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UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANÁ
LUCIANO RODRIGUES DE ALMEIDA GRR20183153
DOSAGEM DE AÇÚCARES REDUTORES

PELO MÉTODO DO 3,5-DINITROSSALICILATO
Relatório apresentado no curso de Engenharia de

Bioprocessos e Biotecnologia, da aula prática da
disciplina de Bioquímica, na Universidade Federal
do Paraná, setor Palotina.
Professor(a): Marise Fonseca.
PALOTINA
2021
INTRODUÇÃO
Açúcares redutores são carboidratos que possuem seu grupo carbonílico livre,
capazes de se oxidar na presença de agentes oxidantes em solução alcalina. Esta
habilidade pode ser utilizada como instrumento para a quantificação de glicídios.
Sabe-se que as aldoses e cetoses com hidroxilas heterosídicas livres são capazes
de reduzir soluções alcalinas de determinados compostos como, por exemplo, o
3,5-dinitrosalicilato.
Sumner (1921) desenvolveu o método para determinação de açúcares
redutores em urina de pacientes com e sem diabetes, baseado na
capacidade de o ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) ser reduzido pela glicose a
composto nitroamino análogo (ácido 3-amino-5-nitrosalicílico), altamente
colorido (Figura 1). Esse composto aromático absorve fortemente a luz,
sendo possível, assim, estabelecer uma relação direta entre a medida
colorimétrica e a quantidade de açúcares redutores presente.
(VASCONCELOS, N. M.; PINTO, G. A. S.; ARAGÃO, F. A. S., 2013, p. 7)
Parte Experimental
O método do DNS se fundamenta na redução do ácido 3,5-dinitro salicílico

em ácido 3-amino-5- nitro salicílico por conta da ação de açúcares redutores. Dessa
forma, a glicose utilizada e se oxidou, resultando em um ácido glucônico, de acordo
com a reação abaixo:
O experimento tem por objetivo, traçar uma curva padrão para dosagem de
glicose pelo método de DNS e a partir dessa curva, determinar a concentração de
uma solução problema.
Para isso foram utilizados: Uma solução padrão de glicose (10 μmol/mL), a
solução problema, ácido 3,5-dinitrissalicilico em solução alcalina (DNS) e
espectrofotômetro. Utilizando 6 tubos de ensaio, foram preparadas soluções
conforme a tabela abaixo:
Tubo Solução de H2O(mL) DNS(mL) Abs(540nm) Glicose(umoles

glicose /mL)
(mL)
b - 1,0 1 - -
1 0,4 0,6 1 0,155 2,0
2 0,6 0,4 1 0,240 3,0
3 0,8 0,2 1 0,325 4,0
4 1,0 - 1 0,09 11,25
5 1,0 - 1 0,130 81,25
6 1,0 - 1 0,200 250
A concentração de glicose em cada tubo é feita a partir da seguinte relação:
C1V1=C2V2 Para o tubo 1 tem-se que 0,4x5= 1,0xC2 -> C2=2,0 μmol/mL
Para os tubos 4 ao 6 os cálculos foram feitos conforme as diluições.
Construção da curva padrão de glicosídeos redutores:
Com os dados da tabela acima, foi traçada uma curva de Absorbância x

concentração, a qual pode ser visualizada abaixo:
Cálculo do coeficiente angular:

K =Σ𝑎𝑏𝑠/Σ[𝑔𝑙𝑖𝑐𝑜𝑠𝑒] = 0,155 + 0,240 + 0,325 / 2,0 + 3,0 +4,0 + = 0,08
Calculo do fator linear (f)
K =Σ[𝑔𝑙𝑖𝑐𝑜𝑠𝑒] /Σ𝑎𝑏𝑠 = 2,0 + 3,0 +4,0 / 0,155 + 0,240 + 0,325 = 12,5
A curva padrão acima possui relação definida pela equação y = 0,085x +
0,015 e um R² = 1, onde “y” representa absorbância e “x” a concentração da
substância.
O limite se sensibilidade do método para a aparelhagem utilizada, são
extremos dos valores de absorbância medidos a 540nm (0,155 e 0,325) a
concentração de glicose estar associada a um valor de absorbância nessa faixa, o
que é definido pela equação da reta apresentada anteriormente y = 0,085x + 0,015
Determinação da concentração de uma solução problema
Utilizando a curva padrão obtida e os mesmos reagentes dever-se-ia determinar a

concentração de uma amostra com concentração desconhecida, porém era sabido
que sua molaridade estava na faixa 80 a 150 mM.
Para isso foi considerado um valor intermediário e os cálculos foram executados
para a solução, como se a mesma tivesse a concentração de 100 milimols.
Como a curva trabalha com soluções na ordem de μmol/mL, e sabendo-se que uma
solução de 100 milimols corresponde a uma solução de 100 μmol/mL, basta apenas
fazer um diluição como a que se segue:
C1V1=C2V2
100 x 2 = 250 x V2
V2 = 0,8mL
A concentração final de 250 μmol/mL foi determinada através das diluições, medir
suas respectivas absorbâncias e calcular a concentração.
Ao medir a absorbância, nota-se que esses valores são diretamente
proporcionais à concentração de glicose obtida em cada tubo. Isso ocorre porque
quanto maior a concentração de glicose, mais DNS é formado, DNS é o motivo da
cor laranja da solução e, portanto, o motivo da medição da absorbância
Exercícios:
1- De posse de uma solução de glicose de concentração 22,5 mg/mL, qual a diluição

