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Practica N° 4

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PRACTINA N°04

CROMATOGRAFÍA
INTEGRANTES
Aguirre Fernández Nayely Lucia 80%
Condor Chavez Jurith Ines 80%
Delgado Cumpa Adolfo Berly Braulio 80%
Izaguirre Durand Ximena Fabiana 80%
INTRODUCCIÓN
La cromatografía es una técnica analítica ampliamente utilizada en química y ciencias
relacionadas que se emplea para separar, identificar y cuantificar los componentes de
una mezcla. La cromatografía está basada en la capacidad de los diferentes
componentes de una muestra para interactuar de manera diferente con una fase
estacionaria y una fase móvil, lo que permite la separación acorde a sus propiedades
físico-químicas.

La cromatografía ha evolucionado a lo largo de los años y se ha convertido en una


herramienta esencial en la investigación, la industria y la ciencia forense. Permite la
separación de sustancias en una amplia gama de aplicaciones, desde la purificación de
compuestos químicos hasta la identificación de drogas en muestras biológicas, pasando
por la determinación de contaminantes en alimentos y productos farmacéuticos.
OBJETIVOS
Demostrar la presencia de diferentes pigmentos
1
como la clorofila, caroteno y xantofila

2 Extraer pigmentos fotosintéticos y

3 Interpretar una cromatografía


MARCO TEÓRICO
La cromatografía es un método químico muy utilizado
en los laboratorios para llevar a cabo análisis El principio usado en este método
cualitativos. Es una técnica que no necesita grandes químico es el de la retención
equipamientos, normalmente se basa en una tira de selectiva, que consiste en observar
papel filtro, y puede aplicarse en todas las ramas el diferente comportamiento de los
científicas. componentes de una mezcla sobre
un soporte, como un papel, un gas,
FASES DE CROMATOGRAFÍA un líquido o una resina

Fase estacionaria: en esta fase, los componentes de la muestra están


retenidos en el soporte adecuado. Según el tipo de soporte, líquido o
sólido, pueden ser planas o en columna.
Fase móvil: En esta fase, el compuesto químico fluirá hasta arrastrar a la
muestra obligándola a atravesar la fase estacionaria.

fuente: https://inensal.com/cromatografia/
HISTORIA
El botánico ruso Mikhail Tswett (Mikhail Semenovich Tsvett, 1872-1919) - también conocido por su
nombre latinizado, Tiselius - empleó por primera vez en 1906 el término "cromatografía" (del griego
chroma y graphein que significan respectivamente "color" y "escribir").
A comienzos del año 1903, Mikhail Tswett usó columnas de adsorción de líquidos para separar
pigmentos vegetales (por ejemplo, clorofilas). Las disoluciones se hacían pasar a través de una columna
de vidrio rellena de carbonato de calcio, que finamente dividido da un material poroso que interacciona
de forma diferente con los componentes de la mezcla, de forma que éstos se separaban en distintas
bandas a lo largo de la columna.
Los primeros equipos de cromatografía de gases aparecieron en el mercado a mediados del siglo XX. A
su vez, la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) comenzó a desarrollarse en los años 1960,
aumentando su importancia en las décadas siguientes, hasta convertirse en la técnica cromatográfica
más empleada. Sin embargo, esto se irá modificando con el paso de los años.
PRINCIPIOS TEORICOS
La cromatografía es una técnica de separación extraordinariamente versátil que presenta
distintas variantes. En toda separación cromatográfica hay dos fases (sólida, líquida o gas) una
móvil y otra estacionaria, que se mueven una con respecto de la otra manteniendo un contacto
íntimo. La muestra se introduce en la fase móvil y los componentes de la muestra se
distribuyen entre la fase estacionaria y la móvil. Los componentes de la mezcla a separar
invierten un tiempo diferente en recorrer cada una de las fases, con lo que se produce la
separación. Si un componente está la mayor parte del tiempo en la fase móvil el producto se
mueve rápidamente, mientras que si se encuentra la mayor parte en la fase estacionaria, el
producto queda retenido y su salida es mucho más lenta.
La más utilizada en química orgánica es cromatografía líquido-sólido en sus dos variantes:
cromatografía en columna (CC) y cromatografía de capa fina (TLC)
CLASIFICACIÓN
Las distintas técnicas cromatográficas se pueden dividir según cómo esté
dispuesta la fase estacionaria:

Cromatografía plana Cromatografía en columna


La fase estacionaria se sitúa La fase estacionaria se sitúa dentro de una
sobre una placa plana o sobre un columna. Según el fluido empleado como
papel. fase móvil se distinguen:
Las principales técnicas son: -Cromatografía de líquidos
-Cromatografía en papel -Cromatografía de gases
-Cromatografía en capa fina -Cromatografía de fluidos supercríticos
GENERALIDADES TECNICA
Consden y Martin introdujeron en 1944 un método La solución de componentes que se han de separar se
de cromatografía de partición en el que se utilizan aplica en forma de mancha, cerca de uno de los
tiras de papel de filtro como «soporte», que aplicaron extremos de la tira de papel de filtro preparada. El
al análisis de aminoácidos. La técnica se ha papel se introduce entonces en una cámara hermética,
extendido a toda clase de productos naturales y cuya atmósfera está saturada de disolvente y agua y
aunque sustituida en gran medida por la que contiene además, disolvente saturado de agua.
cromatografía en capa fina (CCF), continúa siendo el Los disolventes que dan resultados más satisfactorios
método de elección para el fraccionamiento de son los parcialmente miscibles con el agua, como el
ciertos grupos de sustancias. fenol, n butanol y alcohol amílico.
DETERMINACIÓN DE RF
La relación entre la distancia recorrida sobre el
papel por un componente de la solución problema
y la distancia recorrida por el disolvente se designa
Rf, factor de retención (Rf) llamado también
“relación de frentes”, el cual es característico de
cada compuesto específico correspondiente a
dicha mancha y, en condiciones constantes (esto
es, tipo de papel, tipo de solvente, temperatura,
etc.), su valor es también constante para cada
compuesto.
II. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA, CCF ( TLC, THIN LAYER
CROMATOGRAPHY, EN INGLÉS)

Por cromatografía en capa fina se entiende la técnica capaz de separar los


componentes de una muestra entre dos fases, una móvil, que suele ser líquida y otra
estacionaria, que puede ser líquida o sólida, y que está dispuesta como una capa de
material poroso de un espesor determinado, colocada sobre un soporte plano inerte,
de vidrio o de aluminio.
Proceso de Adsorción: La muestra aplicada en la capa es adsorbida en la superficie
del material por la acción de fuerzas electrostáticas (fuerzas de Van der Waals,
puentes de Hidrógeno, efectos inductivos, etc). Luego, cuando la capa es expuesta a
un flujo por acción capilar, se inicia una competencia de enlaces entre los sitios
activos del adsorbente y la sustancia con el solvente.
Adsorbentes:
Los adsorbentes más utilizados en la Cromatografía de Capa Fina son:
• Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)
• Óxido de Aluminio ó Alúmina (ácida, neutra ó básica)
• Tierra Silícea ó Kieselguhr
• Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
• Poliamidas
Preparación de la placa cromatográfica:
Se usan como soporte del adsorbente láminas de: Vidrio, Plástico ó Metálicos (ej: Aluminio). Los tamaños de
la placa para TLC convencional son : 20 cm x 20 cm; 10 cm x 20 cm y 5 cm x 2 cm
Aplicación de la muestra:
La muestra los aminoácidos glicina (Gly), leucina (Leu), ácido aspártico (Asp) y lisina (Lys )se aplica en punto
en la placa.
Desarrollo de la Placa:
Es un proceso mediante el cual son transportados a través de la fase estacionaria por la fase móvil. N-
butanol/acetona/ácido acético/agua (35/35/20/10)
Detección ó Visualización:
Por sustancias químicas en este caso la Ninhidrina
CUESTIONARIO
1- Definir: Comatografía, cromatofolio,
cromatograma, Adsovente, Eluyente.

