Aula 9 - Identificacao Bacteriana

Rotina e identificao bsica dos
principais grupos de bactrias

(estafilococos, estreptococos e
bastonetes Gram negativos)
Anhanguera Micro Clinica
Prof. Krain Melo
Cocos Gram Positivos

Identificao
preliminar
Baseada na morfologia
Estreptococo: cadeia normalmente longa
Estafilococos: em forma de cocos aos pares,
em cachos de uva ou agrupados.
Identificao presuntiva:
Inoculao primria na placa de gar sangue de carneiro que
deve ser incubada em 5% de tenso de CO (mtodo da vela ou
estufa de CO ).
As colnias de estafilococos so geralmente maiores, convexas,
de colorao variando do branco-porcelana a amarelo podendo
apresentar hemlise ou no.
O desenvolvimento da cor amarelada no S. aureus ocorre
somente aps incubao prolongada (72 h), temperatura
ambiente.
As colnias de estreptococos tendem a serem menores
(puntiformes), e com halos de hemlise total ou parcial (beta e
alfa hemlise).
A diferenciao entre os estreptococos e os estafilococos se d,
seguramente, pela prova da catalase.
Staphylococcus
aureus
Streptococcus
agalactiae

PROVA DA CATALASE
Selecionar uma colnia suspeita e aplic-la em
uma lmina de vidro.
Colocar sobre este esfregao uma gota de gua
oxigenada a 3% e observar a formao de
bolhas.
Para a famlia Microccocacea (estafilococos) a
prova geralmente positiva.
Para a famlia Streptococcacea (estreptococos)
negativa.
Identificao de Estafilococos
O teste mais importante na identificao da famlia

Micrococcaceae a prova da catalase.
Esta famlia composta de quatro gneros:
Planococcus, Micrococcus, Stomatococcus e
Staphylococcus.
O gnero Staphylococcus apresenta 32 espcies,
14 subespcies, sendo que somente 15 espcies
so encontradas em amostras humanas.
Divididos em duas categorias: coagulase positivos e
coagulase negativos de acordo com a resposta ao
teste da plasmo coagulase.
Existem cerca de 31 espcies de

Staphylococcus coagulase negativa conhecidas,
das quais os mais freqentes so:
Staphylococcus epidermidis - causador de infeces

de cateteres e prteses e o mais freqente
microrganismo encontrado em hemoculturas.
Staphylococcus saprophyticus - causador de infeco
urinria em mulheres jovens.
Staphylococcus haemolyticus - importante devido
resistncia aumentada aos antimicrobianos, e por ser
comumente confundido com o S. aureus, pois
apresenta hemlise na placa de gar sangue de
carneiro.
TESTE DA COAGULASE EM LMINA

A maioria das cepas de Staphylococcus aureus possui a
coagulase ligada (ou fator aglutinante) clumping factor na
superfcie da parede celular, que reage com o fibrinognio
do plasma causando a coagulao do mesmo.
Colocar 2 gotas de salina em uma lmina;

Emulsionar uma colnia isolada a ser testada;
Colocar uma gota de plasma e misturar com um palito de
plstico ou madeira;
Observar se h aglutinao em 10 segundos;
No se pode executar este teste a partir de um gar com grande
concentrao de sal como gar manitol.
Coagulase positivo: S. aureus

S. coagulase negativo
TESTE DA RESISTNCIA A NOVOBIOCINA
A cepa semeada de maneira semelhante ao
antibiograma em placa de Muller Hinton acrescida
de um disco teste de novobiocina contendo 5 g.
As amostras resistentes mostram zonas de
inibio de 6 a 12 mm, enquanto as susceptveis
apresentam halos de 16 mm ou mais.
As cepas de Staphylococcus saprophyticus so
resistentes.
Cepas sensveis: S. coagulase negativo
Identificao de Estreptococos
Os estreptococos podem ser diferenciados de

acordo com sua aparncia na placa de gar sangue
aps incubao a 35C em presena de 5% de
CO2, podendo apresentar: hemlise total (beta),
parcial (alfa, de cor esverdeada) ou nenhuma
(gama).
A identificao de espcie de estreptococos beta
hemolticos feita atravs de aglutinao com
soros especficos contra os antgenos de Lancefield
(A, B, C, D, F e G), que constitui uma prova rpida,
porm no acessvel a todos os laboratrios em
virtude do elevado custo.
Alfa, beta e gama
hemlise.
Streptococo: Beta
hemlise.
TESTE DA OPTOQUINA
Semear um quarto de uma placa de gar
sangue com a cepa alfa hemoltica a ser
testada;
Aplicar um disco de optoquina;
Incubar a 35oC em tenso aumentada de CO2;
Uma zona de inibio de 14 mm ou mais volta
de um disco de 6 mm significa sensibilidade.
Sensvel: Streptococcus pneumoniae
Resistente: S. grupo viridans
TESTE DE CAMP (NA MESMA PLACA)

