UNIVERSIDAD

NACIONAL
MAYOR DE SAN
MARCOS

(Un

iversidad del Per, Decana De

Amrica)

CURSO

: LABORATORIO DE QUIMICA ORGANICA

TEMA

:CROMATOGRAFIA DE COMPUESTOS

ORGNICOS

PROFESOR :Mg. Q.F. FELIX VELIZ Luis Miguel

ALUMNOS

:
10170019
10170045
10170106
10170100
10170050

TURNO

2010

Arce Esteban Stefany Lizeth

Chuqui Torres Carol
Cubas Gonzales Alexander
Caldern Villasante Susana
Zea Rodrguez Rosa

4:00 p.m.-6:00 p.m.

Ciudad Universitaria, noviembre del

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PRACTICA N 6 CROMATOGRAFIA DE COMPUESTOS ORGANICOS

FII

INTRODUCCIN
La cromatografa, es la tcnica de anlisis qumico utilizada para separar
sustancias puras de mezclas complejas; la cual es aplicada a muchas ramas de la
ciencia. Esta tcnica depende del principio de adsorcin selectiva (no confundir con
absorcin), cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes, y as verificar
especialmente su pureza.
El primer trabajo en el que se hace pasar una fase mvil gaseosa a travs de una
columna data de 1951, dando lugar a la tcnica conocida como cromatografa de gases.
Las tcnicas cromatogrficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase
mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la muestra
a travs de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un slido.
En la cromatografa en papel, una muestra lquida fluye por una tira vertical de papel
adsorbente, sobre la cual se van depositando los componentes en lugares especficos.
Existen otras tcnicas como cromatografa gas-lquido que permite la separacin
de mezclas de compuestos gaseosos o de sustancias susceptibles de vaporizarse por
calor. La mezcla vaporizada es conducida mediante un gas inerte a travs de un estrecho
tubo en espiral que contiene una sustancia, por la que los componentes fluyen en
diferentes proporciones, siendo detectados al final del tubo. Otro mtodo es la
cromatografa por infiltracin gelatinosa, basado en la accin filtrante de un adsorbente
poroso de tamao uniforme. Con este mtodo se consigue separar y detectar molculas
de mayor masa molecular.

La combinacin de altas resoluciones, sensibilidad y tiempos de anlisis cortos la

ha convertido una tcnica de rutina usada en la mayora de los laboratorios qumicos.

El uso de la cromatografa est ampliamente extendido en el anlisis de alimentos,

medicinas, sangre, productos petrolferos y de fisin radiactiva.

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En consecuencia, las mejores tcnicas de anlisis cualitativo son aqullas que

combinan la capacidad de separacin de la cromatografa con la capacidad de la
identificacin de tcnicas como la espectroscopa de masas (tcnicas acopladas).

I.

PRINCIPIOS TERICOS

CROMATOGRAFA:
La cromatografa, es la tcnica de anlisis qumico utilizada para separar
sustancias puras de mezclas complejas; la cual es aplicada a muchas ramas de la
ciencia. Esta tcnica depende del principio de adsorcin selectiva (no confundir con
absorcin), cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla,
permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes, y as verificar
especialmente su pureza.
Las tcnicas cromatogrficas son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase
mvil que consiste en un fluido (gas, lquido o fluido supercrtico) que arrastra a la muestra
a travs de una fase estacionaria que se trata de un slido o un lquido fijado en un slido.

Tipos

Fase mvil

Fase estacionaria

Cromatografa en
papel

Lquido

Lquido ( molculas de agua contenidas en la

celulosa del papel )

Cromatografa en capa
fina

Lquido

Slido

Cromatografa de
gases

Gas

Slido o lquido

Cromatografa lquida
en fase inversa

Lquido
(polar)

Slido o lquido
(menos polar)

Cromatografa lquida
en fase normal

Lquido
(menos
polar)

Slido o lquido
(polar)

Cromatografa lquida
de intercambio inico

Lquido
(polar)

Slido

Cromatografa lquida

Lquido

Slido

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de exclusin
Cromatografa lquida
de adsorcin

Lquido

Slido

Cromatografa de
fluidos supercrticos

Lquido

Slido

CLASIFICACIN:
Las distintas tcnicas cromatogrficas se pueden dividir segn cmo est dispuesta la
fase estacionaria:
Cromatografa plana. La fase estacionaria se sita sobre una placa plana o sobre
un papel. Las principales tcnicas son:

Cromatografa en papel
Cromatografa en capa fina
Cromatografa en columna. La fase estacionaria se sita dentro de una columna.
Segn el fluido empleado como fase mvil se distinguen:

Cromatografa de lquidos
Cromatografa de gases
Cromatografa de fluidos supercrticos

TECNICAS DE SEPARACIN:

La cromatografa y mtodos de separacin clsicos se basa en la separacin

de componentes de una muestra. Estas tcnicas no son de caracterizacin
propiamente dicha; las propiedades de los materiales dependen de los componentes y de
la proporcin existente entre ellos.

