UNIVERSIDAD NACIONAL DE INGENIERIA

FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA DE HIGIENE Y SEGURIDAD
INDUSTRIAL

“Preparación y esterilización de medios de cultivo. Clasificación de

Medios”
2º LABORATORIO DEL CURSO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL BO-122E

MALPARTIDA SOTO JUAN CARLOS 20215015G

SAL Y ROSAS SANTOS BRYAN DAVID 20192705B

DOCENTE: Msc. Blgo. ALVARO MARTÍN MARTÍNEZ VILA

Lima, Perú
24 de setiembre de 2021
 INDICE
I. RESUMEN.................................................................................................3

II. INTRODUCCIÓN.......................................................................................3

III. OBJETIVOS...............................................................................................4

IV. MARCO TEÓRICO....................................................................................4

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL........................................................9

1. MATERIALES Y EQUIPOS...........................................................................9

2. METODOLOGIA.........................................................................................11

VI. RESULTADOS.........................................................................................11

1. MEDIO DE CULTIVO:..............................................................................11

2. FÓRMULA:..............................................................................................11

3. PROCEDIMIENTO:..................................................................................12

4. CLASIFICACIÓN:.....................................................................................12

VII. DISCUSIÓN DE RESULTADOS..............................................................12

VIII. CONCLUSIONES....................................................................................13

IX. RECOMENDACIONES............................................................................14

X. CUESTIONARIO......................................................................................15

XI. FUENTES DE INFORMACIÓN................................................................17

XII. APENDICE...............................................................................................18

XIII. ANEXOS..................................................................................................19

2
 I. RESUMEN

El resultado del ejercicio presencial de una práctica de laboratorio es

diferente e irremplazable a comparación del seguimiento de estas de
manera virtual. El laboratorio de microbiología permite acercarnos lo más
posible a lo que vendría a ser lo presencial. Por lo que el siguiente tema a
tratar y ya consolidados los temas vistos la semana anterior, se verá el
tema “Medios de cultivo”.

Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento

y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el
desarrollo de los microorganismos. Puesto que la diversidad metabólica
de los microorganismos es enorme, la variedad de medios de cultivo es
también muy grande.

En la siguiente práctica de laboratorio se repasará y practicará los

ejercicios a realizar para comprender y clasificar los medios de cultivo.

II. INTRODUCCIÓN

Un medio de cultivo es el material alimenticio en donde crecen los

microorganismos, y este crecimiento es el cultivo. Para que las bacterias
puedan crecer adecuadamente en un medio de cultivo artificial, este debe
cumplir diversas condiciones de temperatura humedad y acidez.

Los componentes habituales de un medio de cultivo son:

 Agar
 Extractos
 Peptonas
 Fluidos corporales
 Sistemas amortiguadores
 Indicadores de pH
 Agentes reductores
 Agentes selectivos

De acuerdo con su estado físico, los medios de cultivo se pueden

clasificar en:

3
  Medios sólidos: Permite detectar los diferentes tipos de
bacterias que puedan encontrarse en una sola muestra.
 Medios líquidos o caldos: Permite el crecimiento de bacterias
con poca concentración en la muestra.

III. OBJETIVOS

Conocer la clasificación, preparación, esterilización y distribución de los

medios de cultivo.

Objetivos específicos:

 Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de

un medio de cultivo.
 Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes
para el crecimiento de microorganismos en el laboratorio.

