Colutorio Con Aceites Esenciales de Ishipingo y Clavo de Olor PDF

UNIVERSIDAD POLITECNICA SALESIANA
SEDE QUITO
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS Y AMBIENTALES
CARRERA: BIOTECNOLOGÍA DE LOS RECURSOS NATURALES
Tesis previa a la obtención del título de:
Ingeniero en Biotecnología de los Recursos Naturales
TEMA:
Eficacia in-vitro de un colutorio elaborado con aceite esencial de

ishpingo (Ocotea quixos) y clavo de olor (Syzygium aromaticum).
AUTORA:
Teresa Melania Veloz Vera
DIRECTORA:
Ing. Tatiana Mosquera
Quito, Febrero 2011

DECLARATORIA DE RESPONSABILIDAD
Los conceptos desarrollados, análisis realizados y las conclusiones del presente

trabajo, son de exclusiva responsabilidad de la autora.
Quito, febrero de 2011
__________________

A mis padres Luis y Narcisa
A mis hermanos Luis Alejandro y Lorena
Gracias por su amor incondicional y por confiar en mí.

AGRADECIMIENTOS
No puedo dejar pasar esta oportunidad para agradecer, de todo corazón, a todas las
personas que de una u otra forma contribuyeron para que este sueño personal se haga
realidad:
• A Dios por el maravilloso don de la vida, por estar conmigo en todo

momento, por fortalecer mi corazón y ayudarme a salir adelante a pesar de las
dificultades.
• A la Universidad Politécnica Salesiana por el financiamiento de esta tesis.
• A mis padres: Luis y Narcisa, y mis hermanos: Luis Alejandro y Lorena, ya
que son ellos quienes me acompañan y me apoyan durante todo el transcurso
de mi vida, dándome ánimos y fortaleza cuando más lo necesito.
• A la Ing. Tatiana Mosquera, Directora de esta Tesis, por su entusiasmo,
constante ayuda y orientación. Por ser además, mi ejemplo personal y
profesional.
• A la Dra. María Elena Maldonado, por compartir desinteresadamente sus
conocimientos, sobretodo en el área de Microbiología.
• Al Químico Paco Noriega, por su colaboración en la identificación química
de los aceites esenciales de ishpingo así como en la cuantificación del mismo
durante el estudio de estabilidad acelerada.
• Al Máster Patricio Yánez, por su acertada asistencia y colaboración en el
análisis estadístico de los datos obtenidos.
• A Fundación Chankuap, por proveerme las muestras de aceites esenciales de
ishpingo.
• A la Dirección del CIVABI, por facilitarme el uso de las instalaciones,
materiales y equipos del laboratorio de Microbiología para el correcto
desenvolvimiento de esta Tesis.
• A los ayudantes y colaboradores de los Laboratorios del CIVABI, por
recibirme día a día durante este tiempo, por su gran voluntad y paciencia
facilitándome materiales y equipos.
• A los/as estudiantes que formaron parte del panel sensorial, por su
disponibilidad y apoyo en la prueba de perfil del producto elaborado.

• A mis amigos/as, por ser testigos y cómplices de las alegrías y tristezas, de

buenos y malos momentos pero sobretodo, por levantarme el ánimo cuando
las cosas no fueron como las esperaba.
• A todas las personas que de una u otra manera contribuyeron para que esta
Tesis llegue a su término.
Mil gracias a todos/as

INDICE
CARÁTULA………………………………………………………………………….i
DECLARATORIA DE RESPONSABILIDAD……………………………………...ii
DEDICATORIA……………………………………………………………………..iii
AGRADECIMIENTO….……………………………………………………………iv
ÍNDICE………………………………………………………………………………vi
INTRODUCCION…………………………………………………………………..vii
1. MARCO TEORICO………………………………………………………….1
2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA…………………………………...41
3. JUSTIFICACION…………………………………………………………...42
4. HIPÓTESIS…………………………………………………………………43
5. OBJETIVOS………………………………………………………………...44
5.1 General………………………………………………………..…………44
5.2 Específicos…………………………………..…………………………..44
6. MATERIALES Y MÉTODOS……………………………………………...44
7. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS………………………..58
8. CONCLUSIONES…………………………………………………………..89
9. RECOMENDACIONES…………………………………………………….90
10. FOTOGRAFÍAS…………………………………………………………….92
11. ANEXOS……………………………………………………………………96
12. BIBLIOGRAFÍA…………………………………………………………..125

INTRODUCCIÓN
La caries, así como las infecciones de garganta, son algunas de las enfermedades más
comunes en el mundo. Los microorganismos presentes en la placa dental o placa
bacteriana están íntimamente relacionados a estas patologías, siendo Streptococcus
mutans y Streptococcus pyogenes los agentes etiológicos que causan la caries y las
infecciones de garganta respectivamente; por lo cual, el control de estos
microorganismos es de mucha importancia para evitar la enfermedad y en la
actualidad se lo realiza mediante el uso de productos tópicos o locales (enjuagues
bucales y colutorios) que contienen sustancias antimicrobianas para eliminar la flora
bacteriana de la placa dental.
En los últimos años, el uso de las plantas como fuente de principios activos
antimicrobianos es de gran interés para los investigadores puesto que las ventajas son
diversas: fácil acceso, bajo costo y sobretodo, pocos efectos colaterales indeseables.
La presente investigación pretende demostrar de una manera clara y sencilla la

alternativa que se tiene en el uso de los aceites esenciales de ishpingo (Ocotea
quixos) y clavo de olor (Syzygium aromaticum) en la formulación de un colutorio
(enjuague bucal) que inhiba el crecimiento de S. mutans y S. pyogenes.
Esta investigación se realizó con el objeto de determinar la eficacia in vitro del

colutorio elaborado frente a cuatro enjuagues bucales comerciales (Listerine,
Encident, Oraldine y Colgate Plax) mediante el método de difusión en medio sólido.
En una primera parte se abordan los aspectos teóricos más relevantes de la

investigación así como la importancia y el por qué de la misma. Seguidamente se
procede a describir los objetivos de la investigación y se describe detalladamente los
materiales y métodos utilizados. A continuación se presentan los resultados y el
análisis de éstos. Finalmente se exponen las conclusiones y recomendaciones a las
que se llegaron con esta investigación.

1. MARCO TEORICO
1.1 LA PLACA DENTAL O PLACA BACTERIANA
1.1.1 Introducción
Los seres humanos vivimos inmersos en un mundo de bacterias, se encuentran por

todos lados y nuestro cuerpo no es la excepción. Pocas horas después del nacimiento,
“somos colonizados por bacterias que vivirán con nosotros durante toda la vida, estas
bacterias colonizan toda la piel, tracto digestivo, vías respiratorias altas, oídos, boca
y algunos otros tejidos.”1
Sin embargo sabemos que algunas de estas bacterias con las que convivimos
diariamente pueden representar un riesgo para nuestra salud, principalmente
en las siguientes situaciones:
• Cuando crecen de forma anormalmente alta.

• Cuando existen bacterias en un sitio anormal al que les corresponde.
• Cuando existen bacterias en un sitio normalmente estéril.2
Por estas razones, nuestro cuerpo debe funcionar como un micro-ecosistema

equilibrado en donde vivan simbióticamente un gran número de bacterias. Cuando
este equilibrio se rompe, ya sea por alteración del ecosistema bacteriano normal o
por factores del cuerpo humano que favorezcan la disminución de las defensas y que
permitan que las bacterias normales invadan y ataquen a su huésped humano, estas
bacterias representan un riesgo potencial. El número y el tipo de bacterias pueden ser
modificados por factores como: la temperatura, la humedad y la presencia de
nutrimentos o de sustancias inhibitorias.3

1
ABOITIZ, Carlos, Flora bacteriana normal,[en línea], 02/04/ 2008, actualizado 11/11/2008, [citado
08/08/2010], Formato html, disponible en Internet: http://www.doctoraboitiz.com/pediatria/36-
articulos-de-pediatria/114-flora-bacteriana-normal.html
2
Ídem
3
Ídem

1.1.2 La cavidad oral: hábitat de microorganismos
La cavidad oral, tomando en cuenta en ella a los dientes y las encías, es una de las
regiones del cuerpo que posee la flora bacteriana más diversa y compleja.4 La flora
oral está compuesta por más de 300 especies de microorganismos pero no está
completamente identificada.5
La boca está continuamente bañada por la saliva, manteniendo una temperatura de

35-36°C a un pH de 6,75 a 7,25, condiciones óptimas para el crecimiento de muchos
microorganismos.6
En el momento del parto, la boca del neonato está exenta de microorganismos, es

estéril, sin embargo, al establecerse un contacto con la madre, 8-12 horas después del
nacimiento, una gran cantidad de microorganismos se incrementan rápidamente
(lactobacilos, estreptococos, estafilococos, enterococos, coliformes, etc).7 Durante la
aparición de los primeros dientes, se incorporan a la flora bacteriana de la cavidad
oral varios anaerobios mientras que, en la niñez las especies facultativas son
predominantes. Conforme pasa el tiempo, las bacterias se incrementan de modo que
en la última etapa de la niñez, esta flora bacteriana bucal se parece a la de los adultos.
La variada flora de la boca puede ser resumida en la Tabla 1.

4
GUERRA, Juan, Microbiología bucal, [en línea], Bolivia, editor desconocido, fecha de publicación
desconocida, [citado 08-08-2010], formato pdf, disponible en Internet:
http://www.ops.org.bo/textocompleto/rnbiofa93020213.pdf, p. 69.
5
s/a, “Placa dentobacteriana”, Revista de la Asociación Dental Mexicana, Vol 60, Nº 1, México,
Enero-Febrero 2003, pp 34-36
6
Ídem, p. 35
7
Ídem, p. 35

Tabla 1. Flora normal de la cavidad bucal y su existencia

Bacteria Existencia
Staphylococcus epidermidis Muy frecuente
Staphylococcus aureus Común
Streptococcus mitis Muy frecuente
Streptococcus salivarius Muy frecuente
Streptococcus mutans Muy frecuente
Streptococcus faecalis Común
Streptococcus pneumoniae Común
Streptococcus pyogenes Común
Neisseria meningiditis Muy frecuente
Veillonella sp. Común
Coliformes (Escherichia coli) Común
Proteus mirabilis Común
Pseudomonas aeruginosa Ocasional o transitorio
Haemophilus influenzae Común
Bacteroides Común
Espiroquetas Común
Lactobacillus sp. Muy frecuente
Clostridios Ocasional o transitorio
Corinebacterias Común
Actinomicetos Común
Micoplasmas Común
Fuente: ABOITIZ, Carlos, Flora bacteriana normal, 2008
1.1.3 Placa dental: descripción general
Durante años han existido varias definiciones expresadas por diferentes

investigadores acerca del término placa dental. “La placa dental fue descrita por
primera vez en 1898 por Black, como una masa microbiana que recubría las lesiones
cariosas. En 1976, Bowen, define a la placa dental como depósitos blandos que

forman una biopelícula que se adhiere a la superficie dentaria o a otras superficies

duras en la boca”8.
En la actualidad, Marsh y Martin (2000), “definen a la placa dental como una

comunidad microbiana compleja que se encuentra en la superficie de los dientes,
embebida en una matriz de origen bacteriano y salival”9. Esta matriz se forma por
sustancias poliméricas extracelulares (EPS), cumple con una función de protección
de la comunidad bacteriana y facilita la comunicación entre los microorganismos por
señales bioquímicas.
Siendo una comunidad pluricelular, la placa dental posee comportamientos similares

a los de los organismos vivos individuales: nace, se desarrolla y se reproduce
presentando diferenciación morfológica y funcional entre las células constituyentes
así como complejos sistemas de comunicación dentro de la comunidad.
La placa dental también llamada placa bacteriana se puede definir como una “masa
blanda, translúcida y muy adherente que se acumula sobre la superficie de los
dientes, formada casi exclusivamente por bacterias y sus subproductos.”10 La OMS la
define como “una entidad bacteriana proliferante, enzimáticamente activa, que se
adhiere firmemente a la superficie dentaria” (…) por tal motivo, no se elimina con un
simple enjugue de agua.
Es importante tener presente la diferencia entre el concepto de placa dental y otros

depósitos dentarios como la sustancia alba, “la cual es un depósito aparentemente
igual a la placa bacteriana, pero fácilmente removible pues carece de la adherencia y
organización que son características fundamentales de la placa”.11

8
GUILARTE, C. y PERRONE, M. Microorganismos de la placa dental relacionados con la Etiología
de la Periodontitis, [en línea], Venezuela, 2004, Acta odontológica Venezolana, Vol 42, Nº 3, formato
pdf, disponible en Internet:
http://www.actaodontologica.com/ediciones/2004/3/microorganismos_placa_dental_etiologia_periodo
ntitis.asp
9
Ídem
10
CASTRO, Viviana, Inhibición Del Crecimiento In Vitro De Streptococcus mutans por Papaina y
Sanitrend, [en línea], Santiago-Chile, 2005, [citado 12-06-2010], Tesis Universidad de Chile, Facultad
de Odontología, formato pdf, disponible en:
http://www.cybertesis.cl/tesis/uchile/2005/castro_v/sources/castro_v.pdf, p.15
11
LAHOUD, Víctor, Placa Bacteriana, [en línea], lugar de publicación desconocido, editor
desconocido, fecha de publicación desconocida, [citado 21-09-2010], Revista Odontológica,

1.1.4 Formación de la placa dental
La placa dental, como se ha mencionado, está formada por un conjunto de

microorganismos. Su desarrollo incluye un conjunto de complejos procesos:12
• Formación de la película adquirida sobre el esmalte

• Adhesión bacteriana a la película adquirida
• Colonización primaria
• Colonización secundaria
• Maduración de la placa
La primera fase en la formación de la placa dental es la formación de la cutícula

dentaria o película dental adquirida (PDA), que ocurre a los pocos minutos de haber
realizado un correcto cepillado dental. La PDA “se define como una capa acelular
formada por proteínas salivales y otras macromoléculas, provenientes de desechos
bacterianos, su espesor varía entre 2 y 10 µm”13 (...). La PDA funciona como una
barrera de protección proporcionando “lubricación a las superficies impidiendo la
desecación del tejido, además, posee moléculas que funcionan como sitios de unión
para adherencia de microorganismos y enzimas de origen salival, lizosimas, amilasas
y peroxidasa, que favorecen la colonización bacteriana sobre la superficie de la
película”14
“La colonización bacteriana primaria ocurre mediante la adhesión irreversible y

específica entre los receptores de la película adquirida y las moléculas bacterianas

U.N.M.S.M., formato pdf, , disponible en Internet:
http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/rev_cientifica/n04_1994/pdf/a06.pdf, p. 28-29
12
LIÉBANA, José, Estabilidad de genotipos de Streptococcus mutans en escolares usando la técnica
AP-PCR y el cebador OPA-2, [en línea], Granada, Editorial de la Universidad de Granada, 2008,
[citado 24-10-2010], Tesis Universidad de Granada, Facultad de Odontología, formato pdf, disponible
en Internet: http://digibug.ugr.es/bitstream/10481/1836/1/17366768.pdf, ISBN 978-84-338-4915-1, p.
25.
13
LLENA-PUY, Carmen, “The rôle of saliva in maintaining oral health and as an aid to diagnosis”,
Med Oral Patol Oral Cir Bucal, 2006; 11: E449-55. © Medicina Oral S. L. C.I.F. B 96689336 - ISSN
1698-6946
14
ARICAPA, Diana, Actividad antimicrobiana de plantas sobre microorganismos cariogénicos, [en
línea], Bogotá, 2009, [citado 06-10-2010], Tesis Pontificia Universidad Javeriana, Facultad de
Ciencias Básicas, Carrera de Bacteriología, formato pdf, disponible en Internet:
http://www.javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/tesis324.pdf, p.52

conocidas como adhesinas, (…) esta etapa dura entre 4 y 24 horas y en ella
predominan las bacterias de metabolismo aerobio.”15
“La colonización secundaria puede durar entre 1 y 14 días, a partir de este

momento, predomina la multiplicación activa de bacterias por agregación y
coagregación, aunque también pueden haber bacterias que se unan por
adhesión. La placa aumenta de espesor y en las zonas más profundas
comienzan a predominar los microorganismos anaerobios, se establecen
fenómenos de competencia bacteriana y los nutrientes se obtienen a partir de
la degradación de la matriz acelular y gracias a la excreción de determinados
metabolitos bacterianos que pueden servir de nutrientes a otras especies.
Transcurridas dos semanas aproximadamente se forma la placa madura, en

cuyas zonas más profundas escasean el oxígeno y los nutrientes y aumenta el
acúmulo de productos de desecho, poniéndose en riesgo el número de células
viables (…). La placa madura puede mineralizarse y formar el cálculo, cuya
composición microbiana es similar a la de ésta, aunque tal vez con menor
número de células viables. La formación del cálculo tiene como prerrequisito
que la placa tenga un pH más alcalino que la saliva (…) La actividad de las
proteasas en la saliva está íntimamente relacionada con los índices de cálculo,
así mismo la alta concentración de urea en la placa favorece la deposición de
calcio y fósforo en la misma. Sobre esta placa calcificada pueden volver a
iniciarse procesos como los anteriormente descritos, lo que irá incrementando
su espesor. 16
Una característica importante de esta comunidad bacteriana que se establece en la

cavidad bucal es el “mantenimiento de una microflora estable en un medio que es
variable. Tal estabilidad ha sido denominada homeostasis microbiana”17.
“Esto no significa que no haya actividad metabólica alguna entre las

poblaciones microbianas que constituyen la placa. Por el contrario, esta
estabilidad es el resultado de un balance dinámico, sostenido por una serie de
interacciones, tanto sinérgicas como antagónicas, entre los diferentes grupos
microbianos. Estas interacciones incrementan el catabolismo de nutrientes
endógenos (proteínas y glicoproteínas) y proveen protección de las presiones
del medio, a través del mantenimiento de un medio local favorable aún
durante las fluctuaciones desfavorables periódicas que puedan ocurrir en el
microambiente. Estas interacciones permiten a los organismos, dentro de una
comunidad, persistir y crecer sobre un hábitat más amplio y desplegar
acciones sinérgicas en el reciclamiento de nutrientes, incrementando de esta
forma la eficiencia metabólica dentro de la comunidad.

15
LLENA, Carmen, Op. Cit., p. 453
16
Ídem, p. 453
17
PEREZ, Ada, “La Biopelícula: una nueva visión de la placa dental”, Rev Estomatol Herediana,
2005; 15(1): 82 - 85

De otro lado, las interacciones antagónicas entre los microorganismos son un

factor que contribuyen a determinar la composición de las comunidades
microbianas de la placa dental. La producción de compuestos antagónicos,
tales como bacteriocinas18, o sustancias inhibidoras semejantes a las
bacteriocinas, pueden proporcionar a un organismo determinado una ventaja
competitiva cuando interacciona con otros.”19
1.1.5 Clasificación de la placa dental
Existen varios criterios para clasificar a la placa dental. De acuerdo a sus propiedades
la placa puede ser: adherente o poco adherente, por su capacidad patógena puede ser
cariogénica o periodontopatogénica, sin embargo, la clasificación más utilizada es de
acuerdo a su ubicación: supragingival o subgingival.20
“La placa dental supragingival se encuentra en las superficies dentales y está

constituida predominantemente por flora bacteriana sacarolítica Gram
positiva, en las cuales se encuentran microorganismos cariogénicos; sin
embargo, es posible que esta placa se extienda hasta el fondo del surco
gingival y entre en contacto con la encía, recibiendo la denominación de placa
marginal. La placa dental subgingival se encuentra por completo dentro del
surco gingival o de los sacos periodontales, y está constituida principalmente
por flora bacteriana proteolítica Gram negativa en la cual se encuentran
microorganismos periodontopatogénicos.”21
Tanto la placa supragingival y subgingival son importantes en la formación de sarro

y caries dental, mientras que, la placa subgingival es importante en la destrucción
del tejido blando en las diferentes formas de la periodontitis.
1.1.6 Acumulación de la placa bacteriana: causas y consecuencias
La acumulación de la placa bacteriana se debe principalmente a técnicas incorrectas

de cepillado y hábitos higiénicos bucodentales inadecuados. Esta acumulación, es la
responsable de varias patologías como:
• Gingivitis: Según la Academia Americana de Periodontología, se define

como la inflamación de la encía. Es causada por la acumulación de placa

18
Las bacteriocinas son un grupo heterogéneo de péptidos sintetizados en el ribosoma de algunas
bacterias (por ejemplo las lácticas) que tienen actividad antibacteriana ante microorganismos
relacionados o presentes en su ambiente.
19
PÉREZ, Ada, Op. Cit., p. 84
20
s/a, Placa dentobacteriana, Op. Cit., p. 34
21
GUILARTE, C. y PERRONE, F., Op. Cit.

bacteriana alrededor del diente, en la encía, produciendo al inicio inflamación

y posteriormente sangrado.
• Enfermedad periodontal: Una vez que se ha producido una gingivitis, si la
placa bacteriana continúa en el diente sin ser removida por largo tiempo se
endurecerá por acción de los minerales de la saliva y se convertirá en un
cálculo dental. Si a continuación, éste sigue creciendo por mayor
acumulación de la placa bacteriana, “comenzará a retraer la encía y el
ligamento periodontal facilitando la caída del diente por pérdida de tejido de
soporte. Esto se llama enfermedad periodontal y se puede clasificar de
acuerdo a su severidad.”22
• Sarro: Si la acumulación de la placa no es controlada mediante la higiene
bucal diaria, al cabo de un tiempo se endurece por acción de los minerales y
se transforma en sarro dental. Al sarro también se lo denomina cálculo dental
o tártaro.
• Halitosis: Es el término usado para describir el aliento desagradable. La
principal causa de la halitosis, “es la putrefacción de sustratos proteicos,
principalmente, por parte de los microorganismos gramnegativos”23 presentes
en la boca. “Esto genera compuestos sulfúricos volátiles, que son
responsables de la halitosis.”24
• Caries: “La caries es una enfermedad infecciosa caracterizada por la
destrucción del tejido dentario por efecto de los ácidos que producen las
bacterias en presencia de alimentos azucarados y almidones. Esta enfermedad
puede ir desde una pequeña mancha blanca, que es el estadio inicial de la
caries, hasta la destrucción total del diente y la diseminación de la infección
hacia otras partes del cuerpo.”25

22
AIEPI, Módulo Salud Oral, [en línea], lugar de publicación desconocido, editor desconocido, fecha
de publicación desconocida, [citado 14-04-2010], Organización Panamericana de la Salud, formato
pdf, disponible en Internet: http://new.paho.org/hq/dmdocuments/2009/si-oral1.pdf, p. 9
23
VELAZQUES, María Eugenia y GONZÁLEZ, Olga, “La Halitosis. Definición, clasificación y
factores etiológicos”, Acta Odontológica Venezolana, Vol 44, Nº 2, Venezuela, 2006
24
Ídem
25
AIEPI, Op. Cit. p. 9

1.1.7 Composición microbiológica de la placa
“La placa bacteriana está constituida en un 70% de su volumen por microorganismos

y el 30% restante, por elementos microbianos”26, tales como: mucina salival,
residuos alimenticios y células descamadas de la cavidad bucal.27 La composición
microbiana de la placa es muy variable y se modifica en función de la localización
(supragingival o subgingival), el medio externo, la vida de la placa y la edad del
individuo. Los microorganismos que forman la placa dental son diversos, “se pueden
encontrar entre 200 y 300 especies”28.
La identificación de los microorganismos de la placa se basa en el análisis de su

morfología, tinción Gram y análisis bioquímicos.29
En general, la placa bacteriana supragingival madura (la más común) esta compuesta
en un 50% por cocos, un 48% por bacilos, un 1% por treponemas orales y el 1%
restante por otros microorganismos.30
En la Tabla 2, se presentan los microorganismos más importantes presentes en la

placa bacteriana supragingival madura.

26
LAHOUD, Víctor, Op. Cit., p. 28
27
Ídem, p. 28
28
SUÁREZ, Susana, Composición microbiana de las placas dentales, [en línea], lugar de publicación
desconocido, editor desconocido, fecha de publicación desconocida, [citado 16-05-2010], formato
html, disponible en Internet:
http://microral.wikispaces.com/Microbiolog%C3%ADa+de+las+placas+bacterianas+dentales.
29
LAHOUD, Víctor, Op. Cit., p. 28
30
SUÁREZ, Susana, Op. Cit.

