Manual de LBA

INSTITUTO TECNOLÓGICO DE SONORA
DIRECCIÓN ACADÉMICA DE RECURSOS NATURALES

DEPARTAMENTO DE BIOTECNOLOGÍA Y CIENCIAS ALIMENTARIAS
MANUAL DE PRÁCTICAS
LABORATORIO DE BIOQUÍMICA ANALÍTICA,
PLAN 2016
AUTORES:
M.C. Miguel Alfonso Pereo Gálvez
Dra. Olga Nydia Campas Baypoli
Dra. Dalia I Sánchez Machado
M.C. Eunice Guzmán Fierros
CD. OBREGÓN, SONORA ENERO 2023
1
Índice
Objetivo y presentación del manual……………………………………………. 3
Normas durante el trabajo de laboratorio……………………………………... 4
Lineamientos para la presentación del reporte de laboratorio…………….. 5
Formato para la elaboración de reportes de laboratorio…………………… 6
Cédulas de evaluación……………………………………………………………. 11
Práctica No. 1 Determinar el contenido de cenizas y humedad en materias
primas utilizadas en procesos biotecnológicos” .................... 15
Práctica No. 2 Determinar el contenido de fósforo en materias primas
utilizadas en procesos biotecnológicos …………………..…. 19
Práctica No. 3 Determinar el contenido de nitrógeno en materias primas
utilizadas en procesos biotecnológicos………………………. 23
Práctica No. 4 Cuantificación de lípidos por el método de Bligh y Dyer…….. 27
Práctica No. 5 Monitoreo de pH y Acidez Total Titulable (ATT) durante el
proceso de fermentación láctica de un vegetal………………. 31
Práctica No. 6 Determinación de linealidad, repetibilidad, reproducibilidad,
límite de detección y cuantificación durante la determinación
de azúcares reductores………………………………………... 37
Práctica No. 7 Determinación de aminoácidos libres por el método
espectrofotométrico de Ninhidrina……………………………. 43
Práctica No. 8 Determinación espectrofotométrica de vitaminas de interés
biotecnológico…………………………………………………... 48
Práctica No. 9 Determinación de cobre por espectroscopia de absorción
atómica en residuos agroindustriales………………………… 52
Disposición de residuos…………………………………………………………. 61
Referencias…………………………………………………………………………. 62
2
Objetivo y presentación del manual
El laboratorio de bioquímica analítica está ubicado en el cuarto semestre de la
carrera de Ingeniería en Biotecnología plan 2016, donde el estudiante adquirirá los
fundamentos y herramientas metodológicas para determinar la composición
bioquímica de materias primas y metabolitos de interés biotecnológico, mediante
técnicas analíticas clásicas e instrumentales, con la finalidad de monitorear
procesos biotecnológicos. La cual forma parte del bloque de “caracterización de la
materia prima utilizada en procesos biotecnológicos” cuya competencia es analizar
las propiedades físicas, químicas y biológicas de la materia prima, los agentes
biológicos y sus componentes utilizados en procesos biotecnológicos con base en
protocolos estandarizados y/o normatividad vigente.
En la sesión 1 de laboratorio se presentará el plan de trabajo, normas para trabajar

en el laboratorio, criterios de evaluación y los requisitos del reporte. A partir de la
sesión 2 se iniciará con el trabajo de laboratorio.
El presente manual consta de 9 prácticas de laboratorio. Las prácticas 1, 2, 3 y 4

consistirán en la caracterización de las materias primas para determinar su calidad
durante el desarrollo de los procesos biotecnológicos. En la práctica 5 se realizará
un proceso de fermentación láctica de un substrato vegetal para realizar el
monitoreo de la fermentación. Y en la práctica 6 se determinarán los principales
parámetros de validación de un método analítico.
Las prácticas 7 y 8 consistirán en la cuantificación de analitos de interés

biotecnológico, tales como aminoácidos y vitaminas. Finalmente, en la práctica 9 se
aplicará un método instrumental de espectrofotometría de absorción atómica para
la determinación de un metal.
Es importante mencionar que se utilizará el método investigativo durante el

desarrollo del curso de laboratorio, el cual consistirá en sesiones prácticas en el
laboratorio y sesiones en aula para la presentación de resultados y conclusiones.
Además, se programará al menos un examen de los fundamentos teóricos y
metodológicos de cada una de las prácticas.
Los autores del presente manual y los instructores del curso estamos seguros que
esta materia contribuirá en gran medida en la formación integral de los estudiantes.
3
Normas durante el trabajo de laboratorio
1. El estudiante debe asistir al laboratorio con bata blanca de algodón
abotonada, lentes de seguridad, guantes de nitrilo y zapato cerrado de tacón
corto, se recomienda utilizar pantalón durante las sesiones prácticas.
2. Durante la sesión práctica se debe manejar un cuaderno de notas exclusivo

para el laboratorio (bitácora), con las siguientes especificaciones: pasta dura,
anotar sólo con tinta, evitar borrones y tachones, no arrancar hojas, fechar y
foliar cada página. Al inicio de cada sesión de laboratorio se revisará en la
bitácora el diagrama de flujo de la práctica y el cuestionario.
3. Si no se cumplen los requisitos 1 y 2 el estudiante no podrá acceder al
laboratorio.
4. Los estudiantes serán responsables del manejo adecuado de los reactivos
durante la preparación de soluciones, cuidando de no contaminarlos. Así
como de su almacenamiento, tomando en cuenta siempre las medidas de
seguridad establecidas en los laboratorios.
5. El área de trabajo y en general el laboratorio debe de mantenerse limpio al
inicio y final de la sesión práctica. Es recomendable asignar un equipo por
sesión para que sea responsable de verificar la limpieza.
6. Los estudiantes deben asegurar la limpieza y el adecuado manejo de los
equipos de laboratorio, tales como balanzas, espectrofotómetros,
potenciómetros entre otros. Así como las mesas de trabajo y material.
7. Los reportes de laboratorio se entregarán de forma individual, la sesión
siguiente a la fecha de terminación de cada práctica. Estos serán diseñados
de acuerdo a los lineamientos establecidos en el presente manual. Los
resultados obtenidos en la práctica se revisarán al final de cada sesión en la
bitácora.
8. Para aprobar el curso es requisito asistir al 100% de las sesiones de
laboratorio, obtener calificación aprobatoria en los reportes y exámenes.
4
Lineamientos para la presentación del reporte de laboratorio
El reporte de laboratorio consistirá en un documento en Word, en el que se incluirá
el título de la práctica, seguido de los integrantes del equipo. El resto del reporte se
escribirá usando doble columna sin límite de páginas, con los siguientes
encabezados: introducción, metodología, resultados y discusión, conclusiones,
bibliografía.
La introducción debe incluir los antecedentes bibliográficos de la temática a

abordar en la sesión práctica, se debe escribir iniciando con información general a
particular del tema, al final de la introducción escriba el propósito o el objetivo de la
práctica.
La metodología consiste en describir los procedimientos y métodos utilizados para

el desarrollo de la práctica, deben citarse las referencias de los métodos utilizados.
Los resultados deben presentarse mediante tablas y figuras, realizar una
descripción clara de los resultados obtenidos. En la discusión debe expresar la
importancia de los resultados obtenidos y compararlos con conocimientos
publicados.
Las conclusiones son una descripción breve de los hallazgos más relevantes de la
sesión práctica, las cuales deben ser congruentes con el título y el objetivo de la
práctica.
Las referencias bibliográficas deben aparecer en la lista en el orden en que se

citan en el texto. Estas se escriben de acuerdo a: a) Organismos oficiales: siglas
del organismo, año, edición, título. b) Artículos científicos: autores iniciando por el
1er apellido seguido de las iniciales del segundo apellido y nombre(s), año de la
publicación, revista (journal), volumen y páginas. c) Libros: autores iniciando por el
1er apellido seguido de las iniciales del segundo apellido y nombre(s), año de la
publicación, edición, editorial, lugar, páginas.
A continuación, se muestra un ejemplo de reporte y la lista de verificación para la

evaluación.
5
Formato para la elaboración de reportes de laboratorio
Título del trabajo, centrado. Primera letra en mayúsculas, las siguientes en
minúsculas. Tamaño 12 en negritas. Tipo de letra Times New Roman
Nombre de los autores* (miembros del equipo, nombre y apellido) con letra tamaño 11. Nombre
de la institución educativa (centrado), Dirección de la Institución educativa. Dirección de correo
electrónico de un responsable para correspondencia (señalar con un asterisco).
Palabras clave: Palabra 1, palabra 2 y palabra 3
Introducción. Consiste en una laboratorio o la fuente de donde fue

descripción general del tema, dando la obtenida) y los equipos (modelo, marca)
información necesaria en forma precisa y utilizados dentro de una secuencia que
haciendo referencia a solo las muestre de manera concreta y lógica el
directamente relacionadas y consideradas desarrollo de la práctica (RCB, 2015). En
indispensables para el desarrollo del tema caso de presentarse modificaciones, deben
(RCB, 2015). De este modo, la detallarse. Si necesitas escribir nombres
introducción debe de proporcionar al científicos usa cursiva. Para los
lector una idea clara y precisa del estudio compuestos químicos usa formulas
que se realizó. Tata de no contener condensadas y su concentración en N, M,
muchos párrafos, revisa bien tu redacción g, g L-1 o %, según convenga. La palabra
para que uses preferentemente el punto y metodología deberá ser escrita en negrita,
seguido. No dejes espacios ente párrafos. el resto con letra normal usando Times
Las citas deben ir en formato APA entre New Roman a tamaño 12.
paréntesis y aparecer en la sección de
Resultados y discusión. En esta sección
referencias en orden alfabético (Lee,
se presentan los resultados cuantitativos y
2010; Melédrez & Silvestrini, 2014).
cualitativos obtenidos durante la
La palabra introducción va escrita en
experimentación, analizando si los
negrita, el resto del texto deberá de ir
resultados apoyan o no el objetivo de la
escrito en tamaño normal Times New
investigación. La redacción de los
Roman a tamaño 12, a dos columnas
resultados, comienza con un parrado de
justificado. Usa márgenes de 2 cm arriba
los resultados, la primera tarea que debe
y 1.5 en los tres lados de la página.
realizarse en esta sección es precisamente
Deberás optimizar el espacio para que
la de discutir, comentar y/o interpretar los
puedas escribir lo más importante de tu
hallazgos expuestos en los resultados. Si
trabajo, no uses sangría.
se tienen resultados negativos (contrarios
Al final de esta sección, en un párrafo
a lo esperado), deben ofrecerse sus
aparte deberá definirse el objeto de
posibles explicaciones. Los resultados
trabajo, el cual se refiere a la contribución
experimentales podrán presentarse en
que se pretende derivar del estudio (2).
tablas y figuras solo cuando estas sean
Para plantear el objetivo es indispensable
absolutamente necesarias, y deben de
conocer con detalle qué es posible lograr
estar explicadas de forma concisa pero
mediante la investigación; sólo asó se
completa en el texto. En caso de que los
fijan objetivos debidamente
resultados estén sustentados por análisis
fundamentados y susceptibles de
estadístico, deberá ser mencionado en la
alcanzarse (ITSON, 2009).
procedencia de los datos y el método
Metodología. Aquí deberán describir las estadístico empleado (RCB, 2015).
técnicas (ya sea citando el manual de
6
Las palabras resultados y discusión van Referencias. La literatura citada es un
con letra negrita, el resto del texto en letra elemento de vital importancia es todo
normal, en Time New Roman a tamaño escrito científico porque fundamenta las
12. afirmaciones del autor y permiten que el
En un espacio como este puedes colocar una lector amplíe el horizonte de sus
figura (foto, imagen, gráfica). Asegúrate de conocimientos, mediante la consulta de
escribir unidades correctamente, que los números
y símbolos sean los adecuados. Usa letra Times fuentes consignadas en la lista. Es
New Roman a tamaño 9. obligatorio consignar las citas completas
y en el idioma en el que dicha referencia
Figura1. Los títulos de las figuras van en
Times New Roman a tamaño 11. Las figuras se haya consultado. Además, es preciso
llevan una descripción corta al pie, Times New Roman tener presente que en las referencias se
a tamaño 9. incluyen libros, artículos, memorias de
Tabla 1. Se podrán insertar tablas. El titulo va congresos, páginas web, enciclopedias,
con letra Times New Roman a tamaño 11 en entre otros.
la parte superior de la tabla. La palabra referencias deberá ser escrita
Título de la Valor(es) Valor(es)
variable
en negritas. El resto del texto con letra
Datos Datos Datos normal Times New Roman a tamaño 12.
Datos Datos Datos Las citas se escribirán en letra a tamaño
Las tablas llevan una descripción corta al pie del 10, con sangría francesa de 0.5 cm.
significado de los acrónimos utilizados y el análisis Los formatos a continuación son para
estadístico realizo, usando Times New Roman a tamaño
9. artículo, capítulo de libro, y memorias de
El ancho de las líneas superior e inferior congreso, respectivamente (ITSON,
en las tablas, deberá ser de 1.5 puntos y en 2014).
caso de líneas centrales de 0.5 puntos Formato para artículo:
(ITSON, 2009). Apellido, inicial del nombre, Apellido, inicial del
nombre y Apellido, inicial del nombre. (Año).
Conclusiones. En la sección dedicada a Título del artículo. Abreviatura de la revista en
las conclusiones, deben presentarse, en cursiva. Vol. (número): pág.-pág.
forma breve, las implicaciones teóricas y Formato para capítulo de libro:
Apellido, inicial del nombre, y Apellido, inicial del
prácticas de los hallazgos del estudio. Es nombre. (Año). Título del capítulo. En: Título
importante cuidarse de no sobre del libro en letra cursiva. Apellido del editor e
generalizar; es decir, establecer inicial del nombre. Editorial. País de edición.
concusiones que no estén respaldadas por pág.-pág.
los resultados de la investigación. Otro Formato para trabajo de memorias de
aspecto importante a considerar en congreso:
Apellido, inicial del nombre. (Año). Título del
relación a las conclusiones son los
trabajo. Título de las memorias del congreso en
objetivos de estudio, ya que se deben letra cursiva. Entidad organizadora. Lugar de
analizar en medida que se lograron. En las realización. Fecha. pág.-pág.
conclusiones se deben analizar y evaluar Ejemplos de referencias:
los puntos principales de la investigación; ITSON. (2009). Manual de titulación para
éstas manifiestan el valor del estudio, así licenciatura y profesional asociado. Instituto
como el dominio que se tiene del tema. La Tecnológico de Sonora. Vicerrectoría
Académica. Ciudad Obregón, Sonora.
palabra conclusiones deberá ser escrita en ITSON. (2014). Normas para presentar artículos.
negrita, el resto del texto normal usando La Sociedad Académica. Núm. 44:58-52.
Times New Roman a tamaño 12. Lee, M. (2010). Guía para la elaboración de
trabajos utilizando el manual de estilo APQA
6ta. Ed. Consultado en:
7
http://es.slideshare.net/UPRBayamonBibliote Deberás comprometerte a llenar por lo
ca/apa6th-2010 menos una página y no más de dos,
Meléndrez, M. E. & Silvestrini, M. (2014). Citar
fuentes según APA. 6ta Edición. Formas
incluyendo referencias. No se
generales. Consultado en: aceptarán trabajos incompletos que
http://ponce.inter.edu/cai/manuales/Citar_fuen estén escritos en menos 80% del
tes_APA6ta.pdf espacio indicado ni aquéllos que
RCB. (2015). Instrucciones para los autores. Rev. carezcan de alguna de las secciones
Colomb. Biotecnol., XVII (1): 151-152. Nota: aquí citadas.
8
EJEMPLO DE REPORTE DE LABORATORIO
Fermentación láctica de los residuos de brócoli

