Capítulo 15

Transformación genética del arroz

Eddie Tabares

Contenido
Página
Resumen 253
Abstract 254
Introducción 254
Herramientas 255
Organismos modificados 256
Sistemas de transformación genética 256
Biolística 256
Sistema de Agrobacterium 257
Genes marcadores 260
Problemas y perspectivas 265
Cepas y genotipos 265
Bioeconomía 266
Arroz transgénico en el CIAT 267
Contra el VHB 267
Contra el añublo de la vaina 268
Contra la sequía 269
Referencias bibliográficas 271
Anexo: Ilustración detallada de los pasos que requiere la transformación
genética del arroz mediante el sistema Agrobacterium 275

Resumen
El arroz fue, entre las monocotiledóneas, la primera especie cultivada que experimentó
transformación y regeneración genéticas. Inicialmente se transformaron cultivares de arroz
del grupo japónica. Un tiempo después, fueron transformados numerosos cultivares de los
tipos javánica e índica y fueron regenerados como plantas fértiles. En su mayoría, los estudios
de transformación del arroz han empleado la transferencia directa del ADN en protoplastos,
la cual es inducida en diversos postratamientos. Otros métodos de transformación, menos
dependientes del genotipo, fueron desarrollados en años recientes, entre los cuales figuran
la transformación por biolística y el sistema de Agrobacterium tumefaciens. En ellos se
emplean diferentes explantes de la planta de arroz, como embriones inmaduros y maduros
e inflorescencias.

253
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

Abstract
Genetic transformation in rice
Among monocotyledons, rice is the first cultivated species to undergo genetic transformation
and regeneration. Rice cultivars of the japonica group were the first to be transformed,
followed by numerous javanica and indica cultivars, which were regenerated as fertile plants.
Most rice transformation studies have used direct DNA transfer in protoplasts, induced by
different post-treatments. Other transformation methods less dependent on the genotype
have been recently developed, including biolistic transformation and use of Agrobacterium
tumefaciens. Both use rice plant explants, such as inflorescences and mature and immature
embryos.

Introducción condiciones adversas que reducen mucho

la productividad agrícola.
La modificación genética de los cultivos
mediante los métodos tradicionales ha Los científicos aprovechan actualmente
sido esencial para mejorar la calidad y la tanto los conocimientos tradicionales
abundancia de los alimentos. Los como los enfoques modernos para mejorar
cereales pertenecientes a la familia el rendimiento de los cultivos y la calidad
Poaceae, entre ellos el arroz, de los productos agrícolas. El avance en
proporcionan dos tercios del alimento paralelo de esas dos líneas de
que consume la población del mundo investigación de la ciencia agrícola
(Borlaug, 1988). La producción de grano pretende reducir las consecuencias
que implica esta responsabilidad crucial ambientales asociadas con el consumo de
se debe, principalmente, al mejoramiento los recursos naturales (agua, tierra,
de las variedades nativas durante siglos. abonos) que hace la agricultura.
Este proceso se inició, en los cereales,
por el sistema de mejoramiento genético En América Latina y el Caribe (ALC), el
convencional. La hibridación amplia, en arroz aporta más calorías a la dieta de la
particular, desempeñó un papel población que el trigo, el maíz, la yuca o
importante en el desarrollo de numerosos la papa. Se mejora, por tanto, el
cultivares de cereales cuyo rendimiento bienestar de la población de esa región si
agronómico alcanzó niveles altos (Brar y se eleva la eficiencia de producción del
Khush, 1986; Jauhar y Chibbar, 1999; cultivo; esto se logra mejorando el
Jauhar y Peterson, 2001). germoplasma del arroz. Las nuevas
variedades han hecho más competitivo el
La ingeniería genética ha proporcionado, sector arrocero latinoamericano y, en
en los últimos años, técnicas más consecuencia, los consumidores compran
rápidas y mejor dirigidas para introducir el grano a menor costo y los productores
características agronómicas útiles en las obtienen mayores ganancias. El arroz
principales especies cultivadas de barato beneficia al 20% de la población
cereales. En todo el mundo, los más pobre de ALC, que gasta cerca de la
agricultores incrementan actualmente el mitad de sus ingresos en alimentos (de la
área de siembra con cultivos mejorados cual el 15% va para el arroz).
gracias a la biotecnología moderna. La
genética y las ciencias afines han Los científicos agrícolas enfrentan ahora
ensanchado la ‘caja de herramientas’ de el siguiente reto: mantener el impulso
genes disponibles, y ya hay genes para alcanzado por ese mejoramiento sin dejar
reducir el estrés biótico causado por de combatir las enfermedades y plagas del
malezas, plagas y enfermedades, cultivo, manteniendo bajos los costos de

254
 Transformación genética del arroz

producción y reduciendo el riesgo complementar métodos de análisis de

ambiental del uso excesivo de plaguicidas. proteínas (las cuales son expresiones
La solución está en el aumento de la fenotípicas) y de caracteres agronómicos y
diversidad genética del arroz y en el botánicos; la herramienta, en este caso, es
desarrollo de acervos de genes asociados alguna forma de análisis del genoma, en
con rendimientos altos y estables. especial del que se basa en el método de
la reacción en cadena de la polimerasa
Herramientas (PCR, en inglés), cuyas técnicas, que han
sido ya automatizadas, permiten analizar
El estudio de esa diversidad genética y la un gran número de muestras en corto
identificación de las diferencias genéticas tiempo.
que hay entre posibles progenitores del
germoplasma de arroz ha sido crucial Otra herramienta biotecnológica muy
para los programas de fitomejoramiento, importante es la transformación genética
para quienes regulan la distribución de la de plantas. Consiste en la incorporación
semilla comercial, para los productores de uno o varios genes de interés
que eligen la semilla adecuada para agronómico (resistencia a enfermedades o
siembra, y para las empresas de molinería insectos, tolerancia a la sequía) en el
y de mercadeo del grano. En el pasado genoma de una planta útil. Cuando se
reciente, esos trabajos se basaban en la obtiene una planta transgénica mediante
caracterización agronómica y morfológica transferencia directa de genes (por
de las semillas y de las plantas. electroporación de protoplastos,
bombardeo con partículas o acción de
Los estudios mencionados acudían Agrobacterium sp.) se requieren,
tradicionalmente a los métodos generalmente, genes marcadores
bioquímicos. El análisis electroforético de seleccionables. Estos genes facilitan la
las proteínas de la semilla, por ejemplo, co-integración del gen de interés en un
ha empleado (en el arroz y en otros locus mendeliano del genoma de la
cereales) la cromatografía líquida de alta planta. Obtenido el resultado, es muy
resolución (HPLC, en inglés). Otro deseable eliminar el gen marcador. A esta
ejemplo son los perfiles isoenzimáticos intención se suma la preocupación de los
empleados en la clasificación del ecologistas de que el gen marcador
germoplasma. Aunque la información seleccionable (o alguno de sus derivados)
entregada por estas técnicas se considera sea tóxico o alergénico para los
aceptable, es difícil estandarizarlas, y su consumidores de los productos vegetales
capacidad discriminatoria es baja. (algunos han sido ‘etiquetados’ en el
mercado). Para producir plantas
En este escenario apareció la transgénicas libres de genes marcadores
biotecnología, y su contribución al negativos (las llamadas ‘plantas limpias’),
mejoramiento del cultivo ha sido la biotecnología propone el uso de
extraordinaria. Proporciona, por ejemplo, marcadores positivos, los cuales están
herramientas analíticas que establecen la relacionados generalmente con azúcares;
identidad genética de los cultivares y un ejemplo es la enzima isomerasa de la
determinan el nivel de pureza de las posfomanosa. Puesto que no hay aún
semillas. Facilita el mejoramiento de un comprobación científica de dichos efectos
cultivo cuando el enfoque clásico no ofrece —ni del efecto negativo de genes
soluciones; por ejemplo, cuando se transferidos tanto antibióticos como
dispone de muy pocos genes de resistentes a herbicidas— el público
resistencia estable y duradera a un factor consumidor está en libertad de aceptar
ambiental nocivo. Es útil también para las plantas transgénicas.