Tabla 2. Microorganismos presentes en la placa supragingival madura

TIPO COCOS BACILOS DIVERSOS
MICROORGANISMOS
Mycoplasma spp
Candida spp
Trichomonas tenax
Entamoeba gingivalis
Gram (+) Streptococcus spp Actinomyces spp.

anaerobios Enterococcus spp (A. naeslundii, A.
facultativos Micrococcus spp odontolyticus)
Staphylococcus spp Corynebacterium
spp
Gram (+) Peptostreptococcus Eubacterium spp
anaerobios spp
estrictos
Gram (–) Neisseria spp.
preferentemente
aerobios
Gram (–) Veillonella spp. Haemophilus spp.
anaerobios Campylobacter spp.
facultativos Eikenella spp.
Gram (–) aerobios Fusobacterium spp.
estrictos Prevotella spp.

Selenomonas spp
Fuente: SUAREZ, Susana, Composición microbiana de las placas dentales, fecha de publicación
desconocida
Otros microorganismos importantes son: Streptococcus sanguis, S. mitis y S. oralis,

S. mutans, S. salivarius, S. gordonii S. parasanguis, Neisseria spp., Actinomyces
naeslundii. Prevotella loescheii, Prevotella intermedia, Capnocytophaga sp.,
Fusobacterium nucleatum, Porphyromonas gingivalis y otros.31

31
SUAREZ, Susana, Op. Cit.

1.1.8 Microorganismos seleccionados para la investigación
Para la realización de esta tesis se han escogido a dos microorganismos:

Streptococcus mutans y Streptococcus pyogenes. La selección de estos
microorganismos se ha basado en la importancia que éstos tienen en la producción de
algunas enfermedades comunes en la población como: la caries (producida por S.
mutans) y la faringoamigdalitis (producida por S. pyogenes).
1.1.8.1 Streptococcus mutans: antecedentes y características generales.
La caries es el “padecimiento de mayor prevalencia y costo en el mundo, ya que se

calcula que es de un 70% en la población mundial. Sin embargo, esta prevalencia es
mucho mayor en los países menos desarrollados y con mayor índice de pobreza.”32
En los países industrializados, la caries dental es considerada como uno de los

mayores problemas de salud oral, “llegando a afectar entre 60% y 90% de la
población escolar y adulta.”33 Investigaciones realizadas a “principios de la década
de 1990 en algunos países Latinoamericanos como República Dominicana,
Argentina, Venezuela y Ecuador, informan que entre 85% y 97% de la población
presentaba esta enfermedad.”34
La aparición de la caries dental está mediada por complejos mecanismos que son
iniciados por algunos factores como: genéticos, conductuales (sobretodo la dieta),
ambientales y microbianos. “En el caso de los factores microbianos, la presencia de
bacterias es fundamental para el inicio y progresión de las lesiones de caries, sin
bacterias no hay lesión.”35
Existen un sinnúmero de microorganismos que producen caries, a estos

microorganismos se les denomina cariogénicos, sin embargo, “Streptococcus mutans

32
PORTILLA, J. y col., “Conceptos actuales e investigaciones futuras en el tratamiento de la caries
dental y control de la placa bacteriana”, Revista Odontológica Mexicana, Vol 14, Nº 4, México,
Diciembre 2010, pp 218-225.
33
ARICAPA, Diana, Op. Cit., p. 20
34
Ídem, p. 20
35
FIGUEROA-GORDÓN, M, ALONSO, G y ACEVEDO, A, “Microorganismos presentes en las
diferentes etapas de la progresión de la lesión de caries dental”, Acta Odontológica Venezolana, Vol
47, Nº 1, Venezuela, 2009, ISSN: 0001-6365, pp 1-13.

ha sido implicado como el principal agente etiológico de la caries dental”36, por tal
razón, se ha escogido a este microorganismo para la realización de esta
investigación.
Streptococcus mutans es una bacteria cocacea, Gram positiva, microaerofílica. Para

poder crecer y desarrollarse “in vitro” necesita de medios enriquecidos y un ambiente
con baja tensión de oxígeno, sus células se disponen en cadenas.
El papel de Streptococcus mutans, en la iniciación y progresión de la caries dental ha

sido ampliamente estudiado. Algunas características fenotípicas de estas bacterias
son determinantes en su cariogenicidad. Su capacidad de virulencia está asociada a
varios factores, como son:37
• Su poder acidogénico, ya que metaboliza hidratos de carbono a ácidos

• Su poder acidofílico, pues es capaz de crecer a pH 5.2, y
• Su carácter acidúrico, ya que puede mantenerse metabólicamente activo a
pesar de un pH bajo
Es importante destacar que no todas las cepas de S. mutans poseen estas

características y que unas son más patógenas que otras. Las propiedades de
patogenicidad de algunas de estas especies, permiten su adaptación y crecimiento
sobre el esmalte y así la colonización del diente. En esta etapa influyen, también
factores exógenos como el excesivo consumo de sacarosa en la dieta. Para que
Streptococcus mutans se disemine entre las superficies dentarias debe estar presente
en cantidad suficiente en la saliva, para poder vencer a la colonización de la
microbiota bucal normal.38
La habilidad de Streptococcus mutans para formar la placa bacteriana, está

relacionada con la producción de glucosiltransferasas, enzimas que tienen un
rol principal en las interacciones adhesivas y expresión de virulencia de estos
microorganismos debido a que, catalizan la síntesis de polisacáridos
extracelulares (glucanos solubles e insolubles en agua) que promueven la
adhesión de estreptococos cariogénicos a la superficie del diente. Dichas
enzimas proporcionan a la célula un sustrato de dónde obtener energía y

36
CASTRO, Viviana, Op. Cit., p. 16
37
Ídem, p. 16-17
38
Ídem, p. 17

mantener la producción de ácido durante largos periodos de tiempo. A partir

del metabolismo de la sacarosa estos microorganismos producen
principalmente ácido láctico, el cual es fundamental en la virulencia debido a
que, aparentemente, es el ácido más potente que interviene en la
desmineralización del diente.39
1.1.8.2 Streptopccocus pyogenes: antecedentes y características generales
El estreptococo beta hemolítico del grupo A es conocido también como

Streptoccocus pyogenes y “es uno de los patógenos bacterianos de mayor
importancia en el ser humano.”40 Es un coco Gram positivo, anaerobio facultativo,
crece en pares o en cadenas en medio líquido, inmóviles, capsulados, requieren
medio nutricionalmente rico y una baja tensión de oxígeno para crecer, son catalasa
negativa y sensibles a la bacitracina. El rango de temperatura de su crecimiento varía
entre 25 a 45ºC siendo 37ºC la temperatura óptima.41 42
S. pyogenes es parte de la flora normal de la cavidad bucal sin embargo, es el

causante del 15-30%, de las faringoamigdalitis (FAA) bacterianas.43 La FAA es una
enfermedad que se caracteriza ser un proceso agudo febril con inflamación de las
membranas mucosas y estructuras subyacentes de la nasofaringe y amígdalas,
evidenciándose eritema, exudados y ulceraciones.44 “El término faringitis es otra
variante semántica intercambiable, si bien debe reservarse a la infección primaria de
la faringe.”45 “Raramente otras bacterias pueden dar faringitis: estreptococos ß–

39
CASTRO, Viviana, Op. Cit., p. 17
40
GORDILLO, R y otros, “Sensibilidad de aislamientos faríngeos de Streptococcus pyogenes en la
provincia de Córdoba (España)”, Prous Science S.A.-Sociedad española de Quimioterapia, Rev Esp
Quimioterap, Vol 16, Nº1, España, Marzo 2003.
41
RIVERA, Maribel, “Estreptococo Beta Hemolítico grupo A (Streptococcus pyogenes)”, Honduras
Pediátrica, Volumen XIX, Nº2, Honduras, Abril, Mayo, Junio 1998, pp 47-51
42
AÑANCA, Erick, Efecto antibacteriano invitro del extracto acuoso de vainas de Caesalpinia
spinosa (Tara) en cepas de Staphylococcus aureus y Streptococcus pyogenes, [en línea], Perú, 2009,
[citado 29-10-2010], Tesis Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann, Facultad de Ciencias
Médicas, formato pdf, disponible en Internet: http://www.unjbg.edu.pe/tesis/pdf/tesis11.pdf, p. 25.
43
MONTEQUI, S y SANTOS, J.C, “Infecciones bacterianas de vías altas: Otitis, amigdalitis”, Boletín
de la Sociedad de Pediatría de Asturias, Cantabria, Castilla y León, Vol 46, Suplemento 2, España,
2006, pp 294-303.
44
RUIZ, Carmen, Prevalencia de Streptococcus beta hemolítico del grupo A, en niños con
faringoamigdalitis aguda bacteriana y niños sanos, [en línea], Guatemala, Enero 2003, [citado 29-
10.2010], Tesis Universidad Francisco Marroquín, Facultad de Medicina, formato pdf, disponible en
Internet: http://www.tesis.ufm.edu.gt/pdf/3538.pdf, p. 8
45
Ídem, p. 294

hemolíticos grupo C y G, anaerobios, Corynebacterium diphteriae, Neisseria

gonorrhoeae.”46
La FAA ocurre principalmente en niños y adolescentes de edad escolar (5-15 años),

con una gran incidencia en los primeros años escolares. Es importante recalcar que
todas las edades son susceptibles a esta enfermedad y no existe ningún tipo de
predilección por el sexo.47
La incidencia de FAA es mayor en climas templados y fríos debido al contacto

cercano entre las personas. La transmisión del agente causante, S. pyogenes, es
mayor durante la fase aguda (3-5 días) sin tratamiento y disminuye durante la etapa
de colonización. Durante la fase aguda de la FAA, el S. pyogenes se encuentra en
grandes cantidades en la nariz y garganta y si no existe un tratamiento adecuado, este
microorganismo persiste durante algunas semanas pese a que desaparecen los
síntomas y signos en pocos días.48
En el tratamiento de la FAA, la penicilina es el agente elegido prioritariamente. La

amoxicilina es una alternativa con eficacia semejante.49
Las complicaciones por FAA son poco frecuentes (1%) y pueden ser:
• Complicaciones locales: flemón amigdalino, absceso retrofaríngeo, adenitis

cervical supurada, otitis media aguda, mastoiditis, sinusitis, celulitis cervical.
• Complicaciones generales o post–estreptocócicas: fiebre reumática y
glomerulonefritis aguda; son extremadamente infrecuentes en el adulto.

46
SAVIO, Eduardo y otros, Guías de Tratamiento Infecciones Respiratorias, [en línea], Montevideo,
UDELAR, Agosto 2005, [citado 22-08-2010], formato pdf, disponible en Internet:
http://www.clinfec.fmed.edu.uy/pautas/pdfs/GuiaTToIR205_1.pdf, ISSN 1510-9380, pp 1-19
47
RUIZ, Carmen, Op. Cit. p. 9
48
Ídem, p. 9
49
SAVIO, Eduardo y otros, Op. Cit., p.7

1.1.9 Control de la placa bacteriana
“El control de la placa bacteriana es la eliminación de la placa en forma regular y la

prevención de su acumulación sobre los dientes y superficies (…) adyacentes (…)”.50
Esta se logra mediante métodos: mecánicos y químicos.
El método mecánico se basa en la remoción de la placa por medio del cepillado, la

limpieza interdental (mediante el uso de la seda, hilo dental o palillos de dientes) y el
raspaje y alisado radicular (realizado por el odontólogo con instrumentos
apropiados). Una desventaja de estos métodos es que requieren tiempo, motivación y
destreza manual por lo tanto, pueden no ser suficientes para controlar la placa.51
Por su parte, “el método químico para el control de la placa se dirige a la utilización
de sustancias antisépticas y/o antibióticas que permiten reducir o retardar la
formación de la placa bacteriana (…)”52. Estas sustancias actúan por medio de varios
mecanismos como:53
• Evitando la adherencia bacteriana (mediante el empleo de agentes

antiadhesivos)
• Retardando la proliferación bacteriana con sustancias bacteriostáticas.
• Extrayendo la placa establecida mediante lo que se conoce como "cepillo
dental químico".
• Alterando la patogenia de la placa.
Ahora bien, el control químico de la placa, como ya se ha mencionado, está dado por
diversas sustancias que son utilizadas como enjuagues bucales. Las sustancias más
utilizadas son:54

50
PLATT, Cristina, y otros, Uso de los diferentes agentes químicos para el control de la placa
bacteriana como coadyuvantes en la prevención de las enfermedades gingivales, [en línea],
Venezuela, editor desconocido, fecha de publicación desconocida, [citado 27-05-2010], ODOUS
Científica, Revista de la Facultad de Odontología, Universidad de Carabobo, formato pdf, disponible
en Internet: http://servicio.cid.uc.edu.ve/odontologia/revista/v5n1/5-1-2.pdf, p.2.
51
Ídem, p. 3
52
Ídem, p. 3
53
Ídem, p. 4
54
Ídem, p. 4

1. Los compuestos de amonio cuaternario (cloruro de benzalconio, cloruro de

cetilpiridinio)
2. Fenoles (triclosán) y aceites esenciales55.
3. Productos naturales (sanguinarina)
4. Bisguanidas (digluconato de clorhexidina)
1.2 LOS ENJUAGUES BUCALES
1.2.1 Descripción general y tipos
Los enjuagues bucales son soluciones que se emplean después del cepillado dental,
con el fin de eliminar la placa bacteriana.56 Usando una definición más técnica,
podemos decir que los enjuagues bucales “son soluciones acuosas o hidroalcohólicas
que se aplican sobre las mucosas de la cavidad bucal. Se utilizan para limpiar y
refrescar dicha cavidad.”57
Los enjuagues bucales pueden ser clasificados según su contenido de alcohol,

entonces tenemos58:
• Ausencia de alcohol: Son soluciones acuosas generalmente de flúor utilizadas

principalmente como aporte suplementario de flúor para prevención de la
caries.
• Colutorios: Su contenido en alcohol es nulo o inferior al 20%. Se utilizan sin
diluir.
• Elixires: Su contenido en alcohol es superior al 50%. Se administran diluidos
en agua.

55
Entiéndase en este punto como aceites esenciales únicamente a los monoterpenos cíclicos y
acíclicos mas no a “las mezclas volátiles, de naturaleza compleja” elaboradas por las plantas.
56
GUADRÓN, José, Efecto sobre la placa bacteriana de los antisépticos bucales, [en línea], El
Salvador, Universidad Salvadoreña Alberto Masferrer, Facultad de Cirugía Dental, 2007, [citado 22-
05-2010], formato pdf, disponible en Internet:
http://www.usam.edu.sv/SiteUmasferrer/InvetigacionInstitucional/Enjuagues%20bucales.pdf , p. 4
57
MUÑOZ, María José, Higiene bucodental. Pastas dentríficas y enjuagues bucales, [en línea], lugar
de publicación desconocido, editor desconocido, fecha de publicación desconocida, [citado 19-05-
2010], Dermofarmacia, formato pdf, disponible en Internet:
http://www.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?_f=10&pident_articulo=15465&pident_usuario=0&pide
nt_revista=4&fichero=04v19n03a03008pdf001.pdf&ty=75&accion=L&origen=doymafarma&web=w
ww.doymafarma.com&lan=es, p. 5
58
Ídem, p. 5

1.2.2 Composición
Los enjuagues bucales tienen prácticamente la misma composición que las pastas
dentríficas, aunque no llevan sustancias abrasivas.59 Los componentes más
importantes de un enjuague bucal y su función, según María José Sánchez son:
• Detergentes o espumantes: Son agentes tensioactivos cuya función es

disminuir la tensión superficial, solubilizar los depósitos existentes sobre los
dientes y facilitar la dispersión de los agentes activos del dentífrico. Los más
usados son: Lauryl sulfato de sodio, N-Lauryl sarcosinato de sodio (Gardol),
Cocomonoglicerido sulfanato de sodio. Se usan en concentraciones que van
del 1-3%.
• Humectantes: Evitan que las mucosas bucales se resequen con el uso del
producto. Se usan principalmente: glicerina, sorbitol, polietilenglicol y
propilenglicol en concentraciones que van del 10-30%.
• Aromatizantes: Utilizados para que el consumidor tenga la sensación de
frescura en la boca luego del uso del producto. Por ejemplo: mentol, timol,
eucaliptol, esencias de menta, canela, fresa y otros.
• Edulcorantes: Útiles para proporcionar un sabor dulce al enjuague. Se usa:
sacarina, xilitol y ciclamatos en concentraciones del 1-2%.
• Colorantes: Necesarios para proporcionar características organolépticas
agradables a la vista para el consumidor. Se usan los mismos colorantes
usados en la industria alimenticia.
• Conservantes: Son imprescindibles sobretodo si el enjuague carece de
alcohol. Principalmente se usan: benzoatos y parabenos en concentraciones
del 0.1 al 0.5%.
• Principios activos: Aquellos que ejercen algún efecto terapéutico como:
o Sustancias antiplaca o antibacterianas: Son agentes que eliminan los
microorganismos presentes en la placa. Los más usados son:
digluconato de clorhexidina, triclosán, hexetidina, fluoruros (fluoruro
de estaño), aceites esenciales (timol, eucaliptol, mentol).

59
MUÑOZ, María José, Op. Cit., p. 5

o Sustancias que aumentan la resistencia del esmalte dental: Útil para

prevenir la caries, son sustancias que contienen flúor. Los principales
compuestos fluorados son: Fluoruro sódico, Mono flúor fosfato de
sodio, Fluorhidrato de Nicometanol (fluorinol), Fluoruro de estaño,
Flúor de aminas, Fluoruro potásico.
o Sustancias desensibilizantes: Para combatir la sensibilidad dental a
los cambios térmicos o a los ácidos. Las principales sustancias
desensibilizantes son: nitrato de potasio, flúor, cloruro de estroncio,
oxalato férrico, lactato de aluminio, citrato sódico dibásico.
o Sustancias blanqueadoras: Para aclarar el color de los dientes. Las
sustancias más usadas son: peróxido de carbamida, bicarbonato sódico
micropulverizado, trifosfato pentasódico, citroxaina, odontoblaxina.
o Sustancias antiinflamatorias: Para combatir procesos inflamatorios de
las encías y regenerar las mucosas. Las más utilizadas son: alantoína,
aldioxa, provitamina B5 (pantenol), ácido hialurónico, enoxolona,
vitamina E.
o Enzimas: Actúan sobre el metabolismo de la placa en casos de
resequedad bucal, restableciendo el equilibrio bacteriano. Las más
usadas son: Glucosa oxidasa, Amiloglucosa oxidasa, Lactoperoxidasa,
Glucolactoperoxidasa.
o Sustancias portadoras de calcio: Se usa el glicerofosfato cálcico.
o Sustancias naturales: Pueden tener uno o varios de los efectos
mencionados anteriormente. Se usan extractos de plantas, entre los
más conocidos están los extractos de manzanilla, berenjena, clavo de
olor, tomillo, salvia, mirra, menta y otros.
1.2.3 Método de elaboración
Los enjuagues bucales son soluciones. Se entiende por solución a la “mezcla,

60
química y físicamente homogénea, de dos o más sustancias” . Las soluciones son las
formas farmacéuticas más simples y de uso frecuente en la actualidad.

60
CUMBREÑO, Soledad y PÉREZ, Francisco, Procedimientos Normalizados De Trabajo–
Pn/L/Ff/007/00, Offarm, Vol 23, Nº 9, Octubre 2004, pp 156-158.

Principalmente son formulaciones de antisépticos tópicos (enjuagues bucales) y

productos dermatológicos (queratolíticos, corticoides, antibióticos antiacné, etc). 61
El método de elaboración de estos productos propuesto por Soledad Cumbreño se

resume en los siguientes pasos:
• Pesar o medir todos los componentes de la fórmula.

• Reunir las ¾ partes del disolvente con el o los principios activos y agitar
hasta que se disuelvan completamente. “La velocidad de disolución del
principio activo puede aumentar calentando, siempre que este aumento de
temperatura no afecte a la estabilidad del producto”62 o de los principios
activos. Si el o los principios activos son termolábiles, añadirlos y disolverlos
en frío. Si el o los principios activos son insolubles en el disolvente,
disolverlos previamente en un disolvente adecuado.
• Añadir lentamente los componentes minoritarios (conservantes, colorantes,
saborizantes por ejemplo) y agitar hasta su completa disolución.
• Adicionar lentamente (si la fórmula lo describe) y con agitación constante,
los espesantes. Mezclar hasta que se obtenga una solución homogénea.
• En caso de ser necesario, filtrar la solución.
• Completar la solución (con el resto del disolvente) hasta el volumen total
especificado en la fórmula.
• Proceder al acondicionamiento en el envase adecuado (compatible con la
solución que contiene, atendiendo a las especificaciones).
• Realizar los controles de calidad respectivos: organolépticos, físico-químicos,
microbiológicos.
1.2.4 Marcas más usadas y su composición
En este punto se procederá a describir las características de los enjuagues bucales que
serán utilizados como muestras en esta investigación. La información que se
presenta, es la descrita en las etiquetas de cada producto.

