La electroforesis es una técnica que separa moléculas basándose en su carga y tamaño utilizando un campo eléctrico. El primer aparato sofisticado de electroforesis fue desarrollado por Tiselius en 1937, por lo que recibió el Premio Nobel en 1948. Existen dos tipos principales de electroforesis: horizontal que usa gel de agarosa para ácidos nucleicos, y vertical que usa gel de poliacrilamida tanto para proteínas como ADN. El proceso general consiste en aplicar las muestras al gel y someterlo
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La electroforesis es una técnica que separa moléculas basándose en su carga y tamaño utilizando un campo eléctrico. El primer aparato sofisticado de electroforesis fue desarrollado por Tiselius en 1937, por lo que recibió el Premio Nobel en 1948. Existen dos tipos principales de electroforesis: horizontal que usa gel de agarosa para ácidos nucleicos, y vertical que usa gel de poliacrilamida tanto para proteínas como ADN. El proceso general consiste en aplicar las muestras al gel y someterlo
La electroforesis es una técnica que separa moléculas basándose en su carga y tamaño utilizando un campo eléctrico. El primer aparato sofisticado de electroforesis fue desarrollado por Tiselius en 1937, por lo que recibió el Premio Nobel en 1948. Existen dos tipos principales de electroforesis: horizontal que usa gel de agarosa para ácidos nucleicos, y vertical que usa gel de poliacrilamida tanto para proteínas como ADN. El proceso general consiste en aplicar las muestras al gel y someterlo
La electroforesis es una técnica que separa moléculas basándose en su carga y tamaño utilizando un campo eléctrico. El primer aparato sofisticado de electroforesis fue desarrollado por Tiselius en 1937, por lo que recibió el Premio Nobel en 1948. Existen dos tipos principales de electroforesis: horizontal que usa gel de agarosa para ácidos nucleicos, y vertical que usa gel de poliacrilamida tanto para proteínas como ADN. El proceso general consiste en aplicar las muestras al gel y someterlo
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HISTORIA DE LA ELECTROFORESIS
PARA EMPEZAR, HABLAR DE ELECTROFESIS VAMOS A EMPEZAR CON UNA BREVE
INTRODUCCION DE LA HISTORIA: TENEMOS QUE EL PRIMER APARATO SOFISTICADO DE ELECTROFORESIS FUE DESARROLLADO POR TISELIUS EN 19937, Y GRACIAS A SU TRABAJO O A LA DEDICACION QUE LE TOMO LE DIERON UN RECONOCIMIENTO REFLEJADO EN UN PREMIO NOBEL EN 1948, EL FUE QUIEN DESARROLLO EL CONCEPTO DE FRENTE MOVIL, QUE DESPUES SE CONOCIO YA COMO ELECTROFORESIS, LA CUAL SE USA PARA SEPARAR MOLECULAS.
ELECTROFORESIS:
EN BIOLOGIA, EXISTEN MUCHAS TECNICAS QUE SE REALIZAN COMUNMENTE, QUE
REQUIEREN EL PROCESO DE ELECTROFORESIS COMO YA LO HABIAMOS ESCUCHADO ANTERIORMENTE EN LAS EXPOSICIONES DE NUESTROS COMPAÑEROS PARA ESTO SE NECESTA UNA PREBIA PREPARACION O EL ANALISIS, PARA QUE ME ENTIENDAN MEJOR VA HACER LA SEPARACION Y LA PREPARACION DE LOS ACIDOS NUCLEICOS Y LAS PROTEINAS, BUENO YO CREO QUE TODOS YA SABEMOS QUE LA MAYORIA DE LAS BIOMOLECULAS TIENEN CARGAS, YA SEAN POSITIVAS O NEGATIVAS ENTONCES POR ESTA RAZON ESTAS SE DESPLAZAN O MIGRAN MEJOR DICHO, CUANDO SE SOMETEN A UN CAMPO ELECTRICO Y SE DIRIGEN AL POLO DE CARGA DIFERENTE UO AL POLO OPUESTO O SEA SI TENEMOS UNA CARGA POSTIVA Y UNA NEGATIVA ESTAS SE ATRAEN. PERO DEBEMOS TENER EN CUENTA QUE LAS PROTEINAS PUEDEN TENER CARGA YA SEA POSITIVA O NEGATIVA Y QUE LOS ACIDOS NUCLEICOS O ADN SOLO POSSEN CARGA NEGATIVA POR QUE EN SU ESTRUCTURA TIENEN GRUPOS FOSFATOS. EN POCAS PALABRAS LA ELECTROFORESIS CONSISTE EN LA MIGRACION DE MOLECULAS MAS O MENOS PROPORCIONADAS POR SU TAMAÑO YA SEAN GRANDES O PEQUEÑAS A TRAVES DE UN GEL, SEGÚN SU PESO O TAMAÑO TODO ESTO SE DA GRACIAS A UN CAMPO ELECTRICO.