255
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

Las herramientas moleculares que ofrece 2007 se cultivaron 114.3 millones de

la biotecnología han sido también hectáreas (282.4 millones de acres) de
empleadas con frecuencia en distintos productos agrícolas biotecnlógicos (un
tipos de análisis de los genes del arroz: nuevo récord) en 23 países; esto
representa un incremento del 12.3% en
• Mediante el RAPD (‘random área plantada respecto a los años
amplified polymorphic DNA’), que anteriores (James, 2007).
amplifica diversos fragmentos de ADN
empleando la PCR antes mencionada Los campos cultivados con OGM traen a
y usando ‘partidores’ de secuencia los agricultores los siguientes beneficios:
aleatoria, se han diferenciado varios
cultivares de arroz. La técnica RAPD • Una reducción en el uso de
no es muy reproducible y por ello se pesticidas e insecticidas (Brookes y
reserva para estudios comparativos de Barfoot, 2007).
colecciones de germoplasma de arroz. • Un incremento en seguridad para las
• Por medio del AFLP (‘amplified especies vegetales que no son
fragment length polymorphism’) objetivo agrícola (Marvier et al., 2007;
—técnica muy sensible que detecta OECD, 2003).
fragmentos polimórficos • Un aumento en la adopción de la
(polimorfismos) de ADN combinando labranza de conservación y de las
una digestión enzimática con una prácticas de conservación de suelos
amplificación por PCR, y que entrega (Fawcett y Towry, 2002).
patrones de información con más • Una reducción en la emisión de gases
amplificaciones y mayor de invernadero por causa de las
reproducibilidad que el RAPD (sin prácticas agrícolas (Brookes y
requerir información previa del Barfoot, 2007).
genoma estudiado)— se han • Un incremento en la producción
identificado cultivares de arroz, se ha agrícola (Brookes y Barfoot, 2007).
analizado la diversidad genética de
genotipos de arroz de diverso origen, Sistemas de transformación
se han hecho análisis filogenéticos genética
entre los ancestros de la especie
cultivada de arroz y sus principales Los sistemas de transformación genética
subespecies de los tipos índica y han sido desarrollados para una gran
japónica, y mediante selección variedad de cultivos. En el desarrollo de
asistida por marcadores se han protocolos para producir plantas
mejorado varios materiales de arroz. transformadas en los cereales se han
empleado dos sistemas: el transporte de
Organismos modificados ADN mediante la bacteria Agrobacterium
tumefaciens y la biolística o
Hace 13 años, en 1996, se comercializó el transferencia directa de genes mediante
primer organismo modificado un bombardeo de partículas.
genéticamente (OGM). Desde entonces,
los agricultores han sembrado (James, Biolística
2007) cerca de 690 millones de hectáreas
(1700 millones de acres) de OGM sin que La técnica de introducir ADN dentro de
se haya confirmado un solo daño a la las células por medios físicos, es decir,
salud humana o al medio ambiente por por bombardeo con microproyectiles
su causa (FAO, 2004; National Academy (Figura 1), ha revolucionado el campo de
of Sciences, 2004; WHO, 2004). En el la transformación genética de las

256
 Transformación genética del arroz

Antes Después

Cilindro de
aceleración

Disco de
ruptura

Micropartículas
cubiertas con ADN

Membrana

Células blanco
Figura 1. Biolística o bombardeo de células y tejidos con micropartículas.

especies vegetales cultivadas. Sistema de Agrobacterium

Infortunadamente, la biolística tiene un
grave inconveniente: la variación La bacteria Agrobacterium tumefaciens
considerable que se ha observado en el tiene la capacidad de transferir ADN
transgene introducido respecto a su entre reinos diferentes. El impacto de
estabilidad, a su integración en el este hallazgo ha conducido a importantes
genoma y a su expresión en la planta. aplicaciones en diversos campos, como la
biología vegetal, la agricultura y la

257
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

biotecnología. El conocimiento básico natural de la bacteria Agrobacterium

sobre el mecanismo de transferencia de tumefaciens (en adelante, designada como
ADN ha permitido el desarrollo de Agrobacterium) para entregar un segmento
vectores para la introducción de genes discreto de ADN dentro del recipiente que
foráneos. contiene el genoma de la célula vegetal
(Figura 2) ha sido explotada en este
Agrobacterium tumefaciens y sus especies sistema para transformar genéticamente
relacionadas como A. rhizogenes y A. vitis los cereales (Cheng et al., 2004).
son patógenos reconocidos de las
plantas, y tienen la capacidad de integrar La transformación de las
establemente parte de su material monocotiledóneas (entre ellas, los cereales)
genético dentro del genoma del mediante Agrobacterium es influenciada
hospedero. El estudio del mecanismo por los siguientes factores:
por el cual A. tumefaciens induce la
formación de tumores en plantas ha sido • La selección del genotipo vegetal y del
fundamental para su uso como explante que den mejor respuesta.
herramienta en la ingeniería genética de • La cepa de Agrobacterium elegida.
plantas. • Los vectores binarios, los cuales son
los más usados para la transformación
La técnica de transformación mediante de plantas y de los cuales hay una una
bacterias del género Agrobacterium, por gran variedad. En el sistema,
su parte, facilita la integración precisa de Agrobacterium tiene dos vectores: uno
un pequeño número de copias de genes que contiene la región de T-ADN con el
en el genoma de una planta y alcanza un gen de interés, y otro que contiene la
grado considerable de estabilidad del región vir (o región de virulencia).
transgene (Dai et al., 2001). La habilidad

ADN
cromosónico

T-ADN
Plásmido T-ADN Cromosoma
Ti

Corona
mellada

Agrobacterium
tumefaciens

Figura 2. Diagrama de la acción de Agrobacterium tumefaciens para formar agallas en las

plantas.

