Manual de La Seccion
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Manual de La Seccion
Se organizan de forma consecutiva los addis por orden de llegada cada uno con su
identificación.
Se mide el volumen de cada muestra y se centrífuga 10 ml de orina en tubos plásticos
graduados.
Las ordenes organizadas se pasaran a las listas de trabajo que llevaran los siguientes
datos: nombre, numero, volumen, tiempo y los resultados de leucocitos, hematíes ,
cilindros y albúmina.
NEFROLOGÍA
Las orinas de 24 horas se mezclan, se miden y se le separa una alícuota en un tubo de
ensayo rotulado.
Las muestras se separan de acuerdo a la determinación que se le va a realizar.
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL SEDIMENTO URINARIO. CITURIA
4. Muestra.
La muestra debe estar constituida por el chorro intermedio de la orina emitida
inmediatamente después de levantarse. En los análisis de urgencias puede
utilizarse la orina de emitida en cualquier momento del día o de la noche.
5. Procedimiento.
Consta de los parte una para la determinación de proteína o albúmina y otras para
el examen microscópico para el sedimento urinario.
a. Proteinuria (albuminuria)
Se determina cualitativamente el contenido de proteína en la muestra
añadiendo en un tubo de ensayo a 3 mL de orina 3 gotas de ácido
sulfosalicílico al 20 %.
Se informa de acuerdo a la turbiedad que aparezca como:
1—1mm-- h 0.1mm
------------------------------------------- --------------------------------------
1 111213141 111213141 1 1 1 1
m 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 2 1
m 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
-------------------------------------------- -------------------------------------
1 1 1 1 1 1 1 1
1 1 1 1 1 1 1 1
1 1 1 1 1 1 1 1
1 1 1 1 1 1 1 1
-------------------------------------------- -------------------------------------
1 111213141 111213141 1 1 1 1
m 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 3 1 1 4 1
m 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
------------------------------------------- -------------------------------------
Fig. 1 Fig. 2
Cámara de Newbauer Cámara de Newbauer
Área enumerada (leucocitos y eritrocitos) Área enumerada (cilindros)
N= Ne x 10 000
C = Ce x 2 500
7. Control de la calidad
8. Intervalo de referencia
ALBÚMINA : NO CONTIENE
0 a 10 000 LEUCOCITOS / mL
0 a 10 000 ERITROCITOS / mL
0 CILINDROS / mL
9. Bibliografía:
4. Muestra:
a) Addis de 2 horas:
La muestra debe estar constituida por la orina de las dos primeras horas del
día preferentemente de reposo.
Método de recolección:
A las 6 am orinar para vaciar la vejiga. Marcar la hora y recoger toda la orina
de las 2 horas siguientes en una vasija ancha y verterlo con cuidado en el
frasco.
b) Addis de 8 horas:
La muestra debe estar constituida por la orina de las 8 últimas horas del
reposo nocturno.
Método de recolección:
A las 10 pm orinar para vaciar vejiga, marcar la hora y recoger toda la orina
de la madrugada hasta las 6 am inclusive, en una vasija ancha y verterlo con
cuidado en el frasco.
5. Procedimiento:
a) Medir diuresis y anotar el volumen.
b) Homogenizar la orina
c) Verter en un tubo de centrífuga graduado, 10 mL de la muestra, centrifugar
durante 5 minutos a 2000 rpm
d) Decantar a un tubo de ensayo previamente rotulado 9 mL del sobrenadante.
e) Resuspender el sedimento en el mL restante.
f) Examen microscópico del sedimento urinario
Se mezclan y se esperan 5 minutos. Leer contra blanco reactivo a 580nm, con una
cubeta de 1mL de volumen y 1 cm de paso de luz.
6. Gráfico de calibración
Se prepara distintas diluciones de la solución matriz para obtener 0.2; 0.5, 0.7 y
1.0 g/L. Este método es lineal solo hasta 1 g/L, que generalmente nos corresponde
con 0.4 de extinción; por eso a valores mayores de extinción debemos diluir la orina y
repetir la determinación con orina diluida y luego multiplicar el resultado por la dilución
a) Proteinuria
D.O (orina)
C = --------------------------------- x C ( sol. Referencia) x dil.