que se deve fazer para que 1 mL desta solução dê absorvância de 0,4 quando
dosada pelo método do DNS?
f = 12,5 Pmoles/mL PM glicose = 180
f = c/Abs
c = f × Abs c = 12, 5 × 0, 4 = 5 μmoles/mL
PM glicose= 180 g
então: 180 g 1 mol
0,0225 g x = 125 μmol
Agora:
C1 . V1 = C2 . V2 = 125 × 1 = 5 × v2
v2 = 25 mL
Diluição:
Vf/ Vi -= 25/1 = 25x
Resposta final : A diluição deve ser de 25x.
2- Com o objetivo de determinar o grau de pureza de uma maltose comercial, 2 mL

de uma solução de concentração de 150 mg/mL foram diluídos a 120 mL e, desta
diluição, tomaram-se duas alíquotas de 1 mL, em duplicata, para a dosagem com o
DNS.
Com base nos resultados da tabela acima, calcule o grau de pureza desta maltose
comercial.
f = 12,5 Pmoles/mL PM maltose = 342
c = f × Abs = 125 (
0,51+0,49 / 2 )= 6, 25μmoles/mL
M maltose: 342 g/mol
C1 . V1 = C2 . V2
150 × 2 = C2 × 120
c2= 2,5 mg/ml
Então:
342g==== 1mol
2, 5 × 10−3 === x = x = 7, 31μmoles
Se:
7,31 μmoles ==== 100%
6,25 μmoles ==== x
x= 85,5% de pureza.
3- 5 mL de uma solução de glicídeo redutor foram diluídos a 20 mL com água

destilada, originando a solução B. 0,2 mL dessa solução B, após reação com DNS,
apresentou uma Abs igual a 0,30. Pede-se a concentração de A em Pmoles/mL,
sabendo-se que 1 mL de uma solução do mesmo glicídeo de concentração 4
Pmoles/mL forneceu uma Abs igual a 0,5.
f= 0,4/0,5= 8 μmoles /mL

c=f x Abs= 8 x 0,3= 2,4 μmoles /ml
C1 . V1 = C2 .
V2 C1 . 5 = 2,4
. 20
C1= 9,6 μmoles /ml
4 - Alíquotas colhidas após 60 e 90 minutos de crescimento de células de levedura

em meio contendo glicose foram ensaiadas para a verificação do consumo de
glicídeo. Ao fazer a dosagem do sobrenadante com DNS foi perdido o branco de
reação. Se não se pudesse fazer outro branco por falta de reagente, como verificar
se houve consumo de glicose no intervalo considerado?
R= Sabe-se que quanto menor a concentração de glicose menor é a absorbância a

ser medida. Por tanto se no tempo 90 minutos observa-se uma taxa menor de
absorbância que na mostra a 60 minutos, podemos concluir que houve consumo de
glicose no intervalo.
5 - . A concentração de uma solução de glicose é de 1 mol/100 mL. Que diluição

deverá ser feita para que 1,0 mL da solução resultante contenha 1 milimol?
1mol === 100mL

0, 01 ==== 1mL
0, 01 mol × 1 = 0, 001 × V
i V i = 10 mL
Cf / Ci =0,01 / 0,001 = 10 ×
6 - Para a dosagem de uma solução de maltose de concentração desconhecida foi
necessário proceder-se a diluições de modo a se ter leituras de Abs dentro da faixa
de obediência à lei de Lambert-Beer. Assim:
a) tomaram-se 4 mL da solução que foram diluídos, em balão aferido, a 100 mL
obtendo-se a solução B.
b) 10 mL da solução B foram diluídos a 25 mL obtendo-se a solução C.
c) da solução C retirou-se uma alíquota de 0,4 mL para a dosagem de maltose com

o reagente do DNS, e obteve-se uma Abs em 540 nm igual a 0,30. Qual será a
concentração em mg mL da solução original, sabendo-se que o PM da maltose é
342? Expresse o resultado também em molaridade. Dado: fator = 12 Pmoles/mL de
amostra
C = f × Abs = 12 × 0, 3
C = 3, 6 μmoles/ml
V b x Cb = Cc x V c
10 x Cb = 3, 6 x 25
Cb= 9 μmoles/mL
V b x Cb = Cc x V c
9 x 100 = 4 x Ca
Ca=225 μmoles/mL
1mol==324g
225.10-8==x
x=0,07695 ou 76,95 mg
7- Uma solução de glicose foi preparada de modo que 45 mg do glicídeo foram
solubilizados em um volume final de 10 mL. A que volume devem ser diluídos estes
10 mL de forma que uma alíquota de 1 mL de solução diluída forneça Abs= 0,25
quando dosada pelo método do DNS?
Dados: f = 10 Pmoles/mL de amostra PM glicose = 180
C2 = f x abs = 10 x 0, 25μmoles/mL
V1= 10 mL C1 = m ÷ v =45 ÷ 10 =4, 5 mg/L
180g====1 mol
4,5.10-3g=x x=25 μmoles
25 x10 = 2, 5 x V 2 V 2 = 100ml
8 - Um mililitro de uma solução A de glicose de concentração 150 Pmoles/10 mL foi