61
CUMBREÑO, Soledad y PÉREZ, Francisco, Op. Cit., p. 156
62
Ídem, p. 158

1.2.4.1 Colgate Plax Menta Fresh Mint
Colgate Plax® proporciona una protección prolongada y una duradera sensación de

limpieza y frescura en su boca. Su fórmula exclusiva con triclosán y fluoruro de
sodio ayuda a formar una barrera protectora que continuamente ayuda a reducir la
formación de placa bacteriana y el mal aliento. Además, Colgate Plax® proporciona
protección a los dientes y las encías entre cepilladas por 12 horas. Con su fórmula
odontológicamente comprobada, Colgate Plax® ayuda a fortalecer sus dientes,
proporcionando una mayor protección anticaries.
Instrucciones de uso: Use Colgate Plax® antes o después de cepillar sus dientes, al
menos dos veces al día. Llene la tapa con Colgate Plax®. No adicione agua.
Enjuague la boca durante 60 segundos y después elimine el producto de la boca.
Advertencias: No tragar. Manténgase fuera del alcance de los niños. No debe ser
usado por niños menores de 6 años. Si observa alguna reacción desfavorable,
suspenda su uso.
Fabricante: Colgate-Palmolive Indústria e Comércio Ltda. Brasil.
Ingredientes: Fluoruro de sodio (0.05% o 225 ppm de flúor), triclosán (0.03%),

Gantrez63 (0.20%), agua, sorbitol, alcohol etílico, glicerina, lauril sulfato de sodio,
metilcocoil taurato de sodio, copolímero PVM/MA, sabor, fosfato disódico, fluoruro
de sodio, hidróxido de sodio, triclosano, sacarina sódica, D&C amarillo 10
(CI47005), FD&C azul 1 (CI42090).
El triclosán usado como principio activo en este enjuague bucal es un derivado del
fenol y ha sido incluido recientemente en los enjuagues bucales y las cremas
dentales.
Es incoloro y cristalino y tienen un amplio espectro de eficacia contra las

bacterias Grampositivas y Gram-negativas. También es efectivo contra las

63
El Gantrez es un copolímero entre metil vinil éter y anhídrido maleico (PVM/MA) y se ha descrito
su uso en la industria farmacéutica como espesante, estabilizante de soluciones acuosas, componente
de adhesivos dentales, parches transdérmicos y excipientes en comprimidos bucales.

microbacterias, bacterias estrictamente anaeróbicas, esporas y hongos. Su

mecanismo de acción se da en la membrana citoplasmática microbiana,
induciendo un escape de las sustancias celulares y de esta manera, causando
una bacteriólisis. Su toxicidad es baja y es altamente liposoluble.64
Solo como colutorio al 0,2% tiene un efecto inhibitorio moderado de la placa

y una sustantividad65 antimicrobiana de alrededor cinco horas. Su acción se
ve reforzada por el agregado de citrato de zinc o por el copolímero éter
polivinilmetacrílico del ácido maleico. Más que beneficios en el control de
placa, el triclosan parece tener importancia en control de la gingivitis al tener
un papel antiinflamatorio.(…) Tiene un control antiplaca similar al fluoruro
sódico pero muy inferior a clorhexidina 0,12% (Addy, 1990). No se han
observado efectos adversos importantes con esta sustancia.66
1.2.4.2 Encident
El enjuague Encident, es la fórmula más efectiva para eliminar en forma prolongada

las bacterias que causan la caries, el mal aliento, enfermedades periodontotales como
la gingivitis, periodontitis y otras infecciones de la orofaringe, manteniendo las
encías sanas. Su sabor agradable a menta deja su boca fresca y saludable.
Instrucciones de uso: Llene el dosificador de la tapa y enjuague su boca mínimo por

un minuto, luego deseche.
Advertencias: No lo ingiera. Temperaturas bajas pueden cambiar la apariencia de

este producto sin afectar sus propiedades y efecto. Consulte a su odontólogo para
tratamientos específicos y/o prolongados.
Fabricante: Blenastor C.A. Quito-Ecuador.
Ingredientes: gluconato de clorhexidina (0.12%), fluroruro de sodio (0,10%).
La clorhexidina es sin duda el antiséptico de elección. Su utilización es

amplia y es el agente más efectivo. La reducción de placa y de gingivitis
alcanza el 60%. Su mecanismo de acción se realiza mediante una reducción

64
PLATT, Cristina, y otros, Op. Cit., p.5
65
La sustantividad se define como la habilidad de un agente de unirse a las superficies titulares y de
liberar a través del tiempo, en dosis adecuadas, su principal ingrediente activo.
66
BASCONES, A y MORANTE, S, “Antisépticos orales. Revisión de la literatura y perspectiva
actual”, Avances en periodoncia, Vol 18, Nº 1, España, Abril 2006, pp 31-59.

de la formación de la película adquirida y alteración del desarrollo bacteriano

y de la inserción al diente. Se presenta de tres formas: digluconato, acetato e
hidrocloruro, la mayoría de productos usan el digluconato en concentrados
del 20% o 12%.(…) El estudio definitivo que introdujo la clorhexidina en el
mundo de la periodoncia fue el realizado por Löe y Schiott en 1970, donde se
demostró que un enjuague de 60 segundos dos veces al día con una solución
de gluconato de clorhexidina al 0,2% en ausencia de cepillado normal, inhibía
la formación de placa y consecuentemente el desarrollo de gingivitis.(…) A
bajas concentraciones tiene efecto bacteriostático, a altas concentraciones es
bactericida debido a la precipitación o coagulación del citoplasma. La
clorhexidina adsorbida gradualmente se libera durante veinticuatro horas,
aunque la concentración en la boca disminuye. Por ello reduce la
colonización bacteriana de las superficies dentarias.(…) Su efecto adverso
más común es la pigmentación marrón de los dientes, de algunos materiales
de restauración y de las mucosas sobre todo del dorso de la lengua. La
discoloración de las superficies de los dientes, lengua y mucosa oral es un
efecto colateral bien conocido de los productos que contienen clorhexidina.
Estas discoloraciones se piensa que pueden estar originadas por la interacción
entre las sales de clorhexidina en la boca y los taninos presentes en algunos
alimentos (té, vino, etc...) aunque tampoco puede descartarse la concentración
y la dosis.(…) Otro efecto secundario descrito frecuentemente es la alteración
del gusto.67
1.2.4.3 Listerine
Enjuague bucal. Ayuda en la higiene oral, en la prevención y reducción de la placa

bacteriana, así como de la gingivitis. Combate los gérmenes que causan el mal
aliento, la placa y la inflamación de las encías (gingivitis).
Instrucciones de uso: Enjuague la boca con 20 ml durante 30 segundos, sin diluir, 2

veces al día, después del cepillado.
Advertencias: Hipersensibilidad a los componentes. No administrar a niños menores

de 12 años. No ingerir. Si observa alguna reacción desfavorable, suspenda su uso y
consulte al odontólogo. El clima frío puede cambiar su apariencia, sin alterar su
efecto. Mantenga alejado de los niños. Almacene a temperatura ambiente. No exceda
de 30ºC. Consulte a su odontólogo anualmente.
Fabricante: McNeil LA LLC, Cali-Colombia

67
BASCONES, A y MORANTE, S. Op. Cit. p. 37-41.

Ingredientes: agua, alcohol 28.4%, ácido benzoico, eucaliptol, timol, mentol, metil
salicilato, benzoato de sodio, caramelo, Poloxamer 407.
Los fenoles y aceites esenciales han sido utilizados en colutorios y caramelos

durante años, aunque no tan eficaces como la clorhexidina. Tienen una
actividad antiplaca avalada por una cantidad de estudios a corto y largo plazo
de uso en el hogar. Lindhe (2000). (…) El producto comercial característico
de este grupo es el Listerine. Su mecanismo de acción se relaciona a la
ruptura de la pared celular e inhibición de la enzima bacteriana. Sus
principales efectos adversos son la sensación de quemadura y gusto amargo.
Comentan Ocampo y col. (2000) que puede producir una reducción entre 20 y
34% de la placa.68
Entre sus efectos adversos podemos destacar su fuerte sabor, que la casa
comercial justifica diciendo que al ser un producto norte americano es más
fuerte porque a los americanos les gustan los sabores fuertes y de acuerdo a
Pontefract y cols. en 2001 tiene un ligero poder erosivo sobre el esmalte. De
acuerdo a Addy y cols. 1995 el Listerine® tiñe los dientes en combinación
con una ingesta abundante de te, en su estudio, en el que los pacientes bebían
cinco tazas de te al día (…) lo que es un factor a tener en cuenta a la hora de
usar este producto a largo plazo (…) Otros efectos secundarios observados
han sido: (…) el sabor amargo y la sensación de quemazón en la cavidad
oral.69

1.2.4.4 Oraldine
Tópico bucal. Antiséptico bucofaríngeo. Efecto coadyuvante en el tratamiento de la

estomatitis ulcerosa y micótica. Reduce los síntomas y se observa un incremento de
la cicatrización en lesiones orales quirúrgicas, traumáticas e infecciosas.
Instrucciones de uso: Haga gargarismos con 15 ml (una cucharada) de Oraldine sin

diluir durante 30 segundos. Repita 2 o 3 veces al día. No exceda la dosis
recomendada.
Advertencias: Si esta embaraza o en periodo de lactancia consulte al médico antes

de usar este producto. Evítese el contacto con los ojos, si esto sucede con abundante
agua fresca. Manténgase fuera del alcance de los niños. No ingerir. Consérvese el
frasco bien cerrado a temperatura ambiente.

68
PLATT, Cristina, y otros, Op. Cit., p. 5.
69
BASCONES, A y MORANTE, S. Op. Cit. p. 35

Fabricante: McNeil LA LLC- Cali, Colombia.
Ingredientes: Cada 100 ml contienen: hexetidina 100 mg, excipientes: alcohol 10

ml, sacarina sódica 27.800 mg, sorbitol y otros c.s.
La hexetidina es un derivado de pirimidina al que se le atribuyen propiedades

antisépticas así como la de acelerar la cicatrización postcirugía periodontal
(Donnazzan, 1963; Leydiger 1961; Simring, 1963). La hexetidina tiene una
acción inhibitoria limitada de la placa. Su acción antiplaca se reforzaría con
las sales de Zinc. Su sustantividad es de 1-3 horas, al estudiar su efectividad
en la curación de úlceras aftosas, no se encontró ningún beneficio sobre una
higiene oral convencional. Además la hexetidina en concentraciones mayores
del 0,1% puede producir úlceras orales. (…) la hexetidina tiene algún efecto
inhibidor de placa y aunque éste se ve mejorado en combinación con Zn,
sigue siendo menor en comparación con el efecto antigingivitis y antiplaca de
clorhexidina al 0,2%. 70
1.3 LA FITOTERAPIA
1.3.1 Descripción general
Una de las actividades más antiguas del ser humano es el estudio de plantas,
sobretodo como una importante fuente de alimento. Desde siempre, el ser humano
tuvo la necesidad de distinguir “entre aquellas plantas que eran venenosas y las que
no lo eran, adquiriendo así un amplio conocimiento sobre aquellas que poseían
propiedades medicinales, que fue transmitiendo a través del tiempo al principio en
forma verbal y luego por medio de la escritura.”71 Sin dudarlo, existen infinidad de
especies de plantas que contienen sustancias o principios activos de importancia para
el tratamiento de enfermedades y que aún están por descubrir.
“Muchas especies son estudiadas con frecuencia para hallar en ellas su posible valor
farmacológico, en especial por sus propiedades estrogénicas, antipiréticas,
antihelmínticas, astringentes, fungicidas, antibióticas.”72 En la actualidad, las plantas,

70
BASCONES, A y MORANTE, S. Op. Cit. p. 36
71
ROMERO, Melissa, HERNANDEZ, Yrasema y GIL, Marielsa, Actividad inhibitoria de la
Matricaria recutita “Manzanilla Alemana” sobre el Streptococcus mutans,[en línea], Caracas, fecha
de publicación desconocida, [citado 16-06-2006], Revista Latinoamericana de Ortodoncia y
Odontopediatría, formato pdf, disponible en Internet:
http://www.ortodoncia.ws/publicaciones/2009/art1.asp, ISSN: 1317-5823, pp 1-13
72
Ídem, p. 3

sobretodo las medicinales, están recobrando el papel protagónico “que tuvieron en

los primeros tratamientos médicos, se aprecia un nuevo auge de las aplicaciones
terapéuticas de las plantas, una recuperación de su uso”73 y es así que nace la
fitoterapia, es decir, “la técnica médica que se sirve de las plantas (del griego phytos,
planta) para combatir las enfermedades y restablecer los equilibrios de la salud.” 74
1.3.2 Sustancias Naturales con Actividad Antimicrobiana
Si se entiende por “natural” lo que el Diccionario de la Real Academia de la Lengua

define como “aquello perteneciente o relativo a la naturaleza”, se entiende que esto
engloba diversos aspectos:
1) Deben ser considerados los elementos naturales que constituyen la tabla periódica,
dentro de estos, los utilizados como antimicrobianos son “el oxigeno, el yodo y el
arsénico, empleados para la infecciones por anaerobios, la desinfección y el
tratamiento de la sífilis respectivamente.”75
2) Es necesario tomar en cuenta a las “sustancias producidas por microorganisos con

carácter biocida, haciendo especial hincapié en el papel de los probióticos.”76
3) Otro aspecto esencial constituyen las “sustancias sintetizadas por individuos del
reino animal que presentan igualmente actividad antimicrobiana, con especial
referencia a los compuestos de origen peptídico.”77
4) Finalmente, sin duda, el reino vegetal es el que proporciona la mayor cantidad y

variedad de sustancias antimicrobianas aplicadas a las enfermedades humanas.

73
ROMERO, Melissa, HERNANDEZ, Yrasema y GIL, Marielsa, Op. Cit. p. 3
74
BUENO, Mariano, Fitoterapia, [en línea], lugar de publicación desconocido, fecha de publicación
desconocida, [citado 04-11-2010], Instituto de Medicina Biológica y Antienvejecimiento, formato
pdf, disponible en Internet: http://www.biosalud.org/archivos/divisiones/4311Fitoterapia.pdf, pp 1-9
75
DOMINGO, D y LÓPEZ-BREA, M, “Plantas con acción antimicrobiana”, Rev Esp Quimioterap,
Vol 16, Nº4, España, Diciembre 2003, pp 385-393
76
Ídem, p. 1
77
Ídem, p.1

1.3.3 Sustancias de origen vegetal con actividad antimicrobiana
Los trabajos realizados por Pasteur y Fleming (siglo XIX, inicios del siglo XX)
fueron fundamentales en el conocimiento de las enfermedades de tipo infecciosas
(producidas por microorganismos) y su tratamiento, pero el uso de compuestos
naturales obtenidos de plantas data de mucho tiempo atrás. “Existen pruebas de que
los hombres del Neandertal que ocuparon Irak hace 60000 años usaban las plantas
con fines medicinales.”78 Posteriormente, a lo largo de la historia existen otros
ejemplos bien documentados, como lo son “las figuras de Hipócrates en la medicina
griega, Avicena en la árabe y Paracelso en la centroeuropea, que fueron auténticos
especialistas en la aplicación de las plantas en medicina.”79
Un ejemplo cercano a nuestra cultura, es el uso del primer antipalúdico, que lleva su
nombre debido a que con él, fue tratada la condesa de Chinchón, virreina del Perú en
el siglo XVII. Debido a esto, la planta tomó el nombre de Cinchona officinalis y su
principio activo de quina.80
“Se han aislado alrededor de 12.000 compuestos procedentes de organismos

vegetales y se estima que constituyen tan sólo el 10% de los metabolitos
secundarios”81 (se diferencian de los primarios en que no son indispensables para la
vida de la planta). Un porcentaje representativo de estos compuestos muestran
actividad antimicrobiana. El por que de la existencia de estos compuestos en las
plantas aún es desconocida. Al respecto existen algunas teorías: “podrían ser
compuestos con diferentes funciones y de forma accidental aportan un poder
antimicrobiano, o realmente tienen una actividad antimicrobiana como primer fin.”82
Las plantas son capaces de fabricar compuestos ilimitadamente, la mayoría de estos,

tienen relación con el fenol y sus derivados.83 Los principales compuestos con
actividad antimicrobiana elaborados por las plantas, según D. Domingo y M. López,
son:

78
DOMINGO, D y LÓPEZ-BREA, Op. Cit., p.1
79
Ídem, p.1.
80
Ídem, p. 1
81
Ídem, p. 2.
82
Ídem, p. 2
83
Ídem, p. 2

• Fenoles y heterósidos fenólicos: Son los compuestos fitoquímicos más

simples y consisten en un anillo fenólico sustituido. Algunos ejemplos son el
catecol, el pirogalol, el ácido cinámico y cafeico. Los lugares y el número de
grupos hidroxilo (OH) en el anillo, al parecer están relacionados directamente
con la toxicidad frente a los microorganismos, así, a mayor hidroxilación
mayor toxicidad. El mecanismo de acción parecer estar relacionado con la
inhibición enzimática por los compuestos oxidados, posiblemente mediante
reacciones de grupos sulfihidrilo o por interacciones no especificas con
proteínas. Dentro de este grupo se encuentran los aceites esenciales que son
mezclas de estos compuestos. 84
• Taninos: Son compuestos fenólicos, no nitrogenados, solubles en agua,
alcohol y acetona e insolubles en éter, benceno y cloroformo. Su
composición química es variable pero tienen una característica común: ser
astringentes y coagular los alcaloides, albúminas y metales pesados. Su
aplicación más antigua es en la industria del cuero, para el proceso de curtido.
Aprovechando su capacidad para precipitar las proteínas, fueron aplicados en
los tejidos vivos, empleándolas sobretodo en tratamientos del tracto
gastrointestinal y en escoriaciones y quemaduras de la piel. Los taninos se
dividen, en función de su capacidad para ser hidrolizados en: hidrolizables y
condensados. Se han descrito alrededor de 30 taninos que pueden inhibir
hongos y bacterias.85 86
• Cumarinas: Son compuestos derivados de la benzo- -pirona. Tienen
propiedades antiinflamatorias, antitrombóticas y vasodilatadoras. Su
mecanismo de acción antimicrobiano es mediante interacción con el DNA
eucariota, lo que explica también su actividad antiviral.87
• Flavonas y compuestos relacionados: Son estructuras fenólicas que
contienen un grupo carbonilo. Constituyen la familia más amplia de fenoles
naturales. Su actividad ante los microorganismos probablemente se debe a

84
DOMINGO, D y LÓPEZ-BREA, M, Op. Cit., p.4
85
Ídem, p.3
86
AÑANCA, Erick, Op. Cit., p. 16
87
DOMINGO, D y LÓPEZ-BREA, M, Op. Cit., p.3

que forman complejos con las proteínas solubles y extracelulares y con las
células de la pared bacteriana, de manera similar a las quinonas. 88
• Alcaloides: Son compuestos nitrogenados heterocíclicos. El mecanismo de
acción de los alcaloides parecer ser mediante intercalación entre la pared
celular y el DNA del microorganismo.89
• Aceites esenciales: Son sustancias olorosas obtenidas a partir de plantas. Los
aceites esenciales se caracterizan por ser una mezcla compleja de varios
compuestos pertenecientes a diferentes grupos químicos: hidrocarburos
(compuestos terpénicos), alcoholes, aldehídos, cetonas, ésteres, éteres y
fenoles.90
1.3.4 Aceites Esenciales: definición y propiedades
“Los aceites esenciales son productos volátiles de naturaleza compleja,

elaborados por ciertos vegetales a los que confieren un aroma agradable.
Oficialmente, se conocen como aceites esenciales a los productos que pueden
obtener por arrastre con corriente de vapor de agua o por expresión del
pericarpio de algunos frutos.”91
Comúnmente también se los denomina esencias, sin embargo, esta denominación es

más amplia ya que no solo incluye a los aceites esenciales.
Los aceites esenciales son líquidos a temperatura ambiente. La mayoría son casi
transparentes, incoloros o ligeramente coloreados (amarillentos). Algunos son
inflamables. Generalmente son menos densos que el agua (con excepciones como el
aceite de clavo y canela). Los aceites esenciales suelen ser insolubles en agua, son
lipófilos por lo tanto, solubles en solventes orgánicos apolares (hexano, éter etílico,
etc). La solubilidad en alcohol es variable y generalmente son solubles en alcoholes
de alta graduación. Tienen índices de refracción elevados y presentan actividad

88
DOMINGO, D y LÓPEZ-BREA, M, Op. Cit.,p.3
89
Ídem, p. 3
90
ZEKARIA, Dan, Los aceites esenciales una alternativa a los antimicrobianos, [en línea], lugar de
publicación desconocido, fecha de publicación desconocida, [citado 20-10-2010], Laboratorios Calier,
formato pdf, disponible en Internet: http://www.calier.es/pdf/Microsoft_Word_-
_Aceites_esen_como_promotores.pdf, pp 1-6
91
KUKLINKSKI, Claudia, Farmacognosia. Estudio de las drogas y sustancias medicamentosas de
origen natural, Primera reimpresión, Ediciones Omega, Barcelona-España, 2000, p. 134.

óptica (desvían el plano de la luz polarizada, tienen poder rotatorio). Se oxidan

fácilmente y polimerizan dando productos resinosos.92
1.3.5 Distribución y localización
Los aceites esenciales se encuentran casi exclusivamente en los vegetales superiores,

“existirían, según Lawrence, 17.500 especies aromáticas.”93 Concretamente, los
aceites esenciales se encuentran en algunas familias de las Angiospermas, de las
cuales destacan por ejemplo: Myrtaceae (eucalipto, clavo), Laureaceae (canela),
Rutaceae (cítricos), Lamiaceae (menta, melisa, lavanda), Asteraceae (manzanilla),
Apiaceae (anís, hinojo), Poaceae, Zingiberaceae (jengibre), etc.94
Los aceites esenciales pueden ser almacenados por la planta en diferentes órganos:
en las flores (nardo, rosas), en las hojas (laurel, eucalipto), en las cortezas (canela),
en los leños (sándalo), en las raíces (vetiver), en los rizomas (jengibre), en los frutos
(anís), en las semillas (nuez moscada). Se acumulan en cavidades secretoras, en
células, en pelos secretores, en canales secretores, etc. Aunque todos los órganos de
la misma planta pueden contener aceite esencial, la composición de éste puede variar
según su localización. 95
Cuantitativamente, los contenidos de aceite esencial en las plantas son bajos,

frecuentemente este contenido es inferior a 10 ml/kg de planta. Contenidos elevados
son raros (por ejemplo de los botones florales del clavero se puede extraer hasta 150
ml/kg en droga seca).96
1.3.6 Funciones en las plantas
En las plantas, los aceites esenciales pueden desempeñar varias funciones, algunas de
las cuales incluso aún no están claramente descritas. Es probable que tengan un rol
fundamental ejerciendo: protección a la planta contra los depredadores y atracción de

92
KUKLINKSKI, Claudia, Op. Cit., p. 134
93
BRUNETON, Jean, Farmacognosia. Fitoquímica. Plantas Medicinales,Segunda Edición, Editorial
Acribia S.A., Zaragoza-España, 2001, p. 481.
94
KUKLINKSKI, Claudia, Op. Cit. p.135
95
BRUNETON, Jean, Op. Cit., p. 482
96
Ídem, p.482

agentes polinizadores (insectos).Experimentalmente se ha comprobado que algunos

aceites esenciales cumplen un papel en el campo de las interacciones vegetales
(agentes alelopáticos97, especialmente inhibidores de la germinación). Por otro lado,
podrían constituir el soporte de una comunicación y transmisión de mensajes
biológicos selectivos.
1.3.7 Composición química
Los aceites esenciales son mezclas complejas y variables de componentes (a veces

más de 200) pertenecientes, de manera casi exclusiva, a dos grupos de orígenes
biogenéticos distintos: el grupo de los terpenoides y el grupo de los compuestos
derivados del fenilpropano. Pueden también contener compuestos de diversos
orígenes.98
• Terpenoides: en los aceites esenciales se encuentran solamente los terpenos

más volátiles, es decir, los de menor peso molecular: monoterpenos
(acíclicos: mirceno, monocíclicos: p-cimeno, bicíclicos: pineno) y
sesquiterpenos (hidrocarburos monocíclicos o policíclicos: β-bisaboleno,
alcoholes: farnesol, cetonas: nootkatona, aldehídos: sinensales, ésteres:
acetato de cedrilo).99
• Derivados del fenilpropano: Son menos frecuentes. Se trata generalmente
de alil y propropenilfenoles, a veces de aldehídos y lactonas. Se pueden
encontrar compuestos en C6-C1 como la vainillina.100
• Compuestos de orígenes diversos: Son compuestos que resultan de la
transformación de moléculas no volátiles. Dentro de estos se encuentran los
compuestos procedentes de la degradación de:
o Ácidos grasos: originan ácidos, alcoholes, aldehídos y ésteres, por

ejemplo: hexenales, ácidos jazmónicos.101

97
Se define como agentes alelopapáticos a las sustancias químicas liberadas por las plantas que
provocan un efecto perjudicial sobre la germinación o el desarrollo de otras plantas.
98
99
Idem, p. 482
100
Ídem, p. 482
101
Ídem, p. 486

o Terpenos: iononas (provienen de la auto-oxidación de los carotenos),

ironas (provienen de la oxidación de triterpenos bicíclicos),
compuestos nitrogenados (raros en los aceites esenciales: pirazinas,
también pueden haber aminas alifáticas volátiles: metilamina).102
Los componentes mayoritarios de los aceites esenciales pueden constituir hasta un

85% de su composición total, mientras que el 15% restante, son compuestos que se
presentan en trazas. La concentración de un compuesto específico en un aceite
esencial puede ser muy variable ya que, son muchos los factores que intervienen en
la composición del aceite esencial entre ellos, los más importantes son: el lugar de
origen de la planta, la especie y el órgano de la planta del cual es extraído el aceite,
las condiciones climáticas y de crecimiento de la planta (uso de fertilizantes, tipo de
tierra de cultivo, etc), el proceso de destilación así como la forma de almacenamiento
del aceite, entre otros.103
1.3.8 Aplicaciones y propiedades farmacológicas
Las aplicaciones de los aceites esenciales son múltiples y variadas. Se utilizan por
sus propiedades aromáticas en la industria: alimentaria, cosmética (en perfumería) y
química (productos de limpieza). Por sus propiedades farmacológicas se los usa en la
industria farmacéutica y cosmética.104
En el ámbito farmacéutico, los aceites esenciales tienen algunas propiedades y son

usados tanto por vía tópica (externa, sobre la piel) como por vía interna. Según
Kuklinski las propiedades o acciones fundamentales de los aceites esenciales son:
• Poder antiséptico: El mismo se manifiesta frente a diversas bacterias

patógenas (grampositivas o gramnegativas), incluso cepas generalmente
resistentes a los antibióticos. Algunos aceites esenciales son activos frente a
hongos y levaduras (Candida). Las dosis activas son bajas y se determinan
mediante experimentación in vitro. El poder antiséptico de los aceites

