T4 - Metabolismo

Metabolismo de Xenobióticos
Reacções de fase I e reacções de Fase II
Luís Constantino
Faculdade de Farmácia da Universidade de Lisboa
FFUL 2024
Nefrónio
Sangue
RIM
• Filtração de células e compostos de PM elevado

• Excreção do restante
• Reabsorção de iões e moléculas endógenas – Transporte activo
• Reabsorção de compostos apolares – Difusão passiva
Urina
Velocidade
de
excreção
Lipofilia
Log P –molécula neutra
Log D- molécula ionizada a determinado pH (geralmente 7.4)
Reacções envolvidas no metabolismo de fármacos:
•Reacções de fase I
•Reacções de fase II.
As reacções de fase I levam na maioria dos casos à

introdução ou revelação de grupos funcionais polares,
como o hidroxilo, amina, carboxilo ou tiol.
As reacções de fase II consistem na conjugação de

grupos funcionais com pequenas moléculas endógenas,
como o ácido glucurónico, glicina, sulfatos ou
aminoácidos
Oxidação
Redução
Reacções de fase I
Hidrólise
Ácido glucurónico
Sulfato
Reacções de fase II Glicina, e outros AA
(conjugação com:) Glutationa e ácido mercaptúrico
Grupo acetilo
Grupo metilo
Vias metabólicas da anfetamina
CH3
HOOC O
HO NH2
O
HO
OH
Glucuronido da p-hidroxianfetamina
CH3 CH3
NH2 NH2
HO
Anfetamina p-Hidroxianfetamina
OH
CH3
NH2
HO
p-Hidroxinorefedrina
Muitos fármacos considerados activos não o
são, na realidade, “per se”.
Prontosil
1,3,4-triaminobenzeno Sulfanilamida
(p-aminofenilsulfonamida)
1909 - Síntese Paul Gelmo

1932 - Gerhard Domagk, Bayer - Descoberta da actividade- prémio Nobel da medicina 1939
1935 - Ernest Fourneau, Pasteur - Metabolismo
O elixir sulfanilamida surgiu devido ao impacto da descoberta da molécula mas foi
impropriamente formulado, causando mais de 100 Mortes nos EUA (o solvente era
o anticongelante dietilenoglicol). Foi este desastre que deu o poder à FDA para
supervisionar os medicamentos de forma mais eficiente.
Alguns xenobióticos são tóxicos depois de metabolizados
10
9
8
HO
7 O
OH
benzo[a]pireno 7,8-óxido 7,8-trans-dihidrodiol
O
N
NH
N N NH
O
desoxirribose HO
HO HO
OH OH
(+)-7,8-diol-9,10-óxido
aducto com o ADN
CIT P450
É uma monooxigenase. Estas enzimas utilizam um dos átomos de

uma molécula de dioxigénio numa reacção que resulta,
frequentemente, na inserção desse átomo numa molécula orgânica,
enquanto que o outro é reduzido a água.
A reacção requer oxigénio molecular e um dador de electrões.
R-H + NADPH + H+ + 02 R-OH + NADP+ + H2O

•Na maioria dos casos, o citocromo P 450 introduz um grupo
hidroxilo no produto, obtendo-se um composto estável.
•Em alguns casos, o produto é quimicamente instável e sofre

transformação espontânea.
CH3 CH OH H
2 decomposição
Cit P450
N N N
H H H
Reacções efectuadas pelos Cit P450
•Hidroxilações alifáticas
•Hidroxilações aromáticas
•N-, S-, O- e C- desalquilações
•Formação de N-óxidos,
•Sulfoxidação
•Epoxidação
• (….)
Composição do sistema Citocromo P450
• Cit P450
• Cit P450 reductase
• Componente fosfolipídico
• NADPH
R-H + 2e- + 2H+ + 02 R-OH + H 2O
As monooxigenases do Cit P450 para funcionarem necessitam de

dois electrões. Nos mamíferos estes são fornecidos pelo NADPH.
Citocromo P450 redutase contém dois grupos prostéticos:
•FAD
•FMN.
FAD serve como aceitador inicial de electrões do NADPH

FMN serve como dador desses electrões ao citocromo P450.
Citocromos P450 (isoenzimas)
· Cadeia polipeptídica de aprox. 50 000 Daltons
· Grupo prostético de FeIII protoporfirina IX
N N
FeIII
N N
HOOC COOH
· Um grupo tiolato está ligado a uma das posições axiais do Fe
· A outra está ocupada por uma molécula de água

Modelo do citocromo P50 com um substrato (varfarina) no cento
activo. O grupo Heme e o substrato ocupam uma cavidade hidrofóbica
Cit P450 extrahepáticos
CIT P 450
Hepático
Principal local do metabolismo de fármacos
Grande parte da actividade conhecida dos citocromos P450

está localizada no fígado
A actividade dos citocromos P450 pode ser aumentada ou
diminuída por pré-tratamento com uma grande variedade de
compostos genericamente designados por indutores e
inibidores.
• A administração de um fármaco indutor leva ao

aumento do metabolismo quer do fármaco quer de
outros tomados concomitantemente.
• O tratamento com um fármaco inibidor leva a uma

diminuição do metabolismo.
Efeito do Saquinavir na AUC do Midazolan. Ao inibir o metabolismo do
midazolan o Saquinavir aumenta a exposição dos doentes ao fármaco
Isoformas de Cit P450
• Em 1973 Lu verificou que o fenobarbital (PB) induzia a produção de
citocromo P450, no entanto a actividade oxidativa apenas aumentava para
alguns substratos.
Substrato Ratos tratados com PB Grupo de controle