258
 Transformación genética del arroz

• Los vectores co-integrados, que se plantas transgénicas tratadas, lo que

construyen recombinando tres hubiera mostrado la integración en el
elementos: un plásmido Ti genoma de los genes deseados.
desarmado que contiene el borde
izquierdo, un pequeño vector que Un grupo de investigadores chinos
contiene el gen de interés flanqueado liderados por H.S. Chang obtuvieron en
por el borde derecho, y una región 1993 unas pocas plantas transgénicas al
homóloga al borde izquierdo. inocular embriones inmaduros de arroz
• Los genes marcadores, que son con una cepa de Agrobacterium
utilizados para distinguir entre las tumefaciens. Demostraron, mediante la
células de las plantas transformadas técnica de hibridización con Southern,
con un gen integrado y la mayor parte que el ADN transferido había sido
de las células transformadas. heredado por la progenie de las plantas
• Los genes selectivos y los genes tratadas; aunque analizaron la progenie
promotores, los cuales permiten de una sola de las plantas
distinguir las células de las plantas transformadas, el informe que publicaron
transformadas de las que no lo han hizo historia. Hiei et al. (1994)
sido. resolvieron la controversia porque
• Las condiciones de inoculación produjeron pruebas inequívocas de la
(medios de cultivo, temperatura, pH) y transformación estable del arroz de tipo
las del co-cultivo (tiempo de japónica mediante el sistema de
exposición del explante a la bacteria). Agrobacterium, después de hacer los
• Las condiciones del cultivo de tejidos análisis genético y molecular de un gran
y de los medios de regeneración. número de progenies de plantas (R0, R1 y
R2).
Por otro lado, la competencia o capacidad
de Agrobacterium para ‘infectar’ un tejido Resultados
específico es todavía un inconveniente de Varias décadas de investigación
esta técnica de introducción de genes, exhaustiva resultaron en un relativo
principalmente de los genes que entendimiento del mecanismo de
interesan, en forma más amplia, el transferencia del T-ADN de
mejoramiento de los cereales. Esta Agrobacterium a las células de la planta
limitación puede considerarse como un hospedera. Además, la identificación y la
desafío para el futuro de la caracterización molecular de los genes
transformación genética. vegetales involucrados en la
transformación exitosa mediante
Historia Agrobacterium abrió una vía nueva para
Durante años, las plantas comprender mejor la respuesta de la
monocotiledóneas fueron inaccesibles a célula vegetal (y de la planta) a la
la manipulación genética. Entre 1987 y ‘infección’ causada por Agrobacterium.
1993, varios laboratorios en todo el
mundo hacían grandes esfuerzos para Se entiende, por ejemplo, que hay un
transformar las plantas de ese grupo gran número de factores críticos
botánico (entre ellas, los cereales de (o condiciones necesarias) en la
importancia económica: arroz, cebada y transformación del arroz por el sistema
trigo) empleando vectores de de Agrobacterium; entre ellos, las
Agrobacterium (Potrykus, 1991). Los siguientes:
primeros estudios generaron
controversias porque, simplemente, no • El uso de tejidos vegetales de
se basaron en un número grande de las crecimiento activo (embriones

259
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

maduros e inmaduros, mecanismo tradicional para lograr este

inflorescencias). objetivo es el empleo de genes
• El uso de acetosiringona (un químico marcadores, puesto que la expresión de
utilizado para la inducción de genes éstos permite hacer dicha distinción.
de virulencia o genes vir. Ahora bien, cada gen marcador selectivo
• Una temperatura entre 22 y 24 ºC debe ser ‘seguro’, lo que plantea un
durante el co-cultivo. problema potencial de seguridad en
ingeniería genética de plantas. Para
Se han publicado, además, los siguientes generar plantas transgénicas en los
informes, en la mayoría de los cuales se cereales se han empleado varios genes
emplearon embriones inmaduros como marcadores selectivos (Cuadro 2). Los
explantes: que se han usado con mayor frecuencia
son los que codifican para las siguientes
• Kumlehn et al. (2006) aplicaron con enzimas (Cheng et al., 2004): la
éxito el sistema antes descrito de neomicín-fosfotransferasa (npt), la
transformación a variedades de arroz higromicín-fosfotransferasa (hpt) y la
de tipo japónica, javánica e índica. fosfinotricín-acetiltransferasa (pat).
• Dong et al. (2001) utilizaron Usados como marcadores, confieren
inflorescencias inmaduras como resistencia, respectivamente, a la
explantes. kanamicina (y a algunos parientes
• En el 2004, Terada y sus aminoglicósidos, tales como el G418 y la
colaboradores desarrollaron un paramomicina), a la higromicina y a la
protocolo en gran escala muy eficiente L-fosfinotricina (PPT). Aunque ha
para la transformación de arroz con aumentado la demanda de plantas
Agrobacterium, que genera alrededor transgénicas libres de marcadores, hay
de 100 transformantes estables que tener en cuenta que el número de
partiendo de 150 semillas. genes marcadores disponibles en un
laboratorio, que sean de alta eficiencia en
Se puede concluir que la transformación determinada especie vegetal, es aún
del arroz mediada por Agrobacterium se limitado.
ha convertido en un método confiable y
de fácil reproducción para transferir La presencia de genes marcadores en
genes de interés en el genoma del arroz productos agrícolas liberados para el
(Figura 3). Estos éxitos pueden consumo humano parece indeseable; no
atribuirse a diversos factores, uno de los obstante, esos genes no han presentado
cuales, que resulta crítico, fue el hasta ahora riesgos biológicos (Hansen y
desarrollo de un sistema efectivo para la Wright, 1999). Una de las
regeneración de plantas fértiles. En el preocupaciones es que los genes
Cuadro 1 se muestra la transformación marcadores puedan ser transferidos a
genética que se ha realizado en algunas malezas o a ciertos
cereales (arroz) usando el sistema de microorganismos patógenos, ya sea en el
A. tumefaciens. tracto gastrointestinal o en el suelo,
haciendo que unas y otros se vuelvan
Genes marcadores resistentes a tratamientos con herbicidas
o antibióticos, respectivamente.
Un paso crítico en la regeneración de las
plantas transgénicas es la capacidad de La producción de plantas transgénicas
distinguir las células transformadas (las libres de genes marcadores es
que tienen un transgene integrado) de las actualmente un requisito critico para su
que no fueron transformadas. El comercialización. Diferentes estrategias

260
 Encuentro de los tejidos
con Agrobacterium

Embriones inmaduros Co-cultivo 10-15 minutos Co-cultivo 2- Eliminación de

3
Con tratamiento de líquido sólido dí Agrobacterium
as
precultivo y sin él
Temperatura Oscuro
ambiente 20-25 °C Fase de
Explante Co-cultivar reposo

Embriones inmaduros
Callos embriogénicos
Opcional 7 días

Enraizar y Selección
transferir al suelo Fase I
Plantas
transgénicas Oscuro

1-2 semanas Seleccionar 3 semanas

Enraizamiento
Opcional
Luz/Oscuro Regenerar Selección
16/8 horas Fase II

Oscuro
Pre-
Luz/Oscuro Regeneración 4 semanas
1 semana regeneración
3-4 semanas
Luz/Oscuro Oscuro
16/8 horas
261

Figura 3. Pasos que se dan, en general, en la transformación de un cereal como el arroz mediante el sistema de Agrobacterium.
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

Cuadro 1. Resultados de la transformación genética obtenida en arroz mediante el sistema

de Agrobacterium.