102
103
ZEKARIA, Dan, Op. Cit., p. 2.
104

esenciales es variable: los aceites que tienen componentes con un grupo fenol
tienen un elevado poder antiséptico; los que tienen componentes con función
alcohol tienen un poder antiséptico medio, los que tienen componentes con
función cetona tienen un bajo poder antiséptico.
• Propiedades antiespasmolíticas: Disminuyen los espasmos
gastrointestinales y aumentan las secreciones gástricas, por lo que se los ha
calificado como digestivos, estomáquicos, carminativos, colagogos (facilitan
la salida de la bilis de la vesícula al duodeno) y coleréticos (facilitan la
secreción de la bilis por parte de las células hepáticas).
• Propiedades sedantes: Algunos aceites esenciales tienen propiedades
sedantes en caso de nerviosismo y angustias. Mejoran insomnios y trastornos
psicosomáticos diversos.
• Propiedades irritantes: Varios aceites esenciales, usados por vía tópica,
provocan el aumento de la circulación capilar y epidérmica y producen
enrojecimiento (efecto rubefaciente). Otros producen una sensación de calor
externa.
• Propiedades analgésicas: Ciertos aceites esenciales aplicados por vía tópica
presentan una acción analgésica frente a dolores musculares, articulares por
tal motivo, son usados en pomadas, cremas, geles que alivian esguinces,
distenciones, algias articulares o musculares.
• Otras propiedades: Muchos aceites esenciales son cicatrizantes y
vulnerarios (ayudan a sanar heridas). Unos actúan sobre el árbol bronquial
ayudando a la fluidificación de las secreciones (son expectorantes); otros
actúan sobre el aparato renal ejerciendo una acción diurética.
Muchos de los aceites esenciales son tóxicos, por esta razón es importante que se
controle su uso y administración. Los efectos tóxicos pueden ser a nivel del sistema
nervioso (neurotoxicidad, convulsiones, asfixia, trastornos síquicos) y a nivel
dérmico (irritante, sensibilizante, fototóxica).105

105

1.3.9 Propiedades antimicrobianas: mecanismos de acción

Como se ha mencionado anteriormente, los aceites esenciales poseen notables
propiedades antimicrobianas sin embargo, su mecanismo de acción no ha sido
definido completamente. En la actualidad, los estudios sobre las propiedades
antimicrobianas de los aceites esenciales se han centrado en la utilización de
microorganismos patógenos para el ser humano.106
Diversos estudios determinan que los aceites procedentes de: clavo, canela,
mostaza, orégano, romero y tomillo son los que poseen actividad
antimicrobiana más acentuada (Deans 1987). Sin embargo, aún no se ha
establecido un procedimiento estandarizado en las pruebas de Laboratorio in
vitro. Normalmente estas pruebas consisten en la evaluación de la
Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) que impide el crecimiento de la
bacteria enfrentando un número concreto de Unidades Formadoras de
Colonias (UFC) de la bacteria en cuestión con el agente antimicrobiano. Al
ser los aceites esenciales liposolubles, se realizan diluciones dobles seriadas
de los aceites en caldo con emulsionante (Zaika 1988). A la hora de
determinas las CMI hay que tener en cuenta la volatilidad del compuesto así
como su grado de difusión en el medio.(…)
Considerando la gran variedad de compuestos químicos presentes en los
aceites esenciales, es muy probable que su actividad antimicrobiana no sea
atribuible a un mecanismo específico, sino a la acción combinada de varios de
ellos sobre distintas localizaciones de la célula.
Los aceites esenciales en general ligeramente más activos frente a bacterias
Gram positivas que frente a las Gram negativas. Esto puede deberse a la
influencia de la estructura de la pared celular y la composición de la
membrana externa de las bacterias y su interacción con los aceites esenciales,
de naturaleza lipofílica.
En el caso de las bacterias Gram negativas sensibles, así como de las Gram
positivas, los aceites esenciales se introducen a través de los lípidos de la
membrana celular y mitocondrial, alterando su estructura y haciéndolas más
permeables. Como consecuencia, tiene lugar una fuga de iones y de otros
contenidos celulares, de forma más o menos intensa, que puede llevar a la
muerte celular.
Parece que para obtener un mayor efecto antibacteriano la dosis a aplicar es
relativamente reducida, del orden de 100 a 200 ppm(...) Dosis superiores no
producen necesariamente un mejor efecto.
Generalmente, los aceites esenciales que poseen notables propiedades
antimicrobianas, contienen un alto porcentaje de compuestos fenólicos como
el carvacrol, el timol y el eugenol. El carvacrol (componente mayoritario del
orégano) y el timol (procedente del tomillo) son capaces, (…), de desintegrar
la membrana externa de las bacterias Gram negativas.(…) El eugenol,
(componente mayoritario del aceite de clavo), y el cinamaldehido
(componente de la canela) actúan inhibiendo la producción de enzimas

106
ZERAKIA, Dan, Op. Cit. p. 3

intracelulares, tales como, amilasas y proteasas, lo que provoca el deterioro

de la pared y un alto grado de lisis celular. 107
1.3.10 Aceite Esencial de Ishpingo: Composición y usos
La identificación química de los componentes del aceite esencial foliar de ishpingo

se encuentra aún en una fase inicial, tanto a nivel nacional como internacional. Sin
embargo, Noriega y Dacarro, en nuestro país, realizaron la identificación de los
compuestos presentes en el aceite esencial de la hoja de ishpingo. Esta investigación
arroja datos interesantes que van a ser descritos a continuación.
Los principales componentes del aceite foliar de ishpingo son: cariofileno

(19.029%), humuleno (14.324%) y eremofileno (11.407%) de un total de 62
compuestos identificados (Ver Tabla 3).
Tabla 3. Composición química del aceite foliar de ishpingo

Compuesto Identificado (%)
Acetol 0.055
Benzaldehído 0.886
Canfeno 0.250
Cimeno 0.062
Cinamato de metil 7.214
Cinemaldehído 3.425
Hidroxicinemaldehído 0.113
Terpinolen 0.197
Cinamato de etilo 4.733
Copaeno 7.000
Cumeneno 0.172
Espatulenol 0.280
Mosleno 0.291
Oxido de cariofileno 3.831
p-cimeno 2.951
Fuente: NORIEGA, Paco y DACARRO, Cesare, Aceite foliar de Ocotea quixos (Lam.) Kosterm.:
actividad antimicrobiana y antifúngica, 2008
Es importante mencionar que los estudios respecto a los usos del aceite esencial de
ishpingo son escasos. Noriega y Dacarro en su estudio, demuestran que este aceite
tiene una alta capacidad inhibitoria contra hongos (Candida albicans) y bacterias

107
ZERAKIA, Dan, Op. Cit. p. 4

(Staphylococcus epidermidis, Sthaphylococcus aureus, Escherichia coli,

Streptococcus pyogenes y Streptococcus mutans).
Es interesante el hecho de que este aceite a concentraciones que van desde 50 a 0.097
µl/L inhibe el crecimiento de Streptococcus mutans. Para el caso de Streptoccocus
pyogenes el rango es un poco menor, las concentraciones que inhiben su crecimiento
van de 50-0.39 µl/L.108
1.3.11 Aceite Esencial de Clavo de olor: Composición y usos
El contenido de aceite esencial en la planta de clavo es excepcional: 150 a180 ml/kg.

Mayoritariamente contiene un propenilfenol: el eugenol (75-88%). Se encuentra en
forma libre pero también en forma de acetato de eugenilo (4-15%). Otros compuestos
que se encuentran en este aceite esencial son: cavicol, 4-alil-fenol, ésteres (20%),
sesquiterpenos (5-6%), α y β-cariofileno (5-12%), α y β-humuleno, calacoreno,
calameneno, α-muruleno, α-amorfeno, óxido de cariofileno, epóxido de humuleno,
salicilato de metilo, β-amirina. Según la Real Farmacopea Española, la concentración
del aceite esencial de la droga no debe ser inferior al 15%.109
El contenido de aceite esencial en las hojas presenta una menor concentración (2%)
siendo su principal componente el eugenol (82-88%). En la corteza llega al 4-6% y
su contenido de eugenol es aún mayor: 90-95%. Este aceite tiene la particularidad de
ser más pesado que el agua, es de color amarillo, tornando al parduzco en contacto
con el aire.110
El alto contenido de eugenol (o ácido cariofílico) le proporciona a este aceite esencial

propiedades antisépticas, bactericidas, fungicidas, parasiticidas y antimicóticas. En
odontología, sus propiedades antisépticas hicieron que forme parte de numerosos
preparados y enjuagues bucales ya que, demuestra actividad inhibitoria frente a
microorganismos periodontales.111

108
NORIEGA, Paco y DACARRO, Cesare, “Aceite foliar de Ocotea quixos (Lam.) Kosterm.:
actividad antimicrobiana y antifúngica”, La Granja, Vol 7, Nº 1, Ecuador, Julio 2008, pp. 3-8
109
ALONSO, Jorge, Tratado de Fitofármacos y Nutraceúticos, 1era Reimpresión, Editorial Corpus,
Rosario-Argentina, 2007, p. 346
110
Idem, p. 346
111
ALONSO, Jorge, Op. Cit. p. 346

El aceite de clavo resulta interesante por sus propiedades anestésicas locales (inhibe
la conducción nerviosa), también es antiinflamatorio (inhibe la síntesis de
prostaglandinas y la quimiotaxis de leucocitos). A bajas concentraciones (10-2 – 10-3
mM/l) es bactericida. Por vía general y a dosis elevadas (0,5 ml/kg), el aceite
esencial de clavo es tóxico, sobretodo en niños pequeños a los que provoca depresión
del SNC, necrosis hepatocelular, convulsiones y trastornos de la coagulación. Se
metaboliza rápidamente. La industria usa este aceite para producir eugenol destinado
a síntesis, especialmente de vainillina. Se recomienda el uso de este aceite esencial
en gargarismos al 1-5% en agua.112
1.4 ESTUDIO DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA
1.4.1 Antecedentes
La investigación de nuevas sustancias con actividad antimicrobiana así como el

tratamiento de las enfermedades producidas por microorganismos, día a día es más
complicada. Frecuentemente nuevas sustancias están siendo producidas y probadas
para uso humano, pero al mismo tiempo muchas especies bacterianas son cada vez
menos sensibles a estas sustancias.113
“Hacia fines de los años 50, no existía un procedimiento estandarizado

aceptable para los test de sensibilidad. Es así como en el año 1977, en
Ginebra, integrantes de la Organización Mundial de la Salud (OMS)
expresaron su alarma por el creciente aumento de la resistencia a antibióticos
en el mundo, causado a menudo por el uso indiscriminado de estos
productos.(…) Por esta razón, es necesario mantener una estrecha vigilancia
utilizando pruebas de sensibilidad fidedignas que proporcionen datos
comparables.”114

112
Ídem, p. 346
113
CASTRO, Viviana, Op. Cit., p. 33.
114
Ídem, p. 33

1.4.2 Pruebas de sensibilidad a antimicrobianos
Las pruebas de sensibilidad a antimicrobianos “son técnicas que investigan la

actividad de distintos agentes quimioterapéuticos”115 frente a un microorganismo;
sirven para identificar al microorganismo y para implantar la terapia más efectiva.
Todas las bacterias no tienen la misma sensibilidad a los distintos antibacterianos, de

ahí la importancia de realizar estas determinaciones. La evaluación de esta
sensibilidad nos va a ayudar en la selección del compuesto más adecuado para el
tratamiento de una infección bacteriana. Las pruebas más utilizadas para evaluar la
sensibilidad de una bacteria a un agente antibacteriano están basadas en el
enfrentamiento in vitro de la bacteria con distintas concentraciones del agente.116
La sensibilidad de una bacteria a un antibiótico determinado viene dada por la

concentración mínima inhibitoria (CMI o MIC), que se define como la menor
concentración de antimicrobiano capaz de inhibir el desarrollo de una cepa
bacteriana dada. Algunos métodos permiten además determinar lo que se
denomina concentración mínima bactericida (CMB), que es la menor
concentración de antimicrobiano capaz de eliminar (muerte celular) una cepa
bacteriana dada. Así, el objetivo terapéutico será alcanzar en el organismo la
CMI o CMB con dosis no tóxicas.117
Los métodos más utilizados para determinar la sensibilidad de una bacteria a agentes
antimicrobianos son: la difusión en agar y la dilución en caldo o agar y se conocen en
general con el nombre de antibiograma.
1.4.2.1 Antibiograma por difusión en agar
El fundamento de esta técnica es que “discos impregnados con antimicrobiano se

depositan sobre cultivos de microorganismos en placa. Por difusión del agente
antimicrobiano a través del medio se produce un halo de inhibición del crecimiento,
cuyo diámetro es proporcional a la acción del agente antimicrobiano.”118

115
GRANADOS, Raquel y VILLAVERDE, M, Microbiología Tomo II, Segunda Edición, Thomsom
Editores, Paraninfo S.A., España, 2002, p. 156
116
GAMAZO, Carlos y otros, Manual práctico de Microbiología, 3ra Edición, Masson S.A.,
Barcelona-España, p. 121
117
Ídem, p. 121
118
GRANADOS, Raquel y VILLAVERDE, M. Op. Cit. p. 162, 163

Este método fue estandarizado por Bauer et al en 1966. Este estudio dio lugar
al método de Kirby-Bauer, que es el recomendado por la Food and Drug
Administration (FDA) y el National Committee for Clinical Laboratory
Standars (NCCLS), aunque con ligeras modificaciones.
Varios factores afectan al tamaño del halo de inhibición: la carga de

antibiótico en los discos, la difusión del antibiótico en el medio de cultivo, el
tamaño del inóculo bacteriano, la composición y el grosor del medio de
cultivo, la velocidad del crecimiento bacteriano y el tiempo de incubación.119
Según Gamazo y otros, la técnica consiste en:
a. Preparar cultivos de 18 horas de las bacterias que hay que ensayar en agar
tripticasa soja (TSA) o agar infusión cerebro-corazón (BHIA).
b. Inocular una porción de una colonia (bacteria en estudio) en 5 ml de caldo de
tripticasa soja (TSB) o caldo de infusión cerebro-corazón e incubar a 37ºC
hasta que la turbidez sea visible (2-5 horas, fase logarítmica). Ajustar la
turbidez con solución salina o caldo de cultivo estéril hasta una turbidez
equivalente al estándar 0.5 de McFarland. De forma alternativa, como un
método más rápido, se puede preparar directamente a partir de la colonia
aislada en el medio de agar (fase estacionaria), resuspendiéndola en solución
salina o caldo de cultivo estéril hasta lograr la turbidez equivalente al
estándar 0.5 de McFarland.
c. Utilizar un hisopo de algodón para tomar el inóculo: sumergirlo en la
suspensión y eliminar el exceso presionándolo sobre la pared interna del tubo
que lo contiene.
d. Inocular la superficie de una placa de agar de Mueller-Hinton (por ser el que
ofrece una composición homogénea en todos los lotes y gran
reproductibilidad, no presenta efectos antagónicos y permite el crecimiento
de la mayoría de los microorganismos) con el hisopo pasándolo
uniformemente por toda la superficie en tres direcciones. Por último, pasar el
hisopo por el perímetro externo del agar. Dejar secar 5 minutos.
e. Colocar los discos de antibióticos o sustancias antimicrobianas sobre la
superficie del agar utilizando unas pinzas estériles y apretándolos suavemente
sobre la superficie del agar. Los discos no deben estar a menos de 15 mm de

119
GAMAZO, Carlos y otros, Op. Cit. p. 122

los bordes de la placa y lo bastante separados entre sí para que no se

superpongan las zonas de inhibición (aproximadamente 20 mm). Dejar las
placas 15 minutos a temperatura ambiente. La difusión del agente
antimicrobiano es casi instantánea por eso, no se debe mover ningún disco
una vez implantados.
f. Incubar la placa en posición invertida a 37ºC durante 18-24 horas. No se debe
exceder este tiempo de incubación.
g. Medir los diámetros de las zonas de inhibición con una regla o un calibrador
utilizando luz refleja sobre un fondo negro.
Los diámetros de los halos de inhibición se traducen a las categorías de

microorganismo resistente (R), intermedio (I), moderadamente sensible (MS) o
sensible (S), de acuerdo a tablas interpretativas.
1.4.2.2 Antibiograma por dilución en caldo
La dilución en medio líquido es una técnica en la que se prueba una suspensión

normalizada de bacterias frente a varias concentraciones de un agente
antimicrobiano (normalmente mediante diluciones seriadas que reducen la
concentración a la mitad) en un medio líquido estandarizado. El método se puede
realizar tanto en tubos con un contenido mínimo de 2 ml (macrodilución) como
en volúmenes más pequeños, utilizando placas de microtitulación
(microdilución). (…)120
La técnica de macrodilución consiste en diluir el antibiótico a una concentración

final entre 128 y 0.5µg/ml en el caldo de cultivo. Se utiliza un tubo sin antibiótico
como control del crecimiento bacteriano. Una cantidad estandarizada del aislamiento
bacteriano es entonces inoculada en cada uno de los tubos. Luego del período de
incubación (24 horas) se realiza la lectura del crecimiento o ausencia de crecimiento
en cada una de las concentraciones. La MIC es aquella concentración más baja
ensayada que inhibe el crecimiento bacteriano.
Además de la CMI es necesario en ocasiones, evaluar el efecto bactericida de un

antibiótico sobre una bacteria para determinar la concentración mínima bactericida
(CMB). La CMB se puede calcular partiendo del método de dilución en caldo

120
s/a, Métodos de laboratorio para ensayos de sensibilidad de bacterias frente a antimicrobianos,
Manual de la OIE sobre animales terrestres, 2004, [citado 21-11-2010], formato pdf, disponible en
Internet: http://www.oie.int/esp/normes/mmanual/pdf_es/1.1.10_Metodos_de_laboratorio.pdf, p.115.

determinando la proporción de bacterias viables después de 18-24 horas de contacto

con el caldo que contiene el antimicrobiano. Para ello, a partir de cada uno de los
tubos sin desarrollo bacteriano, se inocula con un hisopo estéril sobre placas con
agar, se incuba las placas a 37ºC durante 18 horas y se cuentan el número de colonias
en las placas para la determinación de la CMB. Se considera CMB como la menor
concentracion de antibiótico cuyo subcultivo produce un número de colonias menor
al 0.1% del inóculo original.121

121
GAMAZO, Carlos y otros, Op. Cit., p. 127, 130, 131.

2. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
La industria cosmética es una de las más lucrativas en el mundo. Factura 200.000

millones de dólares anuales, según evaluaciones de Latin American Markets. Sin
embargo, la mayor parte de esta industria usa materias primas y principios activos de
síntesis orgánica, son escasas las industrias que están usando principios activos de
origen natural (principalmente vegetales).
Según la CORPEI, en nuestro país, la industria cosmética natural representa el 4.5%

del mercado cosmético, tiene una tasa de crecimiento promedio del 9% anual y está
dominada por una serie de multinacionales como Unilever (Holanda), L'Oreal
(Francia), Wella y Beiersdorf (Alemania). La escasa producción de cosméticos
naturales es realizada por pequeñas industrias como: Laboratorios Meres y
Fundación Chankuap, esto, a pesar de la gran riqueza natural existente en nuestro
país. Además, los esfuerzos realizados en cuanto al aprovechamiento de los recursos
naturales existentes en nuestro país, no son correctamente enfocados, puesto que,
únicamente el Ecuador exporta materias primas naturales (aceites esenciales por
ejemplo) a otros países (Brasil, Colombia, Japón principalmente) donde son
transformadas en productos elaborados.
Los enjuagues bucales y colutorios, son productos considerados como cosméticos o

cosmoceuticals122. La mayoría, se comercializan libremente, y se utilizan para
eliminar la placa bacteriana existente en la cavidad bucal, cuya acumulación
ocasiona a largo plazo, problemas como caries y gingivitis.
En el mercado existen un sinnúmero de enjuagues bucales, sin embargo, ninguno de

ellos contiene en su fórmula aceites esenciales de plantas nativas (como el ishpingo).
Por lo anterior, mediante esta investigación se pretende formular un colutorio que

contenga como principios activos los aceites esenciales provenientes de dos plantas:
ishpingo (Ocotea quixos) y clavo de olor (Syzygium aromaticum) ya que, existe

122
Son productos que contienen elementos cosméticos y fármacos, además tienen uno o más
ingredientes bioactivos. Representan una nueva categoría en el mercado de los productos cosméticos.

bibliografía123 que indica el poder antiséptico o antimicrobiano de estos aceites

esenciales, convirtiéndose en una alternativa para el consumidor y un aporte a la
investigación en el campo de los cosméticos naturales.
3. JUSTIFICACIÓN
Como se ha mencionado, la industria cosmética es una de las más lucrativas en el

mundo. Existen un sinnúmero de industrias, pero la mayor parte de ellas, usa
principios activos provenientes de procesos de síntesis química. Hoy por hoy, sin
embargo, estas mismas industrias están invirtiendo grandes cantidades de dinero en
investigación de nuevos principios activos, sobretodo de origen vegetal, ya que la
tendencia de la actualidad es volver a lo natural.
Por lo anterior, es importante el aporte investigativo en el campo de los cosméticos

naturales, puesto que éstos tienen importantes ventajas comparativas frente a los
cosméticos tradicionales. Los cosméticos naturales acarrean menos riesgos a la salud
humana debido a que los extractos y aceites esenciales usados en ellos son mezclas
de compuestos sintetizados por las plantas; estos compuestos a la vez, tienen un
efecto sinérgico entre ellos, ejercen su acción a menor dosis y con menor toxicidad
que los productos químicos. Además los componentes de las plantas presentes en sus
extractos y aceites esenciales, se potencian entre si pero a la vez, se protegen de los
efectos indeseables unos de otros.
Por esta razón, es importante que en nuestro país se empiece a invertir en la industria
cosmética, ya que su desarrollo a más de contribuir a crear fuentes de trabajo
aumentaría la producción local y nacional. Esto es vital ya que nuestro país dejaría de
de ser exportador de materias primas y se abriría la posibilidad de exportar
cosméticos naturales, lo que a su vez, aumentaría las divisas para nuestro país. De
esta manera, dejaríamos de importar como se lo ha hecho hasta la actualidad
productos que se podrían hacer aquí a menores costos y de la misma o mejor calidad.

123
NORIEGA, Paco y DACARRO, Cesare, “Aceite foliar de Ocotea quixos (Lam.) Kosterm.:
actividad antimicrobiana y antifúngica”, La Granja, Vol 7, Nº 1, Ecuador, Julio 2008, pp. 3-8

Otro aspecto importante a considerar es la importancia que tienen los enjugues

bucales en la salud oral o bucal. La cavidad bucal es una parte muy importante de
nuestro cuerpo. Con ella, realizamos algunas actividades primordiales como hablar y
comer, de allí que mantenerla saludable no sólo es símbolo de higiene sino que
contribuye a la salud general de nuestro cuerpo.
Para mantener o mejorar la salud de la cavidad bucal, hoy en día existen en el

mercado una infinidad de productos de diferentes marcas pero con un objetivo
común: disminuir el crecimiento de la placa bacteriana, eliminar el mal aliento y(o)
fortalecer los dientes. Dentro de estos productos se encuentran los enjuagues bucales
y colutorios, los mismos que son considerados como productos cosméticos. 124
El mercado oferta una variedad de enjuagues bucales de diferentes marcas, dentro de

los más conocidos están: Listerine, Colgate Plax, Encident y Oraldine; sin embargo,
en el Ecuador, ninguno de ellos usa como principios activos los aceites esenciales
provenientes de plantas. La elaboración y demostración de la eficacia de un enjuague
bucal o colutorio con estos principios activos sería un aporte a la investigación en el
campo de los cosméticos naturales, que como se ha mencionado con anterioridad es
incipiente en nuestro país.
Finalmente, considero importante mencionar que con esta investigación, la

investigadora fortalecerá sus competencias en:
• Despertar el interés por la investigación y aporte a la ciencia

• Conocer como se ejecuta y se lleva adelante un proceso investigativo.
4. HIPÓTESIS
El colutorio elaborado con aceites esenciales de la hoja de ishpingo (Ocotea quixos)

y clavo de olor (Syzygium aromaticum) tiene un efecto bactericida en un medio de
cultivo con Streptococcus mutans y Streptococcus pyogenes, habitantes de la placa

124
GUADRÓN, José, Op. Cit., p. 2

bacteriana, causantes de enfermedades importantes como la caries e infecciones de

garganta respectivamente.
5. OBJETIVOS
5.1 General
Determinar la eficacia in vitro de un colutorio elaborado con aceite esencial de la

hoja de ishpingo (Ocotea quixos) y clavo de olor (Syzygium aromaticum).
5.2 Específicos
1. Determinar la Concentración Mínima Bactericida de los aceites esenciales

de la hoja de ishpingo y clavo de olor para inhibir el crecimiento de
Streptococcus mutans y Streptococcus pyogenes.
2. Realizar un estudio sensorial preliminar con los enjuagues bucales
comerciales que guie a la formulación del colutorio.
3. Formular y elaborar un colutorio con las características propias para este
tipo de productos que contenga como principios activos a los aceites
esenciales de la hoja de ishpingo y clavo de olor.
4. Comparar la eficacia in-vitro del colutorio elaborado frente a cuatro
enjuagues bucales comerciales: Listerine, Encident, Colgate Plax,
Oraldine.
5. Realizar un estudio de estabilidad acelerada del colutorio elaborado.
6. Comparar el perfil organoléptico del colutorio elaborado frente al
enjuague bucal preferido por los consumidores y tomado como estándar.
6. MATERIALES Y MÉTODOS
6.1 Lugar de Investigación
El trabajo experimental se llevó a cabo en el laboratorio de Microbiología del

CIVABI (Centro de Investigación y Valoración de la Biodiversidad) de la
Universidad Politécnica Salesiana, Sede Quito, Campus Girón.