IV. MARCO TEÓRICO

MEDIOS DE CUTIVO: Un medio de cultivo es un sustrato o una solución

de nutrientes que permite el desarrollo de microorganismos. En las
condiciones de laboratorio para realizar un cultivo, se debe sembrar sobre
el medio de cultivo elegido las muestras en las que los microorganismos
van a crecer y multiplicarse para dar colonias. (López T. & Torres
C.,2006)

Los microorganismos son los seres más abundantes de la tierra, pueden

vivir en condiciones extremas de pH, temperatura y tensión de oxígeno,
colonizando una amplia diversidad de nichos ecológicos. Entre los
requerimientos más importantes para su desarrollo están el carbono, el
oxígeno, nitrógeno, dióxido de carbono e hidrógeno. Muchas bacterias sin
embargo necesitan del aporte extra de factores de crecimiento específicos
en forma de suero, sangre y extracto de levadura entre otros. (Ramón P.
& Juárez A., 2002).
4
El desarrollo de un microorganismo en un medio de cultivo depende de
diversos factores, entre los cuales los más importantes son:

- Disponibilidad de los elementos nutritivos necesarios

- Existencia del oxígeno requerido

- Grado de humedad apropiado

- Valores de pH adecuados: Usualmente neutro o ligeramente alcalino

(7.2 – 7.4), salvo excepciones.

- Temperatura de incubación precisa: 35 – 37°C para las bacterias

patógenas.

- Condiciones de esterilidad del medio y protección de posibles

contaminaciones. (García M., Fernández T. & Paredes S., 2005)

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

 Según su origen:
o Naturales: Son los preparados a partir de sustancias
naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de
tejidos o infusiones y cuya composición química no se
conoce exactamente.
o Sintéticos: Son los medios que contienen una composición
química definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para
obtener resultados reproducibles.
o Semisintéticos: Son los sintéticos a los que se les añaden
factores de crecimiento bajo una forma de un extracto
orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.
(López T. & Torres C., 2006)
 Según su consistencia:
o Líquidos: Se denominan caldos y contienen los nutrientes en
solución acuosa. Favorecen mucho el desarrollo y la
multiplicación de las bacterias porque al difundirse estas por
todo el medio encuentran con facilidad las sustancias que
necesitan para nutrirse.
o Sólidos: Se preparan añadiendo un agar a un medio líquido
(caldo). El agar es una sustancia inerte polisacárida (hidrato
5
 de carbono) que se extrae de las algas. Como esta
sustancia no es digerida por las bacterias no constituye
ningún elemento nutritivo, en ellos las bacterias crecen con
mayor dificultad, pues los nutrientes se agotan con rapidez
en el punto donde se desarrollan.
o Semisólidos: Se utilizan para determinar la motilidad de las
especies en estudio. Actualmente se encuentran disponibles
comercialmente con el agregado de agar. (García M.,
Fernández T. & Paredes S., 2005)
 Según su composición:
o Comunes o universales: Su finalidad es el crecimiento de la
mayor parte de los microorganismos poco existentes. Es el
medio más frecuentemente utilizado para mantener colonias
microbianas. Por ejemplo: agar o caldo comunes.
o Selectivos: Son sólidos en los que la selectividad se
consigue alterando las condiciones físicas del medio o
añadiendo o suprimiendo componentes químicos
específicos con el fin de inhibir el crecimiento de especies
químicas cuyo crecimiento no interesa. Este tipo de medio
sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos
e inhibiendo el de otros. Se utiliza para seleccionar y aislar
microorganismos a partir de poblaciones mixtas. Por
ejemplo, Agar salado-manitol o Chapman (permite el
crecimiento de ciertos estafilococos).
(López T. & Torres C., 2006)

COMPONENTES USALES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

 Extractos: Para su preparación, ciertos órganos o tejidos animales

o vegetales (por ejemplo, carne, hígado, semillas, etc.) son
extraídos con agua y calor, y posteriormente concentrado hasta la
forma final de pasta o polvo. Estos preparados deshidratados son
frecuentemente empleados en la confección de medios de cultivo.
Ejemplos: extracto de carne, de levadura, de malta, etc. En el caso
del extracto de carne en polvo o pasta, provee sustancias