Olga Nydia Campas-Baypoli*, Gisell Mendoza-Jiménez, Carolina Bueno-Solano, Dalia I. Sánchez-
Machado, Jaime López-Cervantes
Departamento de Biotecnología y Ciencias Alimentarias, Instituto Tecnológico de Sonora, 5 de
febrero 818 Sur, CP 85000, Cd. Obregón, Sonora, México. olga.campas@itson.edu.mx
Palabras clave: Fermentación láctica, residuos y brócoli.
Introducción. El brócoli aporta una contenido de sulforafano durante el

cantidad importante de fibra, proteína, proceso de fermentación. Además, se
vitaminas, minerales y fitoquímicos cuantificó la proteína cruda por el método
(USDA, 2008). El cultivo de brócoli microkjeldahl (AOAC, 1984) en la
genera residuos en el campo, tales como fracción sólida y líquida de los
las inflorescencias, tallos y hojas; estos fermentados. La cuantificación de
representan alrededor del 70% del sulforafano incluye la conversión de
volumen de la planta, por lo que su manejo glucorafanina a sulforafano (45 ± 2°C
y disposición es un problema para el durante 2,5 h), extracción con
agricultor. Además de los efectos diclorometano, purificación del extracto
negativos en el medio ambiente ya que se en columnas de extracción de fase sólida,
consideran como basura. Actualmente, la y detección por HPLC-UV.
recuperación y bioconversión de los
residuos vegetales a compuestos con valor
agregado está recibiendo mucha atención
(FAO, 2006). Por otro lado, la
fermentación láctica es un proceso
microbiano utilizado para preservar
alimentos, con el cual se mejoran las
propiedades sensoriales y nutricionales
(Bourgeois y Larpent, 1989). El objetivo
de esta investigación fue estudiar la
fermentación láctica de los residuos Figura 1. Homogenización de los residuos (A y B)
agrícolas de brócoli y cuantificar el y obtención de fermentados de brócoli.
contenido de sulforafano como índice de
su calidad nutrimental. Resultados y discusión. Las
Metodología. Los residuos de brócoli se fermentaciones sin adición de NaCl
presentaron una disminución del pH (Figura 2)
homogenizaron (tamaño de partícula <0.5
y un aumento de la acidez total titulable
cm2) en cutter (Figura 1A). La (Figura 3) por efecto del tiempo de
fermentación láctica (Figura 1C) se realizó fermentación, lo anterior no se observó en el
aplicando un diseño factorial 23, las resto de los tratamientos que contenían un 2 %
variables probadas fueron el volumen del de sal. Estos resultados difieren de los
inoculo, la concentración de sal y la reportados para fermentados de repollo en los
concentración de azúcar, la temperatura de cuales se utiliza sal como un ingrediente
incubación fue constante 35°C, el inoculo importante (Tolonen et al., 2002).
utilizado fue un probiótico comercial. Se
monitoreo el pH (AOAC, 1984), acidez
total titulable (AOAC, 1984) y el
9
este fitoquímico disminuyó
significativamente.
Figura 2. Monitoreo de pH durante la

fermentación láctica.
El contenido de proteína en la fracción

sólida y líquida de los fermentados Figura 4. Contenido de sulforafano en los
presentaron un rango entre 6.59 a 14.00 fermentados.
g/100 g materia seca y de 4 a 42 g/100 g
materia seca, respectivamente. Los polvos Conclusiones. La fermentación láctica de
obtenidos pueden ser una buena fuente de los residuos agrícolas del brócoli es una
proteína, que puede utilizarse en la alternativa viable para aprovechar sus
alimentación humana y animal. propiedades nutrimentales en la
alimentación.
Referencias.
AOAC. (1984). Official methods of Analysis. 14th
ed. Arlington, VA, USA: Official methods
of Analysis of the Association of Official
Analytical Chemists.
Bourgeois C.M. y Larpent J.P. (1989).
Microbiología Alimentaria. Editorial
ACRIBIA, S.A. Zaragoza, España. 153-
166.
FAO, Organización de las Naciones Unidas para la
Agricultura y la Alimentación.2006. Ficha
técnica del brócoli. http://www.fao.org.
Figura 3. Monitoreo de la acidez total titulable Kim, M.R.; Lee, K.J.; Kim, H.Y.; Kim, J.H.; Kim,
(%ATT) durante la fermentación láctica. Y.B. Sock, D.E. (1999). Effect of various
kimchi extracts on the hepatic glutathione
El efecto de la fermentación en el S-transferase activity of mice. Food
contenido de isotiocianatos en los Research International 31(5): 389-
vegetales crucíferos es controversial, 394Tolonen, M.; Taipale, M.; Viander, B.;
Pihlava, J.; Korhonen, H.; Riänen E. (2002).
algunos estudios sugieren que se mejora el Plant-Derived Biomolecules in Fermented
rendimiento, mientras en otros autores Cabbage. Journal of Agricultural and Food
reportan que se degradan (Kim et al., Chemistry 50:6798-6803.
1999). El contenido de sulforafano fue USDA. United States Department of Agriculture.
2008. National Nutrient Database for
mayor al inicio de la fermentación (Figura
Standard Reference. Agricultural research
4); sin embargo, a partir de las 12 horas Service.
10
Cédulas de evaluación
Bitácora
Cédula para la evaluación de bitácoras del Laboratorio de Bioquímica
Analítica
ALUMNO:
PRÁCTICA:
FECHA: / /
REVISOR:
I.
II.
III.
IV.
V.
VI.
VII.
VIII.
IX.
X.
XI.
XII.
CRITERIO PUNTOS SI NO OBSERVACIONES

ENCABEZADO (10 puntos)
Título de la práctica 5
Objetivo 5
DIAGRAMA DE FLUJO (40 puntos)
Describe la metodología de manera
detallada.
5
Lleva una secuencia lógica. 5
Presentan un análisis preparativo. 5
Ilustra la metodología a emplear
(métodos e instrumentos de medición).
5
Uso correcto de unidades de medición. 5
Ortografía (correcta escritura de
fórmulas y ecuaciones).
5
Claridad y congruencia. 5
Plan de análisis de datos. 5
ASIGNACIÓN (50 puntos)
Fundamento de las respuestas
(explicación detallada de lo solicitado).
20
Hace referencia a la fuente de
información (citas).
10
Bibliografía (Pertinencia y actualidad). 10
Formato de redacción de bibliografía
(formato APA).
10
TOTAL 100
11
Reportes
Cédula para la evaluación de reportes del Laboratorio de Bioquímica
Analítica
ALUMNO: FECHA: / /
PRÁCTICA: REVISOR:
CRITERIO PUNTOS SI NO OBSERVACIONES
ENCABEZADO
Título conciso, atractivo e informativo
ajustado a los límites del trabajo
5
Información institucional y de contacto 5
INTRODUCCIÓN
Define adecuadamente el enfoque del
estudio y presenta los antecedentes que 5
fundamentan el estudio
Lleva una secuencia lógica 5
Justificación y objetivo(s) 5
MATERIALES Y MÉTODOS
Análisis preparativo 5
Métodos e instrumentos de medición 5
Plan de análisis de datos 5
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Análisis de resultados 5
Claridad y congruencia 5
Presentación de resultados (imágenes,
diagramas, gráficos, tablas, entre otros.)
10
Comprensión e interpretación 5
Análisis comparativo 5
CONCLUSIONES
Propuesta de ideas 5
Deducciones e inferencias 5
BIBLIOGRAFÍA
Pertinencia y actualidad 5
Formato de redacción (APA) 5
FORMATO Y ESTRUCTURA
Redacción (tipografía, tamaño,
ortografía)
5
Presentación de párrafos (justificado) 5
TOTAL 100
12
Presentaciones
Cédula para la evaluación de presentaciones de avances del Laboratorio de
Bioquímica Analítica
GRUPO: FECHA: / /
EQUIPO: REVISOR:
PUNTOS
TÍTULO (0-3)
Es conciso, atractivo e informativo
Se ajusta a los límites del trabajo
INTRODUCCIÓN (0-5)
Define adecuadamente el enfoque del estudio y presenta
adecuadamente los antecedentes que fundamentan el estudio
Justificación y objetivo(s)
REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA (0-4)
Apoya la investigación
Lleva una secuencia lógica
MATERIALES Y MÉTODOS (0-2)
Análisis preparativo
Métodos y/o instrumentos de medición
Esquematización de métodos (representación gráfica)
Plan de análisis de datos
RESULTADOS (0-5)
Presentación
Claridad y congruencia
Información de apoyo (imágenes, diagramas, gráficos, tablas, entre
otros.)
DISCUSIÓN Y CONCLUSIONES (0-2)
Interpretación
Análisis
Propuestas
Conclusiones
REFERENCIAS (0-3)
Pertinencia
Actualidad
DINÁMICA DE LA PRESENTACIÓN (0-3)
Desenvolvimiento escénico
Dominio del tema
Claridad de la presentación
TOTAL
TIEMPO DE PRESENTACIÓN:
TIEMPO DE PREGUNTAS Y RESPUESTAS:
13
Sección de evaluación individual
PUNTOS
TIEMPO DE PREGUNTAS Y RESPUESTAS (0-30)
Nombre de alumno:
CALIFICACIÓN FINAL
Nombre de alumno:
CALIFICACIÓN FINAL
Nombre de alumno:
CALIFICACIÓN FINAL
Nombre de alumno:
CALIFICACIÓN FINAL
14
Práctica No. 1: Determinar el contenido de cenizas y humedad en
materias primas utilizadas en procesos biotecnológicos
I. INTRODUCCIÓN
Los nutrimentos inorgánicos llamados comúnmente minerales, son diversos
elementos químicos necesarios para el bienestar de un individuo, se ha demostrado
en cenizas de plantas, animales, microorganismos así como los seres humanos se
encuentran más de 60 minerales, estos contribuyen para diferentes funciones en el
organismo humano tales como la formación de sustancias estructurales,
controladores de reacciones enzimáticas, influencia en la actividad nerviosa y
mantenimiento del equilibrio de electrolitos y osmótico (Baltes. 2007; Baudi, 2013).
Los minerales se pueden clasificar en tres tipos, el primero como macroelementos
por su abundancia en el organismo y cuya necesidad es elevada (S, Ca, P y Mg), la
segunda clasificación: oligoelementos o elementos trazas, son los minerales que se
encuentra en concentraciones mínimas (Zn, Cu, Mn, Sn, Co,). Por último, los
electrolitos, estos usualmente están disueltos en agua en estado iónico como el Na,
K y el Cl (Adrian et al., 2000; Cervera et al., 2004)
Las cenizas representan la fracción correspondiente a los minerales del alimento.

