclusion : Les deux systèmes analytiques présentent des fidélités statistiquement
identiques.
L E
E
11.6 Comparaison de deux moyennes
N
I O
R S Question pratique :
V E
biologique.
Les mêmes CIQ sont analysés sur les deux systèmes. Les moyennes sont-elles
LA
statistiquement différentes ?
La réponse peut être apportée par le test t pour les cas où au moins une série <30 et
par le test z si les 2 séries sont > 30.
Les tests t est préconisé pour un nombre de valeurs < 30. Cependant le test t et le test z
sont utilisés pour un nombre de valeurs > 30 afin de déterminer si la moyenne d’une
série est significativement différente d’une moyenne de référence (exemple avec les
techniques d’HPLC) ou si la moyenne d’un automate est différente de la moyenne d’un
autre automate (exemple avec les techniques de spectrométrie).

11.6.1 Comparaison de 2 moyennes de CIQ mA et mB obtenues à partir de deux

échantillons de nA et nB valeurs (> 30 pour les deux échantillons)
Puisque les échantillons nA et nB sont tous les deux supérieurs à 30, il est possible d’utiliser le
test Z qui consiste à calculer Z (calculé) et à le comparer à la valeur seuil de 1.96 (pour un p =
0.05).
Z = |mA − mB|⁄Sd
avec Sd =√𝑠𝐴2/𝑛𝐴 + 𝑠𝐵2/𝑛𝐵

et SA2 = variance de l’échantillon nA, SB2 = variance de l’échantillon nB
I
FO
Si Z calculé < 1.96 : les deux moyennes de CIQ sont identiques et l’hypothèse H0 est acceptée
avec une probabilité de se tromper p < 5%.
I T
Si Z calculé > 1.96 : la différence entre les deux moyennes de CIQ est significative et l’hypothèse
H0 est rejetée avec une probabilité de se tromper p < 5%.
FA
Exemple : protéines urinaires (g/L)
U E
Appareil 1 Appareil 2 I Q
n 52 49
N
Moyenne
Ecart-type
0,459
0,031
R O
0,418
0,028
CV 6,753
C T 6,698
Z calculé :
L E
E
N
I
Z calculé > Z théorique (=1.96)O
R S
Conclusion : Les deux systèmes analytiques présentent des moyennes statistiquement
E
différentes avec une probabilité d’erreur p < 5%.
V
A Comparaison de 2 moyennes de CIQ m et m obtenues à partir de deux
L11.6.2 A B
échantillons de n et n valeurs avec au moins un des échantillons < 30
A B
Pour comparer 2 moyennes mA et mB estimés sur deux échantillons nA et nB avec au moins

un des échantillon ayant un effectif < 30, on utilise le test de Student qui consiste à calculer le
(t calculé) et à le comparer à la valeur seuil (t théorique) donné dans la table pour (nA+nB-2)
degré de liberté (Cf. table de t).
La loi t de Student est utilisée selon les conditions suivantes :
- Faire l’hypothèse que la distribution suit une loi normale
- Les variances SA2et SB2 sont comparables (SA2/SB2 < 3) à vérifier par un test F de
Fisher-Snedecor (Cf. 11.5)
- La taille des échantillons nA et nB sont comparables (nA/nB < 1.5)

t calculé = |mA − mB|⁄√𝑆𝑑
avec Sd = S2/nA +S2/nB

et S2 = variance commune aux deux échantillons = [(nA-1)SA2 + (nB-1)SB2] / nA +nB -2
ddl = nA+nB-2
Bilatérale :
- Si t calculé < t théorique 0.05, l’hypothèse H0 est retenue : mA n’est pas
significativement différente de mB.
- Si t calculé ≥ t théorique 0.05, les 2 moyennes diffèrent significativement.
Exemple : cholestérol (mmol/L)

I
FO
Appareil 1 Appareil 2
n 20 20
Moyenne 5,591 5,484
I T
CV 3,2 3,5
|5,591 − 5,484| FA
𝑡𝑐𝑎𝑙𝑐𝑢𝑙é =
√0,0344 + 0,0344
20 20
= 1,824
U E
t théorique (38 DDL) = 1,96
I Q
t calculé < t théorique N
différentes avec une probabilité d’erreur p < 5%. R O
Conclusion : Les deux systèmes analytiques présentent des moyennes statistiquement non
C T
Remarque :
L E
Si les conditions du test Z ou test t ne sont pas remplies, il est possible de comparer les moyennes
E
à l’aide du test de Wilcoxon-Mann-Whitney ou test de la somme des rangs qui a pour conditions
d’utilisation : nA et nB > 10 et pas trop de valeur ex/aequo. Il s’agit d’un test non paramétrique
N
basé sur les rangs des valeurs ordonnées.
I O
S
Il est nécessaire de classer les données des deux séries selon leurs valeurs de première à la
nième selon l’ordre croissant. Lorsque deux valeurs sont identiques, leur rang moyen ex aequo
est déterminé.R
V E
Par exemple dans la série suivante : …, 9 , 10, 10, 11, …
Il sera établi : 9 (rang 6), 10 (rang 7), 10 (rang 8), 11 (rang 9). Comme il y a un ex aequo, le
LA
classement devient 9 (rang 6), 10 (rang 7,5), 10 (rang 7,5), 11 (rang 9). 7,5 étant la moyenne des
rang 7 et 8.
Calcul pour déterminer le facteur W :

|𝑤1-wa |
W = 2
√S 𝑤1
W1 = somme des rangs d’une des séries = (série 1 ) et (série 2)

Wa = somme attendue = n1(N+1)/2
Variance de W1 = S2wi = n1n2(N+1)/12

En pratique :
Il est possible pour d’utiliser Excel pour le calcul de t et classement du test de rang.
t : =T.TEST( matrice 1 ; matrice 2 ; uni/bilatéral : type)

Uni/bilatéral : 1 = test unilatéral et 2 = test bilatéral
Type : type =3 pour un test Z et type = 2 pour un test t
Rang : Excel fonction rang

RANG (nombre; référence; [ordre]
Premier valeur classée =RANG(A1;A$1:A$40)
La valeur précise de p peut être aussi obtenue dans Excel : = LOI.STUDENT.BILATERAL(t

calculé ; ddl) I
FO
I T
11.6.3 Comparaison d’une moyenne observée à une moyenne théorique
FA
Le principe de cette comparaison repose sur l’évaluation de la différence entre la moyenne et
et la valeur de référence devrait être suffisamment éloignée de 0.

