Este documento describe la cromatografía líquida de exclusión, un tipo de cromatografía líquida que separa moléculas en función de su tamaño. Utiliza una fase estacionaria sólida y porosa y una fase móvil líquida. Se usa principalmente para estudiar el peso molecular y distribución de polímeros, así como para la purificación de proteínas. Las moléculas se separan según si son permeables, fraccionables o excluidas de los poros de la fase estacionaria.
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Este documento describe la cromatografía líquida de exclusión, un tipo de cromatografía líquida que separa moléculas en función de su tamaño. Utiliza una fase estacionaria sólida y porosa y una fase móvil líquida. Se usa principalmente para estudiar el peso molecular y distribución de polímeros, así como para la purificación de proteínas. Las moléculas se separan según si son permeables, fraccionables o excluidas de los poros de la fase estacionaria.
Este documento describe la cromatografía líquida de exclusión, un tipo de cromatografía líquida que separa moléculas en función de su tamaño. Utiliza una fase estacionaria sólida y porosa y una fase móvil líquida. Se usa principalmente para estudiar el peso molecular y distribución de polímeros, así como para la purificación de proteínas. Las moléculas se separan según si son permeables, fraccionables o excluidas de los poros de la fase estacionaria.
Este documento describe la cromatografía líquida de exclusión, un tipo de cromatografía líquida que separa moléculas en función de su tamaño. Utiliza una fase estacionaria sólida y porosa y una fase móvil líquida. Se usa principalmente para estudiar el peso molecular y distribución de polímeros, así como para la purificación de proteínas. Las moléculas se separan según si son permeables, fraccionables o excluidas de los poros de la fase estacionaria.
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UNIVERSIDAD TÉCNICA DE AMBATO
FACULTAD DE CIENCIA E INGENIERÍA EN ALIMENTOS
CARRERA DE INGENIERÍA EN ALIMENTOS
ANÁLISIS DE LOS ALIMENTOS II
TEMA:
CROMATOGRAFÍA LIQUIDA DE EXCLUSIÓN
INTRODUCCIÓN
Las técnicas cromatográficas están basadas en la separación de los componentes de una
mezcla, aprovechando la distribución de dichos componentes entre dos fases: la fase móvil y la fase estacionaria. Generalmente, mediante el empleo de una columna que contiene la fase estacionaria, los compuestos a separar son arrastrados por la fase móvil y son analizados a su paso por el detector. Si la fase móvil es un gas, da lugar a la cromatografía de gases, mientras que si es un líquido, se denomina cromatografía líquida.
FUNDAMENTO TEÓRICO
La cromatografía de exclusión es un tipo de cromatografía líquida en la cual la fase
estacionaria es sólida y la fase móvil es líquida. Se utiliza el término de “Cromatografía de exclusión por tamaño”. También se denomina “cromatografía de permeabilidad sobre gel” (GPC) o de permeación en gel.
APLICACIONES:
Su principal aplicación es la separación de las moléculas en función de su tamaño con
la finalidad de estudiar el peso molecular y distribución de los polímeros. Purificación de una proteína Determinación de masas moleculares. Elimina sustancias de pequeño tamaño molecular de una muestra proteica El resultado es similar a una diálisis, pero más rápido.
CARACTERÍSTICAS:
Las principales características de esta técnica cromatográfica son:
Fase estacionaria es inerte, por lo que la columna no se desactiva.
La muestra no interacciona químicamente con la fase estacionaria, ni con la fase móvil. Los solutos son generalmente sustancias de peso molecular elevado (mayores de 2000). Dependiendo de su medida y estructura, éstos se retienen o se eluyen a través de la columna. No se pueden emplear gradientes de elución en la fase móvil. En la figura 1 se muestra el esquema típico de un equipo GPC.
Además el relleno de columna se comporta como un tamiz o filtro dónde se distinguen tres tipos de moléculas:
• Moléculas permeables: Son moléculas pequeñas
• Moléculas fraccionables: Son moléculas intermedias que entran de manera parcial
en el relleno poroso.
• Moléculas excluidas: Son moléculas de medida superior
Es necesario recalcar que en la fase estacionaria se utiliza un material poroso con las siguientes características:
• Uniformidad en la granulometría de las esferas y en la medida de los poros;
• Estabilidad química
• Máxima inercia frente a los compuestos a separar
• Preparación rápida y sencilla
• Resistencia mecánica a altas presiones.
Figura N.-1: Esquema de un equipo GPC
Fuente: (Gutiérrez, Burdó & Cegarra, 2012).
BIBLIOGRAFÍA
Gutiérrez, M. Burdó, A. & Cegarra, J. (2012). La Cromatografía De Exclusión: Análisis de
la distribución de pesos moleculares en siliconas por GPC. Recuperado el 8 de Abril de 2019 de https://upcommons.upc.edu/bitstream/handle/2099/13132/LA%20CROMATOGRA FÍA%20DE%20EXCLUSIÓN,%20ANÁLISIS%20DE%20LA%20DISTRIBUCIÓ N%20DE%20PESOS.pdf