Para su determinación se toma cierta cantidad de alimento previamente pesada y
se incinera totalmente en una mufla a 550°C. Toda la materia orgánica del alimento
se incinera y solo quedan los compuestos inorgánicos. A estas temperaturas se
produce la pérdida de ciertos minerales como el Ca y el P, y la volatilización de otros
como Na, K y Cl. La fracción resultante se denomina ceniza (Adrian et al., 2000;
Caravaca et al., 2008).
La humedad puede influir en gran medida en la fluidez de un material,

compresibilidad y cohesividad. En las industrias agrícolas y alimentarias, la
humedad excesiva puede conducir a productos alterados y contaminados. La
mayoría de los métodos tradicionales para determinar el contenido de humedad son
demorados, invasivos y requiere mano de obra intensiva. El método más común
para determinar el contenido de humedad es analíticamente a través de la pérdida
de peso mediante el método de secado en estufa, en el que el contenido de
humedad se determina a partir del cambio de peso de la muestra después de la
evaporación del agua absorbida en el horno. Otros métodos incluyen la valoración
de Karl Fischer, calorimetría diferencial de barrido y el microondas (Tirado, 2014).
II. OBJETIVO
Determinar el contenido de cenizas y humedad en materias primas por métodos
analíticos.
15
III. MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales Equipos
1 Desecador 1 Mufla
1 Piseta 1 Balanza analítica
3 Crisoles de porcelana 1 Termobalanza
3 Platos de aluminio 1 Horno de secado
1 Pinzas para crisol
1 Guantes de asbesto
1 Espátula
Reactivos
Agua destilada
IV. METODOLOGÍA
Tratamiento de la muestra
Previo a la práctica secar la muestra del vegetal seleccionado (paja de trigo, olotes,
grano de maíz, alfalfa, grano de trigo) a 60°C por 12 horas en horno de convección.
Determinación de cenizas método 923.03 (AOAC, 2005).

1. Previo a la práctica colocar 4 crisoles de porcelana limpios y secos a peso
constante por 2 horas a 550°C en mufla (cada crisol con su clave de
identificación).
2. Colocar los crisoles en desecador hasta enfriar.
3. Pesar y registrar los pesos con los 4 decimales de los crisoles en la balanza
analítica.
4. Colocar con espátula 2 g de muestra seca en los crisoles, registrando el peso
exacto.
5. Colocar los crisoles en la mufla, subir la temperatura gradualmente hasta los
550 °C aumentando la temperatura 100 °C cada 20 minutos.
6. Calcinar a 550°C por 12 horas hasta obtener unas cenizas blancas-
grisáceas, colocar los crisoles en desecador hasta enfriar.
7. Cuidadosamente pesar nuevamente los crisoles conteniendo las cenizas y
registrando su peso exacto.
Cálculos
𝐴−𝐵
𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑐𝑒𝑛𝑖𝑧𝑎 (%) = 2 6 × 100
𝐶
A = Peso del crisol con ceniza (g).

B = Peso del crisol (g).
C = Peso de la muestra (g).
Nota: Conservar las cenizas para la determinación de fósforo en la práctica no. 2
16
Determinación de humedad en termobalanza según NMX-F-428-1982.
1. Coloque el sujetador del plato de aluminio para la muestra, revisando que
este bien asegurada, para que el plato corra libremente sobre su soporte y
que esté limpio y seco.
2. Ajuste el porcentaje de humedad del 0% al 100 %.
3. Pese 1 g de la muestra en la misma balanza, cuidando distribuirla cuidadosa
y uniformemente en el plato.
4. Ajuste la potencia debidamente y baje la tapa de la balanza. La muestra
comenzará perder humedad y la manecilla se moverá hacia arriba. Después
de 15 minutos tome la lectura, asegúrese que permanezca estable durante 2
minutos, la cual se registrará como porcentaje total de humedad.
5. Realice el análisis por triplicado. La diferencia entre los valores extremos de
una serie de determinaciones efectuadas a unas mismas muestras por un
mismo analista, no debe ser mayor de 0.5% del valor promedio de todas las
determinaciones.
V. ASIGNACIÓN
1. Describa cada una de las determinaciones analíticas que integra un análisis
proximal de la materia prima seleccionada para la práctica, además incluya
la tabla de composición proximal.
2. ¿Por qué es importante la determinación de cenizas en una muestra?
3. Investigue al menos 3 métodos utilizados para la determinación de humedad,
además mencione en qué tipo de muestras se aplican.
4. ¿Cuál es la importancia de conocer el contenido de humedad y la actividad
de agua en las materias primas?
5. ¿Qué ventajas tiene el método de la termobalanza para la determinación de
humedad con relación a otros métodos?
VI. REFERENCIAS
Adrian, J., Potus, J., Poiffait, A., & Douvillier, P. (2000). Análisis nutricional de los
alimentos. Zaragoza España: Acribia.
AOAC (2005) Ash of Flour (Direct Method), Method 923.03. In: Official Methods of
Analysis, 18th Edition, AOAC International Publisher, Gaithersburg.
Badui Dergal, S., (2013), Química de los alimentos, 5ta edición, Editorial Pearson
Educación de México, S. A. de C. V., México, pág. 417-430.
Baltes W. (2007). Química de los alimentos.1ra edición, editorial Acribia, S.A.
España.
Caravaca Rodríguez, F., (2003). Introducción a la alimentación y racionamiento
animal. Universidad de Sevilla. pp. 6.
Cervera, P., Clapés, J., & Rigolfas, R. (2003). Alimentación y dietoterapia: nutrición
aplicada en la salud y la enfermedad (4a. ed.). España: McGraw-Hill España.
Retrieved from http://www.ebrary.com.
NMX-F-428-1982. Alimentos. Determinación de humedad (método rápido de la
termobalanza). Foods. Determination of moisture (thermobalance rapid
method). Normas Mexicanas. Dirección general de normas.
17
Tirado, Diego F, Montero, Piedad M, & Acevedo, Diofanor. (2015). Estudio
Comparativo de Métodos Empleados para la Determinación de Humedad de
Varias Matrices Alimentarias. Información tecnológica, 26(2), 03-
10. https://dx.doi.org/10.4067/S0718-07642015000200002.
VII. DIAGRAMA ECOLÓGICO
18
Práctica No. 2: Determinar el contenido de fósforo en materias primas
utilizadas en procesos biotecnológicos
I. INTRODUCCIÓN
El fósforo es un elemento importante y es un elemento químico muy reactivo y se
oxida espontáneamente en contacto con oxígeno atmosférico. Se relaciona
directamente con todas las reacciones de transferencia de energía que ocurren en
los seres vivos. En las plantas, el fósforo, es almacenado en las semillas y/o frutos,
que con el tiempo se convertirán en leguminosas. Además, es ampliamente
distribuido en el organismo humano; se encuentra en el cuerpo casi exclusivamente
en forma de fosfato, principalmente en la sustancia ósea inorgánica y constituye el
principal anión encontrado dentro de las células, componente estructural de
sustancias fisiológicamente importantes: fosfolípidos y los ácidos nucleicos, así
como en el adenosintrifosfato, que constituye una significativa fuente de energía
(Correa y Oviedo, 2017; García et al., 2009).
El análisis químico de fósforo implica 2 etapas básicas, la conversión de la forma

del fósforo que interesa determinar a ortofosfato disuelto. Esto se logra mediante
hidrólisis o digestión oxidante con ácido sulfúrico. Cuando se quiere distinguir entre
la forma disuelta y la suspendida, se realiza un filtrado por membrana y para la
determinación colorimétrica de ortofosfatos se utilizan 3 métodos diferentes: ácido
vanadomolibdofosfórico, cloruro de estaño (II) y acido ascórbico (Severiche &
Gonzalez, 2012). Este último se basa según el método de la AOAC 995.11 en la
formación de un complejo coloreado de fosfomolibdato [(MoO2.4MoO3)2 H3PO4] que
en presencia de ácido ascórbico se reduce a azul de molibdeno y cuya absorbancia
se lee a una longitud de onda de 660 nm.
II. OBJETIVO
Determinar el contenido de fósforo en materias primas por métodos analíticos.

Materiales Equipos
1 Desecador 1 Balanza analítica
3 Vidrios de reloj 1 Campana de extracción
3 Matraz volumétrico de 100 ml 1 Parrilla eléctrica
6 Matraces volumétricos de 25 ml
5 Pipetas graduadas de 10 ml
5 Pipetas graduadas de 5 ml
1 Varilla de vidrio
1 Perilla
1 Piseta.
19
Reactivos
Ácido clorhídrico (HCl) concentrado
Solución madre de fosfato (PO4)-2 de concentración 25 µg/ml.
Disolución 1 (tampón pH 4)
Pesar 34 g de acetato de sodio trihidratado, disuelva en agua y mezcle con
57 ml de ácido acético glacial, complete a 1 litro con agua destilada, ajuste
el pH 4.
Disolución de ácido oxálico al 0.5%
Disolver 0.5 g de ácido oxálico en agua destilada y llevar a un volumen
final de 100 ml.
Disolución 2 (ácido ascórbico)
Disolver 1 g de ácido ascórbico en solución de ácido oxálico 0.5% y
complete a un volumen final de 100 ml.
NOTA: preparar la disolución 2 el día de su uso.
Disolución 3 (molibdato de amonio sulfúrico)
Diluir 75 ml de ácido sulfúrico en 200 ml de agua, los cuales se adicionan
a una solución que contiene 25 g de molibdato de amonio disueltos en 300
ml de agua (575 ml volumen final).
IV. METODOLOGÍA
Muestra
1. Cenizas obtenidas de la práctica No. 1.
Determinación de fósforo total en alimentos método espectrofotométrico del

molibdato de amonio (AOAC No. 995.11)
Curva de calibración
Utilizando una solución madre de fosfato (PO4)-3 con una concentración de 25 ppm
(µg/ml): prepare en matraces volumétricos de 25 ml soluciones de trabajo de fosfato
(PO4)-3 de 1, 5, 10, 15, 20 y 25 ppm (µg/ml) (Tabla 1).
Tabla 1. Diluciones para obtención de la curva de calibración.