U E
celle de la valeur de référence ou plus précisément la différence entre la moyenne observée
I Q
Z=
| 𝑚 − µ|
avec Sµ =
𝑆𝑜𝑏𝑠
N
𝑆µ √𝑛
R O
On estime l’écart type de la référence, Sµ si non connu par l’écart type de l’échantillon :
T
EC
𝑆𝐴
Sµ =
√𝑛𝐴
EL
Exemple :
Un laboratoire souhaitant valider une méthode dosage de l’afanitib par LC-MS/MS au moyen
N
d’une solution de référence à la concentration de 5 ng/ml a obtenu les 18 valeurs suivantes :
I O
nb essais 1
S 2 3 4 5 6 7 8 9
ER
Résultats 5,90 5,80 5,75 5,03 5,77 5,07 4,31 5,43 4,74
nb essais
Résultats V 10
5,03
11
5,77
12
5,07
13
5,63 4,88
14 15
5,80
16
4,73
17
5,03
18
5,83
LA
Moyenne observée = 5,31
Ecart type observé sobs = 0.489
CV% = 9.21
• La taille de l’échantillon étant inférieur à 30, le test t de Student est utilisé

avec les hypothèses suivantes :
o Hypothèse nulle H0 : m = µ, la moyenne observée n’est pas statistiquement
différente de la moyenne de référence.
o Hypothèse alternative bilatérale H1 :m ≠ µ, les deux moyennes sont
statistiquement différentes.

On va déterminer si la différence des moyennes qui équivaut à 0.31 (5.31(m) – 5.00(µ)) est
suffisamment éloignée de zéro pour rejeter l’hypothèse H0.
Pour commencer, la valeur du t observé est calculé :
| 𝑚 − µ| 𝑆𝑜𝑏𝑠 0.489 0.489

t= avec sµ = = = = 0.115
𝑠µ √𝑛 √18 4.243
| 5.31 − 5.00|
t observé = 0.115
= 2.695
Puis, la valeur de t observé est comparée à la valeur t théorique obtenue à partir de la table t
de Student pour un degré de liberté ddl = 18-1 = 17.
I
t théorique (α = 0.05 et ddl = 17) = 2.110
FO
t théorique (α = 0.02 et ddl = 17) = 2.567
I T
t observé > t théorique : permet de rejeter l’hypothèse H0 : m = µ, les deux moyennes sont
statistiquement différentes avec p < 2%.
FA
• E
La taille de l’échantillon est supérieure ou égale à 30, le test Z (t théorique)
= 1.96 sera utilisé pour comparer la moyenne observée à une moyenne U
théorique
I Q
N
R O
t observé 2,695 > t théorique 1 ,96 : permet de rejeter l’hypothèse H0 = m = µ, les deux moyennes
sont statistiquement différentes.
C T
E
EL
11.7 Comparaison de deux séries de résultats (séries appariées)
11.7.1 Test t des différences
N
I O Question pratique :
R S
V E biologique.
Les mêmes échantillons patients sont analysés sur les deux systèmes. Les différences
observées sont-elles statistiquement significatives ?
LA La réponse peut être apportée par le test t des différences.
11.7.1.1 Principe
Les données des deux échantillons, de même effectif n, se présentent sous la forme de n
couples. Pour chaque couple on calcule la différence. On obtient n différences qu’on peut
considérer comme un échantillon aléatoire de la population des différences. On calcule la
moyenne des différences (md) et l’écart-type des différences (σd). Le problème se ramène
donc à la comparaison de la moyenne des différences à 0 (valeur de référence).
• Si n (nombre de pairs) ≥ 30 le Z sera comparé à la valeur théorique = 1.96
• Si n (nombre de pairs) < 30 Le t calculé sera comparé au t théorique avec (n-
1) DDL.

Ce test est applicable si les différences sont distribuées selon une loi normale. En
pratique, cette condition est difficilement applicable.
Ce tcalculé ou Zcalculé sera comparé respectivement au tthéorique ou 1,96 de sorte que :

- Si t calculé < t théorique ((nd-1) DDL): la moyenne des différences ne diffère pas
significativement de 0 (risque α).
- Si t calculé ≥ t théorique la moyenne des différences diffère significativement de
0.
I
FO
Ou
- Si Z calculé < 1.96 la moyenne des différences ne diffère pas significativement de
0 (risque α).
I T
-
F A
Si Z calculé ≥ 1.96 la moyenne des différences diffère significativement de 0.
E
11.7.1.2 Exemple de comparaison en utilisant un test t des différences
U
I Q
Un laboratoire réalise un dosage du cholestérol (mmol/l) sur 20 échantillons de sérums par
deux appareils puis établit un tableau de synthèse de comparaison des résultats obtenus,
étude des différences. N
Appareil 1 Appareil 2
R ODifférences (1-2)
5.2
3.6
5.14
3.66
C T 0.06
-0 .06
3.7
4.77
L E
3.96
4.72
-0.26
0.05
4.23
3.4 E 4.28
3.32
-0.05
0.08
3.6
N 3.29 0.31
I O5.9
3.5
5.85
3.47
0.05
0.03
R S 2.6
4.0
2.52
3.92
0.08
0.08
V E 4.5
7.4
4.32
7.06
0.18
0.34
LA
2.2 2.22 -0.02
4.3 4.56 -0.26
5.2 5.34 -0.14
6.0 5.84 0.16
3.5 3.61 -0.11
4.4 4.53 -0.13
1.4 1.46 -0.06
tthéorique ((nd-1)=19 DDL) = 2,093

tcalculé < t théorique, la moyenne des différences ne diffère pas significativement de 0.

Conclusion : les résultats des deux systèmes analytiques présentent des différences non
statistiquement significatives.
Remarque :
Le test t sur séries appariées est un test très sensible qui peut mettre en évidence des différences
très faibles, statistiquement significatives, qui n’ont pas d’impact sur le plan clinique.
Dans le cas général, le test est bilatéral.

