4.

5.
6.

GRAM CRYSTAL VIOLET

(English)

INTENDED USE
Remel Gram Crystal Violet is a reagent recommended for use in qualitative
procedures to differentiate gram-negative from gram-positive organisms.
SUMMARY AND EXPLANATION
The Gram stain method was developed in 1884 by the Danish
bacteriologist, Christian Gram, to differentiate bacterial cells from infected
tissue.1 Later it was discovered that the bacterial cell wall composition
was the key to the Gram stain and would differentiate bacteria into two
groups based on cell color after staining. Since that time there have been
many modifications of the original technique.2,3
PRINCIPLE
The primary stain is crystal violet, a basic dye taken up by all bacteria due to
its ability to rapidly permeate the cell wall. It stains the protoplast of bacteria
purple. The potassium-iodine mixture is the mordant which complexes with
the primary stain in the cell. In gram-positive cells, the crystal violet-iodine
complex is trapped in the cell due to a decrease in cell wall permeability
caused by alcohol dehydration. Gram-positive cells are stained purple. In
gram-negative cells, the complex is removed by the decolorizer due to an
increase in permeability caused by solubility of the lipids in alcohol. The
counterstain used must be a contrasting color to the primary stain and, in
this case, it is safranin which stains gram-negative cells red.
REAGENTS (CLASSICAL FORMULA)*
Crystal Violet (CAS 548-62-9) ........................................................ 20.0 g
Ammonium Oxalate (CAS 6009-70-7) .............................................. 8.0 g
Ethyl Alcohol 95% (CAS 64-17-5) ................................................. 200.0 ml
Demineralized Water (CAS 7732-18-5)......................................... 800.0 ml
*Adjusted as required to meet performance standards.

PRECAUTIONS
Warning! Flammable liquid and vapor. May cause eye, skin, and
respiratory tract irritation. May cause central nervous system depression.
May cause liver and kidney damage. May cause reproductive and fetal
effects. The toxicological properties of this material have not been fully
investigated.
This product is for In Vitro diagnostic use and should be used by properly
trained individuals. Precautions should be taken against the dangers of
microbiological hazards by properly sterilizing specimens, containers, and
media after use. Directions should be read and followed carefully. Refer
to Material Safety Data Sheet for additional information.
STORAGE
This product is ready for use and no further preparation is necessary.
Store product in its original container at 20-25C until used.
PRODUCT DETERIORATION
This product should not be used if (1) the color has changed from purple,
(2) the expiration date has passed, or (3) there are other signs of
deterioration.
SPECIMEN COLLECTION, STORAGE, AND TRANSPORT
Specimens should be collected and handled following recommended
guidelines.4,5

Flood with Gram Decolorizer until the solvent flows colorless from
the slide (10-30 seconds).
Rinse with water and overlay with Gram Safranin for 30 seconds.
Rinse with water and allow to dry.

INTERPRETATION
Gram-positive organisms stain purple.
Gram-negative organisms stain red.
QUALITY CONTROL
All lot numbers of Gram Crystal Violet have been tested and found to yield
acceptable stain results as listed in the Interpretation section. Positive
and negative control slides should be tested prior to use of new lot
numbers of stains and decolorizing reagent and at least weekly thereafter.
If aberrant quality control results are noted, patient results should not be
reported.
LIMITATIONS
1.
Test positive and negative controls with each new lot number of
stains and weekly thereafter to verify reagent efficacy and ensure
that decolorization procedure is performed correctly.5
2.
To obtain the most reliable results, remove clinical specimen isolates
from an 18-24 hour culture growing on nonselective medium.5
3.
Do not overheat smears when fixing slides. Excessive heating will
cause atypical staining.5,6
4.
Gram-positive organisms contained in a specimen may appear
gram-negative if the patient is on antimicrobial therapy.5
5.
Precipitated crystal violet can appear as coccoid shapes or fungal
elements, as well as other artifacts or background material.5
BIBLIOGRAPHY
1.
2.
3.
4.
5.
6.

Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1952. Bacteriol. Rev. 16:1-29.

Mittwer, T., J.W. Bartholomew, and B.J. Kallman. 1950. Stain Technol.
25:169-179.
Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1951. Stain Technol. 26:231-240.
Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scotts
Diagnostic Microbiology. 12th ed. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.
Garcia, L.S. 2010. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 3rd ed.,
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
Mangels, J.I., M.E. Cox, and L.H. Lindberg. 1984. Diagn. Microbiol. Infect.
Dis. 2:129-137.

PACKAGING
REF R40052, Gram Crystal Violet ............................................. 250 ml/Btl
REF R40053, Gram Crystal Violet ...................................... 250ml/Btl, 5/Pk
REF R40073, Gram Crystal Violet .................................................... Gallon
Symbol Legend
REF

Catalog Number

IVD

In Vitro Diagnostic Medical Device

LAB

For Laboratory Use

Consult Instructions for Use (IFU)
Temperature Limitation (Storage Temp.)

LOT

Use By (Expiration Date)

EC REP

MATERIALS REQUIRED BUT NOT SUPPLIED

(1) Loop sterilization device, (2) Inoculating loop, swabs, collection
containers,
(3) Incubators,
alternative
environmental
systems,
(4) Supplemental media, (5) Quality control organisms, (6) Gram Iodine
(R40056), (7) Gram Decolorizer (R40054), (8) Gram Safranin (R40058),
(9) Glass slides, (10) Bunsen burner or slide warmer, (11) Microscope,
immersion oil, (12) Staining rack, (13) Methanol (optional).
PROCEDURE
1.
Make a thin smear of the material for study on a glass slide. Allow
the slide to air-dry completely or use a slide warmer. Fix the slide by
passing 3 or 4 times through the flame of a Bunsen burner or flood
the smear with methanol and allow it to evaporate.
2.
Place the slide on a staining rack and overlay with Gram Crystal
Violet for 1 minute.
3.
Wash thoroughly with water and overlay with Gram Iodine mordant
for 1 minute.

Batch Code (Lot Number)

Authorized European Representative

Manufacturer

12076 Santa Fe Drive

Lenexa, KS 66215, USA
www.remel.com
(800) 255-6730
International: (913) 888-0939

EC REP

Remel Europe Ltd.

Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT, UK

For technical information contact your local distributor.

CAS (Chemical Abstracts Service Registry No.)
Manufactured for Remel Inc.
IFU 40052, Revised January 3, 2014

Printed in the U.S.A.

4.

Gram Decolorizer hinzugeben, bis die Farbe vom Objekttrger abgelst

ist (10-30 Sekunden).
Grndlich mit Wasser splen und 30 Sekunden in Gram Safranin
eintauchen.
Mit Wasser absplen und trocknen lassen.

5.
6.

GRAM CRYSTAL VIOLET

(Deutsch)

ANWENDUNGSBEREICH
Remel Gram Crystal Violet ist ein fr qualitative Verfahren zur Unterscheidung
gram-negativer von gram-positiven Organismen empfohlenes Reagens.
ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLRUNG
Die Gram-Frbung wurde 1884 von dem dnischen Bakteriologen Christian
Gram entwickelt, um verschiedene Bakterienzellen von infiziertem Gewebe
unterscheiden zu knnen.1 Spter wurde dann festgestellt, dass die GramFrbung durch die Zusammensetzung der bakteriellen Zellwand zustande
kommt und die Bakterien entsprechend der Anfrbung in zwei Gruppen
eingeteilt werden knnen. Seitdem ist das ursprngliche Verfahren mehrfach
abgewandelt worden.2,3
TESTPRINZIP
Das primre Frbemittel ist Kristallviolett, ein basischer Farbstoff, der sehr
schnell die Zellwand durchdringt und dadurch von allen Bakterien
aufgenommen wird. Kristallviolett frbt die Protoplasten von Bakterien
purpurrot. Als Beizmittel wird eine Kalium-Jod-Mischung verwendet, die mit
dem primren Farbstoff in den Zellen einen Komplex bildet. In gram-positiven
Zellen kommt es aufgrund von Alkoholdehydrierung zu einer Verminderung der
Zellwandpermeabilitt, wodurch der Kristallviolett-Jod-Komplex in der Zelle
verbleibt. Gram-positive Zellen werden purpurrot angefrbt. In gram-negativen
Zellen kommt es aufgrund der Lslichkeit von Lipiden in Alkohol zu einem
Anstieg der Zellwandpermeabilitt, wodurch der Komplex von dem
Entfrbemittel entfernt wird. Die verwendete Gegenfrbung muss eine
Kontrastfarbe zur primren Frbung hervorbringen. In diesem Fall ist Safranin
der Farbstoff, der die gram-negativen Zellen rot frbt.