ensaiada pelo método apropriado, fornecendo a Abs de 0,9. Qual será a
concentração de uma solução B que apresenta uma Abs de 0,3, utilizando-se para a
dosagem 1 mL de solução. Dê a resposta em em umoles/mL.
f = c/abs
f = 15/0, 9
f = 16, 66 μmoles/mL
c = f x abs
c = 16, 66 x 0, 3
c = 4, 99 μmoles/mL
REFERÊNCIA
LEHNINGER, A.L.; NELSON, D.L.; COX, M.M. Princípios de Bioquímica. 2. ed.

São Paulo: Sarvier, 2000.
CISTERNAS, J.R.; VARGA, J.; MONTE, O. Fundamentos de bioquímica

experimental. 2. ed. São Paulo: Atheneu, 2001
SILVA, R. N. et al. Comparação de métodos para a determinação de açúcares

redutores e totais em mel. Ciênc. Tecnol. Aliment. vol.23 no.3 Campinas Sept./Dec.
2003.
VASCONCELOS, N. M.; PINTO G. A. S. ; ARAGÃO F. A. S. Boletim de Pesquisa e
Desenvolvimento: Determinação de Açúcares Redutores pelo Ácido
3,5-Dinitrosalicílico: Histórico do Desenvolvimento do Método e Estabelecimento de
um Protocolo para o Laboratório de Bioprocessos. – Fortaleza: Embrapa
Agroindústria Tropical, 2013.

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LUCIANO RODRIGUES DE ALMEIDA GRR20183153

DOSAGEM DE AÇÚCARES REDUTORES

Relatório apresentado no curso de Engenharia de

Professor(a): Marise Fonseca.

O método do DNS se fundamenta na redução do ácido 3,5-dinitro salicílico

Tubo Solução de H2O(mL) DNS(mL) Abs(540nm) Glicose(umoles

1 0,4 0,6 1 0,155 2,0

2 0,6 0,4 1 0,240 3,0

3 0,8 0,2 1 0,325 4,0

4 1,0 - 1 0,09 11,25

5 1,0 - 1 0,130 81,25

6 1,0 - 1 0,200 250

A concentração de glicose em cada tubo é feita a partir da seguinte relação:

Construção da curva padrão de glicosídeos redutores:

Com os dados da tabela acima, foi traçada uma curva de Absorbância x

Cálculo do coeficiente angular:

Determinação da concentração de uma solução problema

Utilizando a curva padrão obtida e os mesmos reagentes dever-se-ia determinar a

1- De posse de uma solução de glicose de concentração 22,5 mg/mL, qual a diluição

f = 12,5 Pmoles/mL PM glicose = 180

então: 180 g 1 mol

0,0225 g x = 125 μmol

Vf/ Vi -= 25/1 = 25x

Resposta final : A diluição deve ser de 25x.

2- Com o objetivo de determinar o grau de pureza de uma maltose comercial, 2 mL

f = 12,5 Pmoles/mL PM maltose = 342

M maltose: 342 g/mol

2, 5 × 10−3 === x = x = 7, 31μmoles

3- 5 mL de uma solução de glicídeo redutor foram diluídos a 20 mL com água

f= 0,4/0,5= 8 μmoles /mL

4 - Alíquotas colhidas após 60 e 90 minutos de crescimento de células de levedura

R= Sabe-se que quanto menor a concentração de glicose menor é a absorbância a

5 - . A concentração de uma solução de glicose é de 1 mol/100 mL. Que diluição

1mol === 100mL

a) tomaram-se 4 mL da solução que foram diluídos, em balão aferido, a 100 mL

b) 10 mL da solução B foram diluídos a 25 mL obtendo-se a solução C.

c) da solução C retirou-se uma alíquota de 0,4 mL para a dosagem de maltose com

Dados: f = 10 Pmoles/mL de amostra PM glicose = 180

V1= 10 mL C1 = m ÷ v =45 ÷ 10 =4, 5 mg/L

8 - Um mililitro de uma solução A de glicose de concentração 150 Pmoles/10 mL foi

LEHNINGER, A.L.; NELSON, D.L.; COX, M.M. Princípios de Bioquímica. 2. ed.

CISTERNAS, J.R.; VARGA, J.; MONTE, O. Fundamentos de bioquímica

SILVA, R. N. et al. Comparação de métodos para a determinação de açúcares

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