Dans les cas où un laboratoire veut s’assurer de la comparaison seulement sur une partie (haute
ou basse) de la distribution, il utilisera l’interprétation unilatérale du test. Pour rappel, les
hypothèses selon le type de tests ci-dessous.
Bilatérale : I
FO
- Si T calculé < T5%: Hypoyhèse H0 les moyennes des 2 séries ne diffèrent pas
significativement.
- I T
- Si T calculé ≥ T5%: Hypothèse H1 : les moyennes des 2 séries diffèrent significativement.
Unilatérale :
F A
- Si T calculé < T10% : Hypothèse H0 les moyennes des 2 séries ne diffèrent pas
significativement
U E
- Si T calculé ≥ T10%: les moyennes des 2 séries diffèrent significativement.
I Q
N
R O
11.7.2 Test de concordance entre deux instruments
C T
Test de Bland-Altman
L E
D’après l’exemple du CRHUM :
E
crchum.chumontreal.qc.ca/.../crchum.../analyse_graphique_bland-altman
Contexte :
N
I O
On désire comparer deux instruments qui mesurent le même analyte biologique et on veut
savoir si les deux instruments sont concordants (« agreement »).
R S
Données :
V E
Soit dix sujets pour lesquels les mesures sont réalisées. Pour chaque sujet de 1 à 10, on a
LA
une mesure de chaque instrument à comparer.
On calcule la moyenne entre les deux instruments pour chaque sujet (colonne 3) et la
différence entre les deux instruments pour chaque sujet (colonne 4).
12
9,5
10

Graphique :
Un graphique de BLAND-ALTMAN permet de comparer les moyennes des mesures à leurs
différences. On porte sur l’axe des x les moyennes (colonne 4) et sur l’axe des y les différences
(colonne 5).
Pour calculer ce qu’on appelle les limites d’agrément (limits of agreement), il y a trois étapes :
1. Calculer d = moyenne des Différences (ici d = -0.2)
2. Calculer sdd = l’écart type des Différences (ici sdd = 2.25)
3. Calculer la limite inférieure et supérieure = d ± 2 sdd (ici d ± 2 sdd = -4.7 et 4.3)
I
FO
I T
F A
U E
I Q
N
R O
C T
Interprétation :
L E
E
La moyenne des différences « d » indique si un des deux instruments tend à produire des
valeurs systématiquement plus basses ou plus élevées que l’autre. Dans cet exemple d = -
N
0,2. Il semble donc que l’instrument 1 fournisse des valeurs un peu plus faibles que l’instrument
I O
2. Cependant, il faut s’interroger sur la signification de cette différence de -0,2 (voir le
S
paragraphe « Interprétation des limites d’agrément » ci-dessous).
R
V E
La valeur « d » est souvent présentée à tort comme le biais. En fait, on ne connaît pas la vraie
mesure pour chaque sujet, tout ce que l’on a, pour chaque sujet, ce sont deux valeurs qui
comportent probablement des erreurs de mesure. La moyenne entre ces deux valeurs est
LA
notre meilleure estimation de la valeur vraie. La valeur « d » est la moyenne des différences
entre les mesures de l’instrument 1 et celles de l’instrument 2. Si un des instruments donne la
valeur de référence, on peut considérer « d » comme la mesure du biais. Si aucun des deux
instruments n’est « de référence », alors on peut considérer « d » davantage comme une
différence systématique entre deux instruments qu’un biais.
Interprétation des limites d’agrément :

On s’attend à ce que la plupart de nos points se situent dans l’intervalle entre les limites
d’agrément d ± 2 sdd. Il faut donc savoir interpréter ces limites.
Important : les procédures reliées au graphe de Bland-Altman ne sont généralement pas

associées à des tests statistiques et ne produisent pas de valeur de probabilité « p ».
L’interprétation des limites d’agrément se fait en lien avec le contexte de réalisation du test
(intérêt clinico-biologie) non en comparaison avec des valeurs « de référence ». Avant de faire

le graphe de Bland-Altman, il faudra s’interroger sur la différence entre les deux instruments
que l’on considérera acceptable.
Dans l’exemple ci-dessus, si on considère que la différence acceptable entre deux mesures
obtenues par deux instruments est de ± 5 unités, alors les mesures obtenues sont considérées
comme similaires ou interchangeables, les 2 instruments sont concordants. Si la différence
acceptable avait été de ± 2 unités on aurait conclu qu’il n’y a pas de concordance (ou faible
concordance) entre les 2 instruments.
11.7.3 Droites de régression
Lorsque l’on dispose de couples de valeurs obtenues sur des spécimens de patients, on peut
I
FO
reporter sur un graphique orthonormé l’ensemble des données avec en abscisse la technique
prise comme référence et en ordonnée la technique à tester et rechercher la relation existante
entre elles. Il existe différentes modalités de calcul de la relation linéaire qui prennent plus ou
moins en compte l’ensemble des contraintes existant dans la comparaison de méthodes. Les
I T
méthodes de calcul suivantes conduisent à des droites de régression comparables :
F
- droite des moindres carrés (régression orthogonale) tableur Excel, A
- droite des moindres rectangles (droite d’allométrie),
o mx = moyenne de x et σx = écart type des x U E

o y = a.x + b avec a (pente) = σy/σx et b (intercept) = my – a.mx
I Q
o my = moyenne de y et σy = écart type des y
- droite de DEMING,
N
- droite de YORK,
- droite de PASSING-BABLOK.
R O
Exemple : comparaison de 2 méthodes de dosage
C T
Pour chacun des N sujets d’un échantillon, on dose simultanément la même substance par 2
méthodes X et Y.
L E
Sujet 1 2 3 E 4 5 6 7 8 9 10
Y 7,2 5,3
N
2,3 4,1 6,4 8,1 6,8 9,1 5,9 4,8
X 8,1 5,3
I O 2,9 3,8 7,1 7,4 7,7 8,7 5,9 5,2
D’après Appareils et méthodes en Biochimie de Pierre Kamoun – 3e édition, Médecine & Sciences, Flammarion
R S
On désire savoir si X et Y sont ou non des méthodes équivalentes. La question posée est : les
méthodes X et Y donnent-elles les mêmes résultats dans la population des sujets ? A-t- on
E
dans celle-ci X=Y ?
V
•
LA
Droite des moindres rectangles (droite d’allométrie) :
o mx = 6,21 et σx = 1,91221222
o my = 6,00 et σy = 1,98606255
o a (pente) = σy/σx = 1,98606255/1,91221222 = 1,03862036
o b (intercept) = my – a. mx = 6,00 - 1,03862036 x 6,21 = -0,4498
Equation de la droite d’allométrie :