Puntos de la curva Volumen de solución Volumen de agua
concentración (µg/ml) madre (ml) destilada (ml)
Blanco - 25
1
5
10
15
20
25
Las diluciones se realizan a partir de la solución madre.
20
1. Utilice los crisoles con las cenizas obtenidas de la práctica No. 1.
2. Agregue en el crisol con cenizas 5 ml de agua, seguido de 5 ml de ácido
clorhídrico concentrado, cubra el crisol con un vidrio reloj y sométalo a
ebullición cuidadosamente durante 5 minutos en parrilla de calentamiento,
evite que se seque.
3. Una vez alcanzada temperatura ambiente, transfiera cuantitativamente a un
matraz aforado de 100 ml con agua destilada y afore con agua destilada.
Reacción para la determinación de fósforo

1. Agregue a un matraz volumétrico de 50 ml un volumen de 2.5 ml de las
diferentes soluciones de la curva estándar o muestra.
2. Adicione a cada matraz un volumen de 5 ml de la disolución 1, posteriormente
0.5 ml de la disolución 2 y finalmente 2.5 ml de la disolución 3.
3. Mezcle después de cada adición y afore cada matraz con agua destilada.
4. Leer la absorbancia del blanco y la curva con concentraciones de 1-25 µg/ml:
de solución estándar de (PO4)-3 en un espectrofotómetro UV/VIS a una de
longitud de onda de 660 nm.
5. A continuación, tome las lecturas de absorbancia de las muestras.
NOTA: La medición de la curva estándar como de las muestras, debe realizarse después de
transcurrir los 30 minutos de la adición de la disolución 3.
Cálculos
Realice la curva estándar relacionando los resultados de absorbancia obtenidos de
las soluciones de trabajo de fosfato en Microsoft Office Excel. Para obtener la
ecuación de la recta y el coeficiente de correlación.
Una vez obtenida la curva estándar utilícela para calcular la concentración de

fosforo en las muestras, debe considerar el peso de la muestra y las diluciones
realizadas. Además, los resultados se reportarán como el promedio ± desviación
estándar.
V. ASIGNACIÓN
1. ¿Por qué es importante la determinación de fósforo en materias primas?
2. Describa el fundamentó para la determinación de fósforo.
3. Describa por qué es importante determinar fosfatos en agua.
VI. REFERENCIAS
Correa, A.E. & Ovideo, A. C, (2017). estudio de un método para determinar fósforo
en leguminosas mediante espectroscopia ultravioleta visible.InfoAnalitico.
Official methods of analysis of AOAC International, (2012). Method 995.11,
phosphorus (total) in foods. AOAC international, Suite 500, Maryland, USA.
Sereviche-Sierra, C. & Gonzalez-Garcia, H. (2012). Determinación de fosfato en
aguas por método colorimétrico. Validación del método.Quimica Hoy
Chemistry Sciences. 2(3), 28-32.
21
22
Práctica No. 3: Determinar el contenido de nitrógeno en materias
primas utilizadas en procesos biotecnológicos
I. INTRODUCCIÓN
El nitrógeno es uno de los macro nutrientes que comúnmente son absorbidos por
las plantas y su contribución al suelo puede ser inorgánica o orgánica. Por lo tanto,
la materia orgánica y la fijación biológica de los microorganismos son una fuente
importante de este nutriente. El cual es vital para el crecimiento y desarrollo de la
flora (Restrepo, 2016). Para la determinación de nitrógeno total el método más
utilizado es el Kjendhal, el cual se caracteriza por el uso de ebullición del ácido
sulfúrico concentrado que efectúa la destrucción oxidativa de la materia orgánica de
la muestra y la reducción del nitrógeno orgánico a amoníaco, el amonio es retenido
como bisulfato de amonio y puede ser determinado in situ o por destilación alcalina
y titulación (FAO, 1997).
La cuantificación de nitrógeno total y estimación del contenido de proteína bruta

puede realizarse a través de los métodos Kjeldahl y de Dumas entre otros. Por otro
lado la cuantificación directa se realiza por los métodos de Lowry, Millon,
Xantoproteico, Bradford y Biuret principalmente (Adrian et al., 2000).
II. OBJETIVO
Determinar el contenido de nitrógeno en materias primas por métodos analíticos.

Materiales Equipos
1 Desecador 1 Balanza analítica
3 Crisoles de porcelana. 1 Campana de extracción
1 Matraz volumétrico de 100 ml 1 Digestor Digesdahl (HACH)
2 Pipeta volumétrica de 10 ml 1 Espectrofotómetro (HACH)
2 Pipeta volumétrica de 5 ml
3 Vasos de precipitado de 50 ml
5 Perlas de carburo de silicio.
1 Probeta de 50 ml.
1 Piseta.
Reactivos
Ácido sulfúrico concentrado grado analítico (H2SO4).
Peróxido de hidrogeno (H2O2).
Indicado TKN (HATCH).
Agua destilada
Hidróxido de sodio 1N.
Reactivo de dispersión Alcohol polivinílico (HACH).
Reactivó de Nessler (HACH).
23
IV. METODOLOGÍA
Muestra
1. Muestra seca utilizada en la práctica No. 1.
Determinación de nitrógeno Kjeldahl por el método Nessler

Digestión en digesdahl
1. Transferir una cantidad de 0.3 g en caso de muestras sólidas y un peso de 5
g en caso de muestras líquidas a un matraz volumétrico de digestión de 100
ml.
2. Agregue al matraz con una pipeta graduada 4 ml de ácido sulfúrico
concentrado, además adicione 5 perlas de carburo de silicio para el control
de la ebullición en caso de ser necesario (muestras viscosas).
3. Encienda la campana de extracción y programe el equipo a una temperatura
de 440°C.
4. Coloque la pesa sobre el matraz de digestión y posteriormente la columna de
fraccionamiento con el embudo sobre el matraz. Colocar el conjunto sobre la
placa calefactora y calentar hasta ebullición (Figura 1).
5. Calentar 3-5 minutos. No dejar que la muestra hierva hasta evaporarse del
todo.
6. En una probeta de 50 ml añada 10 ml de peróxido de hidrógeno al 50%.
7. Añadir el peróxido de hidrogeno al 50% a la muestra carbonizada a través
del embudo de la columna de fraccionamiento.
8. Cuando termine de añadir el peróxido de hidrógeno, elimine por ebullición el
peróxido en exceso calentando durante más de un minuto.
9. Una vez eliminado el exceso de peróxido de hidrógeno retire la columna de
fraccionamiento y el embudo.
10. Retirar el matraz caliente de la placa calefactora y colóquela en la base de
porcelana hasta enfriar a temperatura ambiente, finalmente afore el matraz
de 100 ml con agua destilada.
Nota: Si la muestra está visiblemente turbia, filtrar o esperar a que las partículas se depositen
en el fondo y la parte superior de la solución esté limpia.
11. El siguiente paso es realizar el método colorímetro de nitrógeno Kjedahl, que
se describe a continuación.
24
Figura 1. Equipo de Digestión Digesdahl
Fuente: HACH (1998).
Métodos colorimétricos, Nitrógeno Total Kjedahl (NTK)

Consultar el método indicado en el espectrofotómetro o en el colorímetro para
realizar el análisis de NTK. La técnica que se describe a continuación es sólo
indicativa en caso de no disponer de un método.
1. En un matraz volumétrico de 25 ml pipetear 1 ml del producto de digestión

de la etapa anterior (muestra) o 1 ml de agua destilada para el blanco (blanco
reactivo).
Nota: Para una muestra con bajo contenido de nitrógeno se deberá utilizar un volumen
mayor. Por ejemplo: una muestra con un contenido estimado entre 11 y 560 mg/l de
nitrógeno se debe agregar 10 ml. En el caso de muestras con un contenido de nitrógeno
estimado entre 45 y 2250 mg/l utilice 5 ml.
2. Posteriormente en el matraz volumétrico de 25 ml agregue las siguientes

soluciones en el orden indicado:
a) Una gota de indicador nitrógeno total kjeldahl (NTK).
b) Añada gota a gota la solución de hidróxido de potasio (KOH) 8 N
agitando cada vez hasta la aparición de un primer color azul claro (pH
3).
c) Añada una gota de KOH 1 N. Tape el matraz e invierta varias veces
para mezclar.
d) Continúe añadiendo KOH 1 N hasta que aparezca un color azul
estable.
e) Añada 18 ml de agua destilada.
f) Agregue 3 gotas de estabilizador mineral y agite.
g) Posteriormente se añada 3 gotas de alcohol polivinílico y agite
25
h) Proceda a aforar el matraz de 25 ml con agua destilada y agregue 1
ml de reactivo de Nessler.
3. Homogenice el matraz y dejar reposar por 2 minutos.
4. Tome la lectura de absorbancia en un espectrofotómetro Hach a 460 nm
(prediseñado para medir nitrógeno total).
5. Calcule el nitrógeno total Kjeldahl con la siguiente fórmula:
(75)𝐴
𝑃𝑃𝑀 =
𝐵∗𝐶
Donde:
PPM= Partes por millón
A = Lectura de la muestra en mg/L.
B = Peso en gramos de la muestra.
C = Volumen de la alícuota (ml) que se usó para el análisis.
V. ASIGNACIÓN
1. ¿Cuáles son las ventajas y las desventajas del método digesdahl para la
determinación de nitrógeno?
2. ¿En qué consiste el fundamento del método de la determinación de nitrógeno
por Kjendahl?
3. Describa los métodos de Lowry, Bradford y Biuret para la determinación de
nitrógeno.
VI. REFERENCIAS
FAO. (1997). Producción y manejo de datos de composición química de alimentos
en nutrición. 13/12/2018, de Dirección de Alimentación y Nutrición Oficina
Regional de la FAO para América Latina y el Caribe Sitio web:
http://www.fao.org/docrep/010/ah833s/Ah833s17.htm.
Restrepo, O. M., Flores J. C. & Arboleda, F. (2016). Influence of management
systems on the nitrogen mineralization and fertilization of sugarcane. Revista
Facultad Nacional de Agronomía Medellín, 69(1), 7755-
7762. https://dx.doi.org/10.15446/rfna.v69n1.54742
26
Práctica No. 4: Cuantificación de lípidos por el método de Bligh y Dyer
I. INTRODUCCIÓN
Las grasas o lípidos son un grupo muy heterogéneo y amplio de compuestos que
difieren tanto en su naturaleza como en su organización y cumple diferentes
funciones, suelen tener cadenas más o menos largas de ácidos grasos con el
alcohol trivalente glicerol (triglicéridos). Además, son insolubles en agua, pero
solubles en disolventes orgánicos. Están constituidos por carbono, hidrógeno y
oxígeno que forman cadenas hidrocarbonadas alifáticas o aromáticas, que también
contienen fósforo y nitrógeno, su presencia en los alimentos se divide en tres
aspectos: calidad, nutrición y biológico. Además, participan indirectamente en la
textura. Otros lípidos son pigmentos, hormonas o vitaminas y forman parte de las
membranas celulares y en la transportación de nutriente que también actúa como
aislantes naturales en los hombres y animales regulando su temperatura (Caravaca
et al., 2003; Baudi, 2013).
Los ácidos grasos son el constituyente primario de la mayoría de los lípidos cuya
estructura es una cadena alifática (abierta, lineal) de carbono entre los 4 y 22, con
un grupo funcional carboxilo. El cual le confiere su carácter químico de ácido
orgánico débil, y le permite unirse químicamente a otros grupos, como, por ejemplo,
a los OH del glicerol. Los ácidos grasos se clasifican en función de la cadena
carbonada, diferenciándose los ácidos grasos saturados, los monoinsaturados con
un doble enlace y los poliinsaturados con dos o más dobles enlaces (FAO, 2012;
Cervera et al., 2004).
También los lípidos se pueden definir como un conjunto de sustancias no polares,

para su extracción se aprovecha esta propiedad, para cualquier cuantificación es
necesario extraer los lípidos de cualquier medio que se encuentre, si buscar otra
característica de su naturaleza química. Los métodos de extracción de lípidos
totales más utilizados son los de soxhlet, Foch y Bligh-Dyer, donde suelen utilizar
solventes como cloroformo y metanol, para desplazar los lípidos de la muestra y
disolverlos en la fase clorofórmica mientras que la parte superior se encuentran las
sustancias no lipídicas (Baltes et al., 2007).
II. OBJETIVO
Determinar el contenido de lípidos en una muestra vegetal por método de Bligh and
Dyer.

Materiales Equipos
1 Desecador Campana de extracción
1 Vórtex Horno de secado
1 Soporte universal Balanza analítica
1 Pinzas
27
2 Espátulas
12 Tubos de ensaye 16x150 mm con
tapón de rosca
1 Gradilla
1 Mortero con pistilo
2 Pipetas volumétricas de 10 ml
2 Perillas
3 Papel filtro Whatman No. 41
Reactivos
Cloroformo 40 ml
Metanol 20 ml
IV. METODOLOGÍA
Previo a la Práctica
1. Lave y seque 6 tubos de ensayo de 10 ml con tapón de rosca, rotúlelos con
una clave de identificación.
2. Coloque los tubos a peso constante en horno 120°C por 2 horas, registre el
peso de los tubos y almacene en el desecador.
1. Pese 5 g de la muestra seca y triturada obtenida en la práctica No. 1 en vidrio
de reloj.
Método de Bligh y Dyer, 1959

1. Pese 0.5 g de muestra en un tubo de ensayo (por quintuplicado).
2. Agregue 5 ml de una mezcla de cloroformo:metanol (2:1).
3. Agite por 2 minutos en vórtex.
4. Filtre la mezcla en papel filtro Whatman No. 41 cuidando de no vaciar los
sólidos.
5. Recupere la mezcla del solvente en un tubo de ensayo previamente puesto
a peso constante.
6. Adicione 5 ml de solvente al tubo con muestra para una doble extracción y
agite por 2 minutos en vórtex.
7. Filtre la mezcla recuperando el solvente (cloroformo:metanol, 2:1) en el tubo
de ensayo con el primer filtrado.
8. Utilice 3 ml de solvente (cloroformo:metanol, 2:1) para arrastrar los residuos
de la muestra y filtrar de nuevo. Adicionar al tubo en donde se colectaron los
filtrados anteriores.
9. Seque la fracción de clororformo:metanol en un horno a 70°C por 12 horas
hasta peso constante.
10. El porcentaje de lípidos se calculará por diferencia de peso.
28
Cálculos
Para la determinación del contenido de lípidos (%) se implementara la siguiente
fórmula:
𝑃! − 𝑃"
𝐶𝑜𝑛𝑡𝑒𝑛𝑖𝑑𝑜 𝑑𝑒 𝑙í𝑝𝑖𝑑𝑜𝑠 (%) = 2 6 × 100
𝑃#
Pf = Peso final del tubo más los lípidos.