6.2 Obtención e identificación de los microorganismos seleccionados para la

investigación
Los microorganismos a utilizar (Streptococcus mutans ATCC 25175 y Streptoccocus

pyogenes ATCC 19615) se obtuvieron del cepario del laboratorio de Microbiología
del CIVABI de la UPS. Dichos microorganismos se encontraban liofilizados en
pastillas (Microorganismos Kwik-Stick, marca Microbiologics) por tal motivo, se
hidrataron y activaron en tubos con 5 ml de caldo estéril TSB (Tripticasa Soya
Broth) marca Criterion. Posteriormente, se sembraron en cajas petri con Agar
Infusión Cerebro Corazón marca Pronadisa y se incubaron en la estufa a 37ºC
durante 24 horas para S. pyogenes y 48 horas para S. mutans.
Una vez transcurrido el tiempo de incubación, se procedió a realizar pruebas

específicas como: la tinción Gram (Ver Anexo 1) y la prueba de la catalasa (Ver
Anexo 2) para ambas cepas, de manera que se verificó que los microorganismos a
utilizar eran S. mutans y S. pyogenes.
6.3 Obtención de los aceites esenciales
El aceite esencial de las hojas de ishpingo (Ocotea quixos) fue proporcionado por
Fundación Chankuap, ubicada en Macas, provincia de Morona Santiago. Se
trabajaron con cuatro muestras de este aceite: dos provenientes del Valle del Upano y
otras dos provenientes de Transcutukú.
El aceite esencial de clavo de olor (Syzygium aromaticum) se obtuvo de Laboratorios

Luque, ubicado en Guayaquil, provincia de Guayas.
6.4 Análisis físico-químico de los aceites esenciales
Los aceites esenciales fueron sometidos a las siguientes pruebas:
• Características organolépticas: Por medio de este análisis se confirmó el

aspecto, color, sabor y olor de los aceites esenciales. La determinación de

estas características se realizó de manera sensorial es decir, usando los

sentidos del olfato, vista y gusto.
• Determinación del índice de refracción: Se utilizó un refractómetro. La
determinación del índice de refracción permite: identificar una sustancia,
verificar la pureza de una muestra, analizar el porcentaje de un soluto en una
solución, etc.125
• Densidad: Se determinó mediante la utilización de un picnómetro. Este
instrumento de laboratorio es un pequeño frasco de vidrio de volumen exacto
y conocido. Se pesa vacío (m1), luego se llena completamente (incluido el
capilar) con agua destilada y se pesa (m2). Finalmente se llena con el líquido
cuya densidad se desea determinar y se pesa (m3). Con estos datos se puede
calcular la densidad del líquido utilizando la siguiente fórmula:
3 1
2 1
• Solubilidad en agua: Se empleó agua destilada. En 5 ml de agua se añadió
0.5 ml de aceite esencial (10%), se agitó durante 1 minuto y se evaluó la
solubilidad.
• Solubilidad en alcohol: Se empleó alcohol etílico de 96º. En 5 ml de alcohol
se añadió 0.5 ml de aceite esencial (10%), se agitó durante 1 minuto y se
evaluó la solubilidad.
• Análisis en GC-MS: Se trabajó con los aceites esenciales de la hoja de
ishpingo para conocer la composición química de los mismos y saber si
existen diferencias significativas entre las muestras provenientes del Valle del
Upano y las de Transcutukú. Se tomó 1 ml de cada aceite esencial y se diluyó
en 2 ml de hexano, posteriormente, se inyectaron 2µL de cada muestra en el
equipo y se compararon los cromatogramas resultantes con el cromatograma
del aceite esencial de la hoja de ishpingo archivado en el equipo. Las
condiciones de trabajo del GC fueron las presentadas en la Tabla 4.

125
s/a, Refractómetro, [on line], fecha de publicación desconocida, [citado 28-11-2010], formato pdf,
disponible en Internet:
http://tabay.unam.edu.ar/aulavirtual/moodledata/2/REFRACTOMETRO_Equipo.pdf, p. 33

Tabla 4. Condiciones de trabajo del GC

Modelo GC 3900
Split ratio 20
Columna Factor Four Varian
Rampa cromatográfica
Temp Rate Hold Total
(C) (C/min) (min) (min)
50 0.0 2.00 2.00
100 20.0 0.00 4.50
260 10.0 0.50 21.00
Fuente: La autora, con base en reporte del equipo
Las condiciones del Espectrómetro de Masas fueron las presentadas en la Tabla 5:
Tabla 5. Condiciones de trabajo del MS

Modelo Saturn 2100D
Rango de masas 40-650 m/z
Energía de ionización 70 eV
Fuente: La autora, con base en reporte del equipo
6.5 Determinación in-vitro de la Concentración Mínima Bactericida (CMB) de

los aceites esenciales de la hoja de ishpingo y clavo de olor mediante el método
de dilución en medio líquido
Para evaluar la acción de los aceites esenciales de la hoja de ishpingo y clavo de olor
sobre Streptococcus mutans y Streptococcus pyogenes en esta investigación, se
determinó la Concentración Mínima Bactericida (CMB) de los aceites esenciales a
través de la técnica de dilución en medio líquido, que contempla enfrentar a los
microorganismos mencionados a diferentes concentraciones de los aceites. Los
aceites esenciales se incorporan al caldo de cultivo de manera que cada tubo de
ensayo tenga una concentración conocida del aceite esencial a ensayar.
Para facilidad de nomenclatura, los aceites esenciales fueron nombrados de la

siguiente manera:

A1 = Aceite esencial de la hoja de ishpingo (Valle del Upano)

A2 = Aceite esencial de la hoja de ishpingo (Transcutukú)
A3 = Aceite esencial de la hoja de ishpingo (Transcutukú)
A4 = Aceite esencial de la hoja de ishpingo (Valle del Upano)
A5 = Aceite esencial de clavo de olor
El procedimiento se realizó de la siguiente manera:
a) Preparación del caldo de cultivo
Siguiendo las instrucciones del fabricante se preparó 250 ml de TSB (Tripticasa Soya
Broth) adicionado con el 2% de Tween 20, con el objetivo de que los aceites
esenciales formen una emulsión con el caldo de cultivo. Se procedió a distribuir 1ml
del caldo en 250 tubos de ensayo con tapa rosca (13x100 mm) y se esterilizó en un
autoclave marca Tuttnauer 387OM, a 121ºC durante 15 minutos.
Una vez esterilizados los tubos de ensayo con TSB se procedió a formar series de
diez tubos y se los etiquetó con información importante como: fecha,
microorganismo a inocular y numero de tubo (del 1 al 10). Este proceso se realizó
por duplicado para cada aceite esencial a evaluar.
Aparte, en un tubo de ensayo vacío y estéril (etiquetado como tubo 0), se colocó 2
ml del aceite esencial a evaluar. Seguidamente, con la ayuda de una pipeta
desechable estéril, se tomó 1 ml del contenido del tubo 0, se transfirió al tubo 1 y se
homogenizó. Se repitió la operación con el tubo 2 y así sucesivamente hasta llegar al
tubo 10. Como se ha mencionado, el procedimiento se realizó por duplicado para
cada aceite esencial.
b) Preparación del inóculo bacteriano
En varios tubos de ensayo, a partir de las cepas ATCC activadas en los pasos
anteriores, se preparó un cultivo de cada una de las cepas a utilizarse en 5 ml del
medio Tripticasa Soya Broth y se incubó a 37ºC durante 24 horas para S. pyogenes y

48 horas para S. mutans. Transcurrido el tiempo de incubación, en una centrífuga

marca Selecta, se centrifugaron los tubos de ensayo a 3500 revoluciones por minuto
(rpm), durante 20 minutos. Inmediatamente, se eliminó el sobrenadante y se
resuspendió el pellet obtenido en 4 ml de solución fisiológica estéril (NaCl 0,9%).
(Ver Fotografía 1)
Seguidamente, en un tubo con 10 ml de solución fisiológica estéril, se adicionó el

inóculo obtenido en el paso anterior, y se reguló la densidad óptica hasta obtener una
absorbancia similar a 0.200 a una longitud de onda de 655 nm; de esta manera se
obtiene un inóculo bacteriano equivalente a 1 x 108 UFC/ml (unidades formadoras de
colonias por mililitro).
Las lecturas de turbidez del inóculo se realizó en el Espectrofotómetro UV/Visible

marca Shimatzu Modelo MINI 1240.
c) Inoculación de microorganismos
Una vez obtenidos los tubos seriados con caldo de cultivo y diferentes
concentraciones de aceite esenciales se procedió a inocular los microorganismos.
Para el caso de S. pyogenes se inoculó 10 µL de la suspensión bacteriana obtenida
anteriormente en cada tubo de ensayo de tal manera que, se inoculan 1x106 ufc/ml.
Para S. mutans, se inoculó 1000 µL de la suspensión bacteriana en cada tubo de
ensayo de tal manera que, se inoculan 1x108 ufc/ml.
La diferencia en el volumen de suspensión inoculada para cada cepa radica en que S.

pyogenes muestra un buen crecimiento in vitro, por su parte, S. mutans es un
microorganismo exigente y en una prueba previa, al inocular 10 µL de la suspensión
bacteriana, no se presenció crecimiento, por esta razón se decidió aumentar el
volumen y por lo tanto la cantidad de UFC a inocular.
d) Incubación
Posteriormente de la inoculación de las suspensiones bacterianas en cada tubo, se

procedió a incubar los tubos en una estufa marca Shel Lab a 37ºC. Los tubos con S.

pyogenes se incubaron durante 24 horas mientras que los tubos con S. mutans se
incubaron durante 48 horas.
e) Siembra en BHIA (Brain and Heart Infusion Agar)
Transcurrido el tiempo de incubación adecuado, con la ayuda de un hisopo estéril, se

tomó una muestra de cada tubo y se sembró en cajas petri que contenían BHIA,
preparado según las indicaciones del fabricante. Se incubaron las cajas en una estufa
marca Shel Lab a 37ºC. Las cajas que contenían las muestras de S. pyogenes se
incubaron durante 24 horas mientras que las de S. mutans se incubaron durante 48
horas (Ver Fotografía 2). Cumplido el tiempo de incubación se observaron las cajas
en las cuales no existe crecimiento bacteriano y se define la CMB de cada aceite
frente a cada microorganismo.
La mayoría de autores recomiendan el uso de agar Muller Hinton suplementado con

el 5% de sangre de cordero para el crecimiento de todas especies de estreptococos sin
embargo, debido a la complejidad en la obtención de este medio de cultivo, se
escogió el medio de cultivo BHIA ya que, existen estudios que indican que el agar
BHIA permite el crecimiento adecuado tanto de S. mutans como de S. pyogenes.126
6.6 Evaluación sensorial de enjuagues bucales comerciales
Con el objetivo de orientar la formulación del colutorio hacia el enjuague de mayor

aceptación por parte de los consumidores, se procedió a realizar una evaluación
sensorial del tipo hedónico y de preferencia para valorar las características: sabor,
sensación de irritación y sensación de frescura que producían los diferentes
enjuagues bucales comerciales usados como muestras: Listerine, Encident, Oraldine,
Colgate Plax. (Ver Fotografía 3)
Para esto, se escogió la Prueba de Nivel de Agrado o también llamada Prueba

Hedónica cuyo objetivo es “localizar el nivel de agrado o desagrado que provoca una

126
MEDINA, Rosalba y otros, “Estudio comparativo de medios de cultivo para crecimiento y
recuperación del Streptococcus mutans ATCC 25175 “in vitro””, Revista Nova, Vol 3, Nº 3, ISSN
1794-2470, Colombia, Enero-Junio 2005, pp 25-30

muestra específica.”127 La evaluación se realizó con la participación de 80 personas

de una edad promedio de 22 años y se realizó en tres etapas: en el primer impacto
(cuando se coloca el enjuague en la boca), durante la evaluación (mientras se realizan
buchadas) y al final de la evaluación (cuando se desecha el enjuague de la boca).
(Ver Fotografía 4).

Para el correcto desenvolvimiento de esta evaluación, se proporcionó a los
participantes las respectivas instrucciones (Ver Anexo 3) así como un formato de
calificación (Ver Anexo 4). Además, cada juez tenía a su disposición un vaso con
agua para enjuagar la boca, un vaso vacío para desechar los enjuagues y galletas soda
para neutralizar los sabores luego de probar cada enjuague.
Se distribuyó 10 ml de cada enjuague bucal en vasos plásticos desechables que

contenían una etiqueta blanca en donde se colocó el código de la muestra (número
aleatorio de tres dígitos), el número de consumidor y el código asignado a cada
enjuague bucal (A, B, C o D). El uso de códigos evita que los jueces distingan los
enjuagues bucales, de esta manera se disminuyen las posibles influencias personales
y sesgos en las calificaciones.
El orden de presentación de las muestras se realizó de acuerdo a un Modelo

Balanceado; es decir, el número de veces que la primera muestra aparece en el
primer lugar en la prueba, debe ser igual al número de veces que la segunda muestra
aparece en el primer lugar, y así sucesivamente, de manera que las muestras ocupen
todos los lugares el mismo número de veces (permutaciones).128 (Ver Anexo 5)
6.7 Formulación del colutorio con aceite esencial de la hoja de ishpingo y clavo
de olor
Una vez escogidos los aceites esenciales con los cuales se iba a trabajar (tomando en
cuenta la CMB más baja) y habiendo establecido un prototipo de preferencia
sensorial, se procedió a formular el colutorio. Dentro de la fórmula se consideraron
las materias primas más importantes: un tensioactivo o detergente (lauril éter sulfato

127
PEDRERO, Daniel y PANGBORN, Rose, Evaluación sensorial de los alimentos. Métodos
analíticos, Primera Edición, Editorial Alhambra Mexicana, México D.F., 1989, p. 105
128
Ídem, p. 33

de sodio), sustancias humectantes (sorbitol y glicerina), un saborizante (sabor

menta), un edulcorante (sacarina sódica), colorantes (verde menta y amarillo) y los
principios activos (principal: aceite esencial de la hoja de ishpingo, secundario:
aceite esencial de clavo de olor). Se decidió no usar conservantes ya que los aceites
esenciales poseen actividad antibacteriana de manera que no debería existir
crecimiento bacteriano en la fórmula, por otro lado, la fórmula contiene alcohol, lo
que también ayuda a que no proliferen las bacterias en la fórmula. Las
concentraciones utilizadas de cada materia prima están dentro de los rangos
sugeridos por la bibliografía. Se elaboraron dos formulaciones, una con mayor y otra
con menor contenido alcohólico. En las Tablas 6 y 7, se presenta la fórmula unitaria
para una presentación de 80 ml:
Tabla 6. Fórmula Unitaria Colutorio A

Sustancia Porcentaje Cantidad
Emal 70 (Lauril éter sulfato de sodio) 3.75% 3g
Glicerina 18.38% 14.7 g
Sorbitol 5.63% 4.5 g
Sabor Menta 4% 3.2 g
Sacarina sódica 0.04% 0.032 g
Alcohol 96º 12.5% 10 ml
Aceite esencial de la hoja de ishpingo 0.26% 0.21 ml
Aceite esencial de clavo de olor 1.56% 1.25 ml
Colorante verde - 1 gota
Colorante amarillo - 1 gota
Agua 33.88% c.s.p.80 ml
Total 100%
Fuente: La autora

Tabla 7. Fórmula Unitaria Colutorio B

Sustancia Porcentaje Cantidad
Emal 70 (Lauril éter sulfato de sodio) 3.75% 3g
Glicerina 18.38% 14.7 g
Sorbitol 5.63% 4.5 g
Sabor Menta 4% 3.2 g
Sacarina sódica 0.04% 0.032 g
Alcohol 96º 6.25% 5 ml
Aceite esencial de la hoja de ishpingo 0.26% 0.21 ml
Aceite esencial de clavo de olor 1.56% 1.25 ml
Colorante verde - 1 gota
Colorante amarillo - 1 gota
Agua 33.88% c.s.p. 80 ml
Total 100%
Fuente: La autora
6.8 Elaboración del colutorio con aceite esencial de la hoja de ishpingo y aceite
esencial de clavo de olor
Para elaborar el colutorio, se siguieron los siguientes pasos:
1. Pesar y medir todos los ingredientes de la fórmula.

2. Mezclar el lauril éter sulfato de sodio junto con la glicerina, el sorbitol y el
sabor menta en un agitador magnético a 800 rpm durante 10 minutos.
3. Reunir el alcohol con los principios activos (aceites esenciales) y agitar hasta
que se disuelvan completamente; una vez logrado esto, añadir lentamente a la
mezcla anterior y aumentar la velocidad de agitación a 1000 rpm.
4. Añadir lentamente las ¾ partes del disolvente (agua).
5. Adicionar los componentes minoritarios: sacarina sódica y colorante y agitar
durante 5 minutos hasta su completa disolución.
6. Completar la formulación con el resto del disolvente hasta el volumen total
especificado en la fórmula.

7. Envasar y etiquetar el colutorio en un frasco de vidrio.

8. Reposar el colutorio por 24 horas para que desaparezca la espuma.
9. Realizar los controles de calidad respectivos: organolépticos y físico-
químicos y microbiológicos.
6.9 Evaluación de la actividad antibacteriana de los colutorios elaborados y los

enjuagues bucales comerciales por el método de difusión en medio sólido
Se siguió la metodología siguiente:
a. Se prepararon los inóculos de las bacterias de la misma manera que los

utilizados para obtener la CMB de los aceites esenciales. (Cfr. Supra p. 48-
49)
b. Se sumergió un hisopo de algodón en la suspensión bacteriana y se eliminó el
exceso presionándolo sobre la pared interna del tubo evitando así el exceso de
inóculo.
c. Se inoculó la superficie de placas de agar BHIA (por ser el que ofrece un
crecimiento adecuado tanto de S. mutans como de S. pyogenes) con el hisopo
pasándolo por toda la superficie en tres direcciones. Se dejaron secar las
placas por 5 minutos.
d. Utilizando unas pinzas estériles se colocaron sobre las cajas petri discos de
papel filtro (6mm de diámetro) con 25µl de las siguientes muestras: Listerine,
Colgate Plax, Encident, Oraldine, Colutorio A, Colutorio B, Blanco Positivo
1 (aceite esencial de la hoja de ishpingo), Blanco Positivo 2 (aceite esencial
de clavo de olor), Blanco Negativo (fórmula del Colutorio A sin aceites
esenciales). Para que las muestras difundan en el medio de cultivo se dejaron
reposar las placas durante 15 minutos a temperatura ambiente.
e. En una estufa marca Shel Lab se incubaron las placas en posición invertida a
37ºC durante 24 horas para S. pyogenes y 48 horas para S. mutans.
f. Transcurrido este tiempo, se midieron los diámetros de las zonas de
inhibición con un pie de rey y se apuntaron los resultados.
g. Todo el procedimiento anterior se realizó por quintuplicado tanto para S.
mutans como para S. pyogenes. La bibliografía señala que el procedimiento

se debe hacer mínimo por cuadriplicado con el fin de obtener un error menor
al 10%.129
6.10 Estabilidad del colutorio elaborado
El estudio de estabilidad fue realizado con el Colutorio B puesto que contiene una
menor concentración de alcohol y es menos irritante que el Colutorio A.
Se realizó un estudio de estabilidad acelerada ya que este tipo de estudio permite

conocer en corto tiempo, la evolución de las características organolépticas, físico-
químicas y microbiológicas del producto. Además, se escogió este tipo de estudio ya
que, puede ser empleado en la fase de desarrollo del producto utilizándose lotes
producidos en escala laboratorial, que es lo que contempla esta investigación.130
Se preparó un lote de 2000 ml y se envasó el producto en frascos de polietileno de 40

ml de capacidad (Ver Fotografía 5). Se escogió este tipo de envase puesto que es uno
de los materiales más utilizado por las marcas comerciales. De acuerdo a lo
recomendado por la Agencia Nacional de Vigilancia Sanitaria del Brasil, las
muestras se sometieron a diversas condiciones de almacenamiento. (Ver Tabla 8)
Tabla 8. Protocolo del Estudio de Estabilidad Acelerada

129
CYTED, Manual de Técnicas de Investigación, Programa Iberoamericano de Ciencia y Tecnología
para el Desarrollo, Subprograma X: Química Fina Farmacéutica, Proyecto X-1:Búsqueda de
Principios Bioactivos en Plantas de la Región, 1995, p. 69
130
AGENCIA NACIONAL DE VIGILANCIA SANITARIA, Guía de estabilidad de productos
cosméticos, Serie Calidad en Cosméticos, Segunda Edición, Volumen 1, Brasilia, Mayo 2005, ISBN –
85-88233-15-0, pp 1-52

Condiciones de Número Período Frecuencia de análisis

almacenamiento de establecido
muestras
Estufa: 40±2 ºC 12 60 días Tiempo cero, 24 horas, 7,
15, 30, 60
Nevera: 5±2 ºC 12 60 días Tiempo cero, 24 horas, 7,
15, 30, 60
Exposición a radiación 12 60 días Tiempo cero, 24 horas, 7,
luminosa: fuente de luz 15, 30, 60
ultravioleta
Fuente: La autora, con base en Guía de estabilidad de productos cosméticos
Se escogieron diferentes parámetros a evaluar durante el tiempo de duración del

estudio. (Ver Tabla 9). Se consideraron aceptables los cambios que se encuentren
dentro del ±2% de variación.131 Para el contenido del principio activo (aceite esencial
de la hoja de ishpingo) se aceptarán cambios hasta de un ±10% de variación,
considerando que no se trata de un producto farmacéutico sino más bien cosmético.
Tabla 9. Parámetros a evaluar en el Estudio de Estabilidad Acelerada

Características organolépticas Aspecto, color, olor, sabor,
Características físico-químicas pH, densidad
Características microbiológicas Mohos y levaduras, aerobios totales,
coliformes totales.
Material de Acondicionamiento Deformación
(Envase)
Principio Activo Variación en el contenido de aceite
esencial de la hoja de ishpingo (A1)
Fuente: La autora
La evaluación de las características organolépticas, físico químicas y del material de

acondicionamiento se realizó de manera sensorial, es decir, usando los órganos de los
sentidos. La evaluación de las características microbiológicas se realizó utilizando
placas Petrifilm marca 3M para el conteo de coliformes totales, aerobios totales y
mohos y levaduras. Para evaluar el contenido del aceite esencial de la hoja de
ishpingo se pesaron en un balón aforado entre 21.3 y 22.5 mg del colutorio y se aforó
a 5 ml con éter de petróleo. De esta dilución se tomó 1ml y se aforó nuevamente a 5
ml de éter de petróleo; se tomó 2 µL de esta muestra y se inyectó en el equipo de
GC-MS. Las condiciones de trabajo del equipo fueron las mismas que las que se

131
La Norma Oficial Mexicana Nom-073-Ssa1-2005, Estabilidad de Fármacos y Medicamentos,
establece que se consideran cambios significativos durante la estabilidad acelerada al 5% de la
variación de los valores iniciales del principio activo y/o especificaciones de apariencia y propiedades
físicas

ocuparon en la identificación del aceite esencial de la hoja de ishpingo (Cfr. Supra

47)
6.11 Perfil Organoléptico del Colutorio elaborado
Se realizó la Prueba de Perfilamiento, cuyo objetivo es analizar las características

organolépticas de un producto y la relación de ellos con un producto estándar; en este
caso, el enjuague bucal que en la prueba hedónica y de preferencia realizada
inicialmente, tuvo mejor aceptación. Esta prueba se realiza de manera que se genera
el mayor contenido de información posible acerca de un producto.132
La prueba se llevó a cabo con un panel sensorial formado por doce jueces, 5 hombres
y 7 mujeres, de una edad promedio de 21.08 años (Ver Anexo 6, Fotografía 6).
Previamente, se siguió un programa de entrenamiento mediante el cual los jueces se
capacitaron en:
• Adquirir conocimientos básicos sobre la Evaluación Sensorial y el manejo de

Buenas Prácticas de Evaluación así como en los sesgos y errores propios de
la Evaluación Sensorial.
• Pruebas de sabores básicos (dulce, salado, amago y ácido)
• Pruebas de aromas (para distinguir ishpingo, clavo de olor, menta, alcohol,
canela, etc.)
• Pruebas de ordenamiento de sabores considerados predominantes según la
formulación
• Pruebas descriptivas
Posteriormente de la etapa de entrenamiento, se procedió a realizar la Prueba del

Perfil del Colutorio, la cual, incluyó evaluar características como: aroma, sabor,
sabor residual y formación de espuma así como el grado de intensidad de cada factor
calificado en una escala del 1-10 (con la posibilidad de usar decimales).