Y = 1,039 x – 0,450

• Droite des moindres carrés, régression orthogonale, tableur Excel :
RAPPORT DÉTAILLÉ EXCEL
Statistiques de la régression
Coefficient de détermination
multiple 0,95787129
Coefficient de détermination R^2 0,91751741
Coefficient de détermination R^2 0,90720708
Erreur-type 0,60499299
Observations 10
CoefficientsErreur-type Statistique t I
FO
-
Constante b -0,17810933 0,68228633 0,26104778
Pente a 0,99486463 0,10546127 9,43345954
I T
Equation de la droite des moindres carrés :
F A
Y = 0,995 x – 0,178
Conclusion : U E
I Q
Si les 2 méthodes fournissent dans la population et aux variations aléatoires près, les mêmes
N
résultats, alors il existe une droite de régression théorique Y = 1.x + 0, c'est-à-dire de pente a
= 1 et d’ordonnée à l’origine b = 0.
R O
- Hypothèse a=1.
T
Les étapes de ce test sont les suivantes :
C
o H0 : a=1 et H1 : a≠1
(n-1)ddl L E
o le paramètre a-1/Sa suit sous H0 une loi de du test t Student avec
E
o pour un risque de 0,05 et et (n-1)ddl = 7, t=2,262
N
o tcalculé = -0,0052/0,10546 = -0,049
I O
t calculé < t théorique : hypothèse H0 acceptée, la pente n’est pas différente de 1.
S
ER
- Hypothèse b=0.
Les étapes de ce test sont les suivantes :
V o H0 : b=0 et H1 : b≠0
LA
o le paramètre b/Sb suit sous H0 une loi du test t de Student avec
(n-2)ddl pour un risque de 0,05 et (n-2)ddl = 8, t=2,306
o tcalculé = -0,178/0,6822 = 0,261
On peut donc conclure que les deux méthodes donnent des résultats équivalents.
La comparaison de la droite de régression obtenue à la droite théorique (y=x) peut être

simplifiée en utilisant les normes d’interprétation (NI) de la droite de régression proposées par
la SFBC. Ces normes correspondent, pour les trois niveaux de concentration définis, aux
erreurs systématiques maximales tolérables.
NI = 2*erreur de justesse

Exemple : acide urique
Valeur Justesse (%) NI

Niveau bas 150 µmol/l ± 7,1 ± 21
Niveau moyen 300 µmol/l ± 6,2 ± 37
Niveau élevé 450 µmol/l ± 5,3 ± 48
Pour les trois niveaux de concentration, les deltas entre les deux droites y=ax+b et y=x sont
inférieures aux normes d’interprétation. L’équation de la droite y=ax+b ne sera pas considérée
comme différente de y=x.
11.8 Comparaison de n séries de résultats (n opérateurs ou n analyseurs) I

FO
I T
La comparaison de plusieurs moyennes entre n groupes (pour n supérieur à 2, sinon un test t
de Student sera réalisé) peut être réalisée à l’aide de l’analyse de variance (Anova ou plus
précisément MANOVA) ou à l’aide d’un test F de Fisher-Snedecor.
F A
Il y a deux raisons pour utiliser l’Anova plutôt que plusieurs tests t :
U E
- le nombre C de comparaisons augmente de façon géométrique, il y a C*(C-
1)/2 comparaisons possibles. Par exemple, la comparaison de 4 moyennes
nécessite la réalisation de 6 tests t.
I Q
N
- le risque de trouver des résultats significatifs ne traduisant pas de réelle
O
différence peut être dû au hasard. Il peut être démontré que dans 27% des
cas l’hypothèse d’égalité sera rejetée alors qu’elle est vraie.
R
suivantes : C T
Comme le test t de Student, les conditions d’utilisation de l’ANOVA sont les
L E
- L’hypothèse que les distributions des différents groupes suivent une loi normale
- Les variances sont comparables (S2 la plus basse /S2 la plus élevée < 3) à vérifier par
E
un test F de Fisher-Snedecor (Cf. 11.5)
N
- La taille des échantillons nx sont comparables (nx la plus bas /nx le plus élevé < 1.5)
I O
La comparaison est basée sur l’établissement du facteur Fcalculé égal au rapport entre la
R S
variance inter groupe et la variance intra groupe. En effet, la variance totale de toutes ces
mesures peut être décomposée en variance intergroupes et en variance intra-groupes.La
V E
comparaison repose sur les hypothèses suivantes :
- Hypothèse H0 : les moyennes sont équivalentes : la variance inter
LA
groupes est faible et inférieure à la variance intragroupe : F calculé ≤ 1
- Hypothèse alternative H1 : les moyennes sont différentes : la variance inter
groupes est élevée et supérieure à la variance intragroupe : F calculé > 1.
Le nombre d’échantillon est nommé k et le nombre de mesures par échantillon est désigné
par n.
La valeur de F calculée est comparée à celle de la valeur théorique d’une table F de Snedecor,
à double entrée avec pour numérateur le [nombre k d’échantillon moins un] et pour
dénominateur le [nombre total de mesure kn –k]
Si l’Anova n’est pas significative, cela veut dire qu’au seuil choisi, il n’y a pas de différence
entre les moyennes. Si elle est significative, cela veut dire qu’au moins une des moyennes
diffère des autres.

Exemple :
Une comparaison basée sur l’établissement du facteur F égal au rapport entre la variance
entre les moyennes des 4 analyseurs (variances inter groupe) et la variance à l’intérieur d’un
groupe de 24 à 25 échantillons (variance intra groupe). Le tableau ci-dessous présente les
résultats obtenus avec les sommes, moyennes et variance de chaque série.
Echantillon Analyseur 1 Analyseur 2 Analyseur 3 Analyseur 4 Analyseur 5