PI = Peso del tubo a peso constante.
Pm = Peso de la muestra.
V. ASIGNACIÓN
1. Defina el término lípido, además describa su clasificación.
2. Clasifique las siguientes moléculas: aceite de oliva, colesterol, progesterona,
vitamina A, lanolina, lecitina, esfingomielina, tripalmitina, fosfatidilcolamina,
gangliósido, testosterona, de acuerdo al esquema de clasificación de los
lípidos.
3. Mencione tres aplicaciones de la determinación de lípidos en un proceso
biotecnológico.
4. Describa los métodos son utilizados a nivel industrial para la extracción y
cuantificación de lípidos.
5. ¿Cuál es el fundamento de la determinación de lípidos por el método de Bligh
y Dyer? Menciona sus ventajas y desventajas respecto los métodos
tradicionales.
VI. REFERENCIAS
Baltes W.(2007).Química de los alimentos.1ra edición, editorial Acribia, S.A.
España.
Bligh, E. & Dyer, W. “A rapid method of total lipid extraction and purification”. Journal
Biochemical Physiology, vol. 37, No. 8, pp. 911-917, 1959.
Caravaca Rodríguez, F.P.; Castel Genis, J.M.; Guzmán Guerrero, J.L.; Delgado
Pretiñes, M.; Mena Guerrero, Y.; Alcalde Aldea, M.J. y González
Redondo.(2008). Bases de la Producción Animal. España: Universidad de
Sevilla. Secretariado de publicaciones. 520 pag.
Retrieved from http://www.ebrary.com
FAO (Organización de las Naciones Unidas para la Alimentación y la Agricultura).
(2012). Grasas y ácidos grasos en nutrición humana consulta de expertos.
Capitulo 3. Disponible en: http://www.fao.org/docrep/017/i1953s/i1953s.pdf
29
30
Práctica No. 5: Monitoreo de pH y Acidez Total Titulable (ATT) durante
el proceso de fermentación láctica de un vegetal
I. INTRODUCCIÓN
Los procesos fermentativos se utilizan actualmente no solo para la conservación de
los alimentos, sino también para conferirles un mejor aroma y mayor digestibilidad.
El proceso fermentativo, en la mayor parte de los casos, permite la prolongación de
la vida útil no tanto del alimento tal cual, sino de sus principios nutritivos, dando así
origen a un producto cuyo estado físico se ha modificado para presentar
características organolépticas propias y típicas (Casp y Abril, 2003).
El término fermentación se refiere a la obtención de energía en ausencia de

oxígeno. La fermentación se define como el catabolismo anaeróbico por el cual
ocurren transformaciones de sustancias orgánicas en compuestos más simples
gracias a la acción de enzimas o microorganismos. El tipo de fermentación se
caracteriza de acuerdo a los productos finales generados, por ejemplo: láctica,
alcohólica, acética, butírica. Los productos que se obtienen a partir de la
fermentación pueden ser deseables como el yogurt, queso, vino, cerveza, o
indeseables como la producción de ácido acético a partir del etanol, así como la
producción de olores desagradables en los alimentos por la obtención del ácido
butírico. Uno de los métodos más antiguos para preservar alimentos es la
fermentación ácido-láctica, método que además logra mejorar las propiedades
sensoriales y nutricionales de los alimentos (Madigan et al., 2003).
La fermentación láctica es aquella en la cual el ácido se produce in situ por la acción

de bacterias lácticas que parten de una fuente de carbohidratos y los causantes de
dicha reacción pueden ser microorganismos pertenecientes a la microflora natural
o bien ser cultivos iniciadores. La utilización de cultivos iniciadores mejora la
eficiencia del proceso de fermentación (Tolonen et al., 2002).
A continuación, se presentan ejemplos de fermentaciones realizadas en diferentes

substratos reportados en la literatura.
Fermentación láctica de residuos de camarón (Tabla 1). Rao y Stevens, 2006: Se

utilizaron cepas de Lactobacillus plantarum para la fermentación de los residuos. La
mayor producción de ácido láctico fue a las concentraciones de 0 y 2% de sal. La
mayor producción de biomasa se obtuvo a las 12 h.
31
Tabla 1. Condiciones utilizadas para la fermentación láctica de los residuos de
camarón.
Ingrediente/Factor Condiciones
Residuo de camarón 200 g
Sal 0.2%
Inóculo 10%
Ácido acético glacial 5 ml (pH 6)
Glucosa 5%
Temperatura 30°C
Fermentación de repollo morado para obtener “Kimchi” (Tabla 2). Kim et al., 1999:
la fermentación se realizó en frascos de vidrio a 20°C por tres días, 600 g repollo se
cortan piezas (2 a 4 cm), se adiciona la sal y se reposa por 2 horas. Posteriormente
se mezcla con el polvo de pimiento rojo, ajo picado, cebolla verde picada y jengibre.
Se determinó el pH y la acidez durante la fermentación. La proporción de
ingredientes utilizada se muestra en la tabla siguiente.
Tabla 2. Condiciones utilizadas para la fermentación del repollo morado.

Ingrediente Proporción (%)
Repollo morado 92
Sal 2
Pimiento rojo 2
Ajo 1.5
Cebolla verde 1.5
Jengibre 1
Total 100
Fermentación de repollo para obtener Sauerkraut (Tabla 3). Tolonen et al., 2002:
la fermentación se realizó utilizando un cultivo iniciador y se comparó con la
fermentación espontánea. Los análisis se realizaron en las porciones sólidas y
líquidas después de prensar.
Tabla 3. Condiciones de fermentación del repollo

Ingrediente/Factor Condiciones
Repollo blanco 20 kg
Sal 0.9% (57% NaCl, 28% KCl)
pH 3.9
Temperatura 20°C
32
II. OBJETIVO
Monitorear el proceso de fermentación láctica de un substrato vegetal mediante la
determinación de pH y ATT para registrar los cambios generados por el proceso
aplicado.

Materiales Equipos
1 Licuadora 1 Espectrofotómetro UV-Vis
1 Espátula 1 Celdas del espectrofotómetro
1 Cuchara 1 Potenciómetro
1 Matraz volumétrico de 50 ml
1 Matraz volumétrico de 500 ml
1 Probeta de 50 ml
tapón de rosca
1 Gradilla
1 Baño maría
1 Parrilla de agitación
1 Recipiente de plástico de 1L con
tapa (alumno)
Papel aluminio
Reactivos
Agua destilada
25 g de ácido cítrico grado reactivo (se utilizará en caso que se requiera ajustar el
pH del substrato).
25 g de sacarosa comercial.
160 ml de Yakult
10 g de NaCl comercial
Buffers pH 10 y 4 para calibrar el potenciómetro
1.4 g de NaOH
33
IV. METODOLOGÍA
Activación del inóculo
1. Como inóculo utilice el probiótico comercial Yakult, el cual se activará 48
horas antes de la realización de la práctica.
2. Para su activación mida con una probeta 50 ml del probiótico y colóquelo en
un matraz Erlenmeyer de 500 ml.
3. Después adicione 350 ml de agua destilada y un 5 % de sacarosa comercial,
homogenice e incube a 37ºC por 48 h.
4. Registre la absorbancia del cultivo a las 0, 24 y 48 horas a 535 nm en
espectrofotómetro UV-vis, utilice como blanco una solución de sacarosa al
5% disuelta en agua.
Fermentación del substrato

Nota: Cada equipo seleccionará un substrato diferente para la realización de la práctica.
1. El substrato vegetal se lavará con agua corriente para eliminar partículas de
tierra, posteriormente se homogenizará en un procesador o de forma manual
para disminuir el tamaño de partícula.
2. Coloque 400 g del substrato homogenizado en recipientes de vidrio o plástico
de 1 litro con tapa.
3. Adicione un 2% de sal con base al peso del substrato, homogenice y deje
reposar durante 15 minutos la mezcla.
4. Finalmente adicione un 35% del probiótico comercial Yakult previamente
activado.
5. Mida el pH de la mezcla anterior y ajústelo si es necesarios a un pH de 4.5,
para ajustar el pH utilice una solución de ácido cítrico al 5%.
6. Incube la mezcla a 30°C en incubadora.
7. Monitoree el proceso de fermentación midiendo el pH y ATT a las 0, 4, 16,
24, 48 h con el fin de confirmar la estabilidad del fermentado durante todo el
proceso.
Pruebas para monitorear la fermentación

Medición de pH
1. Se determinará el pH utilizando el potenciómetro, previamente calibrado con
soluciones buffer de pH 10 y pH 4. La lectura del pH se realizará directamente
en la muestra hasta tener un valor constante.
Determinación de acidez total titulable (ATT)

1. Esta determinación se realizará por triplicado.
2. Pese 1 g de muestra líquida en un vaso de precipitado de 50 ml.
3. Adicione 10 ml de agua destilada y se agite.
4. Mida el pH inicial y regístrelo.
34
5. Titule la muestra con una solución de NaOH 0.1 N hasta obtener un pH final
de 8.4. Registre los ml de NaOH gastados.
Cálculos
Para la determinación del porciento de acidez total titulable (%ATT), cuantificado
como ácido láctico producido por medio de la siguiente fórmula:
𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝑂𝐻 × 0.009
𝑃𝑜𝑟𝑐𝑒𝑛𝑡𝑎𝑗𝑒 𝑑𝑒 𝑎𝑐𝑖𝑑𝑒𝑧 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑡𝑖𝑡𝑢𝑙𝑎𝑏𝑙𝑒 (%𝐴𝑇𝑇) = 2 6 × 100
𝑔 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
1. Presente los datos obtenidos del pH y ATT en gráficas.

2. Los resultados de la práctica se verificarán en la bitácora para
comprobar el adecuado comportamiento al final el monitoreo de la
fermentación o antes de realizar el reporte de laboratorio.
V. ASIGNACIÓN
1. Investigue las reacciones bioquímicas que se llevan a cabo durante el
proceso de fermentación láctica de un substrato.
2. Investigue el fundamento de la determinación de pH, acidez total titulable.
3. Investigue los factores que se deben controlar durante un proceso
fermentativo.
4. Mencione las principales características que distinguen a las bacterias
lácticas.
5. Defina que es un probiótico.
VI. REFERENCIAS
Casp A, Abril J. (2003). Procesos de conservación de alimentos. 2da. Edición,
Editorial Mundi-Prensa, 494 p.
Kim, M.R.; Lee, K.J.; Kim, H.Y.; Kim, J.H.; Kim, Y.B. Sock, D.E. (1999). Effect of
various kimchi extracts on the hepatic glutathione S-transferase activity of
mice. Food Research International 31(5): 389-394.
Madigan M. & Martinko, Parker J. (2003). Brock biología de los microorganismos.
10ma. Edición, editorial Pearson Educación. Madrid España, 1011 p.
Rao, M. S., & Stevens, W. F. (2006). Fermentation of shrimp biowaste for chitin
production. Food and Bioprocess Technology, 44(1), 83-87
Tolonen, M.; Taipale,M.; Viander, B.; Pihlava, J.; Korhonen, H.; Riänen E. (2002).
Plant-Derived Biomolecules in Fermented Cabbage. Journal of Agricultural and
Food Chemistry 50:6798-6803.
35
VIII. DIAGRAMA ECOLÓGICO
36
Práctica No. 6: Determinación de linealidad, repetibilidad,
reproducibilidad, límite de detección y cuantificación durante la
determinación de azúcares reductores
I. INTRODUCCIÓN
La validación es el proceso establecido para la obtención de pruebas documentadas
y demostrativas de que un método de análisis es lo suficiente fiable y reproducible
para producir el resultado previsto dentro de intervalos definidos. La validación
proporciona un alto grado de confianza y seguridad del método analítico y se realiza
con carácter obligatorio cuando se desarrolla un nuevo procedimiento, ya que
permite asegurar que el método propuesto es factible (Fernández et al., 2002).
La adecuada estandarización de un método o ensayo analítico es aquel proceso por

el cual se establece mediante estudios de laboratorio que satisface los requisitos
para las aplicaciones deseadas; esta capacidad se expresa en términos de
parámetros de análisis, donde se tiene en cuenta la linealidad, precisión
(repetibilidad y reproducibilidad), exactitud, especificidad, sensibilidad, entre otros,
en dependencia del objetivo deseado (Gutiérrez et al., 2000; Soto et al., 2002).
En la actualidad es muy importante la validación de métodos y procesos que

permitan mayor confiabilidad en los resultados, fundamentalmente cuando se
trabaja con productos naturales, donde es necesario obtener datos y resultados
experimentales que demuestren la aptitud para el uso que se destina (Gutiérrez et
al., 2000).
II. OBJETIVO
Determinación de linealidad, repetibilidad, reproducibilidad, límite de detección y
cuantificación de un método espectrofotométrico para la determinación de azúcares
reductores.

