LES METHODES DETUDE DES

COMPOSES PHENOLIQUES

Prsent par

Aitfella radhia

2009-2010
 Plan du travail
Introduction

1. Dfinition

2. Classification des composs

phnoliques

3. Mthodes dtude des composs

phnoliques
 Introduction
Plusieurs tudes ont consacrs ces quarante dernires
annes aux mthodes danalyse des composs
Cet expos consiste prsenter
phnoliques, et ont permit de mettre en vidence la fois
essentiellement
les les principales
principales techniques mthodes
modernes utilises et les
dtude
principaux dequant
rsultats ces composs
au dosage,les plus
caractrisation et
frquemment
identificationutilises, savoir,
de ces composs.
les techniques de dosage, didentification et
Ces nombreuses techniques ont
de caractrisation permis
des de confirmer et
composs
de prciser limportance des composs phnoliques dans
phnoliques dorigine vgtale.
certaines technologies lies aux activits humaines, dans
les domaines industriels, de lenvironnement et de la
sant humaine.
 1. Dfinition etLes
gnralits
Vgtaux / micro-
Vgtaux
organismes
OH
Les organismes
animaux

Noyau
V. Shikimate
benznique METABOLITES
Alimentation ou
V. Actate SECONDAIRES
symbiose
(aminoacides,
vitamines,
pigments,etc.)
 Les composs
2. Classification
phnoliques
La complexit du squelette de base (allant dun
simple C6 des formes trs polymriss)
Phnols Tannins
simples
Le degr de modifications de ce squelette
(C15)n
(degr doxydation, dhydroxylation, de
C6 C6-C4
mthylation),

Flavonodes
Lignines
Les liaisons possibles avec dautres molcules
(glucides,
C6 C3- C6lipides, protines, autres mtabolites
(C6-C3)n
secondaires pouvant tre ou non des composes
phnoliques).
Stilibnes
C6 C3- C6
Les anthocyanidines
Cyanidine
Plargonidine
Les tannins
Les flavanes
condenss Les flavones
Les flavonols
Les flavanols
LesKaempfrol,
tannins Quectine
Catchine, picatchine hydrolysables
Les flavanones Les isoflavones
Naringnine Daidzine
 Les
Lestannins
tannins
hydrolysables
condenss

Hydrolyse chimique/enzymatique
Oligomres/polymres de Flavane-3-ols ou flavane-
3,4-diols drivs de la (+) catchine

Partie lhydrolyse
Rsistants Partie non
phnolique phnolique
Traitement acide chaud
Pigments
Acide gallique Gallotannins
rouges ou
Glucose,
DimreProanthocyanidines
de lacide quinique
lacide gallique
Ellagitannins
 3. Mthodes dtude des composs
phnoliques

Prparation des chantillons

Lextraction des composs phnoliques
Mthodes de sparation, de dosage et
didentification des composs phnoliques

Par leurs spectres dabsorption en ultra

violet ou en lumire visible

Par les mthodes chromatographiques

 1. Grande variabilit
Prparation desdes composs
chantillons
Broyagephnoliques
/ / proprits
homognisation
Polarit
Ultrafiltration
Schage / (chantillons liquides)
Par consquent, ilAcidit
est important de choisir
lyophilisation
Une convenablement
Nombre Des
tape dune une mthode
Groupements
importance optimale
capitaleHydroxyles de /
pralable tout
Hydrolyses chimiques
prtraitement en accord ou
avecenzymatiques
les structures
type
Noyaux danalyse fiable.
Aromatiques
(des
chimiques glycosides/formes
et les proprits condenses) des
physicochimiques
Plusieurs mthodes de prparation ont t
Concentration
composs phnoliques.
dveloppes afin de dterminer la fraction phnolique
dans une largedextraction
tapes gamme de types dchantillons.
/ purification
Complexit de la matrice
 Dissoudre
Lobjectifle de
compos
lextraction
recherch
cest dans
de librer
un solvant
les
Les nonfacteurs
composs
misciblephnoliques
avec pH
: leaudextraction
etprsentsdu
sparer milieu
dans
la phase
des
structures
organiquevacuolaires
contenant le parcompos
rupture du (degr
extraire de
tissu vgtal
de la
La nature du
en utilisant
phase
plusieurs
aqueuse.solubilit
techniques: des
solvant substances)
Hexane, ther dithylique, chloroforme,
Extraction mthanol. Nombre dextraction/
Extraction au
La temprture:
par volumefluide
du solvant
0-4C
expression supercritique
Agent rducteur
Concrte
Taille/forme des
particules Inhibiteur par
Extraction des les
Lhydrodistillation glucosidases
solvants
L absolu
 Lextraction des tannins
Distillation
Tissus frais ou
Rendement conservs par
optimal Dichloromthane
conglation ou
lyophilisation