1 3,37 3,37 3,39 3,34 3,39
2 3,37 3,38 3,39 3,41 3,39
3 3,37 3,4 3,41 3,42 3,39
I
FO
4 3,39 3,41 3,41 3,42 3,39
5 3,4 3,41 3,41 3,42 3,39
6
7
3,41
3,41
3,42
3,42
3,43
3,43
3,43
3,43
3,4
I
3,4 T
8 3,42 3,43 3,44 3,43
F A
3,41
9
10
3,42
3,43
3,43
3,43
3,44
3,44
3,44
3,45
U E 3,41
3,41
IQ
11 3,43 3,44 3,45 3,45 3,42
12 3,44 3,44 3,46
N 3,46 3,42
RO
13 3,45 3,45 3,46 3,46 3,43
14 3,45 3,46 3,48 3,49 3,45
15
16
3,46
3,48
3,46
3,46
C T3,51
3,52
3,5
3,51
3,45
3,46
LE
17 3,49 3,46 3,52 3,51 3,46
18
19
3,5
3,5 E
3,48
3,49
3,52
3,52
3,52
3,54
3,49
3,5
20 3,51 N 3,52 3,53 3,55 3,5
21
I O
3,52 3,53 3,53 3,57 3,51
22 S3,53 3,53 3,54 3,57 3,51
23
V
24 ER 3,53
3,53
3,58
3,62
3,55
3,6
3,63
3,64
3,52
3,54
25 3,68 3,69 3,66
LA
Il est possible de voir une un représentation graphique la dispersion des données par séries
afin de comparer les moyennes visuellement.

I
FO
I T
F A
E
A l’aide de l’utilitaire d’analyse Excel il est possible d’obtenir le rapport suivant :
U
RAPPORT DÉTAILLÉ
I Q
Groupes Nombre d'échantillons Somme
N
Moyenne Variance
RO
Colonne 1 24 82,81 3,45042 0,00289
Colonne 2
Colonne 3
25
25
C T 86,7
87,07
3,468
3,4828
0,005475
0,00506
LE
Colonne 4 25 87,25 3,49 0,0064
Colonne 5 24 82,64 3,44333 0,00243
E
N
ANALYSE DE VARIANCE
I O
Source des variations
R S
Somme des carrés Degré de
liberté
Moyenne des
carrés
F Probabilité Valeur
critique pour
F
Entre Groupes V E 0,03953 4 0,00988 2,20452 0,07263 2,44854
LA
A l'intérieur des groupes 0,52893 118 0,00448
Total 0,56846 122
F calculé = 2,20452
F théorique (2/57 DDL) = 2,448
Fcalculé < Fthéorique : les moyennes sont équivalentes, hypothèse H0 acceptée.
Conclusion : Les trois systèmes analytiques présentent des moyennes non statistiquement
différentes.

11.9 Vérification des concordances

https://www.graphpad.com/quickcalcs/kappa1/
Question pratique :
Le dosage qualitatif d’un même paramètre biologique est réalisé par deux techniciens
différents, sur les mêmes échantillons patients. Les résultats obtenus sont-ils concordants ?
La concordance ou la discordance des résultats entre opérateurs peuvent être mises en

évidence par le calcul du coefficient Kappa.
I
11.9.1 Principe
FO
I T
Afin de comparer deux mesures, obtenues par deux observateurs différents utilisant la même
F A
méthode (variables souvent qualitatives), il importe d’évaluer la proportion de résultats pour
lesquels il y a accord entre les observateurs. L'expression de cette concordance passe par le
U E
calcul d'un coefficient dit « kappa », qui est d'autant plus proche de 1 que la concordance est
bonne. A noter que même en cas d'observations effectuées au hasard (hypothèse
I Q
d'indépendance), on observe une concordance non nulle, dite « concordance aléatoire ».
Le calcul du coefficient kappa prend donc en compte la concordance observée Po (somme
N
des proportions diagonales du tableau), et la concordance calculée Pc (concordance attendue
sous l'hypothèse d'indépendance).
R O
C T
Le tableau ci-dessous expose le cas de deux observateurs ayant R modalités de jugement à
propos d'un nombre total d'observations N (effectif total) ; on note n ij l'effectif de la case de
ligne i et de colonne j.
L E
E
N
I O
R S
V E
LA
La concordance observée : P0 = 1/N x
La concordance calculée : PC = 1/N2 x nj)

Le coefficient kappa se calcule comme : K = P0 – PC/ 1 - PC

Il n'y a pas de coefficient kappa « significatif » ou non. Il s'agit d'une mesure de l'accord entre
observateurs, qui est analysée en fonction du contexte. On attend un coefficient kappa d'autant
plus élevé que la variable étudiée est « objective ». Le tableau ci-dessous donne un ordre
d'idée de l'interprétation des valeurs de kappa en fonction de l'intervalle dans lequel se situe
la valeur calculée du coefficient, mais d’autres échelles d’interprétation (reposant sur 3 classes
par exemple) peuvent être utilisées.
I
FO
I T
F A
E
D’après C. Fuhrman & C. Chouaïd, RMR, Fev 2004, vol 21, n°1, pp123-125
U
I Q
Davantage que la valeur absolue du coefficient kappa, il est en fait plus important de connaître
N
son intervalle de variation. Po peut varier de 0 (désaccord total) à 1 (accord parfait), le
coefficient Kappa peut varier de 0 à 1. Cette borne inférieure dépend des totaux marginaux du
à 1. R O
tableau. De même, la valeur maximale du coefficient Kappa n'est pas nécessairement égale
C T
Comparaison entre deux valeurs du coefficient kappa :
L E
S'il n'y a pas de moyen objectif « statistique » de dire qu'un coefficient kappa est « bon » ou
pas, il peut être utile de comparer deux valeurs de ce coefficient entre elles. Pour cela, il faut
E
calculer le rapport, qui suit une loi normale centrée réduite sous l'hypothèse nulle.
N
11.9.2 Exemple I O
R S
Evaluation de la présence/absence de P. falciparum sur 50 échantillons de sang par deux
V E
techniciens. Comparaison des résultats obtenus, étude des différences.
Opérateur 1
LA
Réponses + - Total
+ 20 5 25
Opérateur 2
- 3 22 25
Total 23 27 50
Conclusion : Il existe un bon accord entre les deux opérateurs (cf. tableau II)