6
 nitrogenadas, minerales y vitaminas, mientras que el extracto de
levaduras provee vitaminas del grupo B, nitrógeno y carbono.
 Peptonas: Son mezclas complejas de compuestos orgánicos
nitrogenados y sales minerales que carecen de identidad química
definida; se obtienen por digestión enzimática o química de
proteínas animales o vegetales (soja, carne, gelatina, caseína,
etc.). Las peptonas son muy ricas en péptidos y aminoácidos, pero
pueden ser deficientes en determinadas vitaminas y sales.
 Fluidos Corporales: Sangre completa, sangre desfibrinada, plasma
o suero sanguíneo son frecuentemente añadidos a los medios
empleados para el cultivo de algunos patógenos. La sangre no
puede ser esterilizada y debe, por tanto, ser obtenida en
condiciones asépticas directamente de un animal sano. Los fluidos
corporales no solamente contribuyen con factores de crecimiento,
sino también con sustancias que neutralizan inhibidores del
crecimiento de algunas bacterias.
 Sistemas amortiguadores: Algunos componentes son incorporados
al medio de cultivo para mantener el pH dentro del rango óptimo
del crecimiento bacteriano. Los microorganismos más comunes
son neutrófilos (el pH óptimo para su crecimiento está próximo a la
neutralidad), y sales como fosfatos bisódicos o bipotásicos, o
sustancias como las peptonas, previenen una desviación del pH.
 Indicadores de pH: Indicadores ácido- base se añaden a menudo a
los medios de cultivo con objeto de detectar variaciones del pH.
 Agentes reductores: Cisteína, tioglicolato y otros son agentes
reductores que se añaden a los medios de cultivo para crear
condiciones que permitan el desarrollo de los gérmenes
microaerófilos o anaerobios.
 Agentes selectivos: La adición de determinadas sustancias al
medio de cultivo puede convertirlo en selectivo (ver más adelante,
clasificación de los medios de cultivo). Por ejemplo, cristal violeta,
sales biliares, ácida sódica, telurito potásico, antibióticos, etc., a la
concentración adecuada, actúan como agentes selectivos frente a

7
 determinados microorganismos.
(Rodríguez C., Gamboa C. & Hernández Ch., 2005)

MEDIOS DE CULTIVO UTILIZADOS EN LABORATORIO

 AGAR NUTRITIVO: Es un medio de cultivo usado normalmente

como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque
permanece solido incluso a relativas altas temperaturas. Además,
el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por
lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. En un caldo de
nutrientes, la bacteria crece en el líquido, y aparece como una
sustancia espesa, con colonias difícilmente observables. (Uberoa
F, 1981)
 CALDO BRILA: Medio selectivo recomendado para la prueba
confirmatoria en la detección del grupo coliforme en aguas, leche,
derivados lácteos y otros productos de importancia sanitaria,
mediante la determinación del NMP. López T. & Torres C. (2006)

V. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

8
1. MATERIALES Y EQUIPOS

9
2. METODOLOGIA
 Deberemos pesar 5.75 g de agar nutritivo ISO y
colocaremos esta cantidad en un matraz, posteriormente
añadiremos 250 ml de agua destilada en el mismo matraz
(indicaciones pertenecientes al envase).
 Al tratarse de un medio sólido será necesario disolverlo
completamente antes de llevarlo a esterilizar, es por ello que
utilizaremos un agitador magnético que también calentará la
mezcla.

10
  Dispensamos unos mililitros de la mezcla con ayuda de una
pipeta y una propipeta, con mucho cuidado pasamos unos
cuantos mililitros a dos tubos de ensayo.
 A continuación necesitaremos esterilizar ambos tubos, por
ello lo llevaremos al autoclave a 121 °C durante 15 minutos,
una vez tengamos las muestras estériles las dejaremos
enfriar a temperatura ambiente por unos minutos.
 Dosificamos en placas de petri la muestra que aún está
líquida, para ello encenderemos un mechero y flamearemos
la boca del matraz con nuestra mezcla sobrante, vertemos
un poco en una placa de petri y volvemos a flamear,
repetimos este proceso con el resto de placas, apilaremos
estas una encima de otra hasta que se solidifiquen.