I. Materiales Equipos
1 Celdas de cuarzo 1 Balanza analítica
1 Piseta 1 Espectrofotómetro UV-vis
1 Espátula
1 Probeta de 50 ml
tapón
1 Gradilla
1 Tripié
37
1 Tela de asbesto
1 Mechero de Bunsen
1 Parrilla de agitación magnética
2 Micropipetas de 100-1000 µl
20 Puntas para micropipetas de 100-
1000 µl
1 Agitador magnético
Reactivos
Agua destilada
1 g de glucosa grado reactivo
1.4 g de hidróxido de sodio (NaOH)
0.75 g de ácido 3,5-dinitrosalicilico (DNS)
21.6 g de tartrato de sodio y potasio (KNaC4H4O6)
0.54 g de fenol (C6H6O)
0.59 de metabisulfito de sodio (Na2S2O5)
IV. METODOLOGÍA
Preparación de soluciones
1. Prepare 25 ml de una solución patrón de glucosa al 0.4% (4 g L-1).
2. Reactivo DNS: disuelva en 50 ml de agua destilada las siguientes sustancias
en riguroso orden: 1.4 g de NaOH, 21.6 g de tartrato de sodio y potasio, 0.54
g de fenol, 0.59 g de metabisulfito de sodio, 0.75 g de ácido 3,5-
dinitrosalicilico. Por último, aforar a 100 ml con agua destilada.
1. Utilice jugo natural (naranja, manzana, pera) con alto contenido de fructosa.
2. Utilice la muestra a temperatura ambiente.
Linealidad del método

1. La linealidad se determinará construyendo una curva de calibración de 6
puntos utilizando una solución estándar de glucosa de 4 g L-1 (Tabla 1 y
Figura 1).
2. Utilice un intervalo de concentración desde 0.2-1.2 g L-1 de glucosa.
3. Realice la reacción de azucares reductores por DNS.
4. Obtenga el coeficiente de correlación (R2) y la ecuación de la recta.
Nota: la reacción de azúcares reductores por el método del DNS se debe realizar simultánea, con el
blanco, las 6 soluciones de trabajo del estándar y las muestras de jugo por triplicado.
38
Tabla 5. Elaboración de la curva de calibración.
Concentración de ml patrón ml de agua Absorbancia a
Tubo
glucosa (g L-1) de glucosa destilada 540 nm
Blanco 0 0 0.5
1 0.2
2 0.4
3 0.6
4 0.8
5 1.0
6 1.2
Muestra 1 ? 0 0
Muestra 2 ? 0 0
Muestra 3 ? 0 0
NOTA: Verificar en el etiquetado la concentración de azúcares en la muestra previo a la reacción,
para considerar esta misma al momento de realizar una dilución y determinar su contenido.
Figura 1. Linealidad en la determinación de azúcares reductores por el método de

DNS.
Reacción para la determinación de azúcares reductores por el método DNS.

1. Agregue en los tubos de ensayo 0.5 ml cada uno de los puntos de la curva
de calibración o muestra, según sea el caso.
2. Adicione 0.5 ml del reactivo de ácido 3,5-dinitrosalicílico (DNS) al 1% a cada
tubo.
3. Agite todos los tubos en vórtex y colóquelos a ebullición los tubos por 5
minutos en baño María.
4. Enfríe hasta temperatura ambiente, después adicione a cada tubo 5 ml de
agua destilada y agite en vórtex.
5. Repose 15 minutos a temperatura ambiente y registre la absorbancia a 540
nm en espectrofotómetro.
6. Para la cuantificación de azúcares reductores las absorbancias obtenidas a
540 nm de las diferentes soluciones de trabajo se correlacionan con la
concentración, realizando una regresión lineal (Microsoft Office Excel) para
obtener la ecuación de la recta y el coeficiente de determinación (r2).
39
7. Las muestras con altas concentraciones de azúcares reductores (fuera del
rango de la curva) deben ser diluidas, y considerar la dilución para los
cálculos.
Precisión del método

Repetibilidad.
1. Se realizarán 10 repeticiones de las muestras con las mismas condiciones de
ensayo del análisis de azúcares reductores por el método del DNS, medidas
por el mismo analista, utilizando el mismo material y equipo. Se determinará
la desviación estándar relativa o coeficiente de variación de los datos
obtenidos (Figura 2).
Figura 2. Repetibilidad en la determinación de azúcares reductores por el método

de DNS.
Reproducibilidad.
1. Se realizará el ensayo DNS a las muestras por triplicado con ayuda de 3
analistas (Figura 2). Calcule la desviación estándar relativa o coeficiente de
variación. Para cada analista se debe preparar un blanco reactivo diferente.
Figura 2. Reproducibilidad en la determinación de azúcares reductores por el

método de DNS.
Límite de detección y cuantificación (NMX-AA-051-SCFI-2001)

2. Se realizará una serie de 3 diluciones a partir de la concentración más baja
de la curva calibración (0.2 g/L). Además, prepare 10 blancos reactivos.
3. Realice el ensayo para determinar azúcares reductores con el reactivo DNS
a las diferentes diluciones y blancos reactivo (Figura 3).
40
4. Utilice agua destilada como blanco al momento de tomar la lectura del blanco
reactivo.
5. Registre la absorbancia a 540 nm y con los datos calcule el límite detección y
límite de cuantificación.
Figura 3. Límite de detección y cuantificación en la determinación de azúcares

reductores por el método de DNS.
Cálculos
1. Realice en Microsoft Office Excel la curva estándar relacionando los
resultados de absorbancia obtenidos de las soluciones de trabajo de glucosa
para obtener la ecuación de la recta y el coeficiente de correlación.
2. Una vez obtenida la curva estándar utilícela para calcular la concentración de
azúcares reductores en las muestras, debe considerar el peso de la muestra
y las diluciones realizadas. Además, los resultados se reportarán como el
promedio ± desviación estándar.
3. La precisión (repetibilidad y exactitud) del método se evaluará con la
desviación estándar relativa (coeficiente de variación). Fórmula:
𝐷𝑒𝑠𝑣𝑖𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑒𝑠𝑡á𝑛𝑑𝑎𝑟 (𝑆)

𝐶𝑜𝑒𝑓𝑖𝑐𝑖𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑣𝑎𝑟𝑖𝑎𝑐𝑖ó𝑛 (𝐶𝑉) = Q W × 100
V)
𝑉𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 (X
S = Desviación estándar
X̅ = Promedio aritmético
4. Fórmula para la determinación límite de detección (LD):

𝐿í𝑚𝑖𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑑𝑒𝑡𝑒𝑐𝑐𝑖ó𝑛 (𝐿𝐷) = 𝑌$ + 3𝑆$
YB = Concentración del analito que proporciona una señal igual a la señal del blanco
3SB= Tres veces la desviación estándar del blanco.
5. Fórmula para la determinación límite de cuantificación (LC):

𝐿í𝑚𝑖𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑐𝑢𝑎𝑛𝑡𝑖𝑓𝑖𝑐𝑎𝑐𝑖ó𝑛 (𝐿𝐶) = 𝑌$ + 10𝑆$
YB = Concentración del analito que proporciona una señal igual a la señal del blanco
10sB= Diez veces la desviación estándar del blanco.
41
V. ASIGNACIÓN
1. Defina el término “validación de un método”.
2. Describa los parámetros que se debe cumplir para validar un método.
3. ¿Cuál es la diferencia entre validación y verificación?
4. ¿Explique por qué es necesario validar un método?
VI. REFERENCIAS
Fernández Serret, A.; Aguilera Cabrera, Yeni.; Morales Lacarre, I.; Jimenez, E. A.
(2002). Validación de los métodos analíticos para la identificación y
cuantificación del dextrometorfano jarabe. Rev Cubana Farm; 36 (1):28-34.
Gutiérrez Gaitén, Yamilet Irene, Miranda Martínez, Migdalia, Varona Torres, Noel,
& Rodríguez, Aida Tania. (2000). Validación de 2 métodos
espectrofotométricos para la cuantificación de taninos y flavonoides
(quercetina) en Psidium guajaba, L. Revista Cubana de Farmacia, 34(1), 50-
55.
NMX-AA-051-SCFI-2001. Análisis de agua - Determinación de metales por
absorción atómica en aguas naturales, potables, residuales y residuales
tratadas - método de prueba.
Soto, Carmen; Cuello, Maribel; Alfonso, Yusimí; Cabrera, Osmir; Sierra, Gustavo.
(2002). Validación de una técnica colorimétrica para la determinación de
carbohidratos. Vaccimonitor; 11 (3): 11-14.
42
Práctica No. 7 Determinación de aminoácidos libres por el método
espectrofotométrico de Ninhidrina
I. INTRODUCCIÓN
Las proteínas constituyen el principal componente de las sustancias nitrogenadas,
por lo tanto, su cuantificación es un análisis fundamental en alimentos, suelos,
plantas y otras matrices. La cantidad de proteína en una muestra puede
determinarse, de manera indirecta, cuantificando en nitrógeno total de una muestra.
También puede deducirse su cantidad, directamente, a partir del contenido de uno
o más aminoácidos particulares, los cuales deben poseer entre sus características
el ser fáciles de identificar y de cuantificar gracias a su reactividad química
específica (Adrian et al., 2000).
Los aminoácidos son las unidades más simples de la estructura química de todas
las proteínas. En el código genético están codificados los veinte distintos
aminoácidos, también llamados residuos, que constituyen los eslabones que
conforman péptidos, que cuando forman cadenas polipeptídicas y alcanzan altos
pesos moleculares se denominan proteínas (Badui, 2013).
Moore y Stein (1954) desarrollaron una técnica espectrofotométrica para medir

aminoácidos libres, la cual consiste en una reacción colorimétrica de los
aminoácidos con la ninhidrina y una posterior lectura del compuesto formado a 570
nm en el caso de aminoácidos primarios (Jones et al., 2002). Con aminoácidos
secundarios, prolina e hidroxiprolina, forma un complejo amarillo que absorbe a 440
nm. La ninhidrina es muy sensible a la luz, al oxígeno atmosférico, a cambios de
temperatura y pH. La reacción colorimétrica requiere de la participación de dos
moléculas de aminoácido con dos moléculas de ninhidrina, de las cuales una se
reduce previamente a hidrindantina (Adrián et al., 2000). En la Figura 1 se muestra
el mecanismo de reacción de la ninhidrina con un aminoácido y la correspondiente
formación del púrpura de Ruhemann.
Figura 1. Mecanismo de reacción de ninhidrina para cuantificación de aminoácidos.

Fuente: Cromlab, 2004.
43
Los enlaces peptídicos deben romperse mediante una hidrólisis ácida en grandes
volúmenes de HCl 6N. Posteriormente, los aminoácidos deben separarse por
técnicas como la cromatografía de intercambio iónico. Enseguida se lleva a cabo la
reacción con ninhidrina para cuantificación de aminoácidos (Adrian et al., 2000;
Macarulla y Goñi, 1994). Por tanto, la derivatización con ninhidrina es
exclusivamente post columna tal y como lo muestra la Figura 2.
Figura 2. Esquema del análisis de aminoácidos usando resinas de intercambio

iónico y reacción colorimétrica con ninhidrina. Cada zona coloreada corresponde a
un aminoácido diferente. Fuente: Macarulla y Goñi (1994).
II. OBJETIVO
Determinar el contenido aminoácidos en alimentos mediante el procedimiento
espectrofotométrico de ninhidrina.