Estas tcnicas no dan informacin de la naturaleza de los componentes, para eso

se necesitan otros mtodos de anlisis.

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1.
M

ecanismos de Separacin:
a)

Separacin por adsorcin (cromatografa de adsorcin):

Diferente afinidad de los componentes de la muestra sobre la superficie de un
slido activo (componentes con polaridad baja o media).

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b)

Separacin por reparto (cromatografa de reparto):

Diferente solubilidad en fases estacionaria y mvil (Componentes
polaridad media o alta).

con

c) Separacin por tamao molecular (Cromatografa de permeacin de gel, de

tamiz molecular o de exclusin por tamaos):

Parmetros de columna
Intervalo de trabajo: intervalo de M que pueden ser separados
Lmite de exclusin: M mnimo a partir del cual las macromolculas no
experimentan retencin.

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Las molculas pequeas penetran en los poros de las partculas de

gel, por lo que necesitan ms tiempo para salir al final de la columna.
Las molculas grandes, en cambio, al no penetrar en las partculas
de gel se mueven con el disolvente a una velocidad mayor de
elucin y salen antes de la columna. Por tanto, a mayor masa
molecular menor tiempo de elucin. Este mtodo permite separar
por
tamaos moleculares
siendo
posible
obtener
incluso
distribuciones de masas moleculares a distintos tiempos de elucin.

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d) Separacin por Intercambio inico:

La separacin se basa principalmente en la diferente afinidad para el intercambio
de iones de los componentes de la muestra.

Las especies cargadas negativamente se unen a la matriz slida

cargada positivamente y
son retenidas, mientras que las
especies positivas son rechazadas. De esta manera en funcin
de la carga las especies se eluyen a distintos tiempos dando
lugar a la correspondiente separacin.
La elucin de las especies retenidas se consigue cambiando el
pH del disolvente hasta igualarlo a su punto isoelctrico o hasta
invertir su carga neta.

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Una separacin puede estar basada en la conjuncin de diversos mecanismos

2.

Mtodos de anlisis cromatogrfico:

a)
b)
c)
d)

Anlisis por desarrollo (cromatografa en papel o capa fina).

Anlisis por elucin (cromatografa de gases, cromatografa lquida).
Anlisis frontal.
Anlisis por desplazamiento.

Anlisis por desarrollo

Anlisis por elucin

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Anlisis por desarrollo

3.
C

lasificacin de acuerdo con la forma del lecho cromatogrfico:

a) Cromatografa en columna.
a. Columna empaquetada.
b. Columna tubular abierta.
b) Cromatografa plana (o de lecho abierto).
a. Cromatografa en pape.
b. Cromatografa en capa fina (TLC).
4.

Clasificacin de acuerdo con el estado fsico de la fase mvil:

a) Tcnicas cromatogrficas.
GLC
GSC
LLC
LSC
b) Cromatografa de gases (siempre en columna).
c) Cromatografa Lquida (en columna o sobre plano).
Cromatografa Lquida de Alta Eficacia o de Alta Presin, HPLC.
d) Cromatografa con fluido supercrtico.

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5. Tcnicas especiales:

a)
b)
c)
d)
e)
f)

II.

Cromatografa con fase invertida

Cromatografa con fase normal
Anlisis isocrtico (composicin F. mvil constante)
Elucin con gradiente (Composicin F. mvil cambia de forma continua)
Elucin en etapas o escalonada (Composicin F. mvil cambia de forma
escalonada)
Cromatografa bidimensional (etapas adicionales de separacin)

PROCEDIMIENTOS:

1. CROMATOGRAFIA EN PAPEL DE COMPUESTOS COLOREADOS

PROCEDIMIENTOS:

1. Con un lpiz trazar una lnea de tal manera que esta divida en dos a la
tira de papel. Trace otra lnea perpendicular a la lnea que dividi en
papel por la mitad 1cm del extremo de este. De la misma forma trazar
otra lnea perpendicular a 10cm de la primera lnea trazada (frente de
solvente).

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2. En el punto de origen aplique 4 veces la solucin acuosa de la muestra

problema (1ml aproximadamente), tratando de secarla en cada
aplicacin para evitar la difusin de la muestra sobre el papel.

3. en un tubo de ensayo vierta 1ml de solvente(propanona, acetona, agua,

en proporciones de 4:1:1), colocarlo en la gradilla y en un lugar estable

4. Colocar un soporte en el
a la altura del frente

papel filtro inerte

solvente.