- Proanthocyanidols Solution
dimres aqueuse
- Tannins galliques

Proanthocyanidols polymres
Tannins galliques PM lev
 Tous les composs
2. Mthodes phnoliques
de sparation, de dosage et
Dosage des La loi de Beer-
didentification des composs phnoliques
composs
Coloration des Lambert
phnoliques
organes vgtaux
DO = C d
(fleurs, fruits)
Mthodes UVou/
spectrophotomtriques
colorimtriques
visible
Cycles benzniques
Fonctions hydroxyles
(phnoliques)
Doubles liaisons
 Dosage total Le ractif de Folin-
des composs Ciocalteu
phnoliques Phosphotungstiate
(WO42-)-
Acide ascorbique Phosphomolybdate
(MoO4 2-)

Oxydation des phnolates,

Extraits suffisamment rduction des
purifis
polyhtrocycles
Raliser des tmoins ngatifs
Formation dun complexe molybdne-tungstne
Exprimer
bleu mesur la
auteneur un compos de rfrence
spectro-photomtre
(par exemple en quivalents dacide
chlorognique, ou gallique).
 Tannins condenss
Dosage des La technique au butanol-HCl
tannins La technique la vanilline
Dosage des La mthode du
Prcipitation par le
flavonodes trichloride
formaldhyde
daluminium (AlCl3)
Tannins hydrolysables
Les gallotannins LaLesquerctine
ellagitannins

Par liodate de Loxydation lacide

nitreux
Le
potassium
Par la rhodanine
Catchol
La technique au
NaNO2/HCl
 Identification chimique
spcifique et
caractrisation
Des supports chromatographiques (cellulose du des
Les
couches minces, chromatographiques
mthodes silice, polyamide),
De (s) groupement(s)
Sur papier,
phnolique(s)
sur couches port(s)
minces par le cycle
Des solvants dlution (pH, large gamme de polarit
benznique
depuis
leau
Lestrs polaire jusquau
mthodes benzne fortement
lectrophortiques
apolaire)
Sur papier
Cycle
Les proprits chimiques (s)composs phnoliques
des
benzniqueleurs
eux mme qui permettent (s) rvlations
Une premire approche qualitative
caractristiques sur les chromatogrammes.
concernant un matriel vgtal
inconnu.
 liodate de potassium
Examen en UV
Les tannins
Les Rvlateurs
Coloration rose
gallotannins
Sels ferriques
Coloration,
Les tannins
lacide nitreux (milieu actique)
prcipit bleu
hydrolysables noir
Les
Les tannins Coloration rose
Coloration,
ellagitannins
condenss prcipit brun
verdtres
Les flavonodes

Acide Bleu violac

sulfurique/NH4OH Anthocyane
Rose orange
Flavone

La raction Rose- violace

la cyanidine Flavanones
Rouge
flavonones, flavanonol
 Phase stationnaire de silice
Chrommatographie liquide haute
Lumire visible pour les anthocyanes
Composs
(vers 520nm) Solvant apolaire de
phnoliques non
performance (CHLP)
composition constante (par
Des phases stationnaires
polaires
UV (280, 325 ou 360nm) pour tousexemple
les le mlange
autres phnols hptane-thanol)
Une faible quantit dchantillon vgtal
La Fixation
surface de sur solvant
chacun
unedes pics est dlution
La du
proportionnelle la concentration silice sur la quelle on a
phase dite inverse
combine en une seule opration rapide et
compos. pralablement greff des

Dos
Composs
reproductible
la longueur donde
phnoliques
leschoisie
analyses (degr
chaines aliphatiques
qualitatives
pour lanalyse par rfrence et

apolaires
dhydroxylation,
des composs
quantitatives dun glycosylation,
tmoins obtenus commercialement
extrait et
ou partir
phnolique
danalyses antrieures.
lution par un mlange de solvants (frquemment
mthylation)
complexe
eau/acide actique/actonitrile ou eau/mthanol) dont
on fait varier la composition (la polarit) avec le temps de
lanalyse.
 Conclusion
Des avancs spectaculaires et lamlioration des
techniques analytiques et des approches molculaires ont
aujourdhui permis de confirmer et de prciser la
diversit et limportance de ces composs phnoliques
vgtales.

Notamment la reconnaissance de leur activit anti-

oxydante mais galement anti-inflammatoire et
antimicrobienne. elle est pour une part lorigine du
regain dintrt que lon porte ces composs dans le
domaine de la nutrition et de la pharmacologie.
Merci pour votre attention