Tejido Eficiencia de Promotor o Promotor o gen Referencia

objetivoa transformación gen reportero marcador
(%) seleccionable
EI, CI 12.8 – 28.6 CaMV3SS:gus Nos-P:nptII Hiei et al., 1994
CaMV3SS:hpt
EI 1–5 CaMV3SS:gus CaMV3SS:nptII Aldemita y Hodges, 1996
27 CaMV3SS:hpt
CE - CaMV3SS:gus CaMV3SS:hpt Dong et al., 1996
CE - CaMV3SS:gus Nos-P:nptII Komari et al., 1996
CaMV3SS:hpt
MSI 2.8 - CaMV3SS:bar Park et al., 1996
Act1:bar
Nos-P:nptII
CS 4.8 – 22 CaMV3SS:gus CaMV3SS:hpt Rashid et al., 1996
CS - - Nos-P:nptII Toki, 1997
Ubi1:bar
CE - Osg68:gus Osg68:gus Yokoi et al., 1997
CS CaMV3SS:gus CaMV3SS:hpt Khanna y Raina, 1999
CE - CaMV3SS:gus CaMV3SS:hpt Mohanty et al., 1999
CE - Ubi1:gus CaMV3SS:hpt Upadhyaya et al., 2000
CS - - CaMV3SS:hpt Datta et al., 2000
CE - - CaMV3SS:hpt Jeon et al., 2000
CE 7 Ubi1:gus CaMV3SS:hpt Dai et al., 2001
Nos-P:nptII
CE 41 - CaMV3SS:pmi Lucca et al., 2001
CE 9 – 19 CaMV3SS:gus CaMV3SS:hpt Kumaria et al., 2001
Nos-P:nptII
CE 16 – 19 CaMV3SS:gus CaMV3SS:hpt Kumaria y Rajan, 2002
Nos-P:nptII
CE 6 - CMPS:pmi He et al., 2004
CE 64.1 – 378.7 GOS2:gfp CaMV3SS:hpt Breitler et al., 2004
Ubi1:bar
CE 103/150 semillas CaMV3SS:gus Act1:hpt Terada et al., 2004
CE - - CaMV3SS:nptII Kim et al., 2005
CE 4 – 7.2 - hpt, nptII Rui-Feng et al., 2006
a. Las siglas en inglés van entre paréntesis: EI = embrión inmaduro (IE), CI = callo
inmaduro (IC), CE = callo embriogénico (EC), MSI = medio en suspensión inmaduro
(ISM), CS = cultivo en suspensión (SC).

FUENTE: Shrawat y Lörz (2006).

han sido propuestas para producir esas 2001; Daley et al., 1998; Corneille et al.,
plantas (Dale y Ow, 1991; Komari et al., 2000; Sahrawat et al., 2003; Breitler et
1996; Ebinuma et al., 2001; Hohn et al., al., 2004; Ramessar et al., 2007).

262
 Cuadro 2. Genes marcadores selectivos empleados en la obtención de plantas transgénicas en el arroz y otros cereales.

Marcador para selección Característica conferida Ventajas Desventajas

A. Negativa

npt11 (neomicín- Kanamicina y algunos Kanamicina: Puede usarse

fosfotransferasa) aminoglicósidos como agente seleccionable
relacionados (como la durante la regeneración; no
G418 y la paramomicina), es efectiva en la selección de
la higromicina y la los callos transformados
L-fosfinotricina (PPT) (sin plantas verdes).
hpt (higromicín- Higromicina: En la inserción de intrones;
fosfotransferasa) mejora la frecuencia de las transformaciones
(Wang et al., 1997).
bar (fosfinotricín- Mejora la estabilidad de la transformación en
acetiltransferasa) el arroz y en la cebada.
B. Positiva

benciladenín II-3- Plantas transgénicas sin genes de antibióticos

glucurónido o de resistencia a los herbicidas.
xylosa Usar la xilosa como fuente de carbohidratos y
con abundancia, siempre que las células no
transgénicas necesiten alimento.
(Continúa)
263
264

Cuadro 2. (Continuación.)

Marcador para selección Característica conferida Ventajas Desventajas

manosa 1. PMI: Cataliza la interconversión reversible

de manosa-6-fosfato y fructosa-6-fosfato.
El gen E.coli manA (PMI) permite que las
células vegetales usen la manosa como
fuente de carbohidratos, y que puedan
sobrevivir en medios que contengan
manosa.
2. Riesgo ambiental.
3. Produce plantas transgénicas con mayor
frecuencia.
Butafenil (PPO) Produjo más de 2500 plantas de maíz
tolerantes de algunos herbicidas.
GFP (proteína de Se halló que los modelos de número de copias
fluorescencia verde) y de integración de transgenes eran similares
a los modelos de plantas transgénicas
derivadas de un sistema de selección basado
en la acción química.

FUENTE: Shrawat y Lörz (2006).

 Transformación genética del arroz

Problemas y perspectivas de cultivares élite de cereales. Por

ejemplo, McCormac et al. (1998)
La transformación genética del arroz ha compararon la eficiencia de la
progresado, en años recientes, hasta el transferencia de T-ADN al trigo que
punto de que un gen agronómicamente exhiben dos cepas de Agrobacterium
útil puede ser introducido dentro del rhizogens (LBA9402 y EHA101), y
genoma del arroz utilizando la bacteria encontraron que solamente EHA101
Agrobacterium tumefaciens como vehículo facilitaba una integración exitosa de
de entrega del ADN constitutivo de ese Agrobacterium en ese cereal. En la
gen. mayoría de los cereales se ha logrado la
transformación genética empleando las
En comparación con el arroz, los demás siguientes cepas de Agrobacterium
cereales que interesan a la alimentación rhizogenes (Cheng et al., 2004):
humana se han retrasado en la
investigación relativa a la transformación • LBA4404 y EHA101.
genética; ha habido reportes de • Las derivadas de ambas: EHA105 de
transformación esporádica y limitada a EHA101; AGLO y AGL1 de LBA4404.
cultivares específicos. Los mayores
obstáculos (o limitantes) que enfrenta la La cepa TOK233 de LBA4404 ha
transformación genética de esos cereales resultado un éxito en la transformación
son los siguientes: del arroz.