D.O (solución referencia)
Diuresis (mL)
---------------------------- x C (g/L) = Proteínas excretadas / min
# de horas x 60 min
Diuresis (mL) g
---------------------------- x C ------------- = como g / 1000 = mg ; entonces
# de horas x 60 min 1000 mL
Diuresis (mL)
---------------------------- x C (mg / mL) = Proteínas (mg/min)
# de horas x 60 min
b) Cálculos del conteo del examen microscópico del sedimento (Bawer pag. 199)
N = Ne (1 mL / Vc) dil
N= Ne x 10 000 x 1 / 10
N=Ne x 1 000
Diuresis (mL)
--------------------------- x N ( # de células /mL) = Nm
# de horas x 60 min
Diuresis (mL)
--------------------------- x N = Nm ( # de células /min)
# de horas x 60 min
Entonces:
Diuresis (mL)
Nm (# de células / min) = Ne x 1000 x -------------------------
# de horas x 60 min
C = Ce ( 1mL/Vc) x dil
Dil: Es 1 / 10
Diuresis (mL)
--------------------------- x C ( # de cilindros / mL)
# de horas x 60 min
Diuresis (mL)
--------------------------- x C = Cm ( # de cilindros /min)
# de horas x 60 min
Entonces:
Diuresis (mL)
------------------------- x 250 x Ce = Cm ( # de cilindros / min)
# de horas x 60 min
Parámetros Resultados
Volumen ---------- mL
Leucocitos --------- / min
Hematíes --------- / min
Cilindros --------- / min
Proteinas --------- mg/ min
8. Control de la calidad:
9. Intervalo de referencia
ADDIS DE 2 HORAS
VOLUMEN --------- ML
LEUCOCITOS 0 HASTA 1000 /MIN
HEMATÍES 0 HASTA 1000 / MIN
CILINDROS 0 HASTA 250 / MIN
PROTEÍNAS NO CONTIENE.
DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE LAS PROTEINAS URINARIAS
(método de Marcart y Gerbaut descrito en 1984)
Para la cuantificación:
Reactivo de azul de Comassie (Reactivo de proteínas)
4. Muestra
Una alícuota de orina homogenizada de 24 horas
5. Procedimiento
a) Homogenizar la orina y medir diuresis
b) Guardar una alícuota de la orina rotulada
c) Determinar cualitativamente el contenido de la s proteínas de la alícuota
añadiendo en otro tubo 3 mL de orina con 3 gotas de ácido sulfosalicílico,
se compara con el tubo enumerado y se informa de acuerdo a la turbiedad
que aparezca.
Se informa:
NO CONTIENE: Si se mantiene transparente o si amos tubos mantienen la
misma turbiedad
LIGERAS TRAZAS: Si en el tubo con ácido aparece una ligera opalescencia.
Si la turbiedad es mayor se cuantifican las proteínas por el método de Azul de
Comassie.
Si el precipitado nos indica que la concentración de proteínas es mayor que
1g/L se diluye la orina antes de cuantificarla. Porque el método solo es lineal
hasta 1 g/L
Se mezclan y se esperan 5 minutos. Leer contra blanco reactivo a 580 nm, con una
cubeta de 1 mL de volumen y 1 cm de paso de luz.
6. Grafico de calibración:
La solución matriz de 1 g/L. Se enumeran tubos del 1 al 11 y se le añaden las
siguientes cantidades de solución de calibración para 2 mL del reactivo de Azul de
Comassie.
Am
C = ----------- x Cr = factor * Am
Ar
donde factor = Cr / Ar o cotangente o pendiente
Am: Absorción de la muestra
Ar: Absorción de la solución de referencia
Cr: Concentración de a solución de referencia en g/L
8. Control de Calidad
Se controla la variación de los resultados con un material de control adecuado
(orina control).
9. Intervalo de referencia:
De 0 a 0.15 g/ 24 horas
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS DE BENCE JONES
Método de Putman y col (1959)
4. Muestras
La muestra esta constituida o por la primera orina de la mañana o por orina de 24
horas.
5. Procedimiento:
a. Colocar 4 mL de orina en un tubo de ensayo
b. Añadir 1 mL de buffer acetato 2 M, pH 4.9
c. Incubar en baño de agua a 56 C durante 15 min.
d. Cualquier precipitación es indicativa de presencia de proteínas de Bence Jones
en la orina.
e. Colocar en agua hirviendo 3 minutos y observa continuamente cualquier
disminución o aumento de precipitado; el aclaración de la opacidad es
confirmatorio, pero no todas se redisuelven a temperatura de ebullición.
7. Control de Calidad
Se utiliza la orina de un paciente enfermo, un conocido positivo
4. Muestra
La determinación necesita 2 muestras una de suero y otra de orina de 24 horas
5. Procedimiento:
Se homogeniza la orina de 24 horas, en una probeta y se mide la diuresis, luego se
rotula un tubo de ensayo y se conserva una alícuota de la orina.
En una planilla se enumeran los sueros de los pacientes que se les ha indicado filtrado
glomerular, y a continuación las orinas, las mismas se mandaran diluidas 1 en 20.
1 ml de agua destilada se le saca 50 µL y se le añaden 50 µL de la orina.
Todas las determinaciones se hacen en equipo Hitachi por el Jaffé cinético.
FGt = FG * 1.73 / SC