PSA EIA

Cat. IIDE-2081
VER.3

Inmunoensayo para la Determinación del Antígeno Prostático de rábano picante unido en los pozos después, se ensayó mediante una
reacción colorimétrica. La intensidad del color formado es proporcional a
Solo para diagnóstico In Vitro la concentración de PSA presente en la muestra.
Para uso exclusivo en laboratorios clínicos o de gabinete
Conservar entre 2°C a 8°C REACTIVOS
Materiales abastecidos con el equipo de prueba
NOMBRES COMUNES Y DE PROPIEDAD 1. Placa de micropozos recuubiertas de anticuerpo con 96 pozos
Inmunoensayo de la Enzima de PSA 2. Enzima Conjugada, 1 Frasco
3. Estándares de referencia PSA, que contienen 0, 2.5, 5, 15, 30 y 60
USO DESTINADO ng/mL. Liquido. Listo para usarse
La prueba PSA EIA se utiliza para la determinación cuantitativa de la con- 4. Búfer de lavado concentrado (50x). 1 Frasco
centración del antígeno prostático específico en suero humano que sirve 5. Reactivo TMB. 1 Frasco
como indicador de presencia de cáncer prostático e hipertrofia prostática 6. Solución de Paro. 1 Frasco
benigna, asi como de condiciones inflamatorias de otros tejidos genito-
urinarios adyacentes. Materiales requeridos pero no abastecidos
1. Pipetas de precisión 5 ~ 40 µL, 50 ~ 200 µL y 1.0 mL
INTRODUCCIÓN 2. Puntas para pipetas desechables.
El antígeno específico de la próstata humana (PSA) es una proteasa séri- 3. Agua destilada
ca, la cual es una glicoproteína de cadena simple con un peso molecular 4. Mezclador Vórtex o equivalente.
de aproximadamente 34,000 daltons que contiene 7% de carbohidrato 5. Papel absorbente o toalla de papel
por peso. El PSA es inmunológicamente específico para el tejido pros- 6. Papel cuadriculado
tático, está presente en el tejido prostático maligno e hiperplásico be- 7. Un lector de Microelisa.
nigno normal, en carcinoma prostático metastático, y también en el fluido
prostático y plasma seminal. El PSA no está presente en ningún otro COLECCIÓN Y PREPARACIÓN DE MUESTRAS
tejido normal obtenido del hombre, ni está producido por cánceres del 1. La sangre debe extraerse utilizando técnicas de venopunción están-
pecho, pulmón, colon, recto, estómago, páncreas, o tiroides. Además, es dar y el suero debe ser separado de las células rojas de la sangre
funcional e inmunológicamente diferente de la fosfatasa del ácido pros- tan pronto como sea posible. Evite muestras con alto grado de he-
tático (PAP). molisis, lipemia o turbias.
Las concentraciones de PSA en suero elevadas han sido reportadas en 2. Las muestras de plasma recolectadas en tubos que contienen
pacientes con cáncer prostático, hipertrofia prostática benigna, o con EDTA, heparina u oxalato pueden interferir con los procedimientos
condiciones inflamatorias de otros tejidos genitourinarios adyacentes, de ensayo y deben evitarse.
pero no en hombres aparentemente saludables, hombres con carcinoma 3. Las muestras deben ser tapadas y se pueden almacenar hasta 48
no prostático, mujeres aparentemente saludables, o mujeres con cáncer. horas a 2-8ºC, antes del ensayo. Las muestras almacenadas por
Los reportes han sugerido que el PSA en suero es uno de los marca- más tiempo pueden congelarse a -20ºC. Muestras descongeladas
dores de tumores más útiles en oncología. Este puede servir como un deben mezclarse antes de la prueba.
marcador preciso para evaluar la respuesta al tratamiento en pacientes El almacenamiento de los equipos de prueba sin abrir deben almacenarse
con cáncer prostático. Por lo tanto, la medición de las concentraciones de a 2-8ºC despues de recibirlo. La placa de microtitulación debe manten-
PSA en suero puede ser una herramienta importante para monitorear a erse en una bolsa sellada con desecantes, para minimizar la exposición
pacientes con cáncer prostático y para determinar la efectividad potencial a la humedad. Equipos de prueba abiertos permanecerán estables hasta
y real de la cirugía u otros tratamientos. la fecha de vencimiento, siempre que se almacene como se describe
Estudios recientes también indican que las mediciones de PSA pueden anteriormente.
aumentar la detección de cáncer en la próstata tempranamente cuando
son combinadas con la examinación rectal digital (ERD). PREPARACIÓN DE REACTIVOS
1. Todos los reactivos deben estar a temperatura ambiente (18 a 22ºC)
PRINCIPIO DE LA PRUEBA y mezclar invirtiendo suavemente o girando antes de su uso. No
La prueba de PSA EIA es un inmunoensayo en fase sólida de dos sitios. provocar la formación de espuma.
Conejo anti-PSA está revestido en la superficie de los pocillos de microti- 2. Diluir 1 volumen de buffer de lavado (50x) con 49 volúmenes de
tulación y otro anticuerpo monoclonal anti-PSA marcado con peroxidasa agua destilada. Por ejemplo, diluir 15 mL de buffer de lavado (50x)
de rábano picante utilizado como trazador. Las moléculas de PSA pre- en 735 mL de agua destilada para preparar 750 ml de amortiguador
sentes en la solución o suero estándar están “intercalados” entre los dos de lavado (1x). Mezclar bien antes de usar.
anticuerpos. Después de la formación del complejo que cubre el anticu-
erpo-antígeno-anticuerpo-enzima, los trazadores anticuerpo-enzima no PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO
unidos son eliminados mediante el lavado. La actividad de la peroxidasa 1. Asegure el número deseado de pozos cubiertos en el soporte.