VI. RESULTADOS

1. MEDIO DE CULTIVO:

Agar nutritivo ISO

Fórmula:
- Agar bacteriológico 15 g/l

- Extracto de carne 3 g/l

- Peptona 5 g/l

2. FÓRMULA:

23 gramos de agar nutritivo ISO en un litro de agua destilada.

3. PROCEDIMIENTO:

Mezclar bien y disolver con calor y agitación frecuente. Hervir

durante un minuto hasta disolver por completo. Esterilizar en
autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Enfriar a 45 ºC y
distribuir en recipientes apropiados.

11
 4. CLASIFICACIÓN:

Medio de cultivo artificial. Según su finalidad es un medio

común. Según su consistencia o estado físico es un medio
sólido.

Fuentes consultadas para el resultado:

• Ficha técnica del Agar nutritivo ISO:

https://www.condalab.com/int/es/medios-de-cultivo-
deshidratados/76- 9559-agar-nutritivo-iso.html

• Video referencial: “Preparación de medios de cultivo”

https://youtu.be/YGoPu0cn9ms XVII. DISCUSION DE
RESULTADOS •

VII. DISCUSIÓN DE RESULTADOS

 Un medio de cultivo es una técnica de laboratorio que consta de

una solución cada uno con nutrientes y factores de crecimiento
necesarios, que, aunque tengan muchas y diferentes condiciones,
como humedad, temperatura, oxigeno, aislamiento, alcalinidad y
más, tienen como objetivo principal, el desarrollo y crecimiento de
las bacterias, microorganismos, células, tejidos vegetales
 En la práctica de laboratorio se realizó la preparación de agar
nutritivo ISO, de acuerdo con las medidas indicadas por el
fabricante.
 El agar microbiológico es un elemento solidificante muy empleado
para la preparación de medios de cultivo, los cuales deben estar
exentos de todo microorganismo contaminante para facilitar la
identificación, crecimiento y desarrollo de otros microorganismos
que crecen en sustancias alimenticias artificiales preparadas en
laboratorios, denominados cultivo
 Para el crecimiento de este medio de cultivo, tiene como base
infusión extractos de carne, peptona.
 Se utiliza el mechero de Bunsen para la esterilización debida antes
de su reparto en los recipientes adecuados.

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  Una vez finalizada la esterilización los medios se dejan enfriar a
temperatura ambiente y en los que estén contenidos en tubos
deberán, inclinarse para que al solidificarse adopten la forma de
agar inclinado ó pico de flauta, si tal es la finalidad.
 En las placas de Petri se preparan vertiendo el medio fundido y
estéril dentro de ellas y en un ambiente aséptico (por ejemplo en la
proximidad de la llama de un mechero Bunsen) es conveniente
homogenizar el medio en el transcurso de la operación para evitar
que el agar sedimente en el fondo del recipiente y no se distribuya
por igual en todas las placas.

VIII. CONCLUSIONES

 Mediante el proceso de esta práctica definimos, estudiamos y

aplicamos los procedimientos que se deben llevar a cabo para la
asistencia de un entorno de cultivo, es lucido que de hecho citado
para con la unidad que estamos estudiando, microbiología, en
primer lugar, conozcamos y utilicemos algunos antibióticos
naturales que existen, por lo tanto, creemos contundentemente que
la practica fue muy amena y fructífera para los objetivos trazados al
inicio de esta.
 Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el
análisis de microorganismos con varios fines, como el de
multiplicación, identificación, antibiograma, entre otros, y puede
ofrecer información valiosa sobre los mismos si se realiza de
manera adecuada e higiénica para evitar la contaminación del
medio y la alteración de los resultados. Fue una práctica muy
interesante, sobre todo ver como las bacterias se van
reproduciendo y creciendo.

IX. RECOMENDACIONES

 Prestar con atención cuidadosamente a lo que indica el profesor en

la explicación del proyecto, por lo contrario, ocurriría alguna
operación errónea al realizarlo.