132
PEDRERO, Daniel y PANGBORN, Rose, Op. Cit. p. 87

Se realizaron dos sesiones evaluativas utilizando un Modelo Experimental

Balanceado en el que se presentaban dos muestras, muestra 1: Colgate Plax y
muestra 2: Colutorio elaborado, cuidando que cada muestra sea evaluada el mismo
número de veces en todos los órdenes de presentación. (Ver Anexo 7)
Se proporcionó a cada juez la muestra (10 ml) en un vaso desechable, un vaso con
agua, una galleta soda y el formato de evaluación (Ver Anexo 8).
7. RESULTADOS Y ANÁLISIS DE RESULTADOS
7.1 Identificación de los microorganismos seleccionados para la investigación
La prueba de la tinción Gram resultó positiva para ambos microorganismos: S.

mutans y S. pyogenes, se observaron formas cocáceas dispuestas en cadenas típicas
de estos microorganismos.
La prueba de la catalasa fue negativa tanto para S. mutans como para S. pyogenes,
resultado característico para estos microorganismos.
7.2 Análisis organoléptico y físico-químico de los aceites esenciales
Los aceites A1 y A4 demuestran propiedades organolépticas así como físico-

químicas adecuadas y muy similares a las detalladas en la ficha técnica de referencia
de este producto que comercializa Amazon Aroma (Ver Anexo 9). Por otra parte, los
aceites A2 yA3, a pesar de tener color, sabor y apariencia igual a los aceites A1 y
A5, tienen un olor diferente. Además, los aceites A2 y A3 difieren de los aceites A1
y A4 en la solubilidad en alcohol al 96º, la densidad y el índice de refracción es
ligeramente inferior. (Ver Tablas 10 y 11)
La Real Farmacopea Española (Versión 2002), señala que el aceite esencial de clavo
de olor debería tener una densidad entre 1.030 y 1.063; el índice de refracción
debería estar entre 1.528 y 1.537. Estos datos varían mínimamente con los de la
muestra A5 lo que nos indica que este aceite comercializado por Laboratorios Luque
no es completamente puro. (Ver Tablas 10 y 11)

Tabla 10. Propiedades Organolépticas de los Aceites Esenciales

A1 A2 A3 A4 A5
Color Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo Marrón
Olor A ishpingo A pino A pino A ishpingo A clavo de
olor
Sabor Picante Picante Picante Picante Picante
Apariencia Líquido Líquido Líquido Líquido Líquido
Transparente Transparente Transparente Transparente Transparente
Fuente: La autora
Tabla 11. Propiedades Físico-Químicas de los Aceites Esenciales

A1 A2 A3 A4 A5
Densidad 0.9547 0.9066 0.9504 0.9540 0.9949
(g/ml)
Índice de 1.517 1.479 1.504 1.517 1.440
refracción
Solubilidad Insoluble, Insoluble, Insoluble, Insoluble, Insoluble,
en agua flota sobre flota sobre flota sobre flota sobre se hunde en
el agua el agua el agua el agua el agua
Solubilidad Soluble Insoluble Insoluble Soluble Soluble
en alcohol
96º
Fuente: La autora
Los aceites esenciales A1 y A4 luego de ser analizados por GC-MS tuvieron el perfil
cromatográfico del aceite esencial de la hoja de ishpingo, el compuesto que se
encontraba en mayor proporción fue el cariofileno. Los aceites esenciales A2 y A3
fueron descartados para la elaboración del colurorio puesto que, su perfil
cromatográfico no coincide con el del aceite esencial de la hoja de ishpingo; el
eucaliptol es el componente que se encontraba en mayor proporción.

7.3 Determinación in-vitro de la Concentración Mínima Bactericida (CMB) de

los aceites esenciales de la hoja de ishpingo y clavo de olor mediante el
método de dilución en medio líquido
En la Tabla 12 se muestran los resultados de la CMB del A1 para S. mutans y S.

pyogenes. Una vez que se sembraron alícuotas de cada tubo en cajas petri con BHIA
se observa ausencia de crecimiento en concentraciones del aceite esencial superiores
a 0.19% para S. pyogenes y 0.52% para S. mutans, concentraciones que corresponden
a los tubos 9 y 6 respectivamente.
Tabla 12. Concentración Mínima Bactericida A1

Dilución % aceite S. S. % aceite S. S.
esencial pyogenes pyogenes esencial mutans mutans
Tubo 1 Tubo 2 Tubo 1 Tubo 2
0 100% - - 100% - -
1 50% - - 33.33% - -
2 25% - - 16.67% - -
3 12.5% - - 8.33% - -
4 6.25% - - 4.17% - -
5 3.13% - - 2.08% - -
6 1.56% - - 1.04% - -
7 0.78% - - 0.52% + +
8 0.39% - - 0.26% + +
9 0.19% + + 0.13% + +
10 0.097% + + 0.07% + +
Fuente: La autora -: ausencia de crecimiento
+: crecimiento
a 0.26% para S. mutans y 0.39% para S. pyogenes concentraciones que corresponden
a los tubos 7 para ambos casos.


0 100% - - 100% - -
1 50% - - 33.33% - -
2 25% - - 16.67% - -
3 12.5% - - 8.33% - -
4 6.25% - - 4.17% - -
5 3.13% - - 2.08% - -
6 1.56% - - 1.04% - -
7 0.78% - - 0.52% - -
8 0.39% + + 0.26% + +
9 0.19% + + 0.13% + +
10 0.097% + + 0.07% + +
+: crecimiento

a 2.08% para S. mutans, concentración que corresponde al tubo 4. Para S. pyogenes
se observa ausencia de crecimiento aún a la concentración más baja del aceite
esencial 0.097%.


0 100% - - 100% - -
1 50% - - 33.33% - -
2 25% - - 16.67% - -
3 12.5% - - 8.33% - -
4 6.25% - - 4.17% - -
5 3.13% - - 2.08% + +
6 1.56% - - 1.04% + +
7 0.78% - - 0.52% + +
8 0.39% - - 0.26% + +
9 0.19% - - 0.13% + +
10 0.097% - - 0.07% + +
+: crecimiento

a 0.13% para S. mutans, concentración que corresponde al tubo 8. Para S. pyogenes
se observa ausencia de crecimiento aún a la concentración más baja del aceite
esencial 0.097%.


0 100% - - 100% - -
1 50% - - 33.33% - -
2 25% - - 16.67% - -
3 12.5% - - 8.33% - -
4 6.25% - - 4.17% - -
5 3.13% - - 2.08% - -
6 1.56% - - 1.04% - -
7 0.78% - - 0.52% - -
8 0.39% - - 0.26% - -
9 0.19% - - 0.13% + +
10 0.097% - - 0.07% + +
+: crecimiento

a 0.78% para S. pyogenes y 0.13% para S. mutans, concentraciones que corresponden
a los tubos 6 y 8 respectivamente.


0 100% - - 100% - -
1 50% - - 33.33% - -
2 25% - - 16.67% - -
3 12.5% - - 8.33% - -
4 6.25% - - 4.17% - -
5 3.13% - - 2.08% - -
6 1.56% - - 1.04% - -
7 0.78% + + 0.52% - -
8 0.39% + + 0.26% - -
9 0.19% + + 0.13% + +
10 0.097% + + 0.07% + +
+: crecimiento
Con los resultados expuestos, se descartan el uso de los aceites esenciales A2 yA3
para la formulación y elaboración de nuestros colutorios puesto que estos aceites
como se ha mencionado, presentan una composición química diferente a la del aceite
esencial de la hoja de ishpingo, además, la CMB de estos aceites es superior a las de
los aceites A1 y A4..
Entre los aceites A1 y A4, se escogió el segundo puesto que presenta una CMB
inferior tanto para S. mutans como para S. pyogenes, a escala industrial esto es muy
importante ya que se reducen costos de producción y se aprovechan recursos.
Finalmente, se escogió A5 ya que era el único aceite de clavo de olor que
disponíamos.
7.4 Evaluación sensorial de enjuagues bucales comerciales
La evaluación sensorial dio como resultado que el enjuague bucal Colgate Plax es el
preferido por los evaluadores, por tal razón, este enjuague será tomado como
estándar o prototipo en la elaboración del colutorio.

A los evaluadores les gustó el sabor a menta de este enjuague bucal, por tal razón
será imprescindible tomar en cuenta esta variable. Además, es importante que
nuestro enjuague no sea muy irritante, para esto, trataremos de usar alcohol y los
aceites esenciales en la mínima concentración posible (CMB).
A continuación se presentarán los gráficos correspondientes a las calificaciones

hedónicas generales que cada enjuague bucal recibió en la evaluación sensorial y la
preferencia de cada evaluador. En los Anexos 10-21, se presentan las calificaciones
hedónicas de cada enjuague bucal al primer impacto, durante las buchadas y al final
de la evaluación.
7.4.1 Listerine
El 27% de los participantes de la evaluación sensorial, es decir, 22 personas

declararon que el enjuague bucal Listerine les disgusta mucho debido a que, según
mencionaron es un enjuague muy irritante, picante, provoca un cierto grado de
amortiguamiento en la boca y tiene mal sabor. El 11% de los evaluadores, se
mantienen en un punto neutro, es decir, que Listerine ni les gusta ni les disgusta.
Sólo el 3% de los evaluadores dicen que Listerine les gusta mucho ya que la

sensación de frescuraa que éste proporciona

p permanecee luego de suu uso. (Verr Gráfico
1)
G
Gráfico 1. Calificación
C n General dee Listerine
LISTER
RINE Me disgussta
mucho
Me disgussta
3%
% moderadaamente
Me disgussta
9% 27% ligeramennte
3%
13
Ni me gussta
11% ni me disggusta
1
18% Me gusta
19% ligeramennte
Me gusta
moderadaamente
Me gusta
mucho
Fueente: La autorra, con base enn evaluación sensorial

s hedóónica
7.4.2 En
ncident
La mayoríía de evaluaadores, el 32%, es decir 26 personnas mencionnaron que Encident

E
les gusta moderadam
m ente. Las raazones para esta respueesta es que eeste enjuagu
ue según
mencionarron, tiene unn sabor muyy suave perro la sensaciión de fresccura luego de
d uso es
pobre, adeemás, los evaluadores
e señalaron que al finaal de la evaaluación perrsiste un
sabor mettálico y amaargo en la boca.
b El 17
7% de los evvaluadores,, 14 personaas, están
de acuerdoo en que las características de Encident ni lees gusta ni lles disgusta. Sólo el

1% de loss evaluadores, es decirr, 1 evaluad

dor, responddió que estee enjuague bucal le
disgusta mucho.
m (Verr Gráfico 2).
G
Gráfico 2. Calificación
C n General dee Encident
ENCID
DENT Me disggusta
mucho
Me disggusta
1% 4% moderaadamente
%
6%
13% Me disggusta
17% ligeramente
Ni me gusta
32% ni me disgusta
27% Me gustta
ligeramente
Me gustta
moderaadamente
Me gustta
mucho

s hedóónica
7.4.3 Orraldine
La mayorría de evaluuadores, el 29%, es decir

d 23 peersonas, resspondieron que las
propiedaddes de Oralddine ni les gusta
g ni les disgusta. Sólo
S el 1%, es decir, 1 persona
declaró quue este enjuuague le guusta mucho. Para 4 peersonas, es decir el 5%
% de los
evaluadorees, este enjuuague les disgusta
d muccho. Los evvaluadores m
mencionan que este
enjuague tiene un saabor desagraadable, es un
u poco irrritante y proporciona una
u baja
sensación de frescuraa luego de suu uso. (Ver Gráfico 3)

G
Gráfico Calificación
3.C n General dee Oraldine
ORALD
DINE Me dissgusta
mucho o
Me dissgusta
%
1% moderradamente
13% 5% Me dissgusta
14%
ligeram
mente
21% Ni me gusta
disgusta
ni me d
29% Me gusta
17% mente
ligeram
Me gusta
moderradamente
Me gusta
mucho o

s hedóónica
7.4.4 Coolgate Plax
Para el 333% de los evaluadores,

e , es decir, 26
2 personass, el enjuaguue Colgate Plax les
gusta modderadamentee. A ningunna persona le disgusta mucho
m este enjuague bu
ucal y al
19% de los
l evaluaddores, es decir,
d 15 peersonas, Coolgate Plaxx les gusta mucho.
Algunas de
d las explicaciones para
p estos resultados
r s
serían, segúún los evalu
uadores:
Colgate Pllax tiene unn equilibrio en sus cualidades, posee un agraddable sabor a menta,
la sensaciión de irritaación es aceptable y la sensaciónn de frescura que prop
porciona

durante y luego de su
s uso perm
manece inclu
uso luego de
d comer laa galleta soda. (Ver
Gráfico 4)).
Grráfico 4. Caalificación General

G de Colgate
C Plaxx
COLGATEE PLAX Me disggusta
mucho
Me disggusta
0% 1% moderaadamente
19% 7% Me disggusta
9%
ligeram
mente
Ni me ggusta
ni me d
disgusta
33%
% 31%
Me gussta
ligeram
mente
Me gussta
moderaadamente
Me gussta
mucho

s hedóónica
7.4.5 Prreferencia
Al final de
d la evaluaación, se pidió
p a los evaluadoress que, tomaando en cu
uenta las
cualidadess de sabor, sensación de irritació
ón y sensación de freescura, señaalen que
enjuague bucal
b preferirían compprar y usarlo. Más de la
l mitad de los evaluad
dores, el
55%, es decir, 44 perrsonas, señaalaron que preferirían
p e enjuague bucal Colgaate Plax.
el
30 personnas, es deciir el 38% de
d los evalu
uadores, prreferirían E
Encident. Ell 5%, es
decir, 4 personas preferirían
p Oraldine. Tan
T solo el
e 2%, es decir, 2 personas
p
preferiríann Listerine. (Ver Gráficco 5)

5 Preferenccia de los ennjuagues buccales de loss participanttes de la evaaluación

Gráfico 5.
senso
orial
PREFERENCIA
2%
38% LISTEERINE
55% ENCIIDENT
ORA
ALDINE
5%
COLG
GATE PLAX

s de prreferencia
ulación y elaboración
7.5 Formu n de los colu
utorios
En la Tabbla 17 se presentan
p l caracterrísticas orgaanolépticas, físico-quíímicas y
las
microbiolóógicas de loos colutorios elaborado
os y de los enjuagues
e buucales comeerciales.
En cuantoo al color, los colutoorios elaborrados tienenn una tonaalidad verdee limón,
diferente al resto de enjuagues comercialees. El olor difiere del resto de en
njuagues
usados coomo muestraas. El sabor es picantee, parecido al Listerine, sin embaargo, los

Colutorios A y B presentan un sabor característico a ishpingo. La apariencia es como

la del resto de enjuagues comerciales: líquido transparente.
Las características físico-químicas de los Colutorios elaborados no difieren

significativamente de las presentadas por los enjuagues muestras. Su densidad e
índice de refracción son muy cercanos a los valores presentados por Colgate Plax. El
pH es la única característica en las que los Colutorios A y B difieren
significativamente con Colgate Plax, ya que, presentan, al igual que Encident, un pH
8 (ligeramente básico), mientras que, Colgate Plax tiene un pH 6 (ligeramente ácido).
Tanto los Colutorios A, B y los enjuagues muestras están libre de contaminación

microbiana (aerobios totales, coliformes totales, mohos y levaduras). Esto se debe,
sin duda, a que todos estos enjuagues contienen sustancias antimicrobianas que
inhiben el crecimiento de cualquier tipo de organismo.

Tabla 17. Características de los Colutorios elaborados y los enjuagues bucales comerciales
Colutorio A Colutorio B Listerine Encident Oraldine Colgate Plax
Color Verde limón Verde limón Amarillo Rosado Rojo Verde
Olor Ishpingo y menta Ishpingo y menta Alcohólico Menta Suave Alcohólico Mentolado
Dulce,
Organolépticas Sabor Picante, ishpingo Picante, ishpingo Picante Mentolado Amargo
mentolado
Líquido Líquido Líquido Líquido Líquido Líquido
Apariencia
transparente transparente transparente transparente transparente transparente
Densidad 1.0507 1.0615 0.9682 1.0271 0.9916 1.0426
Índice de
Físico-químicas 1.382 1.382 1.352 1.348 1.345 1.364
refracción
pH 8 8 4 8 4 6
Aerobios totales 0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC
Coliformes totales 0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC
Microbiológicas
Mohos y
0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC 0 UFC
levaduras
Fuente: La autora, con base a evaluación de características

7.6 Actividad antibacteriana de los colutorios elaborados y los enjuagues

bucales comerciales por el método de difusión en medio sólido
En la Tabla 18, se muestran los resultados de los halos de inhibición (mm) que
mostraron los colutorios elaborados y los enjuagues bucales comerciales usados
como muestras. (Ver Fotografías 7-8)
Los resultados obtenidos muestran que Listerine no es capaz de inhibir el

crecimiento de S. mutans ni de S. pyogenes, ya que no se observa ningún halo de
inhibición. Estos datos concuerdan con la investigación realizada por Valentina
Camejo.133
Tanto el Colutorio A como el B, presentan un halo de inhibición promedio de 0.88

mm frente a S. mutans. El Colutorio A muestra un halo de inhibición promedio de 1
mm frente a S. pyogenes mientras que el Colutorio B, para este mismo
microorganismo muestra un halo de inhibición promedio de 1.02 mm.
Encident muestra un halo de inhibición promedio de 3.22 mm frente a S. mutans, y

4.88 mm frente a S. pyogenes. Estos halos, son superiores frente a los presentados
por los Colutorios A y B.
Oraldine presenta un halo de inhibición promedio de 0.25 mm frente a S. mutans y

0.36 mm frente a S. pyogenes. Los halos de inhibición de los Colutorios A y B son
superiores a estos.
Colgate Plax exhibe un halo de inhibición promedio de 0.17 mm frente a S. mutans y

14.68 mm frente a S. pyogenes. Los Colutorios A y B presentan un halo superior
frente a S. mutans pero al mismo tiempo inferior para S. pyogenes.
El blanco negativo no presenta ningún halo de inhibición lo que demuestra que

efectivamente los aceites esenciales de la hoja de ishpingo y clavo de olor son las

133
CAMEJO, Valentina, Sensibilidad in vitro de Streptococcus mutans a sanguinaria, compuesto
fenólico y clorhexidina, Acta Odontológica Venezolana, Vol 37, Nº 2, Venezuela, 1999, formato pdf,
http://www.actaodontologica.com/ediciones/1999/2/sensibilidad_in_vitro_streptococcus_mutans_a_sa
nguinarina_compuesto_fenolico_clorherxidina.asp

sustancias que inhiben el crecimiento de los microorganismos ya que, como se

mencionó con anterioridad, se usó como blanco negativo la misma fórmula del
Colutorio A (con mayor contenido alcohólico) pero sin adicionar los aceites
esenciales.
El blanco positivo 1 (aceite esencial A4 al 100%) mostró un halo de inhibición

promedio de 0.86 mm para S. mutans y 1.06 mm para S. pyogenes. Estos halos son
muy similares a los presentados por los Colutorios A y B.
El blanco positivo 2 (aceite esencial A5 al 100%) mostró un halo de inhibición

promedio de 3.45 mm para S. mutans y 3 mm para S. pyogenes. Estos halos son
superiores a los exhibidos por los Colutorios A y B.

Tabla 18. Actividad antibacteriana de los colutorios elaborados y los enjuagues bucales comerciales
Diámetro de los halos de inhibición (mm)
Listerine Encident Oraldine Colgate Plax Colutorio Colutorio Blanco Blanco Blanco
Microorganismo
A B negativo positivo positivo
(A4) (A5)
S. mutans 0 4 0.3 0.2 1 1 0 1 4
repetición 1
S. mutans 0 3.7 0.4 0.3 1 1 0 1 4.4
repetición 2
S. mutans 0 4 0.3 0.2 1.2 1 0 1.2 4
repetición 3
S. mutans 0 4 0.3 0.2 1 1 0 1 4.3
repetición 4
S. mutans 0 3.6 0.2 0.1 1.1 1.3 0 1 4
repetición 5
S. pyogenes 0 5 0.4 15 1 1 0 1 3
repetición 1
S. pyogenes 0 5 0.4 13.6 1 1 0 1 3.2
repetición 2
S. pyogenes 0 4.4 0.3 14.8 1 1.1 0 1 2.8
repetición 3
S. pyogenes 0 5 0.3 15 1 1 0 1 3
repetición 4
S. pyogenes 0 5 0.4 15 1 1 0 1.3 3
repetición 5
Fuente: La autora, con base en estudio de la actividad antibacteriana

7.6.1 Análisis Estadístico de la Actividad Antibacteriana de los colutorios

elaborados y los enjuagues bucales comerciales
El análisis estadístico de los resultados obtenidos en el estudio de la actividad

antibacteriana de los colutorios elaborados y los enjuagues bucales comerciales se
realizó mediante el Software Statistix 8.0. Frecuentemente para este tipo de casos se
realiza la prueba estadística paramétrica del Análisis de Varianza de una vía sin
embargo, esta prueba es útil siempre y cuando los datos obtenidos sean normales. En
esta investigación, los datos obtenidos no cumplen con esta premisa por tal razón, se
procedió a realizar la prueba de Kruskal Wallis ya que reemplaza a la paramétrica
Análisis de Varianza de una Vía.
7.6.1.1 Prueba de Kruskal Wallis contrastando los diámetros del halo de

inhibición generados por los enjuagues bucales para Streptococcus
mutans
• Hipótesis Nula: Los seis enjuagues bucales utilizados en el estudio de la

actividad antibacteriana tienen medianas del diámetro de los halos de
inhibición estadísticamente similares.
• Hipótesis Alternativa: El valor de la mediana del diámetro del halo de
inhibición generado por al menos de uno de estos enjuagues bucales es
diferente a los generados por los otros enjuagues.
• Nivel de significancia (alfa): 0.05

Los resultados emitidos por Statistix 8.0 fueron:
Tabla 19. Análisis de Varianza No Paramétrico de una Vía de Kruskal-Wallis

Enjuague bucal Mean Rank Sample Size
(Variable) (Tamaño de la muestra)
Colgate Plax 8.8 5
Colutorio A 20.8 5
Colutorio B 20.2 5
Encident 28.0 5
Listerine 3.0 5
Oraldine 12.2 5
Total 15.5 30
Fuente: La autora, con base en Statistix 8.0
Valor del Estadístico de Kruskal-Wallis (H): 27.61

Valor de la probabilidad asociada al estadístico (P): 0.00
Conclusión: Al menos uno de los enjuagues bucales está generando un halo de

inhibición mucho más fuerte que los otros.
Para determinar cual de los enjuagues está generando tal halo de inhibición se realizó
una prueba extra de comparaciones entre las medianas de todos los pares posibles de
enjuagues (Kruskal-Wallis All-Pairwise Comparisons Test, Statistic 8.0), de la cual
se obtuvieron los siguientes resultados:
Tabla 20. Kruskal-Wallis All-Pairwise Comparisons Test