Comatografía Rf
La relación que presenta la
Procedimiento que se
distancia relativa que el
emplea para separar los
punto viajó en comparación
distintos componentes de la
con la distancia que podría
mezclas homogénea
haber ocurrido si se moviera
aprovechando su diferente
con la frente de disolvente
afinidad por un disolvente

cromatograma Adsovente Eluyente


Registro grafico Sólido que tiene la Solvente o mezcla
bidimensional obtenido en capacidad de retener de solventes usados
un medio absorbente, que sobre su superficie un para mover los
muesta la separación de componente presente compuestos a
sustancias mediante una en corrientes líquidas traves de la
cromatografía o gaseosas columna.
2. Dar las características de los siguientes adsorbentes:
- Silica gel, Óxido de Aluminio ó Alúmina, Tierra Silícea ó
Kieselguhr, Celulosa y, Poliamidas.

Silicia Gel Oxido de Aluminio


Aspecto cristalino Olor inodoro
Porosa Insoluble
Inerte Conductor térmico
Inodora y no toxica Denso (3.798)
Insoluble Punto de fusion 2027°C
Estable Punto de ebullicion 2977°C

Tierra Silícea Celulosa Poliamidas


Resistente a los Insoluble Resistente
gases y al desgaste Almidón Duro
Duro Estructura Lineal Tenacidad Media
Denso Fibrosa Absorbe humedad
Opaca Insoluble al alcohol y al Textura suave y ligera
Amorfo agua Fácil de pintar
3. CLOROFILA
DEFINICIÓN, TIPOS, ESTRUCTURAS Y DEGRADACIÓN QUÍMICA.

Definición:
Es un pigmento fotosintético que participa en
la absorción de radiación electromagnética y
ayuda en la conversión de energía luminosa en
energía química a través de la síntesis de
compuestos orgánicos. El término “clorofila” se
deriva de dos palabras griegas; khloros que
significa verde pálido y phyllon que significa
hojas.

https://microbiio.info/clorofila/
CLOROFILA
DEFINICIÓN, TIPOS, ESTRUCTURAS Y DEGRADACIÓN QUÍMICA.

Tipos:
Clorofila A: Es el tipo de clorofila más ampliamente
distribuido que se encuentra en todos los
organismos vivos capaces de realizar la fotosíntesis
oxigenada (produciendo oxígeno como
subproducto).
Clorofila B: Es la segunda clorofila más abundante
en los organismos fotosintéticos oxigenados. Estos
se distinguen de la clorofila a en la sustitución de
formilo en la posición C-7 del anillo.
Clorofila C: Es una forma de clorofila que actúa
como un pigmento accesorio y se distribuye menos
ampliamente que la clorofila A y B.
https://microbiio.info/clorofila/
CLOROFILA
DEFINICIÓN, TIPOS, ESTRUCTURAS Y DEGRADACIÓN QUÍMICA.