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  Desinfectarse antes y después de entrar al laboratorio para evitar
algún riesgo que ocasionaría contacto con algún microorganismo.
 Usar la protección personal adecuada y necesaria en el laboratorio
durante el análisis microbiológico (mascarilla, guardapolvo, lentes,
gorro, guantes de nitrilo, pantalones largos).
 Preparar productos que solo provengan de fabricantes o
proveedores que suministren mercancías de calidad.
 Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un
medio de cultivo.
 Utilizar agua destilada o desmineralizada con una calidad
microbiológica y físico-química adecuada.
 Mantener el laboratorio esterilizado y desinfectado para evitar
riesgo alguno con los productos.
 Utilizar materiales de vidrio bien lavados y enjuagados con agua
destilada.
 Controlar el tiempo y la temperatura recomendada durante la
esterilización.
 Nunca se deben exceder las condiciones señaladas por el
fabricante.
 Conocer los diferentes tipos de medios de cultivos existentes para
el crecimiento de microorganismos en el laboratorio.
 Etiquetar debidamente las muestras preparadas en el laboratorio.
 No delirar de un área a otra cuando se tenga el asa de siembra
cargada con cierto cultivo de microorganismos, ya que puede
gestar aerosoles y meter cizaña otras áreas, proceder solo en su
empleo.
 Limpiar el laboratorio al terminar el trabajo de análisis
microbiológico y desinfectar los instrumentos utilizados.

X. CUESTIONARIO

1. ¿Por qué se deben esterilizar los medios de cultivo?

Porque se deben eliminar o remover todos los microorganismos
como células vivas, esporas de hongos, endosporas bacterianas,
virus y viroides.
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 Su correcta aplicación puede garantizar la ausencia de
microorganismos en los medios de cultivo a ser empleados.
Existen diversos métodos de esterilización, entre ellos: calor (seco
o húmedo), filtración (para sustancias termolábiles y aire),
radiaciones y aplicación de gas de óxido de etileno (para jeringas y
cajas de plástico).

2. Si no se realizan los cálculos adecuadamente para la

preparación de los medios, ¿qué puede ocurrir en el momento
de sembrar?
Puede ocurrir que los macroorganismos nos crezcan ni se
conserven , ya que la composición varía de acuerdo a la especie
que se quiere cultivar, cada tipo de macroorganismo necesita una
nutrición especifica.
3. ¿Por qué se necesita ajustar el valor del pH en los medios de
cultivo?
Porque con el propósito de observas variaciones en el pH que
puede ocurrir por las fermentaciones, se hace imprescindible
algunas veces agregar indicadores acido – base que nos solicite.
4. ¿Cuál es el papel de las sales biliares en algunos medios de
cultivo?
Las sales biliares inhiben en adecuada medida el crecimiento de
bacterias Gram positivo, así que solo se selecciona el crecimiento
de bacterias Gram negativa, grupo en el que se encuentren en las
bacterias denominadas coliformes que son las que se quieren
seleccionar en este medio para su identificación , observación ,
aislamiento o recuento.
5. Buscar la formulación del medio SIM y clasificar según los
criterios establecido e indicar la función de cada uno de los
ingredientes.
El medio SIM es un agar semisólido y diferencial, especialmente
diseñado para ayudar a la identificación de algunas bacterias,
principalmente de la familia Enterobacteriaceae. A diferencia de
otros medios, este debe ser semisólido para que sea detectable la
capacidad de movimiento que poseen algunas bacterias.
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  La letra S del acrónimo SIM hace referencia a la producción
de sulfuro de hidrógeno (H2S). Las bacterias capaces de
formar sulfuro de hidrógeno tomarán el azufre del tiosulfato
de sodio.
 La segunda letra del acrónimo SIM es la “I”, la cual
representa la formación de indol. En este sentido, la
tripteína, además de ser una fuente de nutriente, cumple
otra función fundamental. Esta peptona es rica en un
aminoácido llamado triptófano, por tanto, puede evidenciar a
las bacterias que producen triptofanasa.
Por último, la letra “M” de la palabra SIM significa motilidad. A fin
de poder evaluar la motilidad, este medio es estratégicamente
semi-sólido, pues esta característica es esencial para poder
observar si existe o no movimiento bacteriano. Las bacterias que
poseen flagelos son las que dan esta prueba positiva.
Fórmula (en gramos por litro)
TRIPTEINA…………………………………………………………20.0
PEPTONA…………………………………………………………..6.1
SULFATO DE HIERRO Y AMONIO……………………………...0.2