11.10 Comparaison de deux pourcentages observés sur deux

échantillons (variable qualitatives)
Question pratique :
Le dosage qualitatif d’un même paramètre biologique est réalisé par deux méthodes
différentes à partir des mêmes échantillons patients. Les performances sont-elles
identiques ?
L’équivalence ou non entre les deux techniques peut être mise en évidence par le test de
χ2 de Mac Nemar.
I
11.10.1 Principe FO
I T
F A
Le test de Mac Nemar est un test non paramétrique qui est utilisé dans le cadre de la
comparaison de deux variables qualitatives binaires appariées. Il peut être utilisé à condition
que les effectifs des paires discordantes est supérieur à 10.
E
Pour réaliser le test χ2 de Mac Nemar, il est nécessaire de construire un tableau de croisé
U
associé aux deux variables appariées (Test A, Test B) également appelé tableau de
contingence.
I Q
Test A
N
+
R O -
+
T
EC
n+,+ n-,+
Test B
EL
-
n+,- n-,-
N
Le calcul ne tient compte que des valeurs discordantes :
I O
R S
V E
L’hypothèse H0 : 2 calculé < à la valeur seuil 2 0.05, les méthodes sont statistiquement de
performances équivalentes.
LA
L’hypothèse H1 : 2 calculé < à la valeur seuil 2 0.05, les méthodes sont statistiquement de
performances différentes.
11.10.2 Exemple
Un laboratoire étudie les performances d'un test immunochromatographie A par rapport à un

test de référence ELISA à partir des mêmes échantillons (appariés)
Il obtient les données suivantes :

Test IC A
Totaux
+ -
Test ELISA + 18 8 26
- 3 33 36
Totaux 21 41 62
I
Les effectifs théoriques sont les suivants :
FO
Effectif
I
Effectif théoriqueT
e +/+
observé
18
F A
8.8 (26×21/62)
f
g
+/-
-/+
3
8
U E
12.2 (36×21/62)
17 (26×41/62)
h -/- 34
I Q24 (36×41/62)
62
N 62
f+g 11
R O
C T
La somme des paires discordantes (n = 11) est supérieure à 10 et les effectifs théoriques de
E
chaque case sont ≥ 5. Le Test de χ2 de Mc Nemar est donc utilisable.
L
E
χ2MN =
(f−g)2
=
(3−8)2
= 25/11 =2.27
N f+g 11
I O
R S
Conclusion : χ2MN < à la valeur seuil 2 0.05 = 3.84 (pour un ddl = 1) : les performances des
deux techniques sont équivalentes.
V E
LA

12 BIBLIOGRAPHIE
12.1 Références légales et réglementaires
Loi n° 2013-442 du 30 mai 2013 portant réforme de la biologie médicale : J.O. du 31 mai 2013.
Le règlement européen (UE) 2017/746 relatif aux dispositifs médicaux de diagnostic in vitro
https://eur-lex.europa.eu/legal-content/FR/TXT/PDF/?uri=CELEX:32017R0746&from=EN
I
FO
12.2 Références normatives générales
I T
ISO 22870 :2017, Examens de biologie médicale délocalisée (EBMD) — Exigences F A
concernant la qualité et la compétence (AFNOR)
U E
I Q
ISO 5725-1 : 1994, Application de la statistique - Exactitude (justesse et fidélité) des résultats
N
et méthodes de mesure - Parties 1-6 et rectificatifs techniques (AFNOR).
R O
XP V03-044 : 2008, Critères de validation intra-laboratoire pour les méthodes de détection et
quantification de séquences d'acides nucléiques spécifiques. XP V03-044 : Juillet 2008
(AFNOR).
C T
d’étalonnages et d’essais. (AFNOR) L E
ISO/IEC 17025:2017, Exigences générales concernant la compétence des laboratoires
E
N
ISO/CEI GUIDE 98-3 : 2008, Guide pour l'expression de l'incertitude de mesure
O
(GUM) (AFNOR) et JCGM 100 : 2008 (http://www.bipm.org/en/publications/guides/).
I
R
et la compétence.
S
NF EN ISO 15189 :2012, Laboratoires de biologie médicale – Exigences concernant la qualité
V E
NF EN ISO 15189 :2022, Laboratoires médicaux – Exigences concernant la qualité et la
compétence.
LA
ISO 21748 : Juillet 2017, Lignes directrices relatives à l'utilisation d'estimations de la
répétabilité, de la reproductibilité et de la justesse dans l'évaluation de l'incertitude de mesure
(AFNOR).
ISO Guide 31 : 2015, Matériaux de référence - Contenu des certificats et étiquettes (AFNOR)
ISO 10012 : 2003, Métrologie – Systèmes de management de la mesure – Exigences pour les
processus et les équipements de mesure (AFNOR).
FD X07-021 : 1999, Normes fondamentales - Métrologie et applications de la statistique - Aide

à la démarche pour l'estimation et l'utilisation de l'incertitude des mesures et des résultats
d'essais (AFNOR).

ISO/CEI GUIDE 99, Normes fondamentales - Vocabulaire des termes fondamentaux et

généraux de métrologie (VIM) (AFNOR) et JCGM 200 : 2012
(http://www.bipm.org/en/publications/guides/).
ISO 3534-1 : 2007, Statistique - Vocabulaire et symboles - Parties 1 et 2 (AFNOR).
ISO 9000: 2015, Systèmes de management de la qualité — Principes essentiels et

vocabulaire. (AFNOR).
ISO Guide 33 : 2015, Utilisation des matériaux de référence certifiés (AFNOR)
ISO/TS 20914 : 2019, Spécification technique : Lignes directrices pratiques pour l’estimation
de l’incertitude de mesure (AFNOR)
I
FO
12.3 Documentation Cofrac / EA
I T
F A
Document Cofrac SH REF 02, "Exigences p our l’accréditation selon les normes NF EN ISO
15189 et NF EN ISO 22870"
U E
Document Cofrac SH REF 05, "Règlement d'accréditation".
I Q
N
Document Cofrac SH REF 08, "Expression et évaluation des portées d'accréditation".
R O
Document Cofrac SH INF 50, "Portées-types d'accréditation".
C T
Document Cofrac SH GTA 01, "Guide technique d'accréditation en Biologie Médicale".
L E
Document Cofrac SH GTA 02, "Guide technique d'accréditation pour l’évaluation des
E
systèmes informatiques en Biologie Médicale".
N
Document Cofrac SH FORM 43, "Fiche type de vérification (portée A) / validation (portée B)
I O
d’une méthode de biologie médicale".
R S
Document EA 4/17, "EA Position Paper on the description of scopes of accreditation of medical
E
laboratories (EA).
V
LA
12.4 Validation des méthodes
The Fitness for Purpose of Analytical Methods: A Laboratory Guide to Method Validation and
Related Topics. Eurachem Guides (2014).
Guidelines for the validation and verification of quantitative and qualitative test methods. NATA
Janvier 2018.
Validation de méthodes pour la recherche de mutations en génétique somatique. INCA (2014).
A WHO guide for supplementary guidelines on good manufacturing practice (GMP): Validation.
World Health Organisation (2006).