Fenobarbital +++++ ++
benzopireno + ++
etilmorfina ++ ++
Testosterona (hidroxilação 7) ++ ++
benzfetamina +++++ ++
O citocromo isolado dos ratos tratados com fenobarbital tinha também um pico a 448 nm
em vez do pico típico a 450 nm.
• Verificou-se também que diferentes substâncias
(inibidores) tinham acção distinta sobre o
metabolismo de diferentes fármacos.
• O cetoconazole por exemplo inibe o metabolismo

da terfenadina mas não inibe o metabolismo da
fenacetina
Foi a observação de que diferentes substratos

induziam ou inibiam diferentes reacções
efectuadas pelos citocromos P450 que levou à
suspeita de que existiriam várias formas de
citocromo P450.
Cit P 450 e variabilidade genética
metabolismo da debrisoquina - I
• Um investigador (Robert Smith) que estava a participar

como voluntário num ensaio clínico da debrisoquina (um
agente anti-hipertensivo) verificou que ao contrário dos
outros voluntários sofria de uma hipotensão severa.
• A análise da sua urina mostrou que o metabolito da

debrisoquina não se encontrava presente (ao contrário do
que acontecia em todos os outros voluntários).
• Estudos mais extensivos mostraram que algumas pessoas

eram incapazes de metabolizar debrisoquina.
Cit P 450 e variabilidade genética
metabolismo da debrisoquina II
• Verificou-se também que o metabolismo era controlado por

um único gene e que os humanos poderiam ser agrupados
em metabolizadores rápidos e metabolizadores lentos em
relação a este fármaco
• Mais tarde verificou-se que existia uma isoforma de

citocromo P450 (CYP2D6) que era responsável pela
hidroxilação da debrisoquina e que esta isoforma estava
presente em quantidades diminutas em parte da população
• O CYP2D6 é responsável pelo metabolismo de muitos

fármacos dando origem a uma variabilidade farmacocinética
muito grande o que causa graves problemas em terapia.
Diversidade dos Citocromos P450
Estão caracterizados 57 citocromos P450 humanos, num total

de mais de vários milhares de citocromos sequenciados,
Muitos citocromos não humanos encontram-se por caracterizar

Nomenclatura actual das isoenzimas do citocromo P450:
•Famílias (1, 2, 3, 4,...)

•Subfamílias (A, B, C, D,...)
•Citocromos individuais (1, 2, 3, 4, ....).
A maioria das reacções envolvidas no metabolismo de fármacos é

atribuída a um pequeno número destas enzimas (1A2, 2C9, 2C19,
2D6 E 3A4)
O mesmo se passa com a activação de pró-tóxicos (1A1, 1A2,

1B1, 2A6, 2E1 e 3A4).
Importância relativa de alguns citocromos em
metabolismo de fármacos
CYP2D6
19% CYP3A4
36%
CYP2C19
CYP2C9
CYP1A2
CYP2E1 CYP2B6 CYP2A6

Diferentes citocromos são afectados de diferentes maneiras por factores estéreos e
electrónicos
CYP 3A4 – pouco impedimento estéreo: oxidação muito governada por factores electrónicos
CYP 2C9 e CYP 2D6 vários AA estabelecem ligações no centro activo,

Oxidação mediada por factores estéreos e electrónicos
Lista de substratos, indutores e
inibidores dos citocromos P450
Indiana University - Lista de substratos, indutores e inibidores
FDA - Lista de substratos inibidores e indutores de vários citocromos P 450

Example of a table of
substrates, inducers and
inhibitors of CYP

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Metabolismo de Xenobióticos

Reacções de fase I e reacções de Fase II

• Filtração de células e compostos de PM elevado

As reacções de fase I levam na maioria dos casos à

As reacções de fase II consistem na conjugação de

1909 - Síntese Paul Gelmo

É uma monooxigenase. Estas enzimas utilizam um dos átomos de

A reacção requer oxigénio molecular e um dador de electrões.

R-H + NADPH + H+ + 02 R-OH + NADP+ + H2O

•Em alguns casos, o produto é quimicamente instável e sofre

R-H + 2e- + 2H+ + 02 R-OH + H 2O

As monooxigenases do Cit P450 para funcionarem necessitam de

FAD serve como aceitador inicial de electrões do NADPH

· Cadeia polipeptídica de aprox. 50 000 Daltons

· Grupo prostético de FeIII protoporfirina IX

· Um grupo tiolato está ligado a uma das posições axiais do Fe

· A outra está ocupada por uma molécula de água

Grande parte da actividade conhecida dos citocromos P450

• A administração de um fármaco indutor leva ao

• O tratamento com um fármaco inibidor leva a uma

Substrato Ratos tratados com PB Grupo de controle

• O cetoconazole por exemplo inibe o metabolismo

Foi a observação de que diferentes substratos

• Um investigador (Robert Smith) que estava a participar

• A análise da sua urina mostrou que o metabolito da

• Estudos mais extensivos mostraram que algumas pessoas

• Verificou-se também que o metabolismo era controlado por

• Mais tarde verificou-se que existia uma isoforma de

• O CYP2D6 é responsável pelo metabolismo de muitos

Estão caracterizados 57 citocromos P450 humanos, num total

Muitos citocromos não humanos encontram-se por caracterizar

•Famílias (1, 2, 3, 4,...)

A maioria das reacções envolvidas no metabolismo de fármacos é

O mesmo se passa com a activação de pró-tóxicos (1A1, 1A2,

CYP2E1 CYP2B6 CYP2A6

CYP 2C9 e CYP 2D6 vários AA estabelecem ligações no centro activo,

Indiana University - Lista de substratos, indutores e inibidores

FDA - Lista de substratos inibidores e indutores de vários citocromos P 450

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