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2. Dispense 25 µL de estándares, muestras y controles en los pozos
3.0
apropiados.
3. Dispense 100 µL de Reactivo conjugado enzimático en cada pocillo. 2.5
Mezclar suavemente durante 5 segundos.
4. Incubar a temperatura ambiente por 45 minutos. 2.0

5. Retire la mezcla de incubación vaciando el contenido de la placa en

1.5
un contenedor de residuos.
6. Enjuague y vacíe los pocillos de microtitulación 5 veces con el búfer 1.0
de lavado (1X).
7. Golpear ligeramente los pozos sobre el papel absorbente para elimi- 0.5

nar las gotas residuales.

0.0
8. Dispense 100 µL de solución de TMB dentro de cada pozo. Mezclar
0 10 20 30 40 50 60
suavemente durante 5 segundos.
9. Incubar a temperatura ambiente durante 15 minutos. Esta curva estándar es con el propósito de ilustración solamente y no
10. Detenga la reacción añadiendo 100 µL de solución de paro a cada debe ser usada para calcular resultados. Cada usuario debe obtener su
pocillo. propia curva y datos estándar.
11. Mezclar suavemente durante 30 segundos para asegurarse de que
el color azul cambie a amarillo por completo. VALORES ESPERADOS Y SENSIBILIDAD
12. Con el uso de un lector de placa de microtitulación, leer la densidad Se espera que los hombres sanos tener valores de PSA por debajo de 4
óptica a 450 nm dentro de los 15 minutos. ng/mL. La concentración mínima detectable de PSA en este ensayo se
estima en 0.5 ng/mL.
Nota Importante
1. El procedimiento de lavado es crítico. Un lavado insuficiente pro- REFERENCIAS
ducirá una falta de precisión y las lecturas de absorbancia falsa- 1. Hara, M. and Kimura, H. Two prostate-specific antigens, gammaseminoprotein
mente elevadas. and beta-microseminoprotein. J. Lab. Clin. Med. 113:541-548;1989.
2. Se recomienda que no más de 32 pozos se utilicen para cada en- 2. Yuan, J.J.; Coplen, D.E.; Petros, J.A.; Figenshau, R.S.; Ratliff, T.L.; Smith, D.S.
sayo, si se utiliza el pipeteado manual, ya que el pipeteo de todos los and Catalona, W.J. Effects of rectal examination, prostatic massage, ultraso-
estándares, muestras y controles deben ser completado dentro de 3 nography and needle biopsy on serum prostate specific antigen levels. J. Urol.
minutos. Un plato lleno de 96 pocillos puede ser utilizado si el pipeteo 147:810-814; 1992.
automatizado está disponible. 3. Wang, M.C.; Papsidero, L.D.; Kuriyama, M.; Valenzuela, L.A.; Murphy, G.P.
3. Duplicación de todos los estándares y de las muestras, aunque no es and Chu, T.M. Prostatic antigen: a new potential marker for prostatic cancer.
obligatorio, es recomendado. Prostate 2:89-93; 1981.
4. Stowell, L.I.; Sharman, I.E. and Hamel, K. An Enzyme-Linked Immunosorbent
CÁLCULO DE RESULTADOS Assay ( ELISA ) for Prostate-specific antigen. Forensic Science Intern. 50:125-
Calcular el valor de absorbancia media (A450) para cada juego de es- 138; 1991.
tándares de referencia, controles y muestras de pacientes. Construya una 5. Frankel, A.E.; Rouse, R.V.;Wang, M.C.; Chu, T.M. and Herzenberg, L.A. Mono-
curva estándar trazando la absorbancia media obtenida de cada estándar clonal antibodies to a human prostate antigen. Canc. Res. 42:3714; 1982.
de referencia contra su concentración en ng/mL en papel cuadriculado. 6. Benson, M.C.; Whang, I.S.; Pantuck, A.; Ring, K.; Kaplan, S.A.; Olsson, C.A.
Los valores de absorbancia se colocan en el eje Y y las concentraciones and Cooner, W.H. Prostate specific antigen density: a means of distinguishing
verticales o en el eje X horizontal. benign prostatic hypertrophy and prostate cancer. J. Urol. 147:815-816; 1992.
Utilice los valores de absorbancia media para cada muestra para deter- 7. Gorman, C. The private pain of prostate cancer. Time 10(5):77- 80; 1992.
minar la concentración correspondiente de PSA en ng/mL desde la curva 8. Walsh, P.C. Why make an early diagnosis of prostate cancer. J. Urol. 147:853-
estándar. 854; 1992.
9. Labrie, F.; Dupont, A.; Suburu, R.; Cusan, L.; Tremblay, M.; Gomez, J-L and
EJEMPLO DE CURVA ESTÁNDAR Emond, J. Serum prostate specific antigen as pre-screening test for prostate
Resultados de una corrida estándar típica ejecutada con la lectura de la cancer. J. Urol. 147:846-852; 1992.
densidad óptica a 450 nm se muestran en el eje Y contra concentraciones 10. McCarthy, R.C.; Jakubowski, H.V. and Markowitz, H. Human prostate acid
de PSA se muestra en el eje X phosphatase : purification, characterization, and optimization of conditions for
radioimmunoassay. Clin. Chim. Acta. 132:287-293; 1983.
PSA (ng/mL) Absorbancia (450 nm) 11. Heller, J.E. Prostatic acid phosphase: its current clinical status. J. Urol.
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0.0 0.005
12. Filella, X.; Molina, R.; Umbert, J.J.B.; Bedini, J.L. and Ballesta, A.M. Clinical
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Nat. Med. Assoc. 84:1049-1050; 1992.
60.0 2.879

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