RESULTADOS:

1. Luego de de introducir el papel filtro con al muestra problema dentro del

tubo de ensayo se observa que los colores de las respectivas sustancias
se desplazan ascendentemente formando distintas intensidades de

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colores por la lnea trazada en el medio del papel hasta llegar

aproximadamente a l frente del solvente en tonos cada vez mas claros.

2. Una de las sustancias viaja mas rpida que las dems debido a que
dicha sustancia tiene mas afinidad al solvente propanona, cetona, agua
en proporcin 4:1:1).
Calculo de la relacin de flujo.

Rf

frente.de.soluto(dis tan cia.alcanzada. por.la.muestra. problema )

frente.del.solvente(dis tan cia.alcanzada. por.el.solvente)

Rf = 4.8/10=0.48

2. CROMATOGRAFA EN CAPA FINA DE COMPUESTOS

INCOLOROS:
Reactivos y materiales:

Soporte: Silicagel G activado

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Sistema de solvente: Bz-AcOEt (2:1)

Sustancias: Acido acetil saliclico

Revelador: Vapores de iodo metlico, en la prctica se us el revelado

por luz UV.

Tcnica operatoria:

A 1 cm del borde inferior del portaobjeto (cromatograma) marcar dos

puntos equidistantes entre s con un lpiz.

Con un capilar aplicar en un punto el acido acetil saliclico patrn

(qumicamente puro) y el acido acetil saliclico extrado en las
practicas anteriores de, 3 a 5 veces, teniendo la precaucin de dejar
secar despus de cada aplicacin.

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Introducir el cromatograma en la cmara de saturacin el que a su

vez contiene 2 ml del sistema solvente. Cuando el solvente este por
llegar al borde superior retirarla de la cmara, marcar el frente de
solvente, dejar secar.

Exponer las placas cromatograficas bajo la luz UV. Las marcas que
aparezcan se sealaran con lpiz. Determinar el Rf de ambas
sustancias

RESULTADOS:

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Para el clculo del Rf se usara la siguiente expresin:

Rf

frente.de.soluto(dis tan cia.alcanzada. por.la.muestra. problema )

frente.del.solvente(dis tan cia.alcanzada. por.el.solvente)

En la prctica realizada los valores obtenidos arrojaron las siguientes

medidas:

RF1=0.43
RF2=0.50

ANLISIS:
El Rf del acido acetil saliclico patrn (qumicamente puro) y el Rf del
acido acetil saliclico problema tienden a ser muy prximos, esto significa
que la extraccin realizada en las prcticas anteriores fue buena.

III.

CUESTIONARIO:

Pregunta N1:
En la adsorcin la retencin de molculas se lleva a cabo nicamente en la
superficie del adsorbente y la sustancia retenida o adsorbida se le denomina
fase adsorbida. En la absorcin la retencin se sustancias, compuestos o
elementos se lleva a cabo en la estructura misma de la molcula de
absorbente en la que se puede presentar un intercambio inico entre los
componentes del absorbato y el absorbente (hay una reaccin qumica mas o
menos permanente). El proceso de absorcin se presenta cuando una
sustancia es qumicamente integrada en otra; por ejemplo: cuando usted bebe
un vaso de agua, usted esta "absorbiendo" ya que el agua pasa a formar parte
de usted; mientras que en la adsorcin, una sustancia esta siendo mantenida

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dentro de otra por efectos de un enlace fsico. Ejemplo: si usted derrama un

vaso de agua en su pantaln, el agua de ese derrame ser adsorbida por las
fibras de la tela, pero estar ah hasta que el agua se evapore.

La cromatografa

es un mtodo fsico de separacin basado en la

distribucin de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles,
una fija o estacionaria y otra mvil. En la cromatografa lquida, la fase mvil es
un lquido que fluye a travs de una columna que contiene a la fase fija. La
cromatografa lquida clsica se lleva a cabo en una columna generalmente
de vidrio, la cual est rellena con la fase fija. Luego de sembrar la muestra en
la parte superior, se hace fluir la fase mvil a travs de la columna por efecto
de la gravedad. Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el
tamao de las partculas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamao de
los micrones, lo cual gener la necesidad de utilizar altas presiones para lograr
que fluya la fase mvil. De esta manera, naci la tcnica de cromatografa
lquida de alta resolucin (HPLC), que requiere de instrumental especial
que permita trabajar con las altas presiones requeridas.

Cromatografa por gases:

esta es una tcnica para la separacin de

compuestos orgnicos e inorgnicos trmicamente estables y voltiles. La
cromatografa gas-liquido lleva a cabo la separacin por medio del reparto de
los componentes de una mezcla qumica, entre una fase gaseosa que fluye
(mvil) y una fase liquida estacionaria sujeta a un soporte solido. La
cromatografa gas-solido utiliza un absorbente solido como fase estacionaria.
La disponibilidad de detectores verslites y especficos, y la posibilidad de
acoplar el cromatgrafo de gases a un espectrmetro de masas o a un
espectrofotmetro de infrarrojo, amplan aun ms la utilidad de la
cromatografa de gases.