TIOSULFATO DE SODIO………………………………………0.2
AGAR………………………………………………………….……….3.5
pH FINAL: 7.3 ± 0.2
Funciones:
TRIPTEINA: permite el crecimiento de microorganismos exigentes
y la clara visualización de reacciones de hemolisis.
PEPTONA: contiene alta cantidad de hidratos de carbono que
estimulan el crecimiento de una amplia variedad de
microorganismos.
SULFATO DE HIERRO Y AMONIO: es usado como fertilizantes
nitrogenados para la producción de cultivos.
TIOSULFATO DE SODIO: retarda el proceso de la nitrificación,
inhibiendo la acción bacteriana que convierte el amonio al nitrato.

16
 AGAR: se utiliza como agente gelificante para dar solidez a los
medios de cultivo.

XI. FUENTES DE INFORMACIÓN

 OMS (204). Manual de Laboratorio para la Identificación y

Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos de
Patógenos Bacterianos de Importancia para la Salud Pública
en el Mundo en Desarrollo
 Condalab (mayo,2019). Medio SIM
 Pedro Mercado Martínez, Luis Llenque Díaz. Efecto del
cloruro de sodio, sales biliares y pH en la actividad
antibacteriana de Bifidobacteriumanimalis sobre Listeria
monocytogenes.
 Janeth Sanabria Gómez Danny Mercedes Acevedo (2001).
Manual de Laboratorio Microbiología
 Universidd Miguel Hernandez de Elche (2012).
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO [Archivo de
Vídeo]. Youtube https://www.youtube.com/watch?
v=YGoPu0cn9ms
 Universidad de Sevilla (2012). Técnicas Básicas en el
Laboratorio de Microbiología. Preparación de Medios de
Cultivo. [Archivo de Vídeo]. Youtube.
https://www.youtube.com/watch?v=miga09gVMyY&t=

XII. APENDICE

DIAGRAMA DE FLUJO

1. PREPARACION DEL CULTIVO SOLIDO

Primero se empieza la cantidad Posteriormente abierta dicha cantidad en

necesaria para el volumen de medio que se un Eldemeyer y agregue el agua
requiera destilada mezclar y se calienta al mismo
tiempo en la hornilla hasta ebullición.
Lugo tapamos con papel aluminio y llevamos
autoclave por 15 libras de presión 121 grados
Celsius por 15 minutos después
17
Se deja enfriar hasta aproximadamente 45
grados celsius y vierta en cajas de petris
estériles dentro de una cámara de flujo
laminar o al lado del calor de un
mechero para evitar contaminación, se deja
solidificar a temperatura ambiente y
hasta misma temperatura incube por 48
horas para descartar una posible
contaminación del medio.

Este mismo medio puede ser servido en

tubos de ensayo taparrosca antes de ser
utilizado y taparlos su voz sin apretar
una vez fuera de la autoclave antes de que
el medio se solidifique los tubos pueden
ser recortados sobre una superficie
inclinada para producir un bisel o
puestos en gradillas para que queden sin
bisel.

2. PREPARACION DE CULTIVO LIQUIDO

Se repiten los procedimientos anteriormente

descritos, aunque este no se vierte en cajas
de Petri , únicamente se almacena en tubos
de ensayo o en el mismo Endelmeyr.

18
XIII. ANEXOS

Explorando el Universo de la Microbiología: Medios de cultivo

Microbiología Paso a Paso: Métodos de siembra

19
Preparación de medios de cultivo sólidos y líquidos

20