ELEMENTOS NECESARIOS PARA UNA ELECTROFORESIS
PARA LA REALIZACION DE LA ELECTROFORESIS ES NECESARIO QUE TENEMOS EN CUENTA ALGUNOS ELEMENTOS QUE SON IMPORTANTES PARA EL PROCEDIMIENTO, Y A CONTINUACION VAMOS HABLAR SOBRE CADA UNO DE ELLOS Y DARLES A CONOCER EN GENERAL SU FUNCION.
CAMARA DE ELECTROFESIS:
ESTA NOS PERMITE QUE GENERE UN CAMPO ELECTRICO ALREDEDOR DE UN GEL QUE ES DONDE SE DEPOSITAN LAS MUESTRAS YA SEAN DE ADN O DE PROTEINAS, TAMBIEN AQUÍ O EN ESTE CAMPO SE GENERA DENTRO DE UNA SOLUCION AMORTIGUADORA O BUFFER EN LA QUE SE ENCUENTRA COMO POR DECIRLO ASI SUMERGIDO EL GEL. ESTA CAMARA CUENTA CON DOS POLOS, QUE SE CONECTAN A UNA FUENTE DE ENERGIA, AQUÍ EN LA DIAPOSITIVA PODEMOS VER LA IMAGEN DE LA IZQUIERDA, QUE ES UNA CAMARA PARA HACER UNA ELECTROFORESIS VERTICAL, DONDE EL POLO POSITIVO SE ENCUENTRA EN LA PARTE INFERIOR DE LA CAMARA Y EN LAS HORIZONTALES que es la cámara de la parte derecha EN el extremo DERECHo . valga la redundancia GEL
ESTE GEL COMO YA NOS LO HABIA COMENTADO LA PROFE ES COMO UN TIPO GELATINA SIN SABOR QUE FORMA COMO UNA ESPECIE DE MALLA QUE ESTA VA A PERMITIR QUE LAS MOLECULAS ATRAVIESEN O AVANCEN SEGÚN EL PESO DE ELLAS. ENTONCES LOS GELES PUEDEN SER DE DOS TIPOS: DE AGAROSA O POLIACRILAMIDA ENTONCES TENGAMOS EN CUENTA QUE PARA EL GEL DE AGAROSA O ACRILAMIDA SE USAN PARA LA SEPARACION DE ACIDOS NUCLEICOS, Y PARA PROTEINAS SOLO SE USA EL GEL DE ACRILAMIDA. POR CONSIGUIENTE VAMOS HABLAR DEL GEL DE AGAROSA: ESTE GEL DE AGAROSA ES UN POLISACARIDO QUE PUEDE MANTENERSE EN UN ESTADO SOLIDO A CIERTA TEMPERATURA, ESTE GEL SE VA A DISUELVE A TEMPERATURA DE 50 A 60 GRADOS, PARA QUEDAR EN UN ESTADO LIQUIDO, Y CUANDO SE ENFRIA FORMA COMO UNA ESPECIE DEL GEL POROSO ANTES DE QUE EL GEL SE ENFRIE SE VACIA SOBRE UN MOLDE O UN POCILLO YQUE SE LO UBICA EN LA CAMARA Y EN UNO DE LOS EXTREMOS COLOCAMOS EL PEINE QUE NOS SIRVE PARA FORMAR LOS POCILLOS U ORIFICIOS DONDE VAMOS A PONER LAS MUESTRAS GEL DE ACRILAMIDA LA ELECTROFORESIS CON ESTE GEL SIEMPRE SE USA EN CAMARAS VERTICALES QUE ANTERIORMENTE YA LA HABIAMOS VISTO CIERTO …… ELECTROFORESIS HORIZONTAL
Como ya lo habíamos mencionado, en la electroforesis horizontal se usa un gel de agarosa para ácidos nucleicos, y el buffer lo que hace es cubrir el gel de tal manera que trata de evitar que se seque el gel ELECTROFORESIS VERTICAL
Para esta técnica solo y exclusivamente se usa el gel de poliacrilamida que también puede ser usado para proteínas y ADN Procedimiento general de una electroforesis
