Isolamento de Bactérias

1 1. OBJETIVOS Observar os diferentes tipos de bactrias mesfilas existentes no gua.
Aprender tcnicas de isolamento e estudar as caractersticas macroscpicas e microscpicas das mesmas.
2.
INTRODUO
Identificar um dado organismo como espcie baseia-se no preenchimento das caractersticas atribudas quela espcie. O reconhecimento da fonte ou origem do espcime (ambiente, espcie animal, tipo de patologia e localizao) do organismo s vezes fundamental para identificao e a correta caracterizao cultural do organismo em meios de isolamento primrio, assim como a execuo e interpretao da colorao e reao ao Gram so vitais para o sistema de identificao.
Para isolar o microrganismo efetua-se a inoculao ou semeadura, utilizando a tcnica do esgotamento do inculo por estrias, tendo-se o cuidado de usar inteiramente toda a rea do meio para garantir a separao das bactrias, de modo que aps a incubao cada clula separada origine uma colnia.
O processo de identificao propriamente dito comea com a observao das caractersticas das colnias isoladas (a olho nu, com lupa ou microscpio, usando a objetiva de menor aumento). Os seguintes critrios so utilizados para a caracterizao colonial:

Forma; Tamanho (em realao as outras colnias); Elevao - achatada (alta, baixa), espraiada, convexa, etc; Bordos - inteiros, ondulados, lobados, denticulados, franjados, etc.; Superfcie - lisa, rugosa; Estrutura - amorfa, granulosa, filamentosa; Brilho - opaca, translcida e transparente;
Cromogenia ou Pigmentao - amarela, branca, preta, rsea, etc.; Odor ausente, presente; Pigmento Solvel.
Aps a observao dessas caractersticas devem ser feitos esfregaos para coloraes especiais, para observao da morfologia microscpica (forma, arranjos, tamanho e colorao de Gram), presena ou ausncia de esporos, flagelos, cpsulas e granulaes. 3. MATERIAIS Amostra; gua estril; Erlenmeyer; Pipeta estril; Tubos de ensaio; Placas de Petri estreis; Meio de cultura AN (Agar Nutritivo); Ala de platina; Bico de bunsen; Tubos de cultura; Laminas para observao.
4. PROCEDIMENTO Transferiu-se 1 mL da amostra no Erlenmeyer que continha 99mL de gua estril; Agitou-se para obter uma suspenso dos microrganismos existentes; Transferiu-se, com pipeta estril, 1 ml da suspenso para um dos tubos de gua estril; Agitou-se e deste tubo foi retirado 1ml e posteriormente foi transferido para outro tubo com gua e assim sucessivamente, sendo realizada uma srie de diluies 10-3, 10-4,10-5,10-6; De cada diluio transferiu-se para duas placas estreis, amostra de 1ml, incluindo a a amostra e depois adicionou-se a cada placa cerca de 10 ml de
meio de AN fundido e resfriado a 45oC. Agitou-se para homogenizar e esperou-se o meio solidificar em repouso por mais ou menos 3 minutos, as placas foram invertidas e posteriormente incubadas temperatura ambiente durante 48 horas.
5. RESULTADOS Observou-se o crescimento de microoganismos apenas nas placas onde no houve nenhuma diluio. Foram escolhidas colnias e posteriormente foram transferidas com ala de platina parte da colnia para um tubo com AN e incubou-se a temperatura ambiente para obter a cultura pura.
5.1. CARACTERSTICAS MACROSCPICAS A colnia escolhida era de tamanho grande, com colorao creme, de forma arredondada, cremosa, com bordas irregulares, sem brilho caracterstico e nem pigmento solvel.
5.2. CARACTERSTICAS MICROSCPICAS A observao microscpica foi feita a partir da cultura pura do microorganismo crescido em tubo com AN. Primeiramente, foi feito uma obsevao in vivo para observar se o microorganismo apresentava movimento mas foi constatado apenas movimento browniano nas placas. Em seguida, fez-se uma colorao de Gram e descobriu-se que se tratava de uma bactria com forma de bastonete (bacilo) e Gram positiva (retm o corante cristal violeta). Notou-se tambm vrios microoganismos sem colorao o que indica uma possvel contaminao da cultura ou que o microorganismo formou esporos. Posteriormente, fez-se a colorao de esporos e confirmou-se a presena dos mesmos na colnia isolada.

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