Pregunta N2:

COMPARACIN ENTRE CROMATOGRAFA DE GASES Y

HPLC:

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Como caractersticas de ambos mtodos: Son eficientes, muy selectivos,

ampliamente aplicables. Slo se requiere una muestra pequea. Pueden
utilizarse sin destruir la muestra. Se adapta fcilmente al anlisis cuantitativo.
Ventajas de la HPLC: Puede acomodar muestras no voltiles e inestables
trmicamente. Es aplicable a iones inorgnicos.
Ventajas de la CG: Se trata de un equipo sencillo y barato en comparacin
con HPLC. Es rpido. Tiene resolucin en paralelo (columnas capilares). Se
conecta fcilmente con la espectroscopia de masas, (MS). La CG, ofrece la
ventaja de la velocidad y simplicidad del equipo, pero la HPLC es aplicable a
sustancias no voltiles y materiales trmicamente inestables.
Algunas diferencias instrumentales: En HPLC no existen detectores tan
aplicables universalmente, ni tan tampoco tan fiables como en CG. El detector
en HPLC no es necesario que sea sensible en un intervalo tan grande de
temperaturas. El detector usado en HPLC debe tener un volumen interno
mnimo a fin de reducir el ensanchamiento de banda.

Pregunta N3:

El mtodo por capa fina es el mtodo idneo que se aplica para carreras aplicadas, como
ingeniera industrial. La cromatografa en capa fina presenta una serie de ventajas frente a
otros mtodos cromatogrficos (en columna, en papel, en fase gaseosa, etc) ya que el
utillaje que precisa es ms simple.
El tiempo que se necesita para
conseguir las separaciones es mucho
menor y la separacin es generalmente
mejor.
Pueden
usarse
reveladores
corrosivos, que sobre papel destruiran el
cromatograma. El mtodo es simple y los
resultados son fcilmente reproducibles, lo
que hace que sea un mtodo adecuado
para fines analticos.

Factores que influyen en una separacin por cromatografa decapa fina.

a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la

fase
estacionaria.
b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.
c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o
agentes
plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben
limpiarse corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus
dejar

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secar completamente antes de aplicar la muestra.

d) Pureza de los disolventes.

Pregunta N4:
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas la base de su
tamao molecular y carga elctrica. Los cidos nucleicos ya disponen de una carga
elctrica negativa, que los dirigir al polo positivo, mientras que las protenas se cargan
con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora cargas negativas de una manera
dependiente del peso molecular. Para la separacin se usa un gel de agarosa o
poliacrilamida (fibras cruzadas, como una malla). Al poner la mezcla de molculas y
aplicar un campo elctrico, stas se movern y debern ir pasando por la malla, por la
que las pequeas se movern mejor, ms rpidamente. As, las ms pequeas avanzarn
ms y las ms grandes quedarn cerca del lugar de partida.
Se fundamenta en la velocidad molecular y en la movilidad.

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IV. CONCLUSIONES:

Se vio como el cido acetil saliclico obtenido en prcticas anteriores fue un

compuesto pura ya que el Rf con respecto a la muestra patrn era numricamente
cercana.

Se observo en esta prctica que por medio de la cromatografa es posible

identificar de que sustancias est compuesta una mezcla y la pureza.

Como la polaridad del solventes utilizados para la cromatografa determinan la el

resultado mostrndonos sus diferentes compuestos.

Se observo como las diferentes caractersticas de la mezcla A se vean en la

placa promedio de sus diferentes manchas.

Como ciertos factores pueden modificar el restado en esta prctica.

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BIBLIOGRAFA

http://depa.pquim.unam.mx/~fercor/dqo/manuales/1311/p7.pdf
http://es.wikipedia.org/wiki/Electroforesis
Remington Farmacia. Segunda Edicin. Editorial Mdica Panamericana.
Principio y aplicaciones de la cromatografa. Miriam Barquero Quiroz. Serie
Qumica.
Qumica orgnica. Morrison y Boyd. Quinta Edicin 1998. Impreso en Mxico.
Qumica orgnica: Fundamentos terico-prcticos para laboratorio. Lydia Raquel.
Impreso en Espaa.
Qumica orgnica. Aliger Cava de Jongh Jonhson. Segunda Edicin. Impreso en
Espaa.
Qumica orgnica: conceptos y aplicaciones. Philip S. Bailey, Christina A. Bailey
1998
ABBOT D. y Andrews R.S. Introduccin a la Cromatografa. 3a. Ed. Alhambra,
Madrid, 1970.

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