Tipos:
Clorofila D: Es una de las formas más raras de
clorofilas que se encuentran en algunas especies
de algas rojas y cianobacterias.
Clorofila E: Es una forma rara de clorofila que se
encuentra en algunas algas doradas,
principalmente en dos especies, Tribonema
bombycinum y Vaucheria hamata .
Clorofila F: Es la forma más nueva de clorofila que
se descubrió a partir de estromatolitos en 2010. Es
diferente de otras clorofilas en que puede
absorber la luz infrarroja presente en la región roja
que otros cloroplastos.
https://microbiio.info/clorofila/
CLOROFILA
DEFINICIÓN, TIPOS, ESTRUCTURAS Y DEGRADACIÓN QUÍMICA.
Estructura:
Hay varios tipos de clorofila, pero la clorofila más común es la clorofila a, cuya
estructura química se puede describir de la siguiente manera:
1. Porfirina: La porfirina es una estructura plana de cuatro anillos pirrólicos,
unidos por puentes metino (-CH=) y puentes de meteno (-CH2-) que forman un
anillo porfirínico. Estos anillos pirrólicos están conjugados, lo que les permite
absorber la luz en la región del espectro visible.
2. Átomo de magnesio (Mg): En el centro de la porfirina se encuentra un átomo de
magnesio (Mg). El Mg es esencial para la capacidad de la clorofila de capturar y
transferir energía de la luz.
3. Cadena lateral fitol: La clorofila a tiene una cadena lateral llamada fitol que se
une a uno de los anillos de la porfirina. El fitol es una cadena hidrocarbonada
que ancla la clorofila en las membranas de los tilacoides en las células
vegetales.
4. Grupos funcionales: En la porfirina y el fitol, hay varios grupos funcionales,
como grupos -OH y -CHO, que desempeñan un papel en la interacción de la
clorofila con otras moléculas durante la fotosíntesis.
La estructura exacta de la clorofila puede variar ligeramente dependiendo del tipo
de clorofila (a, b, c, etc.). Cada tipo de clorofila tiene algunas diferencias en su
estructura química, pero la porfirina y el átomo de magnesio son características
comunes a todas las clorofilas y son esenciales para su función en la fotosíntesis.
CLOROFILA
DEFINICIÓN, TIPOS, ESTRUCTURAS Y DEGRADACIÓN QUÍMICA.
Degradación química:
La degradación de la clorofila se produce a través de varios pasos químicos.
Aquí hay una descripción general de los principales procesos involucrados:
1. Desprendimiento de magnesio (Mg): En primer lugar, el átomo de
magnesio (Mg) en el centro de la clorofila es eliminado. Esto transforma
la clorofila activa en una forma inactiva.
2. Escisión del anillo porfirínico: Se rompe el anillo porfirínico de la
clorofila, lo que da como resultado fragmentos más pequeños llamados
fitobilinas.
3. Conversión de fitobilinas: Las fitobilinas se transforman en productos
finales de degradación, como feofitinas, que son compuestos de color
marrón o gris en lugar del verde característico de la clorofila.
4. Eliminación de los productos de degradación: Los productos de
degradación de la clorofila, como las feofitinas, se transportan y
almacenan en otras partes de la planta, donde se pueden reutilizar para
la síntesis de nuevas moléculas de clorofila u otros compuestos.
Este proceso de degradación de la clorofila es fundamental para permitir
que los nutrientes contenidos en la clorofila, como el magnesio y el
nitrógeno, sean reabsorbidos por la planta antes de que las hojas caigan.
4. COMENTE SOBRE LOS RESULTADOS OBTENIDOS DEL EXPERIMENTO DEL PIGMENTO
VERDE DE LA ESPINACA APLICANDO LA TÉCNICA DE LA CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
DESCRITA EN LA GUÍA DE PRÁCTICA.

En esta técnica, una muestra se coloca en una línea en


la parte inferior del papel y se deja que un solvente
ascienda a través del papel por capilaridad.

Así como vemos en la imagen, se puede


percibir el ascenso que tuvo el extracto de
espinaca hasta la parte superior de la hoja,
eso demuestra que la tecnica es veraz.
5.HPLC
CARACTERÍSTICAS, EQUIPO. MENCIONE DOS EJEMPLOS DE SEPARACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS POR HPLC.

Características:
1. Alta Resolución: La HPLC permite separar compuestos con alta
resolución y precisión, lo que significa que puede distinguir
entre compuestos muy similares en estructura o propiedades.
2. Elevada Sensibilidad: La HPLC es capaz de detectar y cuantificar
compuestos en concentraciones muy bajas, lo que la hace
adecuada para análisis de trazas.
3. Amplia Aplicabilidad: Puede utilizarse para analizar una amplia
variedad de compuestos, desde pequeñas moléculas orgánicas
hasta biomoléculas como proteínas y ácidos nucleicos.
4. Control de Temperatura: La temperatura puede controlarse en
la HPLC, lo que permite el análisis a diferentes temperaturas y
mejora la separación de compuestos.
5. Selección de Detectores: Se pueden utilizar diversos detectores,
como UV-Visible, fluorescencia, índice de refracción,
conductividad, entre otros, según las necesidades analíticas.
HPLC
CARACTERÍSTICAS, EQUIPO. MENCIONE DOS EJEMPLOS DE SEPARACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS POR HPLC.