• El genotipo del cereal y la clase de La transformación de cereales por el

explante que se emplea en la sistema de Agrobacterium mejorará en el
transformación. futuro cuando se perfeccionen los
• La presencia de tejidos de color siguientes aspectos del proceso:
marrón que mueren (necrosis)
después de ser infectados con • Ampliar el rango de genotipos y de
Agrobacterium. explantes mejorando, al mismo
tiempo, la comprensión de las
Estas limitantes impiden, principalmente, interacciones hospedante–patógeno.
ampliar la gama de hospedantes de la • Desarrollar nuevos métodos para
bacteria entre los cultivares comerciales controlar o minimizar la muerte
de diversos cereales; pocas plantas se (necrosis) de los tejidos
regeneran en estos cultivos. transformados.
• Identificar proteínas vegetales que
Cepas y genotipos puedan participar en la acción de
facilitar la entrega de T-ADN al
Entre los cereales transformados hasta la genoma de las células hospedantes.
fecha, el arroz es, al parecer, el que
menos depende del genotipo: han sido Estos avances harán más aplicable la
transformados más de 40 genotipos de transformación genética y mejorarán su
los grupos japónica, índica y javánica eficiencia general.
(Figura 4).
Asimismo, el análisis profundo de los
La variación en competencia o habilidad genes involucrados en la transformación
de Agrobacterium sp. para ‘infectar’ un por medio de Agrobacterium ayudará a
tejido, un genotipo o una especie entender mejor los eventos de nivel
determinada ha sido uno de los molecular que ocurren durante ese
obstáculos en la transformación genética proceso; por ejemplo, comunicación

265
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

Selección Planta transgénica

Expresión

Figura 4. Transformación de plantas de arroz por el sistema de Agrobacterium. La eficiencia

es de 10% a 44% en las de tipo índica y de 10% a 60% en las de tipo japónica. Se
puede evaluar fácilmente, en condiciones de bioseguridad, una alta producción
de plantas en invernaderos, en casas de malla y en el campo.

celular, transporte molecular despliegue de las nuevas materias

intracelular, reparación y primas cuyo desarrollo depende de las
precombinación de ADN. Estos modernas técnicas moleculares de cría.
conocimientos contribuirían, a su vez, a Sin embargo, rara vez consideran los
ampliar la gama de cultivares élite para desafíos que plantea el uso de cultivos
la transformación y a mejorar la modificados genéticamente, entre ellos
eficiencia del proceso en cultivos de la aprobación oficial, los reglamentos
importancia económica. establecidos, el trabajo de mercadeo
para lograr la adopción del bioproducto
Bioeconomía y su aceptación por el público.

Los Estados Unidos y otros países se Los retos antes mencionados ponen de
mueven hacia una economía basada en manifiesto las consecuencias que tienen
productos vegetales. Han concentrado no sólo los diferentes caracteres de los
grandes esfuerzos de investigación y de cultivos transgénicos sino también el
desarrollo en nuevas materias primas desarrollo global de la bioeconomía. Se
que podrán satisfacer la demanda de requiere una toma de conciencia de los
biomasa para biocombustibles, problemas que plantean los cultivos y de
bioenergía y bioproductos especializados los caracteres genotípicos que se
(como ciertos compuestos industriales y seleccionarán. Esta comprensión
los precursores de los biomateriales). La permitirá, a quienes desarrollan los
mayoría de estas proyecciones cultivos transgénicos, diseñarlos con el
bioeconómicas hacen un amplio máximo de recursos del cultivo, y dotará

266
 Transformación genética del arroz

a las partes interesadas de un alto Procedimiento

potencial de adopción de diversos
productos transformados. Así se evitará Inducción de los callos
la tendencia a satisfacer simplemente las (3 a 4 semanas)
solicitudes de aprobación o de regulación
del mercado para ganar la aceptación del
público. Preparación de los callos y de
Agrobacterium
Arroz transgénico en el CIAT (3 días)

En el CIAT se ha establecido un eficiente

protocolo de transformación genética de Infección de los callos con
plantas de arroz (Figura 5), dirigido a Agrobacterium
generar un número considerable de (3 días)
plantas transformadas (eventos) de
variedades comerciales, que estén sanas
y se adapten a los ecosistemas de arroz Lavado de los callos infectados,
con riego y de arroz de tierras altas en selección de los callos lavados, y
América Latina (Lentini et al., 2003). regeneración de plantas de arroz
(6 a 8 semanas)
Contra el VHB
Figura 5. Protocolo desarrollado en el
CIAT para lograr una
Las primeras plantas de arroz
transformación genética del
transformadas genéticamente en el CIAT
arroz por intermedio de la
por el sistema de la biolística fueron las
bacteria Agrobacterium
plantas transgénicas con resistencia al
tumefaciens.
virus de la hoja blanca del arroz (VHB;
RHBV, del inglés). La hoja blanca del
arroz es una de las principales cuatro especies de ARN de cadena
enfermedades de este cultivo en América sencilla (Ramírez et al., 1992; 1993).
tropical (Morales y Niessen, 1983). La La caracterización molecular permitió
resistencia a este virus es conferida por establecer las secuencias del ARN3 y del
1 ó 2 genes, pero las plantas que los ARN4 del RHBV, y determinar luego que
poseen son susceptibles antes de los estos dos genomas codifican, a su vez,
25 días de edad. La incertidumbre de para dos genes cada uno y de manera
una epifitia hace recurrir a los antisentido (Ramírez et al., 1993). La
agricultores al uso masivo de productos secuencia del ARN3 del virus codifica
agroquímicos que combatan el vector del para la nucleoproteína (N), conocida en
virus, un insecto saltahojas de la especie otros tipos de virus como ‘proteína de la
Tagosodes orizicolus (Muir). cubierta’. Se ha comprobado que la
expresión de esta proteína, en las plantas
El virus transgénicas, es un mecanismo útil para
El RHBV es un miembro del grupo de los producir resistencia a los virus de las
tenuivirus. La caracterización molecular plantas (Beachy et al., 1987).
del virus y la preparación de bibliotecas
de copias de ADN (ADNc) ha permitido El proyecto
diseñar, en algunas variedades El objetivo principal del proyecto es
comerciales de arroz, estrategias de proveer una nueva fuente de resistencia
resistencia al virus mediante la ingeniería al virus para complementar la resistencia
genética. El genoma del RHBV consta de simple que está ya presente en algunas