Enjuague bucal Perteneciente o afín al grupo
Encident A
Colutorio A AB
Colutorio B AB
Oraldine ABC
Colgate Plax BC
Listerine C

Por tanto, hay tres grupos de enjuagues estadísticamente afines entre sí (por
consiguiente también afines en su eficacia inhibitoria in vitro frente a S. mutans):
• Encident, el Colutorio A, el Colutorio B y Oraldine tienen eficacias muy

similares entre sí.
• El Colutorio A, el Colutorio B, Oraldine y Colgate tienen eficacias muy
• Oraldine, Colgate Plax y Listerine tienen eficacias muy similares entre sí.
En otras palabras, separándose, por tanto, nítidamente la eficacia de los siguientes

enjuagues:
• Encident y Colgate Plax: el primero es absolutamente mejor que el

segundo.
• Encident y Listerine: el primero es absolutamente mejor.
• El Colutorio A con Listerine: siendo el primero el mejor.
• El Colutorio B con Listerine: siendo el primero el mejor.
7.6.1.2 Prueba de Kruskal Wallis contrastando los diámetros del halo de

inhibición generados por los enjuagues bucales para Streptococcus
pyogenes
• Hipótesis Nula: Los seis enjuagues bucales utilizados en el estudio de la

actividad antibacteriana tienen medianas del diámetro de los halos de
inhibición estadísticamente similares.
• Hipótesis Alternativa: El valor de la mediana del diámetro del halo de
inhibición generado por al menos de uno de estos enjuagues bucales es
diferente a los generados por los otros enjuagues.
• Nivel de significancia (alfa): 0.05

Los resultados emitidos por Statistix 8.0 fueron:
Tabla 21. Análisis de Varianza No Paramétrico de una Vía de Kruskal-Wallis

Enjuague bucal Mean Rank Sample Size
(Variable) (Tamaño de la muestra)
Colgate Plax 28.0 5
Colutorio A 15.0 5
Colutorio B 16.0 5
Encident 23.0 5
Listerine 3.0 5
Oraldine 8.0 5
Total 15.5 30
Valor del Estadístico de Kruskal-Wallis (H): 28.46

Valor de la probabilidad asociada al estadístico (P): 0.00
Conclusión: Al menos uno de los enjuagues bucales está generando un halo de

inhibición mucho más fuerte que los otros.
Para determinar cual de los enjuagues está generando tal halo de inhibición se realizó
una prueba extra de comparaciones entre las medianas de todos los pares posibles de
enjuagues (Kruskal-Wallis All-Pairwise Comparisons Test, Statistic 8.0), de la cual
se obtuvieron los siguientes resultados:
Tabla 22. Kruskal-Wallis All-Pairwise Comparisons Test

Enjuague bucal Perteneciente o afín al grupo
Colgate Plax A
Encident AB
Colutorio B ABC
Colutorio A ABC
Oraldine BC
Listerine C

Por tanto, hay tres grupos de enjuagues estadísticamente afines entre sí (por
consiguiente también afines en su eficacia inhibitoria in vitro frente a S. pyogenes):
• Colgate Plax, Encident, el Colutorio A y el Colutorio B tienen eficacias

muy similares entre sí.
• Encident, el Colutorio B, el Colutorio A y Oraldine tienen eficacias muy
• El Colutorio B, el Colutorio A, Oraldine y Listerine tienen eficacias muy
En otras palabras, separándose, por tanto, nítidamente la eficacia de los siguientes

enjuagues:
• Colgate Plax y Oraldine: el primero es absolutamente mejor que el

segundo.
• Colgate Plax y Listerine: el primero es absolutamente mejor.
• Encident y Listerine: siendo el primero el mejor.
7.7 Estabilidad del colutorio elaborado
En las Tablas 23-25 se presentan los datos correspondientes a la estabilidad acelerada

del colutorio. Todos los parámetros a evaluar se midieron a los tiempos establecidos
en el estudio excepto el contenido de aceite esencial de la hoja de ishpingo (A1).
La cuantificación del aceite esencial en la fórmula se realizó mediante GC-MS y se

efectuó únicamente a tiempo cero y a los sesenta días de duración del estudio por la
sugerencia y asesoría de un Docente Investigador experimentado en técnicas GC-
MS. Esta cuantificación se realizó mediante la comparación de las áreas bajo el pico
más alto presente en cada muestra, considerándose al área del colutorio a tiempo cero
como la concentración al 100% del aceite esencial de la hoja de ishpingo. (Ver
gráfico 6).

Gráfico 6. Cromatogramas de los Colutorios sometidos al estudio de estabilidad

acelerada
Muestra T0
Muestra 40ºC
Muestra 5ºC
Muestra UV
Fuente: GC-MS
Como se puede observar en el Gráfico 6, los cromatogramas muestran que durante el

tiempo de duración del estudio de estabilidad, los colutorios no han variado su
composición química ya que, se observan los mismos picos, los cromatogramas son
idénticos.

Tabla 23. Resultados de la estabilidad en estufa a 40ºC

Características Tiempo 24 horas 7 días 15 días 30 días 60 días
cero
Aspecto Líquido Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
transparente
Color Verde limón Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
Organolépticas Olor Ishpingo y Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
menta
Sabor Picante- Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
ishpingo
pH 8 8 8 8 8 8
Físico-químicas Densidad (g/ml) 1.0611 1.0644 1.0673 1.0657 1.0648 1.0685
Contenido de A1 (área 3.923*108 - - - - 4.016*108

bajo el pico más alto)
Aerobios totales 0 0 0 0 0 0
Microbiológicas Coliformes totales 0 0 0 0 0 0
Mohos y levaduras 0 0 0 0 0 0
Envase Deformación Ninguna Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
Fuente: La autora, con base en estudio de estabilidad acelerada

Tabla 24. Resultados de la estabilidad en nevera a 5ºC

cero
Aspecto Líquido Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
transparente
Color Verde limón Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
Organolépticas Olor Ishpingo y Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
menta
Sabor Picante- Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración
ishpingo
pH 8 8 8 8 8 8

Envase Deformación Ninguna Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración

Tabla 25. Resultados de la estabilidad en radiación luminosa (UV)
cero
Organolépticas Aspecto Líquido Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración Sin alteración

transparente
Color Verde limón Sin alteración Modificado, Modificado, Modificado, Modificado,
más claro más claro más claro más claro
Olor Ishpingo y Sin alteración Modificado, a Modificado, a Modificado, a Modificado, a
menta plástico plástico plástico plástico
Sabor Picante- Sin alteración Modificado, a Modificado, a Modificado, a Modificado, a
ishpingo plástico plástico plástico plástico
pH 8 8 8 8 8 8

Envase Deformación Ninguna Sin alteración Sin alteración Cambio de Más amarillo, Más amarillo,
color cuarteado cuarteado
(amarillo)

El Colutorio sometido al estudio de estabilidad en estufa a 40ºC, no presenta cambios

en cuanto a sus propiedades organolépticas durante los 60 días de duración del
estudio. El pH se mantiene estable con un valor de 8. A pesar de que la densidad
presenta ligeros cambios durante todo el estudio, los valores se mantienen dentro del
rango considerado aceptable, es decir, entre 1.0824 y 1.0399 g/ml (±2% de variación
del valor inicial), presentando un valor promedio de 1.0661 g/ml. El Colutorio no
presenta ningún tipo de contaminación microbiana y el envase no sufre alteraciones
de ninguna clase. El contenido de principio activo aumentó en un 2.37%, sin
embargo, el valor se encuentra dentro del ±10% de variación considerado aceptable.
El estudio de estabilidad en nevera a 5ºC demuestra que el colutorio no presenta

cambios de sus propiedades organolépticas hasta el final del estudio. El pH tampoco
presenta variación, se mantiene en 8. La densidad se mantiene dentro del rango
aceptable y presenta un promedio de 1.0648 g/ml. El envase no presenta cambios y
no se observa contaminación microbiana de ningún tipo. El principio activo
disminuyó en un 9.26%, encontrándose dentro del rango aceptable de variación.
El estudio de estabilidad en radiación luminosa (UV) indica que el colutorio, a partir

de los 7 días de iniciado el estudio, presenta cambios en la integridad del envase
utilizado lo que a su vez, afectó en el color, olor y sabor del colutorio. El pH se
mantiene estable en un valor de 8. La densidad se mantiene dentro del rango
aceptable con un promedio de 1.0606 g/ml durante todo el estudio. No se evidencia
proliferación microbiana. El principio activo disminuyó en un 11.53%, este valor se
encuentra fuera del rango considerado aceptable.

7.8 Análisis del Perfil Organoléptico del Colutorio elaborado frente al Perfil de
Colgate Plax
Con los datos obtenidos en las dos sesiones evaluativas con los jueces (24 datos por
atributo), se procedió a sacar el promedio de los mismos de manera que se
obtuvieron los siguientes resultados:
• En cuanto al aroma, los jueces indican que Colgate Plax exhibe el aroma
menta y mentol con mayor intensidad que el Colutorio elaborado, éste por su
parte, presenta el aroma del clavo de olor, de la canela, del ishpingo y picante
más fuerte que Colgate Plax. Ambos enjuagues presentan el aroma de
eucalipto y alcohol en intensidades muy parecidas. (Ver Tabla 26 y Gráfico
6)
Tabla 26. Intensidad de aromas en enjuagues bucales

Menta Mentol Clavo Eucalipto Canela Alcohol Picante Ishpingo
de
olor
Colgate 7.14 5.56 2.74 2.67 2.30 3.39 2.21 2.17
Plax
Colutorio 5.66 4.83 4.39 2.65 4.46 3.32 3.12 4.37
Fuente: La autora, con base en prueba del perfil del sabor
Gráfico 6. Perfil del Aroma de Enjuagues Bucales
MENTA
8.00
ISHPINGO 6.00 MENTOL
4.00
2.00
CLAVO DE COLGATE PLAX
PICANTE 0.00
OLOR COLUTORIO
ALCOHOL EUCALIPTO
CANELA

• En lo referente al sabor, el panel sensorial definió que el Colutorio elaborado

presenta un sabor de ishpingo, amargo, irritante y ácido mucho mayor que
Colgate Plax. Por su parte, Colgate Plax demuestra únicamente un sabor de
menta superior al Colutorio elaborado. Ambos enjuagues al parecer, tienen un
sabor de alcohol, de mentol, salado y refrescante muy similares. (Ver Tabla
27 y Gráfico 7)
Tabla 27. Intensidad de sabores de enjuagues bucales

Dulce Menta Mentol Alcohol Ácido Salado Irritante Amargo Refrescante Ishpingo
Colgate 5.12 6.51 5.51 4.15 2.65 1.64 4.48 2.27 6.76 2.01
Plax
Colutorio 4.86 5.50 5.32 4.55 4.20 1.95 7.23 4.77 6.35 4.31
Gráfico 7. Perfil del Sabor de Enjuagues Bucales
DULCE
8.00
ISHPINGO MENTA
6.00
4.00
REFRESCANTE 2.00 MENTOL
COLGATE PLAX
0.00
COLUTORIO
AMARGO ALCOHOL
IRRITANTE ACIDO
SALADO

• El panel sensorial estableció que, en lo que tiene que ver con el sabor
residual, Colgate Plax presenta un sabor residual dulce, de mentol y
refrescante mayor que el Colutorio elaborado mientras que, éste, exhibe un
sabor residual de ishpingo, amargo, irritante y ácido mayor que Colgate Plax.
Ambos enjuagues bucales son parecidos en la intensidad de los sabores
residuales alcohol y salado. (Ver Tabla 28 y Gráfico 8)
Tabla 28. Intensidad de sabores residuales de enjuagues bucales

Dulce Menta Mentol Alcohol Ácido Salado Irritante Amargo Refrescante Ishpingo
Colgate 4.68 5.80 5.21 2.91 2.07 1.53 3.15 2.63 7.02 1.96
Plax
Colutorio 3.50 4.28 4.62 3.56 3.79 1.96 5.73 5.25 5.59 4.40
Gráfico 8. Perfil del Sabor residual de Enjuagues Bucales
DULCE
8.00
ISHPINGO MENTA
6.00
4.00
REFRESCANTE 2.00 MENTOL
COLGATE PLAX
0.00
COLUTORIO
AMARGO ALCOHOL
IRRITANTE ACIDO
SALADO

8. CONCLUSIONES
• Se confirma la actividad antimicrobiana del aceite esencial de la hoja de

ishpingo, coincidiendo con la investigación realizada por Noriega y
Dacarro (2008).
• Los aceites esenciales provenientes de Transcutukú (A2 y A3) presentan
un perfil cromatográfico diferente al del aceite esencial de la hoja de
ishpingo; el componente que se encuentra en mayor proporción es el
eucaliptol.
• El aceite esencial de la hoja de ishpingo utilizado para la elaboración del
colutorio (A4) presenta una CMB para S. mutans de 0.26% y una CMB
para S. pyogenes menor a 0.097%.
• El aceite esencial de clavo de olor utilizado para la elaboración del
colutorio (A5) presenta una CMB para S. mutans de 0.26% y una CMB
para S. pyogenes de 1.56%.
• El aceite esencial A1 presenta una CMB superior a la del aceite esencial
A4 por tal motivo es descartado como principio activo en la elaboración
del colutorio.
• El colutorio elaborado presenta características organolépticas y físico-
químicas similares a las de los enjuagues bucales comerciales.
• Tanto Streptococcus mutans como Streptococcus pyogenes mostraron
susceptibilidad frente al colutorio elaborado con aceite esencial de la hoja
de ishpingo y clavo de olor.
• El colutorio elaborado es más eficaz que Listerine y Oraldine en el
control del crecimiento de S. mutans y S. pyogenes.
• El enjuague bucal Encident es más eficiente que el colutorio elaborado en
el control del crecimiento de S. mutans y S. pyogenes.
• El enjuague bucal Colgate Plax es más eficiente que el colutorio
elaborado en el control del crecimiento de S. pyogenes pero es menos
eficiente en el control de S. mutans.
• El polietileno no es un material de acondicionamiento adecuado para el
colutorio puesto que, a pesar de mantenerse en buen estado a 40ºC y 5ºC,
sufre severas modificaciones frente a la radiación UV lo que modifica las
propiedades organolépticas del colutorio elaborado.

• El estudio de estabilidad acelerada demuestra que el contenido del

principio activo principal (aceite esencial de la hoja de ishpingo) en la
fórmula varía en el tiempo. A 40ºC y 5ºC se mantiene dentro del rango
considerado aceptable (±10%), mientras que en radiación luminosa (UV)
se encuentra fuera de este rango.
• El aumento en el contenido de aceite esencial de la hoja de ishpingo en el
colutorio durante el estudio de estabilidad a 40ºC, puede deberse a que el
colutorio sufrió una evaporación del agua. Esto a su vez provoca la
disminución del volumen y el aumento de la concentración de aceite
esencial.
• Los ligeros cambios de la densidad del colutorio que se presentan durante
el estudio de estabilidad acelerada, pueden deberse a la imprecisión del
método por: errores del operador, del instrumento de medición, de la
balanza y otros.
• El colutorio elaborado presenta un perfil de aroma muy parecido al de
Colgate Plax.
• En el perfil del sabor se evidencia la diferencia del sabor de ishpingo que
presenta el colutorio elaborado frente a Colgate Plax.
• El colutorio elaborado presenta un perfil de sabor residual un poco
diferente a Colgate Plax ya que es más irritante y menos refrescante.
• En general, los resultados del perfil organoléptico demuestra que el
colutorio elaborado no es un producto igual a Colgate Plax pero,
evaluando cuantitativamente sus características sensoriales, las
diferencias no son significativas.
9. RECOMENDACIONES
• Investigar la especie de la cual Chankuap está extrayendo los aceites

esenciales provenientes de Trasnscutukú (A2 yA3), puesto que su
composición química es totalmente diferente a la de los aceites
provenientes del Valle del Upano (A1 y A4).
• Realizar un estudio de estabilidad acelerada y a largo plazo utilizando otro
material de acondicionamiento distinto al polietileno.

• Realizar un estudio in-vitro de la eficacia del colutorio frente a otros

microorganismos presentes en la placa bacteriana.
• Realizar un estudio in-vivo de la eficacia del colutorio para comprobar si
el comportamiento es el mismo que in-vitro.
• A la hora de fabricar un producto a gran escala a base de aceites
esenciales, es importante tomar en cuenta la variabilidad que se puede
tener en cuanto a la Concentración Mínima Bactericida de cada lote.

10. FOTOGRAFÍAS
Fotografía 1. Pellet luego de centrifugar

Fuente: La autora
Fotografía 2. Cajas petri incubándose para determinar la CMB de los aceites

esenciales
Fuente: La autora

Fotografía 3. Enjuagues bucales comerciales usados como muestras

Fuente: La autora
Fotografía 4. Evaluadores mientras califican los enjuagues bucales

Fuente: La autora

Fotografía 5. Colutorio elaborado envasado en el material de acondicionamiento

Fuente: La Autora
Fotografía 6. Panel sensorial en entrenamiento

Fuente: La Autora

Fotografía 7. Halos de inhibición (mm) que mostraron los colutorios elaborados y los
enjuagues bucales comerciales en el estudio de actividad antibacteriana frente a S.
mutans por el método de difusión en medio sólido
Fuente: La autora
Fotografía 8. Halos de inhibición (mm) que mostraron los colutorios elaborados y los
enjuagues bucales comerciales en el estudio de actividad antibacteriana frente a S.
mutans por el método de difusión en medio sólido
Fuente: La autora

11. ANEXOS
Anexo 1. Tinción Gram
Según Gamazo y otros, la técnica se realiza de la siguiente manera:
1. Preparar un frotis bacteriano recordando que en las extensiones demasiado

densas de células, los colorantes no llegan a teñir la muestra
homogéneamente.
2. Teñir con cristal violeta (1 minuto).
3. Lavar con abundante agua el exceso de colorante. En este paso y en el resto
de pasos de lavado o coloración es esencial no arrastrar parte de la
preparación en el proceso. Para evitar que ocurra esto, incline el portaobjetos
y aplique el agua o disolvente en su parte superior de manera que el líquido
resbale lentamente sobre el frotis.
4. Cubrir con lugol (1 minuto).
5. Lavar con agua el exceso de lugol.
6. Lavar la preparación con etanol-acetona hasta que observe que no puede
arrastrar más colorante de la muestra (10-20 segundos).
7. Lavar con agua para eliminar los restos de disolvente.
8. Teñir con safranina (1 minuto).
9. Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste (safranina).
10. Secar la preparación entre dos papeles de filtro con cuidado de no frotar, o
bien, secar al calor de la llama.
11. Examinar al microscopio con el objetivo de inmersión. Las bacterias
Grampositivas quedan teñidas de violeta, mientras que las gramnegativas
aparecen de color rojo.

Anexo 2. Prueba de la catalasa
Cuando se ponen en contacto una bacteria con actividad catalasa con peróxido de
hidrógeno al 3% se producen burbujas de oxígeno. Esta prueba se puede emplear
para diferenciar el género Staphylococcus (catalasa positiva) del género
Streptococcus (catalasa negativa).

Anexo 3. Instrucciones de procedimiento para la evaluación sensorial
INSTRUCCIONES
Durante esta evaluación, usted va a probar cuatro diferentes enjuagues bucales

siguiendo las siguientes instrucciones:
1. Coloque en su boca todo el contenido de enjuague que se encuentra en el

vaso.
2. Realice buchadas (retener y mover el enjuague en la boca) durante diez
segundos.
3. Al término de los diez segundos, deseche el enjuague en el vaso de su
izquierda.
4. Evalúe el enjuague en la hoja adjunta en la siguientes etapas:
• PRIMER IMPACTO: primer contacto del enjuague en la boca.
• DURANTE: mientras realiza las buchadas.
• FINAL DE LA EVALUACIÓN: después de desechar el enjuague.
5. Tome un sorbo de agua (vaso de la derecha).
6. Deguste una galleta soda.
7. Repita el procedimiento para las siguientes muestras.
Evalúe cada uno de los productos usando la siguiente ESCALA DE 7 PUNTOS.
1= me disgusta mucho
2= me disgusta moderadamente
3= me disgusta ligeramente
4= ni me gusta ni me disgusta
5= me gusta ligeramente
6= me gusta moderadamente
7= me gusta mucho

Anexo 4. Evaluación Sensorial Enjuagues Bucales

EDAD AÑOS SEXO MASCULINO
FEMENINO
PRUEBE LAS MUESTRAS DE IZQUIERDA A DERECHA
DESPEGUE LA ETIQUETA ADHESIVA Y PEGUE EN EL DESPEGUE LA ETIQUETA ADHESIVA Y PEGUE EN EL DESPEGUE LA ETIQUETA ADHESIVA Y PEGUE EN EL DESPEGUE LA ETIQUETA ADHESIVA Y PEGUE EN EL
SIGUIENTE CUADRO SIGUIENTE CUADRO SIGUIENTE CUADRO SIGUIENTE CUADRO
SIGA LAS INSTRUCCIONES DE EVALUACIÓN Y CALIFIQUE SIGA LAS INSTRUCCIONES DE EVALUACIÓN Y CALIFIQUE SIGA LAS INSTRUCCIONES DE EVALUACIÓN Y CALIFIQUE SIGA LAS INSTRUCCIONES DE EVALUACIÓN Y CALIFIQUE
PRIMER IMPACTO PRIMER IMPACTO PRIMER IMPACTO PRIMER IMPACTO
SABOR SABOR SABOR SABOR
SENSACIÓN DE IRRITACIÓN SENSACIÓN DE IRRITACIÓN SENSACIÓN DE IRRITACIÓN SENSACIÓN DE IRRITACIÓN
SENSACIÓN DE FRESCURA SENSACIÓN DE FRESCURA SENSACIÓN DE FRESCURA SENSACIÓN DE FRESCURA
DURANTE DURANTE DURANTE DURANTE

FINAL DE LA EVALUACION FINAL DE LA EVALUACION FINAL DE LA EVALUACION FINAL DE LA EVALUACION

DE MANERA GENERAL CALIFIQUE EN PRODUCTO CON DE MANERA GENERAL CALIFIQUE EN PRODUCTO CON DE MANERA GENERAL CALIFIQUE EN PRODUCTO CON DE MANERA GENERAL CALIFIQUE EN PRODUCTO CON
LA MISMA ESCALA INDICADA LA MISMA ESCALA INDICADA LA MISMA ESCALA INDICADA LA MISMA ESCALA INDICADA
ESCRIBA CUALQUIER COMENTARIO ADICIONAL ESCRIBA CUALQUIER COMENTARIO ADICIONAL ESCRIBA CUALQUIER COMENTARIO ADICIONAL ESCRIBA CUALQUIER COMENTARIO ADICIONAL
……………………………………………. ……………………………………………. ……………………………………………. …………………………………………….