Radioprotection - Critères de performance pour l'analyse radio toxicologique - Partie 1 :

principes généraux. NF ISO 12790-1: Juin 2009 (AFNOR).
Validation des procédures analytiques quantitatives – Harmonisation des démarches. SFSTP.

STP Pharma Prat mai/juin 2003, vol. 13 (3): 101-138.
Guide de validation analytique. Méthodologie. STP Pharma Pratique 1992, vol. 2: 205-226.
Guide de validation analytique. Exemples d’application. STP Pharma Pratique 1992, vol. 2:
227-239.
Méthodes chromatographiques de dosage dans les milieux biologiques: stratégie de

validation. SFSTP, 1997, vol. 7: 169-194.
I
Validation of Analytical Procedures: text and methodology. Q2A, Q2B ICH (2005).
FO
I T
IUPAC recommendations for defining and measuring detection and quantification limits,
Analysis magazine 1994, v22, n°5 M24-M26.
F A
E
Analyse des produits agricoles et alimentaires - Protocole de caractérisation en vue de la
validation d’une méthode d’analyse quantitative par construction du profil d’exactitude. NF
V03-110 : Août 2011 (AFNOR). U
I Q
N
Analyse des produits agricoles et alimentaires - Protocole d'évaluation intra-laboratoire d'une
111 : Octobre 1995 (AFNOR).

R O
méthode alternative d'analyse qualitative par rapport à une méthode de référence. XP V03-
C
référence. FD V03-115: Juillet 1996 (AFNOR).
T
Analyse des produits agricoles et alimentaires - Guide pour l'utilisation des matériaux de
L E
Évaluation des performances des dispositifs médicaux de diagnostic in vitro. Norme NF EN
13612: Septembre 2002 (AFNOR). E
N
I O
Guide EURACHEM/CITAC, Quantifier l'incertitude dans les mesures analytiques (3ème
édition), 2012 (www.lne.fr).
R S
Estimer l'incertitude, Mesures et Essai. C. Perruchet et M. Priel, 2000, (Editions AFNOR).
V E
LA
12.5 Validation des méthodes en biologie médicale
A multicentric evaluation of IDMS-traceable creatinine enzymatic assays. Pieroni L (2011) Clin
Chim Acta 412(23-24):2070-5
Accreditation for Microbiological Laboratories. Eurachem Guides (2013).
Analyses de biologie médicale : spécification et normes d'acceptabilité à l'usage de la

validation des techniques. A. Vassault, D. Grafmeyer, J. de Graeve, R. Cohen, A. Beaudonnet,
J. Bienvenu Ann Biol Clin 1999, 57 : 685-95.
CLSI EP17 – A2 Protocols for Determination of Limits of Detection and Limits of Quantitation;
Approved Guideline - Second Edition, 2012.

CLSI EP15 – A3 User Verification of Performance for Precision and Trueness; Approved
Guideline - Third Edition, 2014
Continuous improvement of medical test reliability using reference methods and matrix-
corrected target values in proficiency testing schemes: application to glucose assay. Delatour
V. Clin Chim Acta. 2012 Nov 20;413(23-24):1872-8.
Current databases on biological variations : pros, cons and progress, Ricos C. et al., Scand J
Clin Lab Invest 1999, 59, 491-50. Uptaded in 2014 (www.westgard.com).
Dictionnaire des termes à l'usage de la validation des techniques, Commission validation de

technique SFBC, Ann Biol Clin 1986, 44: 679-85.
I
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Normes d’acceptabilité en hémostase. GEHT, Août 2014.
Plackett-Burman - wjyouden,ehsteiner,statistical manual of the AOAC International, 1975,

ISBN 0-935584-15-3.
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Protocole de validation de techniques (Protocole Valtec) - Document B. Vassault A., A
E
Grafmeyer D., Naudin C., Dumont G., Bailly M., Henny J., Gerhardt MF., Georges P. et les
membres de la commission de Validation de techniques de la SFBC Ann. Biol. Clin.,1986, 44,
686-745. U
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Recommandations 2007 : prélèvements destinés aux tests d'Hémostase. GEHT/GFHT.
REMIC 2018
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C T
Recommandations relatives à l'expression de l'incertitude de mesure des résultats quantitatifs
en biologie médicale (Document F). Giroud C, Dumontet M, Vassault A, Braconnier F, Férard
G Ann Biol Clin 2007, 65 : 185-200.
L E
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SFBC « Recommandations pour l’accréditation des laboratoires de biologie médicale ». Ann
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Biol Clin 2010 ; 68 ; (Hors série no 1) : John LIBBEY ed (313 pages).
I O
Référentiel en microbiologie médicale 2010, 4e édition. Société française de microbiologie.
R S
TIETZ Clinical guide to laboratory tests, Alan HB Wu, 4th edition, Saunders/Elsevier, 2006.
V E
Verification and validation of diagnostic laboratory tests in clinical virology, Holger et al., J. Clin.
LA
Virology 40 (2007): 93–98.
Young DS: Effects of Drugs and Clinical Laboratory Tests, 5th ed. Washington, DC, AACC
Press, 2000.
Quality specifications and allowable limits for validation of methods used in clinical
biochemistry (p.685-95), A. Vassault et al., Ann Bio Clin 57 n°6 de novembre – décembre
1999
Recommandations pour la mise en place et le suivi des contrôles de qualité dans les
laboratoires de biologie médicale. Ann Biol Clin 2019;77:577-97

12.6 Sites Internet

James O. Westgard, PhD, www.westgard.com
Ph. Marquis, www.multiqc.com.
Cofrac, Comité Français d'Accréditation, www.cofrac.fr
AFNOR, Association Française de Normalisation, www.afnor.fr
HAS, Haute Autorité de Santé www.has-sante.fr
EA, European co-operation for Accréditation, www.european-accreditation.org

I
FO
GFHT, groupe d'étude de la Société Française d'Hématologie, site.geht.org/Accueil/
I T
Les fournisseurs de DMDIV et la norme NF EN ISO 15189 Version 2012 Position Paper ,
www.sidiv.fr/__GizBooFlow/data/4c8e7e24f3d57/NEWS/762/documents/5249a0942a04c.pdf
F A
QUAMIC : Comité qualité de la société française de microbiologie, Recommandations 2019,
SFM, www.sfm-microbiologie.org
U E
I Q
N
R O
C T
L E
E
N
I O
R S
V E
LA