Materiales Equipos
1 Celdas de cuarzo 1 Balanza
1 Piseta 1 Espectrofotómetro UV-vis
1 Vaso de precipitado de 500 ml
6 Vaso de precipitado de 50 ml
1 Micropipeta de 1 ml
20 Puntas de 100-1000 µl
1 Probeta de 50 ml
tapón de rosca
44
1 Gradilla
1 Baño maría
1 Vórtex
Reactivos
Agua destilada
Etanol
Reactivo de ninhidrina color
Glicina
IV. METODOLOGÍA
Muestra de análisis
1. Solución problema (preparada por el profesor).
2. Bebida energética (Taurina).
Preparación de soluciones
1. Preparar 50 ml de etanol al 50%.
2. Solución de glicina 1000 mg/L (ppm). Pese 100 mg de glicina en un matraz
volumétrico de 100 ml y afore con agua destilada.
Tratamiento de la muestra:
1. Filtrar la muestra con papel Whatman No. 41 en caso de turbidez o sólidos
suspendidos.
Cuantificación de aminoácidos totales con ninhidrina.

1. Agregue 0.4 ml de muestra o estándar de glicina a un tubo de ensayo.
2. Adicione 0.2 ml de reactivo de ninhidrina color y caliente en baño María por
30 minutos a 100°C para visualizar la reacción (Figura 3).
3. Deje enfriar a temperatura ambiente y agregue 3.8 ml de etanol al 50 %.
4. Registre la absorbancia a 570 nm.
NOTA: Todas las lecturas se realizarán por triplicado.
Figura 3. Reacción colorimétrica de glicina-ninhidrina en la determinación de

aminoácidos.
45
Linealidad
1. La linealidad se determinará construyendo una curva de calibración de 7
puntos utilizando una solución estándar de glicina de 1000 mg/l. (Tabla 1).
2. Utilice un intervalo de concentración desde 30-100 mg/l de glicina.
3. Realice la reacción de cuantificación de aminoácidos totales.
4. Determine el coeficiente de correlación (R2) y la ecuación de la recta.
Tabla 1. Elaboración de curva de calibración

Absorbancia
Puntos de la Vol. solución Volumen de agua
después de la
curva (mg/lL) Madre (ml) (ml)
reacción
Blanco
30
35
40
50
60
80
100
V. ASIGNACIÓN
1. ¿Qué función biológica tienen los aminoácidos?
2. ¿Cuáles son los aminoácidos esenciales y explique porque son considerados
esenciales?
3. Mencione la importancia de determinar aminoácidos libres en la industria
alimentaria.
4. ¿Cuáles son los métodos más utilizados para la determinación de
aminoácidos libres?
VI. REFERENCIAS
Adrian,J., Potus, J., Poiffait, A., & Douvillier, P. (2000). Análisis nutricional de los
Cromlab S.L. (2004). Ninhidrina. Febrero 19, 2018, de Cromlab S.L. Sitio web:
http://www.crom lab.es /REAC_DER_AA_NINHYDRIN.htm
Jones, D., Owen, A., & Farrar, J. (2002). Simple method to enable the high-
resolution determination of total free amino acids in soil solutions and soil
extracts. Soil Biology & Biochemistry, 34, 1893-1902.
Macarulla, J. & Goñi, F. (1994). Bioquímica humana. Barcelona España: Reverte.
Moore, S., & S. William. (1954). A modified ninhydrin reagent for photometric
determination of amino acids and related compounds. Journal of Biological
Chemistry, 211, 907-913.
46
47
Práctica No. 8: Determinación espectrofotométrica de vitaminas de
interés biotecnológico
I. INTRODUCCIÓN
El ácido fólico (ácido pteroil-L-glutámico) es una vitamina hidrosoluble del complejo
de la vitamina B (Figura 1), necesaria para diversos procesos bioquímicos, tales
como la formación de proteínas estructurales, síntesis de nucleótidos y regulación
epigenética, entre otros. El ácido fólico es de particular interés clínico en seres
humanos, por su relación con la anemia megaloblástica y diversos trastornos
neurológicos relacionados con su carencia, además de su comprobada eficacia en
la prevención de defectos del tubo neural cuando se consume previamente al
embarazo (Marcelo et al., 2017). La sociedad médica de todo el mundo ha
recomendado la suplementación con ácido fólico durante la gestación. Según la
Organización Mundial de la Salud, incluso en dietas adecuadas, la cantidad de ácido
fólico no es suficiente para satisfacer las necesidades diarias que están aumentando
en las mujeres embarazadas. Esto puede causar anemia, especialmente en
mujeres jóvenes. El consumo adecuado de la dieta durante la gestación es útil para
el desarrollo normal de las crías y puede determinar su estado metabólico y
hormonal en la edad adulta. Se afirmó que el desequilibrio nutricional durante
períodos críticos, como la gestación, puede predisponer a enfermedades en la
adultez (Brasil et al., 2017).
Figura 1. Estructura molecular del ácido fólico. Fuente: Shishehbore et al., 2011).
Con los años, se han desarrollado varios métodos para la cuantificación de ácido
fólico en formulaciones farmacéuticas. Se han aplicado varios métodos
cromatográficos diferentes en la determinación del ácido fólico en tabletas
individuales o en tabletas multivitamínicas tales como cromatografía electrocinética
de microemulsión, cromatografía de capa fina de alto rendimiento (HPTLC) y
cromatografía líquida de ultra alta presión (UHPLC). Además, se usaron métodos
combinados tales como cromatografía líquida / espectrometría de masas en tándem
(LC/MSMS) y cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) ionización por
electrospray-espectrometría de masas (HPLC/ESI-MS) para determinar el ácido
fólico en tabletas multivitamínicas (Matias et al., 2014).
48
La espectrofotometría derivada se ha utilizado ampliamente como una herramienta
para el control de calidad de los medicamentos, lo que permite la determinación
simultánea de diferentes fármacos en medios multicomponente. La derivación de
los espectros permite la separación de señales superpuestas y elimina la señal de
fondo causada por la presencia de otras especies en la muestra. Esta técnica puede
mejorar la sensibilidad y la selectividad en el análisis de mezclas. Además, es
accesible para la mayoría de los laboratorios, ya que el procedimiento es simple,
rápido y no requiere la extracción previa del analito de la muestra (Moura et al.,
2016).
II. OBJETIVO
Determinar el contenido de acido fólico presente en medicamentos comerciales
utilizando un método espectrofotométrico.

Materiales Equipos
3 Vasos de precipitado de 50 ml 1 Espectrofotómetro UV-vis
1 Espátula 1 Balanza analítica
10 Tubos de ensaye 16x150 mm con 1 Vórtex
tapón de rosca
1 Gradilla
1 Perilla
1 Matraz volumétrico 25 ml
1 Probeta de 10 ml
1 Papel Whatman No. 41
1 Papel Whatman No. 42
2 Celdas de cuarzo
1 Micropipeta de 100-1000 µl
5 Puntas de 100-1000 µl
Reactivos
150 ml de buffer de fósfato de sodio 0.1 M (pH 9.0)
20 ml de solución estándar de ácido fólico (200 µg ml-1)
IV. METODOLOGÍA
1. Registre el peso de una tableta comercial de ácido fólico
2. En un matraz volumétrico de 25 ml disuelva la tableta con buffer de fosfato
(pH=9.1), repose por 10 minutos y homogenice durante 5 minutos en vórtex.
49
3. Filtre la solución anterior con papel Whatman No.41, homogenice por 2
minutos en vórtex y filtre utilizando papel Whatman No. 42.
4. Registre la absorbancia de la solución en un espectrofotómetro UV a una
longitud de onda de 360 nm utilizando celdas de cuarzo.
5. Determine la concentración de ácido fólico de la solución utilizando la
ecuación obtenida en la curva de calibración.
Curva de calibración
1. La linealidad se determinará construyendo una curva de calibración con 6
soluciones en las concentraciones indicadas en la Tabla 1 a partir de una
solución estándar de ácido fólico (200 µg/ml).
2. Determine el coeficiente de correlación (R2) y la ecuación de la recta.
NOTA: Todas las lecturas se realizarán por triplicado.
Tabla 1. Elaboración de la curva de calibración.

ml de
Concentración ml de Absorbancia a
Tubo solución
(µg ml-1) Buffer 360 nm
madre
Blanco 0
1 10
2 20
3 40
4 60
5 80
6 100
Muestra 1 ? 0 0
Muestra 2 ? 0 0
Muestra 3 ? 0 0
NOTA: Verificar en el etiquetado la concentración de azúcares en la muestra previo a la reacción,
para considerar esta misma al momento de realizar una dilución y determinar su contenido.
Cálculos
Una vez obtenida la curva estándar utilícela para calcular la concentración de ácido
fólico en la tableta, debe considerar las diluciones realizadas.
V. ASIGNACIÓN
1. ¿Qué son las vitaminas?
2. ¿Por qué son esenciales las vitaminas para el organismo?
3. ¿Cómo se clasifican las vitaminas? describe 10 vitaminas y su importancia.
4. Menciona 5 alimentos que contengan ácido fólico.
5. La mayoría de las bebidas energizantes existentes en el mercado contienen
glucosa, cafeína, taurina, vitaminas del complejo B, glucuronolactona,
inositol, carnitina y extracto de guaraná. ¿Por qué crees que el fabricante
incluye vitaminas del complejo B?
50
VI. REFERENCIAS
Brasil, Flavia Bittencourt, Amarante, Luiz Henrique, y Oliveira, Marcos Roberto
de. (2017). El consumo materno de ácido fólico durante la gestación y sus
efectos a largo plazo sobre el hígado de las crías: una revisión
sistemática. Revista Brasileira de Saúde Materno Infantil. 17 (1), 7-
15. https://dx.doi.org/10.1590/1806-93042017000100002
Matias, R. Ribeiro, P. R. S. Sarraguça0, M. C. and Lopes J. A. (2014). A UV
spectrophotometric method for the determination of folic acid in pharmaceutical
tablets and dissolution tests. The Royal Society of Chemistry., 6, 3065–3071.
Marcelo-Correa, A. Ordóñez-Vásquez, A. Trespalacios, A. A. & Suárez-Obando,
Fernando. (2017). Inhibición del crecimiento de Erwinia chrysanthemi a
diferentes concentraciones de ácido fólico: posible uso del ácido fólico como
agente bacteriostático y fortificante de la papa Solanum
tuberosum. Universidad y Salud, 19(1), 140
148. https://dx.doi.org/10.22267/rus.171901.77
Moura Ribeiro, M. V. Silva Melo, I. Costa Lopes, F. C. Ciaramella Moita, G. (2016).
Development and validation of a method for the determination of folic acid in
different pharmaceutical formulations using derivative spectrophotometry.
Pharmaceutical Sciences. 52 (4),741-750.
Shishehbore MR, Sheibani A, Haghdost A. Kinetic spectrophotometric method as a
new strategy for the determination of vitamin B9 in pharmaceutical and
biological samples. Spectrochim. Acta. A. 2011; 81:304–307.
51
Práctica No. 9: Determinación de cobre por espectroscopia de
absorción atómica en residuos agroindustriales
I. INTRODUCCIÓN
Mundialmente cada año se generan grandes cantidades de residuos de las
cosechas agrícolas, esta biomasa residual se utiliza de diferentes maneras según
el país y región; se estima que el 80 % de los residuos agrícolas de los países en
vías de desarrollo son quemados, apenas el 15 % sirve como alimento para
animales, el 4.5 % se reincorpora al suelo sin haberse realizado una
descomposición previa y el restante 0.5 % se usa como materia prima en industrias
como la papelera y de aglomerados (Ruilova & Hernández, 2014).
Actualmente, existen algunos métodos para la descomposición de materiales

diversos. Los metales totales incluyen todos los metales combinados orgánica o
inorgánicamente, tanto disueltos como en partículas y se pueden determinar de
forma satisfactoria utilizando técnicas como, la digestión ácida por vía húmeda y
seca. La vía húmeda, consiste en utilizar ácidos, bases y agentes oxidantes, para
asegurar la total destrucción de la materia orgánica y la vía seca, se fundamenta en
procesos de calcinación en muflas de la muestra a temperaturas de los 450- 550°C,
seguida de tratamientos posteriores con estas mismas sustancias (Chaparro et al.,
2016; García et al., 2006).
La técnica de espectrofotometría de absorción atómica (EAA) método consiste en

hacer pasar un haz de luz monocromática de una frecuencia tal que puede ser
absorbido por el analito que se encuentra presente en forma de vapor atómico. La
medida de la intensidad luminosa antes y después de su paso por el vapor atómico
permite determinar el porciento de absorción la cual es directamente proporcional a
la concentración de ese elemento en la muestra analizada. (NOM-117-SSA1-1994;
NMX-AA-051-SCFI-2016). Los átomos o iones de los analitos deben ser
vaporizados a la flama o en un horno de grafito. La técnica de atomización más
usada es la absorción atómica (AA) con flama, donde se nebuliza la muestra y luego
se disemina en forma de aerosol dentro de una llama de aire de acetileno (Skoog et
al., 2001).
La concentración del analito es determinada por la cantidad de absorción aplicando

la Ley de Beer−Lambert directamente en la EAA es difícil debido a la eficiencia de
la atomización de la muestra de la matriz y a la no−uniformidad de la concentración,
y a la longitud de la trayectoria de los átomos del analito (en el horno de grafito AA).
Las mediciones de concentración son generalmente determinadas de una curva de
calibración, después de haber calibrado el aparato con los estándares de
concentración conocida (APHA-AWWA-WPCF, 1992).
Este equipo EAA generalmente está compuesto (anexo) por una lámpara de cátodo
hueco, un quemador compuesto a su vez por un nebulizador de la muestra, un
monocromador para la dispersión de la luz donde se selecciona la longitud de onda
52
particular y un detector que mide la intensidad de la luz, ampliando la señal y
emitiendo la lectura en la pantalla del equipo (Skoog et al., 2001).
II. OBJETIVO
Determinar el contenido de cobre en un residuo agroindustrial utilizando la técnica
de espectrometría de absorción atómica.

