UNIVERSIDAD DE GUAYAQUIL

FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

Integrantes:
• Sánchez Vega Christopher Geordanny

Docente: Q.F. Jose Zamora Guevara Curso: G2A-2

N° 5 PREPARACIONES TEÑIDAS: TINCIÓN SIMPLE Y TINCIÓN

DOBLE Y DIFERENCIAL: TÉCNICA DE GRAM
Objetivos de la práctica de Laboratorio

1. Aprender a realizar un frotis y la fijación luego de agregar el inóculo

2. Realizar una tinción simple
3. Diferenciar la disposición y agrupación de los microorganismos
4. Realizar la técnica de Gram
5. Diferenciar los microorganismos Gram positivos de los Gram negativos observando las coloraciones de los
mismos, además de identificar características morfológicas
6. Adquirir destreza en el manejo del microscopio
Instrucciones o consideraciones previas

MARCO TEORICO

La morfología bacteriana se puede ser estudiada de dos formas distintas:

1. Por visualización de los microorganismos vivos sin teñir, lo que nos permite además observar su posible

movilidad

2. Por visualización de los microorganismos teñidos mediante colorantes, con una concentración tal que hacen

morir a la bacteria y no permiten observar su movilidad, pero sin embargo se mejora notablemente la

visualización de su morfología y otras estructuras según el tipo de tinción llevada a cabo. En general las bacterias

vivas son prácticamente incoloras, no presentando suficiente contraste en el medio acuoso donde estas se
presentan suspendidas, con lo cual no pueden ser observadas con claridad. Pero si se tiñen se producen un gran

contraste con respecto al medio que las rodea. Además, algunos de estos colorantes pueden también teñir

estructuras internas de la bacteria, lo que nos sirve para su identificación.

Por todo esto las principales ventajas, de la técnica de tinción son:

➢ observar más adecuadamente su morfología

➢ proporcionar el contraste preciso y suficiente en cada caso, lo que permitirá diferenciar distintos tipos

morfológicos

➢ establecer una información complementaria sobre sus estructuras internas y/o externas que no podrían ser

observadas por examen en fresco

➢ conocer sus características tintoriales orientándolos hacia un grupo taxonómico u otro en la clasificación

bacteriana

BACTERIAS CARACTERÍSTICAS TIPOS DE AGRUPACIÓN

Células agrupadas en Pares

Forma esférica o casi esférica ya (Diplococos) Células agrupadas

Cocos (esféricas) que sus diámetros (largo y ancho) encadenas cortas y largas

son casi iguales (estreptococos) Células agrupadas

en forma de racimo (estafilococos

Tienen uno de los ejes o diámetro Sin agrupación o agrupación

notablemente mayor que el otro, irregular Células aisladas en

Bacilos o Bastones (cilíndricas) de tal manera que se observan parejas Células en cadenas

como bastoncitos de diferente Disposición celular, una al lado de

ancho y longitud. la otra

 Generalmente de presentación

aislada; las células son muy largas

Helicoidales o curvas (Espirales) en relación a su ancho y se No se tienden a agrupan

observa una torsión alrededor de

su eje (espiras).

La observación de la morfología bacteriana se realiza utilizando colorantes biológicos que permiten aumentar el

contraste entre la célula bacteriana y el medio que las contiene. La técnica más utilizada para el estudio de la

morfología bacteriana es la tinción de Gram. Esta técnica doble y diferencial es la más empleada en

microbiología. Fue desarrollada por Hans Christian Gram, en 1884. A pesar del tiempo transcurrido, la tinción

se ha modificado poco y es uno de los primeros pasos para identificar microorganismos. Este método divide las

bacterias en dos grupos: las Gram positivas y las Gram negativas. Este distinto comportamiento en la tinción de

Gram es debido a la distinta composición de la pared celular de las bacterias. Los microorganismos que retienen

el violeta de genciana, licor de Gram se van a observar de color violeta y aquellos microorganismos que se

decoloran van a adquirir el color de contraste de la safranina, por lo que se observan de color rojo rosado.

En general se pueden decir, que las bacterias Gram positivas van a reaccionar de manera diferente a las Gram

negativas frente a muchos agentes físicos y químicos.

En la técnica de Gram se usan cuatro tipos de soluciones.

Solución Nombre Función

Cristal violeta o violeta de

Colorante primario (básico) Tiñe todas las bacterias del frotis
genciana

Es una sustancia que va a

incrementar la afinidad entre la

célula microbiana y el colorante

Mordiente El licor o lugol de Gram haciendo que se formen un

complejo coloreado que fija el

colorante, por la acción del

mordiente, las células se tiñen

más intensamente.

Retira el colorante de ciertas la

célula teñida (bacterias Gram

negativas). Algunas células se van

a decolorar más fácilmente que

El decolorante Alcohol al 70% o Alcohol Cetona otras. En la tinción de Gram y en

otras tinciones diferenciales, es el

diferente comportamiento en la

decoloración, lo que sirve para

diferenciar las bacterias.

 Va a ser de un color diferente al

del colorante primario. Su misión

será dar color a las células

Colorante de contraste o decoloradas. Los

secundario Safranina microorganismos que no se

decoloran fácilmente retienen el

color del colorante primario. Los

que se decoloran, toman el color

de contraste.

Soluciones de la técnica de Gram

La Tinción de Gram es una tinción que nos permite evaluar:

1. Afinidad Tintorial

2. Morfología

3. Agrupación

Materiales Medios de cultivo y Equipos Reactivos

cepas bacterianas

Algodón Caldo nutritivo Mechero Alcohol

Fósforos Cepas varias Microscopio Azul de metileno

Gasa Safranina

Placa portaobjetos Violeta de genciana

Asa de inoculación Aceite de cedro

Papel filtro Alcohol de cetona

Rejilla de Tinción Lugol de Gram

Procedimiento:
Resultados obtenidos
Características Observadas Ilustración

Usando el objetivo de 100x observamos

dentro del laboratorio colonia de bacterias,
más específicamente podemos observar una
forma de bacilos por su estructura alargada,
y una tinción de Gram color rosado
interpretando que es una colonia de
bacterias gram negativas, con una
agrupación irregular.

Conclusiones

Las tinciones nos permiten observar con mayor detalle características de las bacterias a analizar (a pesar de que no podemos

apreciar su movimiento puesto que las bacterias mueren por la tinción), estas tinciones dan información importante acerca

de la bacteria que estamos observando, sin embargo, no es un estudio suficientemente especifico como para poder

determinar a que género, o familia pertenece la bacteria.

Las características que se pueden observar con esta práctica es básicamente si la bacteria es gram positiva o gram negativa,

su forma (bacilo, coco, estreptococos, espirilos, etc) y la formación de la colonia.

Recomendaciones
1.- Colocar con cuidado las tinciones y el decolorante.
2.- No exponer mucho tiempo al fuego la placa durante la fijación.
3.- Respetar los tiempos de tinción especificados en la práctica.
4.- No olvidar realizar los lavados y secado posterior.
Bibliografía
1- Granados R., Microbiología, Ed. Paraninfo 1999