Equipo:
1. Fase Estacionaria: La fase estacionaria es un material empaquetado en una
columna cromatográfica. Puede ser de sílice, polímeros, resinas, entre
otros, y está diseñada para interactuar con los compuestos en la muestra.
2. Fase Móvil: La fase móvil es un solvente o una mezcla de solventes que se
bombea a través de la columna. Puede ser ajustada para cambiar la
velocidad de elución y mejorar la separación.
3. Bomba de HPLC: La bomba es responsable de suministrar la fase móvil a la
columna a una velocidad constante y controlada.
4. Válvula de Inyección: Se utiliza para inyectar la muestra en el sistema HPLC.
La cantidad de muestra inyectada se puede controlar con precisión.
5. Columna Cromatográfica: Las columnas cromatográficas son críticas en la
HPLC y vienen en diferentes tamaños y con diferentes materiales de
empaque para separar diferentes tipos de compuestos.
6. Detector: El detector registra la señal generada por los compuestos
mientras pasan por la columna. Los tipos de detectores pueden incluir UV-
Visible, fluorescencia, índice de refracción, conductividad, etc.
7. Software y Sistema de Control: Se utiliza un software y un sistema de
control para configurar y controlar el funcionamiento del equipo, así como
para adquirir y analizar datos.
HPLC
CARACTERÍSTICAS, EQUIPO. MENCIONE DOS EJEMPLOS DE SEPARACIÓN DE COMPUESTOS ORGÁNICOS POR HPLC.

Ejemplos de aplicaciones del HPLC


1. Análisis de compuestos farmacéuticos: La HPLC se utiliza
ampliamente en la industria farmacéutica para el análisis de
medicamentos y productos farmacéuticos. Puede separar y
cuantificar los componentes de una formulación de medicamentos
para garantizar su calidad y consistencia.
2. Determinación de compuestos en alimentos: La HPLC se aplica en
la determinación de compuestos en alimentos, como vitaminas,
antioxidantes, colorantes, y residuos de pesticidas. Permite asegurar
la seguridad y la calidad de los alimentos que consumimos.

Estos son solo dos ejemplos de las numerosas aplicaciones de la HPLC


en la química analítica, la investigación, la industria farmacéutica, la
industria alimentaria y otros campos. La HPLC es una técnica versátil y
ampliamente utilizada para el análisis de compuestos orgánicos y
biomoleculares.
6. Aplicaciones de la cromatografía

La cromatografía puede aplicarse a diversos campos, por ejemplo:

Química Analítica: La cromatografía se utiliza para analizar y cuantificar los componentes de una muestra,
como en la determinación de la concentración de analitos en muestras farmacéuticas, alimentarias o
ambientales.
Química Orgánica: En la investigación química, la cromatografía se utiliza para purificar y separar
compuestos orgánicos, así como para analizar mezclas complejas, como las reacciones de síntesis.
Ciencias Ambientales: La cromatografía se utiliza para analizar muestras ambientales, como suelos, aguas
y aire, con el fin de detectar y cuantificar contaminantes y sustancias químicas en el medio ambiente.
Ciencia Forense: En la investigación forense, la cromatografía se emplea para analizar muestras de
evidencia, como sangre, fluidos corporales y sustancias ilícitas, para ayudar en la resolución de casos
criminales.
Farmacología: La cromatografía es esencial para el desarrollo y control de calidad de productos
farmacéuticos, permitiendo la identificación y cuantificación de ingredientes activos y la detección de
impurezas.
DISCUCIÓN
Durante nuestra práctica, encontramos dificultades al
intentar observar la clorofila de la espinaca. Para ello,
se requería un conteo de 15 gotas y secado al
mechero, pero en ocasiones, el secado excesivo
dañaba la muestra, obligándonos a repetir el
experimento. Asimismo, en otras instancias, el
resultado no cumplía con las expectativas deseadas.
CONCLUSIÓN
En conclusión La cromatografía es la separación de una mezcla de 2 o más
componentes por distribución en 2 fases (móvil y estacionaria); también se utiliza como
medio de identificación de sustancias. El tipo de cromatografía dependerá de la
naturaleza de la fase móvil y estacionaria. La polaridad de eluyente determinara la
efectividad de éste como disolvente en la cromatografía de capa fina. Para la
cromatografía aplicada en pureza de sustancias, el número de manchas notables en la
placa será el número de componentes presentes en la sustancia, por lo tanto, la
sustancia pura presentará 1 sola mancha.
BIBLIOGRAFIAS
https://geologiaweb.com/materiales/silice/
https://www.aceromafe.com/poliamida-usos-propiedades/
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https://microbiio.info/clorofila/
fuente: https://inensal.com/cromatografia/
GRACIAS!!

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