Materiales Equipos
1 Espátula 1 Mufla
2 Matraces volumétricos 1000 ml 1 Campana de extracción
7 Matraces volumétricos de 100 ml 1 Equipo instrumental de
3 Matraces volumétricos de 50 ml absorción atómica
5 Vasos de precipitado de 100 ml 1 Lámpara de cátodo hueco para
4 Pipetas volumétricas de 5 ml determinar cobre.
3 Cápsulas de porcelana
1 Probeta de 50 ml
2 Vidrios de reloj
1 Agitador de vidrio
3 Papeles filtro Whatman No. 42
Puntas para micropipeta
Reactivos
Ácido clorhídrico al 20% (v/v).
Agua destilada.
Gas acetileno (grado absorción atómica).
Aire secado a través de un filtro apropiado que elimine aceite y humedad.
Solución estándar comercial de concentración de 100 ppm de cobre.
Solución de ácido nítrico al 1% (HNO3).
Tomar 1.0 ml de ácido nítrico concentrado y pasarlo a un matraz
volumétrico de 100 ml, diluir hasta la marca de afore con agua destilada.
Solución madre de cobre 100 ppm.
IV. METODOLOGÍA
Previo a la práctica
Tratamiento del residuo agroindustrial (muestra)
1. Disminuir el tamaño de partícula de la muestra (opciones de muestra: paja de
trigo, caña de azúcar, leguminosas, cáscara de nuez etc.…).
53
2. Seca en estufa a una temperatura de 70°C hasta obtener consistencia
crujiente (8-10 horas).
3. Pulverice la muestra en mortero o licuadora para obtener partículas de 2 mm
aproximadamente.
Digestión de la muestra por vía seca (AOAC 935.85)

1. Pese un gramo de muestra en crisoles de porcelana por triplicado.
2. Calcine la muestra a 550°C hasta obtener unas cenizas grisáceas o claras.
Deje enfriar a temperatura ambiente.
3. Coloque las cenizas de la muestra en un vaso precipitado de 50 ml, lavando
el crisol con 5 ml de ácido clorhídrico al 20% (en campana de extracción);
finalmente agregue 10 ml de agua destilada a una temperatura de 70°C al
crisol para remover residuos.
4. Agregue la solución a un matraz volumétrico de 50 ml y afore con agua.
5. Filtre la solución anterior con papel Whatman no. 42.
6. Conserve el filtrado hasta su análisis en un contenedor con tapadera.
Método espectrometría de absorción atómica para la cuantificación de cobre

Procedimiento general para el uso del instrumento
1. Siga las instrucciones del manual del fabricante para determinar las
condiciones para el cobre.
2. Instale la lámpara de cátodo hueco para determinación de cobre.
3. Al encender el equipo se deja estabilizar hasta que aparezca la pantalla de
inicio.
4. En la pantalla aparece el menú de inicio y se selecciona “cookbook” para la
elección de las condiciones de trabajo del elemento a analizar.
5. Se elige con el uso de las flechas, el metal a analizar (cobre).
6. Se selecciona la posición de la lámpara, corriente de esta según la lámpara.
Si es individual, queda la que indica el equipo (Tabla 1). Si no, de ser
multielementos, se toma la que viene marcada en la base de la lámpara (10
miliamperio MA).
7. Establezca la longitud de onda y determine la anchura de la rendija de
acuerdo a la sugerencia del fabricante (Tabla 1).
8. Seleccione la combinación de gas: aire/acetileno, ajuste en los tanques
externos el flujo de aire a 60 psi y de acetileno a 11 psi.
9. Optimice la longitud de onda ajustando el dial de longitud hasta que se
obtiene la óptima.
10. Instale la cabeza del quemador aire/acetileno y ajuste su posición.
11. Alinear la lámpara de acuerdo a las instrucciones del fabricante utilizando
una tarjeta utilizada por el proveedor, el haz de luz debe pasar por la cruz
marcada en el círculo que está en la tarjeta (Figura 2). Si no estuviese
alineado, haga uso de las palancas colocadas en la base del quemador para
lograrlo, así mismo de los botones frontales que mueven el quemador, hacia
arriba/abajo y frente/atrás.
12. Encienda el instrumento, caliente el equipo entre 10 y 20 minutos. Reajuste
la corriente después del calentamiento si es necesario.
54
13. Presione de nuevo el botón de optimizar y verifique en la pantalla parte
superior la energía que marca, la cual debe ser cercana al 100%, esto indica
la energía de la lámpara.
14. Haga aspirar un blanco integrado por agua destilada o una solución ácida
con la misma concentración de los patrones y las muestras.
15. Verifique el flujo de succión del nebulizador utilizando una probeta de 10 ml,
el flujo óptimo es de 6 a 7 ml por minuto.
16. Coloque en cero el instrumento utilizando el blanco. Haga aspirar una
solución patrón para obtener la sensibilidad máxima. Ajuste el mechero
vertical y horizontalmente para obtener una respuesta máxima.
17. Haga aspirar un blanco de nuevo y vuelva a colocar a cero el instrumento.
18. El instrumento está listo para trabajar.
19. Una vez terminados los análisis, apague la llama desconectando primero el
gas acetileno y después el aire.
Tabla 1. Condiciones de trabajo y variables

Ancho de la ranura Rango de trabajo óptimo
Longitud de onda (nm)
nm µg/L
324.7 0.5 0.03-10
327.4 0.2 0.1-24
217.9 0.2 0.2-60
218.2 0.2 0.3-80
222.6 0.2 1-280
249.2 0.5 4-800
244.2 1.0 10-2000
Fuente: Varian, 1989.
Curva estándar de calibración

Prepare al menos 5 concentraciones diferentes a partir de la solución patrón de
cobre 100 ppm, utilizando agua destilada para aforar en los matraces de 100 ml
como se indica en la Tabla 2.
Tabla 1. Soluciones para curva de calibración de cobre

Concentración (ppm) Volumen de aforo (ml)
0.50 100
1.00 100
2.00 100
3.00 100
4.00 100
5.00 100
55
Procedimiento analítico
1. Realizar la lectura de cada solución de trabajo y de las muestras bajo las
mismas condiciones de operación siguiendo las indicaciones del manual de
operación del equipo de EAA.
2. Analice el blanco y estándares (de la concentración menor a la mayor) en el
espectrofotómetro de absorción atómica, y elabore una curva de calibración
(absorbancia vs. concentración),
3. Para la cuantificación del metal en las muestras las lecturas obtenidas de las
diferentes soluciones de trabajo se correlacionan con la concentración,
realizando una regresión lineal (Microsoft Office Excel) para obtener la
ecuación de la recta y el coeficiente de correlación lineal (R2).
a. Nota: si r ≥ 0.99 se acepta la curva de calibración. Si no se rechaza
Puntos críticos de control

Tabla 2. Puntos de control
Variable Control de seguridad
Material de vidrio Libre de impurezas
Reactivos Pureza
Estándares Exactitud en la preparación
Equipo Optimización
Interferencias Control
Expresión de resultados
Las lecturas arrojadas (concentraciones) por el equipo están expresadas en ppm
(mg/l).
V. ASIGNACIÓN
1. Investigue los componentes que integran a un equipo de espectrometría de
absorción atómica (realice un diagrama).
2. Investigue el fundamento de la técnica de espectrometría de absorción
atómica.
3. Investigue el procedimiento adecuado para el lavado de material a emplear
en el análisis por EAA.
4. Explique la importancia de la aplicación de métodos instrumentales para la
cuantificación de analitos.
5. Investigue al menos tres aplicaciones prácticas de la cuantificación de
analitos por EAA.
VI. ANEXOS
a) Gases empleados.
Este espectrofotómetro es usado sólo con aire, óxido- nitroso y acetileno para
operación de flama. Emplear gas grado absorción atómica pureza 99.5%.
56
Aire-acetileno
Usar una presión de salida del gas hacia el equipo de AA de 10 psi (lb/in2). Dejar de
utilizar el gas cuando la presión en el manómetro de llenado del cilindro de acetileno
marca por debajo de 700 Kpa (100 psi). la acetona contenida en el fondo del cilindro
puede ser acarreada dentro del espectrofotómetro.
Aire
Si el aire a emplear es de un compresor, purgar antes de encender el equipo. la
presión de entrada al equipo debe ser de 50 psi (lb/in2).
Oxido - nitroso
Gas grado absorción atómica. La presión de entrada al equipo de AA debe ser de
50 psi (lb/in2).
Nitrógeno o argón
Grado absorción atómica, la presión de entrada del gas al equipo de generador de
hidruros debe ser de 50 psi (lb/in2).
b) Accesorios del espectrofotómetro

Quemadores
Montar el quemador haciendo incidir el pivote inferior de este en el orificio que se
encuentra en la base del quemador. Se tienen dos tipos de quemadores:
1. Acetileno
Se emplea únicamente para elementos donde se requiere una flama de aire-
acetileno.
2. Oxido – nitroso
Exclusivo para elementos donde se requiere un tipo de flama óxido - nitroso-
acetileno. Cuando se trabaje con este quemador, se recomienda que por lo menos
cada 20 minutos de funcionamiento es necesario quitar la capa de carbón formada
en la superficie de la ranura empleando una varilla de carbono o similar.
Nebulizador
Encender computadora y proceder de igual manera que para cualquier otro análisis,
creando un método. Encender flama y proceder a regular el flujo de succión usando
los tornillos frontales del nebulizador, ya sea en sentido de o en contra de las
manecillas del reloj para que el flujo quede ajustado a un volumen de 2 - 4 ml/min
si las muestras están extraídas con solvente y de 6- 8 ml por minuto para soluciones
acuosas (Figura 1).
57
Figura 1. Desensamble de la cámara de atomización.
Trampa
Siempre llenar la trampa con el líquido que se está empleando para el análisis de
las muestras (figura 1). Nunca dejar la trampa sin líquido. Si se trata de muestras
acuosas, llenar con agua destilada; en cambio si se trata de muestras extraídas con
MIBK (ISOPROPIL ACETONA;4–METIL–2-PENTANONA), llenar la trampa con
este solvente (ver especificaciones del desensamble de la trampa). Conectar el tubo
de desagüe al recipiente recolector de desechos (Figura 3). No permitir que la
manguera quede dentro del nivel del líquido, ya que se puede sifonear.
Alineación del haz de luz

El haz de luz de la lámpara se alinea con una tarjeta especial distribuida por la
compañía del equipo con este propósito. El haz de luz debe pasar exactamente por
el centro de las líneas en cruz que se encuentran dentro del círculo marcado en la
tarjeta (Figura 2). En caso de no estar alineado emplear los tornillos situados en la
parte frontal del equipo para mover el quemador.
Figura 2. Alineación del haz de luz
58
Figura 3. Nivel de recipiente de desechos.
VII. REFERENCIAS
APHA-AWWA-WPCF. (1992). Métodos normalizados para el análisis de aguas
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agrícolas para la producción del hongo Pleurotus ostreatus. ICIDCA. Sobre los
Derivados de la Caña de Azúcar, 48 (1), 54-59.
Skoog D.A., Holler F.J., Nieman T.A. (2001). Principios de Análisis Instrumental.
Quinta edición. Editorial McGraw-Hill. México D.F.,1028 p.
59
VIII. DIAGRAMA DE ECOLÓGICO
60
Disposición de residuos
La disposición y manejo de residuos, será llevada a cabo en relación a las

recomendaciones proporcionadas por el Departamento de Laboratorios y
Audiovisuales. Para el etiquetado de los residuos generados en el Laboratorio de
Bioquímica Analítica será empleada la siguiente etiqueta debidamente llenada por
el instructor del curso.
61
Referencias
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Analysis, 18th Edition, AOAC International Publisher, Gaithersburg.
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64

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