267
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

de las variedades comerciales de arroz patógeno bajo condiciones de

sembradas en América Latina. invernadero y de campo.
• Caracterización molecular del
El trabajo realizado permite concluir lo patógeno.
siguiente: • Evaluación de diferentes fuentes
potenciales de resistencia o tolerancia
• La protección conferida por el gen que a la enfermedad, incluyendo aquí las
codifica para N (tal como se detectó) especies silvestres del género Oryza.
consiste en una reducción
significativa del progreso y de la Se concluyó que no se conoce aún una
severidad de la enfermedad con fuente de resistencia estable y que todas
respecto al testigo inoculado (CICA 8). las variedades ensayadas son
• Se observaron también muchas susceptibles al patógeno.
reacciones de resistencia, entre ellas
la producción de lesiones localizadas Resistencia alterna
conocidas como ‘reacción de Se consideró entonces la especie
resistencia hipersensitiva’. Phytolaca americana, una maleza que se
encuentra naturalmente desde los
Los resultados de campo indican que la Estados Unidos hasta Argentina, porque
resistencia transgénica al RHBV puede es la fuente de numerosas proteínas de
servir para complementar las fuentes propiedades antivirales y antifúngicas ya
naturales de resistencia al virus. En los analizadas. Contiene, por ejemplo, una
cruzamientos realizados, la tercera proteína antiviral (PAP) que inhibe la
generación de líneas fue más resistente infección causada por un amplio rango
que los cruzamientos no transgénicos. de virus de plantas, ya sea los de tipo
Este resultado sugiere que la protección ARN o los de tipo ADN (como el virus del
conferida por el transgene del RHBV se mosaico del tabaco). Una colaboradora
expresa independientemente de la edad de este proyecto, la Dra. Nilgun Tumer
de la planta y de su composición (Biotechnology Center, Rutgers
genética. Por consiguiente, el transgene University, EE.UU.) estudió la proteína
puede usarse para complementar las PAP y halló que la de 29 kda (kilodaltons)
fuentes naturales de resistencia. tiene la habilidad de inactivar ribosomas
en las células. Ahora bien, las versiones
Contra el añublo de la vaina mutadas del gen que codifica para PAP
generan una potente actividad
El hongo Rhizoctonia solani causa la antifúngica (Zoubenko et al., 1997).
enfermedad ‘añublo de la vaina’ en el
arroz, a la que se deben serias pérdidas El proyecto
en la producción de este cereal en El objetivo de este proyecto fue
América Latina. El Proyecto de Arroz del incorporar el gen PAP y123, una versión
CIAT desarrolla estrategias para controlar no tóxica del gen que codifica para PAP,
la enfermedad, que reduzcan en algunas variedades comerciales de
simultáneamente el uso de fungicidas y arroz que se siembran en América
otros químicos asociados actualmente a Latina, para conferirles resistencia al
ese control. El trabajo comenzó en los hongo R. solani.
tres frentes siguientes:
En trabajos anteriores a los antes
• Adaptación, y posterior mencionados se había demostrado que,
establecimiento, de metodologías para en ausencia de infección del patógeno
evaluar la resistencia del arroz al considerado, la proteína PAP parecía

268
 Transformación genética del arroz

activar tanto la expresión de genes del agua disponible por persona en el

hospedante (del transgene) que están planeta habitado. El incremento de la
asociados con la respuesta de eficiencia en el uso del agua debe ser, por
hipersensibilidad (HR) como las señales tanto, una prioridad en el sector
relacionadas con las rutas de traducción arrocero.
de proteínas de defensa. Además, la
proteína PAP inhibe la formación de Genes y promotores
lesiones locales debidas a diferentes Poco se conoce sobre el metabolismo
virus, por ejemplo los de tipo ARN y molecular asociado con la tolerancia a la
algunos de tipo ADN (Chen et al., 1991), sequía en el arroz. La respuesta
proporcionando así un mecanismo de fisiológica al estrés hídrico se produce a
resistencia contra los virus transmitidos nivel celular, es decir, cuando hay
por áfidos. Ahora bien, dado que el gen cambios en la expresión de ciertos genes.
que codifica para la proteína PAP confiere Se ha demostrado que varios genes del
resistencia frente a un amplio rango de arroz están asociados con la tolerancia
patógenos, es interesante evaluar la de la sequía, de la salinidad y del frío, y
respuesta de este gen frente al virus de la codifican para proteínas cuyo propósito
hoja blanca del arroz (RHBV) y frente a es proteger las células del estrés debido a
otros virus. esas condiciones (Shinozaki y
Yamaguchi-Shinozaki, 1997).
Contra la sequía
Algunos genes responden al estrés
En la actualidad, el Proyecto de Arroz del hídrico con mucha rapidez, mientras que
CIAT desarrolla una investigación otros son inducidos a responder cuando
importante relacionada con algunos se acumula ácido abscísico (ABA) en
genes de resistencia a la sequía. El diversos tejidos de la planta. Se han
potencial de rendimiento del arroz, tanto analizado, en tejidos de plantas de
de secano como con riego, depende Arabidopsis thaliana, los promotores de
grandemente de una adecuada los genes que son inducidos por la
disponibilidad de agua durante todo el deshidratación y el frío; el análisis
ciclo de crecimiento de la planta; ahora identificó varios ‘elementos’ que
bien, dado que el arroz con riego, que participan en las respuestas al estrés
representa actualmente la mayor hídrico dependientes del ABA y en las
producción de este cereal en el mundo, que son independientes de este
requiere una gran cantidad de agua que promotor. El elemento DRE (elemento de
compite la que necesitan otras respuesta a la deshidratación) está
actividades humanas, la prioridad de involucrado en el control de la expresión
esta investigación es innegable. de los genes de respuesta a la
deshidratación de A. thaliana y otras
Por otra parte, los campos inundados especies, y se encuentra en la regiones
donde se cultiva el arroz ‘paddy’ en los promotoras de los genes que pueden
países orientales, contribuyen inducirse a emitir una respuesta a la
significativamente a incrementar la deshidratación y al frío (Kasuga et al.,
emisión de metano, un gas asociado con 1999). El principal control de la
el efecto invernadero; por consiguiente, expresión de estos genes ‘inducibles’ por
influyen en el cambio climático. El agua estrés es otro elemento, el DRBE
se ha convertido, además, en un (elemento que se vincula a la respuesta a
recurso escaso en América Latina, a la deshidratación), que es de carácter
pesar de que en esta región representa, proteínico y ha sido caracterizado como
proporcionalmente, la mayor cantidad de factor de transcripción del elemento que

269
270

M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 M

Figura 6. Análisis molecular del ADN de plantas consideradas ya transgénicas. Las líneas 1 a 23 son muestras (la 19 y la 23 son
negativas), la línea 24 es un pozo sin ADN, la línea 25 es agua sin ADN, la línea 26 es la variedad Curinga no transgénica, la
línea 27 es el ADN del plásmido, la línea 28 es agua sin ADN.