13 Liste des membres du groupe de travail

• Mme Valérie ADJIDE (LBM CHU AMIENS PICARDIE)
• Mme Maud BAUME (LBM DES HOSPICES CIVILS DE LYON)
• Mme Nathalie COLARD (LBM du GCS – SHAB)
• M François DARROUZAIN (LBM CHU TOURS)
• Mme Mélanie DAUTIGNY (LBM du GCS BIOPARIV’)
• Mme Stéphanie DUCREUX (LBM ALPIGENE)
• Mme Florence FISCHER (LBM CHU NICE) I
•
•
Mme Fabienne FLOCH (LBM CERBA)
FO
•
M Julien FONSART (LBM HU St LOUIS LARIBOISIERE F. WIDAL AP-HP)
M Jean-Louis GALINIER (LBM BIOLAB AVENIR) I T
• M Jean-Marc GIANNOLI (LBM UNILIANS/BIOGROUP)
F A
•
• M André HEIM (ROCHE DIAGNOSTICS France)
U E
M Bernard GOUGET (PRESIDENT COMITE SECTION SANTE HUMAINE - COFRAC)
•
•
Mme Annick JOLIVOT (LBM CERBA)
I Q
• N
M Charles-Alexandre JOSEPH (LBM CH BOURG EN BRESSE/LBM CH NORD FRANCHE COMTE)
•
R O
M Fréderic LECOMPTE (LBM BIOPATH HAUTS DE FRANCE NORD)
M Sébastien LEFRANCOIS (LBM CERBALLIANCE ILE-DE-FRANCE SUD)
•
• C T
Mme Anne HAY LOMBARDIE (LBM CHU NANTES)
M Kader MERAH (LBM CERBALLIANCE ILE DE FRANCE SUD)
•
L E
M Jean-François MERITET (LBM AP-HP HÔPITAL COCHIN)
•
•
E
M Bernard POGGI (ProBioQual)
N
M Rayan SATER (LBM UNIBIO)
•
•
O
M Florian SCHERRER (LBM SYNLAB BARLA)
I
•
R S
M Michel VAUBOURDOLLE (LBM DES HUEP AP-HP)
Mme Marie-Christine ZIMOCH (LBM ONCOLOGIQUE DE L’INSTITUT CLAUDIUS REGAUD)
•
• V E
M Olivier ERNY (Biologiste Médical – COFRAC)
Mme Linda OBIANG (COFRAC)
LA

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I

SH GTA 04 - Révision 02 2/168

8.6.2.2 Sensibilité, spécificité analytiques, justesse et fidélité ........................................... 44

SH GTA 04 - Révision 02 3/168

9.8.2 Exemple d’un TUS réalisé sur plusieurs sites .............................................................................. 76

SH GTA 04 - Révision 02 4/168

12 BIBLIOGRAPHIE .................................................................................................................... 163

SH GTA 04 - Révision 02 5/168

L'objectif de la présente révision de ce guide technique d'accréditation est d'expliciter

satisferont les besoins des patients et des cliniciens. I T

SH GTA 04 - Révision 02 6/168

SH GTA 04 - Révision 02 7/168

Processus analytique : ensemble des étapes qui aboutissent à l’obtention de résultats

SH GTA 04 - Révision 02 8/168

- processus complexe : diagnostic biologique d’une infection urinaire I

Répétabilité : conditions qui comprennent la même procédure de mesure, les mêmes

1 Pour les laboratoires exécutant cette étape

SH GTA 04 - Révision 02 9/168

Fidélité intermédiaire : conditions qui comprennent la même procédure de mesure, le même

Il appartient au biologiste médical de se référer à la documentation technique du fournisseur

SH GTA 04 - Révision 02 10/168

libre d’appliquer ou non. F A

Au préalable à cette déclaration d’aptitude, le laboratoire identifie les informations suivantes :

SH GTA 04 - Révision 02 11/168

spécifications (limites acceptables) initialement fixées.

2) Définition du mesurande : le laboratoire identifie le triptyque analyte, matrice et unité. Pour

3) Choix de la méthode : le choix doit tenir compte des performances analytiques de la

SH GTA 04 - Révision 02 12/168

4) Analyse de la bibliographie : afin de définir les critères attendus de performance, en rapport

5) Analyse des points critiques spécifiques de la méthode et/ou de l’examen si nécessaire et

6) Décision du type de méthode - vérification (méthode reconnue)/validation (méthode

SH GTA 04 - Révision 02 13/168

SH GTA 04 - Révision 02 14/168

L’estimation du risque permet de hiérarchiser / prioriser les actions de maîtrise à mettre en

Existe-t-il des recommandations concernant la qualité, le volume du prélèvement et le contenant

Les prélèvements sont-ils réalisés par du personnel formé ?

Le délai et la température de conservation peuvent-il avoir un impact sur la stabilité de l’échantillon ?

La taille des cohortes peut-elle être adaptée au regard de la rareté de la matrice ?

La stratégie de contrôles, calibration… peut-elle être adaptée au regard du type de matrice ?

SH GTA 04 - Révision 02 15/168

DOSAGE DE GLUCOSE en lien avec la taille des cohortes

- Application : tests statistiques

LCR Critique Performance de la - Disposition : procédure de

fonction des caractéristiques de la

Les conditions environnementales (température, hygrométrie, luminosité, vibrations, stérilité …)

par des moyens différents.

LA TEMPÉRATURE DE CONSERVATION DES PRÉLÈVEMENTS (15/30°C)

5M Points Echelle de criticité* Eléments à Moyens de maîtrise / Suivi de la maitrise du

périphérique jamais ces limites ; stock

Dégradation Peu Critique Température Mesure de la température Alarmes de la centrale

SH GTA 04 - Révision 02 16/168

Le personnel est-il formé, habilité ?

Les critères de maintien de compétences du personnel sont-ils adaptés (complexité de la méthode,

enregistrée dans le SMQ)

E analytique des résultats

L’installation répond-elle aux exigences des fournisseurs (environnement, qualification …) ?

Existe-t-il des procédures dégradées ?

Existe-t-il un planning de maintenances ?

L’équipement nécessite-t-il une connexion/paramétrage informatique ?