ELECTROFORESIS DE ADN Bueno compañeros la técnica de electroforesis para ADN consiste con el fin de toda electroforesis, separar macromoléculas en una solución aquí bueno entonces hablando del adn el cual ya sabemos que tiene una carga negativa, para la migración de los acidos nucleicos, esta dada por la forma y el tamaño de la molecula de adn o sea depende de su tamaño o como ya lo hemos visto en pares de bases Para que quede mas claro en si el proceso de la electroforesis se reliza la separación de las moléculas de adn de acuerdo a su peso molecular todo esto depende de la concentración de gel con la que trabajemos o hagamos este proceso
En esta imagen se presenta un gel de agarosa, en el cual podemos ver un marcador de peso molecular junto a las muestras ese marcador nos ayuda a saber cual es el peso molecular de los fragmentos o de las bandas de adn
Ahí en la imagen en la parte superior vemos una micropipeta con la que ponemos la muestra e los pocillos del gel y posteriormente estas corren o migran al polo negativo de la cámara
VISUALIZACION DE LAS MUETRAS
Para la visualización de muestras de adn se utiliza un colorante, que es el bromuro de etidio este tiene una función de intercalarse en las bases del adn y ARN Estas imágenes son fotografías de un gel de agarosa donde en la foto A fue visualizada por bromuro de etidio que cuando se expone A UNA LUZ ULTRAVIOLETA fluorece de color naranja y la B por syber green que es syber green es un colorante Y ES MUCHAS VECES MAS FLUORECENTE QUE EL BROMURO DE ETIDIO
ELECTROFORESIS DE PROTEINAS
La electroforesis de proteínas también es llamada electroforesis en poliacrilamida, en diapositivas
anteriores como ya lo habíamos mencionado que este proceso se lo hace en una cámara vertical de electroforesis entonces esta es una de las técnicas más ampliamente usada para identificar proteínas.
La SDS-PAGE es un tipo de electroforesis de proteinas que se usa mucho, se trata de una electroforesis desnaturalizante en donde las muetras se desnaturalizan por calor en presencia de sds que es un agente desnaturalizante de la proteina ( ruptura de puentes de hidrogeno)
Isoelectroenfoque El Isoelectroenfoque es un tipo de electroforesis que se emplea para separar
moléculas cargadas.
Electroforesis bidimensional
Este tipo de electroforesis básicamente se basa en separar proteínas de una mezcla según dos propiedades moleculares, en este procedimiento hay dos dimensiones la primera dimensión mediante isoelectroenfoque ( separacion de proteinas según su punto isoelectrico) y la segunda dimensión que es su peso molecular que es mediante la electroforesis de poliacrilamida.
Aplicación de electroforesis en el sars cov2
Despues de la amplificación o de la pcr del arn viral, después de todo ese proceso realizamos el método de electroforesis para detectar o considerar si la muestra es positiva Primeramente tomamos 8 micro litros de cada uno de los productos de la segunda reacción de amplificación asi como el marcador de peso molecular y mezclar dos microlitros de tampon o buffer de muestra para electroforesis después aplicamos un gel de agarosa al 2%