La parte delantera del cebador (‘primer’) es así: AtDREB1Aseq 3 (CGAGTTTGTTGGCTAATATGGCAG), de 24 pb (pares de

bases).
El inverso (o contrario) del cebador es así: (GCCAGTGAATTCCCGATCTAGTA), DE 23 pb.
Tamaño del producto de la RCP (‘proteín chain reaction’): 418 pb.
El construido (‘construct’) es así: pBIHosnac6:DREB1A.
 Transformación genética del arroz

controla la expresión de múltiples genes de Investigación para las Ciencias

de respuesta temprana a la sequía Agrícolas del Japón (JIRCAS, sus siglas
(Figura 6). en inglés). Además, un grupo de
investigadores de la Unidad de
El DRBE (también conocido como CBF, Biotecnología del CIAT, entre los que
cell binding factor) y los genes que figura Manabu Ishitani, ha aislado varios
codifican para el elemento fueron genes codificadores de DRBE en el fríjol
aislados de A. thaliana por Liu y sus común y pone a prueba actualmente la
colaboradores en 1998 y del arroz por expresión de estos genes bajo condiciones
Dubouzet y sus colaboradores en el de estrés hídrico.
2003. El DRBE de A. thaliana se ha
utilizado en un sistema heterólogo y su Referencias bibliográficas
expresión se probó en el tomate
transgénico por Hsieh y sus Beachy, R.N.; Rogers, S.G.; Fraley, R.T.
colaboradores en el 2002. Este enfoque 1987. Genetic transformation to
de prueba en transgénicos se ha confer resistance to plant virus
empleado en los casos siguientes: disease. Genetic Engineering
9:229-247.
• Para mejorar la tolerancia a factores
de estrés en especies de plantas en Borlaug, N.E. 1988. Feeding a world of
que hay genes que codifican para las 10 billion people: The miracle
enzimas involucradas en la ahead. Plant Tissue Culture and
biosíntesis de los diferentes osmo- Biotechnology 3:119-127.
protectores.
• Para modificar los lípidos de las Brar, D.S.; Khush, G.S. 1986. Wide
membranas (por ejemplo, las hybridization and chromosome
proteínas LEA) y las enzimas de manipulation in cereals. In: Evans.
desintoxicación en plantas cuyos D.A.; Ammirato, P.V. (eds.).
genes codifican para esos productos Handbook of plant cell culture.
(Kasuga et al., 1999). Macmillan, NY. p. 221-263.

El proyecto Breitler, J.C.; Vassal, J.M.; Catala,

El principal objetivo de este trabajo de M.D.M.; Meynard, D.; Marfà, V.;
investigación del CIAT es probar genes Melé, E.; Royer, M.; Murillo, I.;
que codifiquen para DRBE, y probar Segundo, B.S.; Guiderdoni, E.;
otras secuencias asociadas con la Messeguer, J. 2004. Bt rice
tolerancia de la sequía, con el fin de dar harbouring cry genes controlled by a
mayor eficiencia en el uso del agua a las constitutive or wound-inducible
líneas comerciales de arroz adaptadas a promoter: Protection and transgene
las condiciones tropicales de América expression under Mediterranean
Latina, y para comprender los field conditions. Plant Biotechnology
mecanismos moleculares que explican la Journal 2:417-430.
forma en que esas líneas toleran el estrés
hídrico. Brookes, N.; Barfoot, P. 2007. Global
impact of GM crops: Socio-economic
Los genes que codifican para DRBE and environmental effects in the
(provenientes del arroz y de Arabidopsis) first ten years of commercial use.
fueron proporcionados al proyecto por el AgBioForum 9:139-151.
Dr. Shinozaki, del Centro Internacional

271
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

Chen, Z.C.; White, R.F.; Antoniw, J.F.; Dong, J.; Kharb, P.; Teng, W.; Hall, T.C.
Lin, Q. 1991. Effect of pokeweed 2001. Characterization of rice
antiviral protein (PAP) on the transformed via an Agrobacterium
infection of plant viruses. Plant inflorescence approach. Molecular
Pathology 40(4):612-620. Breeding 7:187-194.

Cheng, M.; Lowe, B.A.; Spencer, T.M.; Ye, Dubouzet, J.G. Skum, Y.; Ito, Y.; Kasuga,
X.; Amstrong, C.L. 2004. Factors M.; Dubouzet, E.; Miura, S.; Seki,
influencing Agrobacterium- M.; Shinozaki, K.; Yamaguchi-
mediated transformation of Shinozaki, K. 2003. DREB genes in
monocotyledonous species. In Vitro rice (Oryza sativa L.), encode
Cellular and Developmental transcription activators that
Biology – Plant 40:31-45. function in drought–, high-salt– and
cold–responsive gene expression.
Corneille, S.; Lutz, K.; Maliga, P. 2000. Plant Journal 33:751-763.
Conservation of RNA editing
between rice and maize plastids: Are Ebinuma, H.; Komamine, A. 2001. MAT
most editing events dispensable? (Multi-Auto-Transformation) vector
Molecular and General Genetics system. The oncogenes of
264:419-424. Agrobacterium as positive markers
for regeneration and selection of
Dai, S.; Zheng, P.; Marmey, P.; Zhang, S.; marker-free transgenic plants. In
Tian, W.; Chen, S.; Beachy, R.N.; Vitro Cellular and Developmental
Fauquet, C. 2001. Comparative Biology – Plant 37:103-113.
analysis of transgenic rice plants
obtained by Agrobacterium-mediated FAO (Organización de las Naciones
transformation and particle Unidas para la Agricultura y la
bombardment. Molecular Breeding Alimentación). 2004. Anuario
7:25-33. estadístico de la FAO 2004. Roma.
v.l, parte 1. Disponible en:
Dale, E.C.; Ow, D.W. 1991. Gene transfer www.fao.org
with subsequent removal of the
selection gene from the plant FAO (Food and Agriculture Organization);
genome. Proceedings of the National WHO (World Health Organization).
Academy of Sciences of the United 2008. World agriculture towards
States of America 88(10):558-562. 2015-2030. Informe condensado.
FAO Economic and Social
Daley, M.; Knauf, V.C.; Summerfelt, Department, Roma.
K.R.; Turner, J.C. 1998. Co-
transformation with one Fawcett, N.; Towry, D. 2002.
Agrobacterium tumefaciens strain Conservation tillage and plant
containing two binary plasmids as a biotechnology: How new
method for producing marker-free technologies can improve the
transgenic plants. Plant Cell environment by reducing the need
Reports 17:489-496. to plow. Conservatory Technology
Information Center, West Lafayette,
Indiana, EE.UU. p. 1-24.