Inocular uma estria nica de uma amostra de Staphylococcus aureus
produtor de beta lisina (ATCC 25923) no centro de uma placa de gar
sangue preparada obrigatoriamente com sangue de carneiro. (Esta
linhagem de S. aureus deve ser mantida continuadamente em estoque)
Inocular as amostras a serem testadas em estrias formando um ngulo
reto com a linha de inoculao da amostra teste de estafilococo. As
estrias no devem se tocar, ficando a 1 mm de distncia, e deste modo
vrias amostras podem ser testadas em uma mesma placa de gar
sangue. A maneira de inocular fundamental para a observao do
efeito esperado.
Incubar a placa a 35-37C durante um perodo de 18-24 horas.
A positividade da prova, Streptococcus agalactiae (grupo B),
evidenciada pelo alargamento da zona de lise, que adquire a forma de
ponta de flecha caracterstica, na rea de interseco entre as duas
estrias.
Outros beta hemolticos: camp test negativo
TESTE DO PYR
Este teste determina a atividade do PYR tambm chamado
pyrrolidonyl-aminopeptidase, uma enzima produzida pelo
Streptococcus pyogenes e tambm pelo Enterococcus sp.
Esse teste tecnicamente equivalente prova da hidrlise da
bile esculina e crescimento em 6,5% de NaCl, usados na
identificao clssica dos enterococos, e mais especfico que o
teste da Bacitracina na caracterizao presuntiva dos
estreptococos beta hemolticos do grupo A, tendo a vantagem
de ser mais rpido.
Em qualquer dos dois casos, o PYR constitui uma alternativa
importante para esclarecer testes duvidosos.
PYR positivo: S. pyogenes
PYR negativo: outros beta-hemolticos Realizar testes de
aglutinao
TESTE DA BILE ESCULINA E DO NACL 6,5%

Semear as provas de Bile Esculina e do caldo de NaCl a
6,5%;
Incubar da mesma forma;
Teste da bile esculina positiva apresenta cor marrom
escuro e o do caldo de NaCl a 6,5 % deve mostrar
turvao para ser considerado positivo.
Bile esculina positiva: todos os estreptococos do grupo D
de Lancefield - Enterococcus sp ou Streptococcus do
grupo D no enterococo (Streptococcus bovis).
Teste da tolerncia ao NaCl a 6,5%: positivo somente para
enterococos.
Identificao de cocos gram-positivos
Figura
5.3
Identificao de Bacilos
Gram-Negativos
Enterobactrias importncia clnica:
A maioria das enterobactrias encontrada no trato

gastrointestinal de humanos, no reino animal, na gua, solo e
vegetais.
Alguns tambm so considerados enteropatgenos por
causarem preferencialmente infeces gastrointestinais como a
Salmonella typhi, outras salmonellas, Shigella spp., Yersinia
enterocolitica e vrios sorotipos de Escherichia coli, embora
possam tambm causar infeco em outros locais.
As enterobactrias representam 80% ou mais de todos os Gram
negativos de importncia clnica isolados na rotina
microbiolgica
So responsveis por de cerca de 70% das infeces urinrias e
50% das septicemias.
Gram-Negativos
Nas infeces hospitalares:
Predominantes: Escherichia coli,

Klebsiella spp., Enterobacter
spp.
Principais gneros das
enterobactrias (cerca de 99%
dos isolamentos de
enterobactrias de importncia
clnica): Escherichia coli,
Klebsiella spp., Enterobacter
spp., Proteus spp., Providencia
spp., Morganella spp.,
Citrobacter spp., Salmonella
spp., Shigella spp., Serratia spp.
As enterobactrias menos
isoladas so: Edwarsiella spp.,
Hafnia spp., Yersinia spp.
Nas infeces da comunidade:
Destacam-se: Escherichia coli,

Klebsiella spp., Proteus spp.,
Salmonella spp., Shigella spp.
Gram-Negativos
Figura
5.4
Gram-Negativos
Conjunto
EPM/MILI/Citrato
Gram-Negativos
Interpretao
do meio EPM
Provas bioqumicas mais frequentes utilizadas para a

identificao de enterobactrias de importncia mdica
Tabela
5.2
Gram-Negativos
Bastonetes
no-fermentadores
Os bacilos Gram negativos classificados como

no fermentadores (BNFs) so microrganismos
aerbios, no esporulados, que se caracterizam
pelo fato de serem incapazes de utilizar
carboidratos como fonte de energia atravs de
fermentao, degradando-os pela via oxidativa.
Gram-Negativos
Alguns
BNFs de importncia clnica:
Gram-Negativos
Testes necessrios para a identificao de rotina dos BNFs

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Cocos Gram Positivos

Cocos Gram Positivos

Cocos Gram Positivos

Cocos Gram Positivos

Cocos Gram Positivos

Cocos Gram Positivos

O teste mais importante na identificao da famlia

Existem cerca de 31 espcies de

Staphylococcus epidermidis - causador de infeces

TESTE DA COAGULASE EM LMINA

Colocar 2 gotas de salina em uma lmina;

Coagulase positivo: S. aureus

Os estreptococos podem ser diferenciados de

TESTE DE CAMP (NA MESMA PLACA)

TESTE DA BILE ESCULINA E DO NACL 6,5%

Identificao de cocos gram-positivos

Enterobactrias importncia clnica:

A maioria das enterobactrias encontrada no trato

Nas infeces hospitalares:

Predominantes: Escherichia coli,

Nas infeces da comunidade:

Destacam-se: Escherichia coli,

Provas bioqumicas mais frequentes utilizadas para a

Os bacilos Gram negativos classificados como

BNFs de importncia clnica:

Testes necessrios para a identificao de rotina dos BNFs

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