Anexo 5. Orden de presentación de muestras de enjuagues bucales para

Evaluación Sensorial
LISTERINE A ORALDINE C
ENCIDENT B COLGATE PLAX D
CONSUMIDOR ORDEN NUMERO

MUESTRA
A 629
B 630
1
C 523
D 164
D 152
A 386
2
B 432
C 132
C 980
D 101
3
A 581
B 772
B 137
C 646
4
D 475
A 146
A 548
B 386
5
C 920
D 715
D 783
A 497
5
B 680
C 923
C 899
D 545
7
A 366
B 308
B 554
C 999
8
D 786
A 920
A 303
B 988
9
C 268
D 371

D 347
A 951
10
B 595
C 465
C 202
D 725
11
A 380
B 665
B 899
C 619
12
D 409
A 772
A 620
B 664
13
C 174
D 876
D 911
A 929
14
B 821
C 615
C 486
D 947
15
A 263
B 213
B 703
C 888
16
D 381
A 929
A 335
B 325
17
C 530
D 789
D 146
A 155
18
B 560
C 174
C 963
D 512
19
A 596
B 808
B 826
C 749
20
D 181
A 721
A 609
B 364
21
C 361
D 672

D 266
A 236
22
B 226
C 288
C 520
D 283
23
A 196
B 641
B 837
C 350
24
D 226
A 288
A 506
B 984
25
C 315
D 719
D 643
A 101
26
B 195
C 934
C 867
D 188
27
A 310
B 398
B 272
C 202
28
D 942
A 768
A 928
B 787
29
C 458
D 902
D 308
A 645
30
B 672
C 621
C 207
D 182
31
A 506
B 402
B 962
C 218
32
D 125
A 597
A 907
B 499
33
C 986
D 187

D 407
A 489
34
B 801
C 278
C 906
D 617
35
A 125
B 872
B 437
C 387
36
D 210
A 648
A 257
B 810
37
C 568
D 512
D 544
A 685
38
B 210
C 119
C 518
D 549
39
A 961
B 599
B 475
C 367
40
D 321
A 616
A 565
B 638
41
C 216
D 395
D 115
A 732
42
B 428
C 458
C 973
D 176
43
A 338
B 757
B 845
C 834
44
D 603
A 137
A 244
B 337
45
C 562
D 500

D 846
A 125
46
B 194
C 111
C 235
D 384
47
A 610
B 850
B 860
C 445
48
D 658
A 123
A 493
B 426
49
C 249
D 738
D 786
A 968
50
B 906
C 213
C 672
D 911
51
A 700
B 697
B 711
C 591
52
D 826
A 416
A 429
B 200
53
C 475
D 496
D 115
A 583
54
B 851
C 612
C 931
D 181
55
A 688
B 292
B 147
C 725
56
D 536
A 193
A 573
B 196
57
C 872
D 844

D 774
A 781
58
B 124
C 771
C 671
D 361
59
A 184
B 319
B 662
C 544
60
D 793
A 605
A 918
B 415
61
C 160
D 766
D 785
A 322
62
B 372
C 640
C 264
D 716
63
A 741
B 521
B 509
C 202
64
D 135
A 860
A 681
B 225
65
C 201
D 462
D 714
A 456
66
B 387
C 125
C 841
D 206
67
A 865
B 299
B 337
C 605
68
D 280
A 577
A 134
B 418
69
C 924
D 886

D 867
A 976
70
B 430
C 314
C 607
D 836
71
A 271
B 516
B 250
C 353
72
D 698
A 951
A 757
B 613
73
C 169
D 557
D 544
A 583
74
B 925
C 639
C 139
D 593
75
A 149
B 455
B 995
C 434
76
D 320
A 101
A 709
B 621
77
C 134
D 618
D 504
A 236
78
B 768
C 364
C 942
D 712
79
A 214
B 311
B 426
C 449
80
D 260
A 613

Anexo 6. Jueces entrenados para la Prueba del Perfil del Sabor
Nº Nombre Sexo Edad Estado civil

(años)
1 Sandra Elizabeth Ayala Valarezo Mujer 20 Soltera
2 Cinthia Karina España Imbaquinga Mujer 19 Soltera
3 Jaqueline Isabel Fuertes Rentería Mujer 19 Soltera
4 Tatiana Alexandra Vásquez Villarreal Mujer 22 Soltera
5 Angélica Maribel Cárdenas Rubio Mujer 25 Soltera
6 Sofía Alexandra Peñaherrera Toledo Mujer 21 Soltera
7 Lizeth Geovanna Chela Chugchilán Mujer 21 Soltera
8 William Vinicio Haro Tipantiza Hombre 23 Soltero
9 Diego Javier Caicedo De la Cruz Hombre 21 Soltero
10 Pablo Alexis Reyes Donoso Hombre 21 Soltero
11 Gabriel Alexander Arcos Pérez Hombre 20 Soltero
12 Christian Andrés Torres Padilla Hombre 21 Soltero
Fuente: La autora, con base en fichas de datos de jueces

Anexo 7. Orden de presentación de muestras para el Perfilamiento del

Colutorio
A = Colgate Plax
B = Colutorio
Panelista Sesión Orden de Código de

presentación muestra
Gabriel Arcos 1 B 605
A 543
Tatiana Vásquez 1 A 604
B 271
Pablo Reyes 1 B 855
A 382
Christian Torres 1 B 278
A 916
Diego Caicedo 1 A 355
B 617
Sofía Peñaherrera 1 A 399
B 493
Jaqueline Fuertes 1 A 591
B 132
Karina España 1 B 654
A 547
Angélica Cárdenas 1 A 206
B 538
Lizeth Chela 1 B 825
A 732
Sandra Ayala 1 A 133
B 324
William Haro 1 A 211
B 311
Gabriel Arcos 2 A 207
B 628
Tatiana Vásquez 2 B 625
A 916
Pablo Reyes 2 A 476
B 563
Christian Torres 2 A 417
B 232
Diego Caicedo 2 B 735
A 149
Sofía Peñaherrera 2 B 800
A 999
Jaqueline Fuertes 2 B 623
A 322

Karina España 2 A 514

B 571
Angélica Cárdenas 2 B 415
A 431
Lizeth Chela 2 A 211
B 345
Sandra Ayala 2 B 781
A 435
William Haro 2 B 231
A 978
Fuente: La autora

Anexo 8. Estudio de Perfilamiento de Enjuagues Bucales
Nombre:_______________________________ Muestra: _____________________
Calificar cada atributo usando una escala de 1 al 10, por favor utilizar decimales.
AROMA: Coloque el vaso cerca de la nariz y aromatice tomando respiraciones

cortas con la boca cerrada.
1. Menta: ________
2. Mentol: _______
3. Clavo de olor: ________
4. Eucalipto: _______
5. Canela: _______
6. Alcohol: _______
7. Picante: _______
8. Ishpingo: _______
SABOR: Tomar un pequeño sorbo del producto y mantenerlo en la boca por un

espacio de 10 segundos, calificar los siguientes sabores además, calificar la espuma
que genera en la boca. (1 cuando se hace buchadas con agua 1 10 al colocar una
cuchara sopera de espumilla en la boca)
9. Espuma: ________
Sabores:
10. Dulce: _______

11. Menta: ______
12. Mentol: _______
13. Alcohol: ______
14. Ácido: _______
15. Salado: _______
16. Irritante o ardor: ________
17. Amargo: ______
18. Refrescante o cooling: _______
19. Ishpingo: _______
SABOR RESIDUAL: Sabores y aromas que persisten después de probar la muestra.
20. Dulce: ________

21. Menta: _______
22. Mentol: _______
23. Alcohol: _______
24. Ácido: ________
25. Salado: ________
26. Irritante o ardor: ________
27. Amargo: ________
28. Refrescante o cooling: ________
29. Ishpingo: _______

Anexo 9. Ficha técnica Aceite Esencial de Ishpingo
Ficha técnica
Aceite Esencial de Canela
(ishpink)
Ocotea quixos
Planta de canela nativa de Ecuador
PRODUCTO:
El aceite esencial de canela (ishpink), es un producto obtenido de las hojas de la
planta Ocotea quixos por medio de una destilación por arrastre de vapor. Se trata de
un aceite esencial totalmente natural sin aditivos químicos.
PRODUCIDO POR:
Fundación Chankuap - Departamento de destilación de aceites esenciales
VIDA ÚTIL:
24 meses a partir de la fecha de producción. Almacenarlo en un sitio fresco y seco en
un frasco de color oscuro.
Al final del periodo de caducidad es aconsejable reanalizar el lote, si eso cumple con
los parámetros de calidad se puede seguir utilizando el producto.
DESCRIPCION DE LA PLANTA:
El ishpink es una planta arbórea perenne dicotiledónea que pertenece a la familia de
las Lauraceae, genero Ocotea, especie quixos.
PARTE USADA DE LA PLANTA:

Hojas.
PROCESO DE PRODUCCIÓN:
El producto es extraído por destilación con agua y vapor de agua. El equipo es de
acero inoxidable. Después de la destilación el aceite esencial es separado del agua
fácilmente, como el aceite esencial flota sobre el agua debida a su densidad menor.
Para eliminar el resto del agua se trata el aceite esencial con sulfato de sodio anhidro
hasta que toda el agua es absorbida.No se añade ningún aditivo químico.
ESTÁNDARES DE EMPAQUE:
Frasco de vidrio de color oscuro de 10 ml.
Peso del Aceite Esencial (10 ml) = 9.6 g +/- 0.3 g
Tamaño del frasco de 10ml = 59 x 24 mm
Peso del frasco = 26.2 g
Peso total bruto por frasco

35.8 g +/- 0.3 g
Características organolépticas
Apariencia: Liquido aceitoso transparente de color amarillo claro
Olor: nota típica de canela

Estándares físico- químicos

Densidad: 0,9609 g/ml
Índice de Refracción: 1,5265
Índice de acidez: 0,57
Solubilidad en alcohol: totalmente soluble en alcohol al 96º
Residuo sólido: 64,06%
Actividad biológica:
El aceite esencial de ishpink tiene una marcada actividad antifúngica sobretodo en
respecto al hongo patógeno humano Candida albicans.

Anexo 100. Calificaciones de Liisterine al Primer

P pacto134
Imp
Primer Im
mpacto
Me disgusta
Sabo
or mucho
LISTERIINE Me disgusta
moderadameente
4% 3%
% Me disgusta
ligeramente
5% 10% Ni me gusta
48%
4
ni me disgustta
16% Me gusta
ligeramente
14% Me gusta
moderadameente
Me gusta
mucho
Me disgusta
Primer Impacto mucho
Irritación Me disgusta
LISTERIINE moderadameente
1% 4% Me disgusta
ligeramente
9%
%
12% 42% Ni me gusta
ni me disgusta
13% Me gusta
ligeramente
19% Me gusta
moderadameente
Me gusta
mucho
Prim
mer Impactoo Me disgustaa
mucho
F
Frescura Me disgustaa
LIISTERINE moderadam mente
Me disgustaa
ligeramentee
9% 8%
% 23% Ni me gustaa
ni me disgussta
14%
%
Me gusta
17% ligeramentee
1
12%
Me gusta
17%
moderadam mente
Me gusta
mucho

134
Fuente: La
L autora, conn base en evaluuación sensoriial hedónica

Anexo 11. Calificcaciones dee Listerine durante

d la realización das135
n de buchad
Durante Me disgussta
mucho
Sabor
Me disgussta
LISTER
RINE moderadaamente
0
0% Me disgussta
6% ligeramennte
3%
6%
% Ni me gussta
4
46% ni me disggusta
18%
%
Me gusta
ligeramennte
21% Me gusta
moderadaamente
Me gusta
mucho
Durannte Me disgusta
Irritaciión mucho
Me disgusta
LISTERIINE
moderadamente
5% %
3% Me disgusta
8%
%
ligeramennte
5%
Ni me gussta
44
4%
ni me disggusta
14% Me gustaa
ligeramennte
Me gustaa
21%
moderadamente
Me gustaa
mucho
Durante Me disgustta
Fresccura mucho
Me disgustta
LISTERRINE moderadamente
Me disgustta
12% 6% 26% ligeramentte
Ni me gustta
18% ni me disgu
usta
12
2% Me gusta
ligeramentte
9
9% 17% Me gusta
moderadamente
Me gusta
mucho

135
Fuente: La

A
Anexo 12. Calificacion
C es de Listerrine al Finaal de la Evaaluación1366
Finaal Me disgussta
Sabor mucho
Me disgussta
LISTERRINE
1% moderadaamente
%
2% Me disgussta
ligeramennte
13% Ni me gussta
8%
% 39%
%
ni me disggusta
Me gusta
18%
% ligeramennte
Me gusta
19% moderadaamente
Me gusta
mucho
Finaal Me disgusta
Irritacción mucho
LISTERRINE Me disgusta
moderadamente
5% 4% Me disgusta
ligeramennte
13% 36% Ni me gussta
ni me disggusta
9% Me gustaa
ligeramennte
22% 11% Me gustaa
moderadamente
Me gustaa
mucho
Finaal Me disgussta
mucho
Fresccura Me disgussta
LISTERRINE moderadaamente
Me disgussta
ligeramennte
16% 22% Ni me gussta
10
0% ni me disggusta
9% Me gusta
8%
ligeramennte
14% 21% Me gusta
moderadaamente
Me gusta
mucho

136
Fuente: La

Anexo 133. Calificaciones de En

ncident al Primer
P pacto137
Imp
Primer Impaacto
P
Me disgussta
Sabor mucho
NT
ENCIDEN Me disgussta
3% 6% moderadaamente
Me disgussta
20% ligeramennte
13%
% Ni me gussta
15% 13% ni me disggusta
Me gusta
ligeramennte
3
30% Me gusta
moderadaamente
Me gusta
mucho
Primer Immpacto Me disgusta
Irritacción mucho
ENCIDDENT Me disgusta
moderadamente
Me disgusta
ligeramennte
8% 5% 13%
1
18% Ni me gussta
9% ni me disggusta
Me gusta
ligeramennte
2
23% %
24% Me gusta
moderadamente
Me gusta
mucho
Primer Immpacto Me disguusta
Fresccura mucho
ENCIDDENT Me disguusta
moderad damente
2% Me disguusta
ligerameente
17% 8% Ni me guusta
%
9%
ni me dissgusta
21% 18% Me gustaa
ligerameente
Me gustaa
25%
moderad damente
Me gustaa
mucho

137
Fuente: La

Anexo 14. Calificaciones de Encident durante

d la realización
r das138
n de buchad
Durante Me disggusta
Sabo
or mucho
ENCID
DENT Me disggusta
moderaadamente
5% 4% Me disggusta
ligeram
mente
15% Ni me ggusta
13%
ni me d
disgusta
27% 16% Me gussta
ligeram
mente
Me gussta
20%
moderaadamente
Me gussta
mucho
Durante
Me ddisgusta
Irritacción much ho
ENCIDDENT Me ddisgusta
4% 4% moderadamente
Me ddisgusta
12% 6% ligeraamente
25%
% Ni me gusta
ni mee disgusta
Me ggusta
26% ligeraamente
23
3% Me ggusta
moderadamente
Me ggusta
much ho
Durante Me ddisgusta
Fresccura much ho
Me ddisgusta
ENCIDDENT
moderadamente
1% 3% Me ddisgusta
ligeraamente
15% 12% Ni me gusta
ni mee disgusta
21% Me ggusta
26%
ligeraamente
Me ggusta
22%
moderadamente
Me ggusta
much ho

138
Fuente: La

A
C dent al Finaal de la Evaaluación1399
es de Encid
Final Me disgusta
Sabor mucho
Me disgusta
ENCID
DENT moderad damente
5% 4% Me disgusta
ligerameente
17% Ni me guusta
15%
% ni me disgusta
22% Me gustta
13%
ligerameente
Me gustta
2
24% moderad damente
Me gustta
mucho
Finaal Me disguusta
Irritacción mucho
Me disguusta
ENCIDDENT moderad damente
4% 3% 5% Me disguusta
ligerameente
12% Ni me guusta
29% ni me dissgusta
Me gustaa
23% ligerameente
Me gustaa
24%
moderad damente
Me gustaa
mucho
Final Me disgusta
Fresccura mucho
ENCIDDENT Me disgusta
moderadamente
4% 3% Me disgusta
7%
%
ligerameente
19% Ni me guusta
10
0%
ni me disgusta
Me gustta
27%
% ligerameente
30% Me gustta
moderadamente
Me gustta
mucho

139
Fuente: La

Anexo 166. Calificaciones de Orraldine al Primer

P pacto140
Imp
Primer Im
mpacto Me disguusta
Sabor mucho
ORALDDINE Me disguusta
moderad damente
4%
% Me disguusta
14% ligerameente
10%
11
1% Ni me guusta
25% ni me dissgusta
Me gusta
18%
% ligerameente
18% Me gusta
moderad damente
Me gusta
mucho
Irritación mucho
ORALD DINE Me disgusta
moderadamente
4% Me disgusta
8% ligerameente
9% 13% Ni me guusta
20%
% ni me disgusta
Me gustta
23% ligerameente
23% Me gustta
moderadamente
Me gustta
mucho
Primer Im
mpacto Me disggusta
Fresccura mucho
Me disggusta
ORALD DINE
moderaadamente
5% Me disggusta
ligeramente
10% 12% Ni me ggusta
11%
% ni me disgusta
23%
% Me gustta
18% ligeramente
Me gustta
21
1% moderaadamente
Me gustta
mucho

140
Fuente: La

Anexo 17. Calificaciones de Oraldine durante

d la realización
r das141
n de buchad
Durante Me disgussta
Sabor mucho
ORALDDINE Me disgussta
moderadaamente
6% 5% Me disgussta
ligeramennte
20% Ni me gussta
21%
% ni me disggusta
21% Me gusta
ligeramennte
14% Me gusta
13%
moderadaamente
Me gusta
mucho
Durante Me disgusta
Irritacción mucho
ORALD DINE Me disgusta
moderad damente
% 5%
3% Me disgusta
10
0% ligerameente
15% Ni me guusta
ni me disgusta
18%
% 22% Me gustta
ligerameente
Me gustta
27
7%
moderad damente
Me gustta
mucho
Fresccura mucho
ORALD DINE Me disggusta
moderaadamente
Me disggusta
5%
% 11% ligeram
mente
14% ni me disgusta
Me gustta
23% ligeram
mente
23% Me gustta
moderaadamente
Me gustta
mucho

141
Fuente: La

A
C dine al Finaal de la Evaaluación142
es de Orald
Finaal Me disggusta
Sabor mucho
ORALDDINE Me disggusta
moderadamente
6% Me disggusta
%
5% ligerameente
24% Ni me gusta
2%
12
ni me diisgusta
15% Me gustta
21% ligerameente
Me gustta
17%
moderadamente
Me gustta
mucho
Finaal Me ddisgusta
Irritacción much ho
ORALD DINE Me ddisgusta
moderadamente
3%
% Me ddisgusta
ligeraamente
10% 7% Ni me gusta
14%
22%
% ni mee disgusta
21% Me ggusta
ligeraamente
23% Me ggusta
moderadamente
Me ggusta
much ho
Finaal Me disggusta
Fresccura mucho
Me disggusta
ORALD DINE
moderaadamente
%
1% Me disggusta
ligeram
mente
13%
%
ni me d
disgusta
23% Me gusta
22% mente
ligeram
Me gusta
14%
%
moderaadamente
Me gusta
mucho

142
Fuente: La

A
Anexo 19. Calificacio
C nes de Colg
gate Plax al mpacto143
a Primer Im
Primer Im
mpacto Me disgusta
Sabor mucho
COLGATEE PLAX Me disgusta
moderadamente
0%
% Me disgusta
%
6%
ligerameente
20% 6% Ni me guusta
12
2% ni me disgusta
Me gustta
27%
% ligerameente
29%
% Me gustta
moderadamente
Me gustta
mucho
Irritacción mucho
COLGATEE PLAX Me disgusta
moderadamente
3% 4% Me disgusta
ligerameente
10%
16% Ni me guusta
23%
% ni me disgusta
Me gustta
19% ligerameente
25% Me gustta
moderadamente
Me gustta
mucho
Primer Im
mpacto Me disggusta
Fresccura mucho
COLGATTE PLAX Me disggusta
moderaadamente
1% 5% Me disggusta
ligeram
mente
17% 8% Ni me ggusta
17% ni me d
disgusta
Me gussta
31% ligeram
mente
21% Me gussta
moderaadamente
Me gussta
mucho

143
Fuente: La

Anexo 200. Calificacciones de Colgate

C Plax hadas144
x durante la realizacióón de buch
Durante
e Me dissgusta
Sabor mucho o
Me dissgusta
COLGATE P
PLAX
moderradamente
0% 1% Me dissgusta
ligeram
mente
21% 12% Ni me gusta
10%
% disgusta
ni me d
Me gussta
2
29% ligeram
mente
27% Me gussta
moderradamente
Me gussta
mucho o
Irritacción mucho
moderaadamente
1% 4% Me disggusta
ligeram
mente
8% 11% Ni me ggusta
28%
% ni me d
disgusta
22% Me gusta
mente
ligeram
Me gusta
26%
%
moderaadamente
Me gusta
mucho
Fresccura mucho
moderaadamente
3% 4% Me disggusta
%
7%
ligeram
mente
19% Ni me ggusta
13%
ni me d
disgusta
Me gussta
27% ligeram
mente
27%
% Me gussta
moderaadamente
Me gussta
mucho

144
Fuente: La

Evaluación145
Aneexo 21. Callificaciones de Colgatee Plax al Fiinal de la E 1
Finaal Me ddisgusta
Sabor mucho
Me ddisgusta
COLGATEE PLAX moderadamente
1% 5% Me ddisgusta
6%
% ligeramente
22% Ni m
me gusta
13
3% ni me disgusta
Me ggusta
22%
% ligeramente
31% Me ggusta
moderadamente
Me ggusta
mucho
Final Me d disgusta

Irritacción mucho
Me d disgusta
COLGATEE PLAX mod deradamente
3% 3% Me d disgusta
ligerramente
9% 13% Ni m
me gusta
ni me disgusta
30%
%
Me ggusta
23%
ligerramente
Me ggusta
19%
%
mod deradamente
Me ggusta
mucho
Finaal Me ddisgusta
Fresccura mucho
Me ddisgusta
COLGATEE PLAX
moderadamente
1% 4% Me ddisgusta
%
7%
ligeramente
24% Ni m
me gusta
15% ni me disgusta
Me ggusta
22%
% ligeramente
27%
% Me ggusta
moderadamente
Me ggusta
mucho

145
Fuente: La
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CARRERA: BIOTECNOLOGÍA DE LOS RECURSOS NATURALES

Tesis previa a la obtención del título de:

Ingeniero en Biotecnología de los Recursos Naturales

Eficacia in-vitro de un colutorio elaborado con aceite esencial de

Teresa Melania Veloz Vera

Ing. Tatiana Mosquera

Quito, Febrero 2011

Los conceptos desarrollados, análisis realizados y las conclusiones del presente

Quito, febrero de 2011

A mis padres Luis y Narcisa

A mis hermanos Luis Alejandro y Lorena

Gracias por su amor incondicional y por confiar en mí.

• A Dios por el maravilloso don de la vida, por estar conmigo en todo

• A mis amigos/as, por ser testigos y cómplices de las alegrías y tristezas, de

Mil gracias a todos/as

La presente investigación pretende demostrar de una manera clara y sencilla la

Esta investigación se realizó con el objeto de determinar la eficacia in vitro del

En una primera parte se abordan los aspectos teóricos más relevantes de la

1.1 LA PLACA DENTAL O PLACA BACTERIANA

Los seres humanos vivimos inmersos en un mundo de bacterias, se encuentran por

• Cuando crecen de forma anormalmente alta.

Por estas razones, nuestro cuerpo debe funcionar como un micro-ecosistema

1.1.2 La cavidad oral: hábitat de microorganismos

La boca está continuamente bañada por la saliva, manteniendo una temperatura de

En el momento del parto, la boca del neonato está exenta de microorganismos, es

Tabla 1. Flora normal de la cavidad bucal y su existencia

1.1.3 Placa dental: descripción general

Durante años han existido varias definiciones expresadas por diferentes

forman una biopelícula que se adhiere a la superficie dentaria o a otras superficies

En la actualidad, Marsh y Martin (2000), “definen a la placa dental como una

Siendo una comunidad pluricelular, la placa dental posee comportamientos similares

Es importante tener presente la diferencia entre el concepto de placa dental y otros

1.1.4 Formación de la placa dental

La placa dental, como se ha mencionado, está formada por un conjunto de

• Formación de la película adquirida sobre el esmalte

La primera fase en la formación de la placa dental es la formación de la cutícula

“La colonización bacteriana primaria ocurre mediante la adhesión irreversible y

“La colonización secundaria puede durar entre 1 y 14 días, a partir de este

Transcurridas dos semanas aproximadamente se forma la placa madura, en

Una característica importante de esta comunidad bacteriana que se establece en la

“Esto no significa que no haya actividad metabólica alguna entre las

De otro lado, las interacciones antagónicas entre los microorganismos son un

1.1.5 Clasificación de la placa dental

“La placa dental supragingival se encuentra en las superficies dentales y está

Tanto la placa supragingival y subgingival son importantes en la formación de sarro

1.1.6 Acumulación de la placa bacteriana: causas y consecuencias

La acumulación de la placa bacteriana se debe principalmente a técnicas incorrectas

• Gingivitis: Según la Academia Americana de Periodontología, se define

bacteriana alrededor del diente, en la encía, produciendo al inicio inflamación

1.1.7 Composición microbiológica de la placa

“La placa bacteriana está constituida en un 70% de su volumen por microorganismos

La identificación de los microorganismos de la placa se basa en el análisis de su

En la Tabla 2, se presentan los microorganismos más importantes presentes en la

Tabla 2. Microorganismos presentes en la placa supragingival madura

Gram (+) Streptococcus spp Actinomyces spp.

facultativos Eikenella spp.

Gram (–) aerobios Fusobacterium spp.