272
 Transformación genética del arroz

Hansen, G.; Wright, M.S. 1999. Recent Komari, T.; Hiei, Y.; Saito, Y.; Murai, N.;
advances in transformation of Kumashiro, T. 1996. Vectors
agricultural plants. Trends in Plant carrying two separate T-DNAs for
Science 4:226-231. co-transformation of higher plants
mediated by Agrobacterium
Hiei, Y.; Ohta, S.; Komari, T.; Kumashiro, tumefaciens and segregation of
T. 1994. Efficient transformation of transformants free from selection
rice (Oryza sativa L.) mediated by markers. Plant Journal 10:165-174.
Agrobacterium and sequence analysis
of the boundaries of the DNA. Plant Kumlehn, J.; Serazetdinova, L.; Hansel,
Journal 6:271-282. G.; Becker, D.; Loerz, H. 2006.
Genetic transformation of barley
Hohn, B.; Levy, A.A.; Puchta, H. 2001. (Hordeum vulgare L.) via infection of
Elimination of selection markers androgenetic pollen cultures with
from transgenic plants. Current Agrobacterium tumefaciens. Plant
Opinion in Biotechnology Biotechnology Journal 4:251-261.
12:139-143.
Lentini, Z.; Lozano, I.; Tabares, E.; Fory,
Hsieh, T-H.; Lee, J-T.; Chang, Y-Y.; Chan, L.; Domínguez, J.; Cuervo, M.;
M-T. 2002. Tomato plants ectopically Calvert, L. 2003. Expression and
expressing Arabidopsis CBF1 show inheritance of hypersensitive
enhanced resistance to water deficit resistance to rice Hoja Blanca Virus
stress. Plant Physiology 130:618-626. mediated by the viral nucleocapsid
protein gene in transgenic rice.
James, C. 2007. Global status of Theoretical and Applied Genetics
commercialized biotech: GM crops 106:1018-1026.
2007. ISAAA Brief No. 37.
International Service for the Liu, Q.Q.; Zhang, J.L; Wang, Z.Y.; Hong,
Acquisition of Agrobiotech M.M.; Gu, M.M. 1998. A highly
Applications (ISAAA), Ithaca, NY, efficient transformation system
EE.UU. mediated by Agrobacterium
tumefaciens in rice. Acta
Jauhar, P.P.; Chibbar, R.N. 1999. Phytophysiologica Sinensis
Chromosome-mediated and direct 24:259-271.
gene transfers in wheat. Genome
42:570-583. Marvier, M.; McCreedy, C.; Regetz, J.;
Kareiva, P. 2007. A meta-analysis of
Jauhar, P.P.; Peterson, T.S. 2001. Hybrids effects of Bt cotton and maize on
between durum wheat and non-target invertebrates. Science
Thinopyrum junceiforme: Prospects 316:145-147.
for breeding for scab resistance.
Euphytica 118:127-136. McCormac, A.C.; Wu, H.; Bao, M.; Wang,
Y.; Xu, R.; Elliott, M.C.; Chen, D.F.
Kasuga, M.; Liu, Q.; Miura, S.; 1998. The use of visual marker
Yamaguchi-Shinozaki, K.; Shinozaki, genes as cellspecific reporters of
K. 1999. Improving plant drought, Agrobacterium-mediated T-DNA
salt, and freezing tolerance by gene delivery to wheat (Triticum aestivum
transfer of a single stress-inducible L.) and barley (Hordeum vulgare L.).
transcription factor. Nature Euphytica 99:17-25.
Biotechnology 17:287-291.

273
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

Morales, F.J.; Niessen, A.I. 1983. Sahrawat, A.K.; Becker, D.; Lütticke, S.;
Association of spiral filamentous Lörz, H. 2003. Genetic improvement
viruslike particles with rice hoja of wheat via alien gene transfer, an
blanca. Phytopathology assessment. Plant Science
73:971-974. 165:1147-1168.

National Academy of Sciences. 2004. Shinozaki, K.; Yamaguchi-Shinozaki, K.

Safety of genetically engineered 1996. Molecular responses to
foods: Approaches to assessing drought and cold stress. Current
inintendent health effects. The Opinion in Biotechnology
National Academic Press, 7(2):161-167.
Washington, DC.
Shinozaki, K.; Yamaguchi-Shinozaki, K.
OECD (Organization for Economic 1997. Gene expression and signal
Co-operation and Development). transduction in water-stress
2003. Considerations for the safety response. Plant Physiology
assessment of animal feedstuffs 115(2):327-334.
derived from genetically modified
plants. ENV/JM/MONO. París. Shrawat, A.K.; Lörz, H. 2006.
Agrobacterium-mediated
Potrykus, I. 1991. Gene transfer to transformation of cereals: A
plants: assessment of public promising approach crossing
approaches and results. Annual barriers. Plant Biotechnology
Review of Plant Physiology Journal 4(6):575-603.
42:205-225.
WHO (World Health Organization). 2004.
Ramessar, K.; Peremarti, A.; Gómez- Scientific facts on genetically
Galera, S.; Naqvi, S.; Moralejo, M.; modified crops. Disponible en:
Muñoz, P.; Capell, T.; Christou, P. www.who.int/foodsafety/
2007. Biosafety and risk publications/biotech
assessment framework for selectable
marker genes in transgenic crop Xiao, H.; Hrdlicka, L.A.; Nambu, J.R.
plants: A case of the science not 1996. Alternate functions of the
supporting the politics. Transgenic single-minded and rhomboid genes
Research 16(3):261-280. in development of the Drosophila
ventral neuroectoderm.
Ramírez, B.C.; Macaya, G.; Calvert, L.; Mechanisms of Development
Haenni, A.L. 1992. Rice Hoja Blanca 58(1-2):65-74.
Virus genome characterization and
expression in vitro. Journal of Zoubenko, O.; Unkun, F.; Hur, Y.; Chet,
General Virology 73:1457-1464. I.; Tumer. N.E. 1997. Plant
resistance to fungal infection
Ramírez, B.C.; Lozano, I.; Constantino, induced by nontoxic pokeweed
L.M.; Haenni, A.L.; Calvert, L. 1993. antiviral protein mutants. Nature
Complete nucleotide sequence and Biotechnology 15(10):992-996.
coding strategy of rice Hoja Blanca
Virus RNA4. Journal of General
Virology 74:2463-2468.

274
 Transformación genética del arroz

Anexo

Ilustración detallada de los pasos que requiere la transformación

genética del arroz mediante el sistema Agrobacterium

1 Maceración 2
var. Curinga

Permanencia en la oscuridad a
temperatura de 24 a 26 °C
Embriones maduros
3 4 (3 a 4 semanas)
(4-5 días)

Callo embriogénico Proliferación del callo

5 (3 a 4 semanas) 6 (3 a 4 semanas)

Subcultivo de callo Callo infectado

7 (3 a 4 días) 8 (3 días)

275
Producción eco-eficiente del arroz en América Latina

5 días después de Selección del callo

9 10 del escutelo
cultivar a 34 °C

Expresión estable del

Proliferación marcador GUS luego de la
del callo selección con higromicina
11 12

Selección por higromicina

(3 a 4 semanas) Regeneración del callo
13 14 (3 a 4 semanas)

Aclimatación
15 Plantas de 2 semanas 16 (endurecimiento) (5 días)

276