INTERPRETATION
Gram-positive Organismen werden purpurrot angefrbt.
Gram-negative Organismen werden rot angefrbt.
QUALITTSKONTROLLE
Alle Chargen des Gram Kristallviolett wurden geprft und fr tauglich befunden,
akzeptable Frbeergebnisse zu erzeugen, wie sie in Abschnitt Interpretation
aufgefhrt sind. Positive und negative Kontroll-Objekttrger sollten vor der
Verwendung neuer Chargen von Farbstoffen und Entfrbereagenz sowie
anschlieend mindestens wchentlich getestet werden. Treten im Rahmen der
Qualittskontrolle abweichende Ergebnisse auf, drfen die Patientenergebnisse
nicht verwendet werden.
BESCHRNKUNGEN
1.
Positive und negative Kontrollen bei jeder neuen Charge des Frbemittels
und eine Woche danach testen, um die Wirksamkeit des Reagens zu
besttigen und um zu gewhrleisten, dass das Entfrbeverfahren
ordnungsgem durchgefhrt wird.5
2.
Die zuverlssigsten Ergebnisse werden erreicht, wenn Isolate aus
klinischen Proben einer 18-24 Stunden alten Kultur auf einem nichtselektiven Medium wachsen.5
3.
Beim Fixieren die Objekttrger nicht berhitzen. bermige Erwrmung
5,6
fhrt zu atypischen Frbeergebnissen.
4.
In einer Probe enthaltene gram-positive Organismen knnen als gramnegativ erscheinen, wenn der Patient Antibiotika einnimmt.5
5.
Przipitiertes Kristallviolett kann als kokkoide Formen oder Pilzelemente,
5
aber auch als andere Artefakte oder Backgroundmaterial erscheinen.
LITERATURANGABEN

REAGENZIEN (KLASSISCHE REZEPTUR)*

Kristallviolett (CAS 548-62-9) ..................................................................... 20,0 g
Ammoniumoxalat (CAS 6009-70-7).............................................................. 8,0 g
Ethanol 95 % (CAS 64-17-5) .................................................................... 200,0 ml
Vollentsalztes Wasser (CAS 7732-18-5) .................................................. 800,0 ml

1.
2.
3.
4.

Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1952. Bacteriol. Rev. 16:1-29.

Mittwer, T., J.W. Bartholomew, and B.J. Kallman. 1950. Stain Technol. 25:169-179.
Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1951. Stain Technol. 26:231-240.
Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scotts
Diagnostic Microbiology. 12th ed. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.
Garcia, L.S. 2010. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 3rd ed.,
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
Mangels, J.I., M.E. Cox, and L.H. Lindberg. 1984. Diagn. Microbiol. Infect. Dis.
2:129-137.

5.

*An die Erfllung der jeweiligen Leistungsstandards angepasst.

6.

VORSICHTSMASSNAHMEN
Achtung! Flssigkeit und Dmpfe sind entflammbar. Kann Reizungen von
Augen, Haut und Atemwegen auslsen. Kann das Zentralnervensystems
beeintrchtigen. Kann Leber und Nieren schdigen. Kann die Fortpflanzungsfhigkeit beeintrchtigen und Ften schdigen. Die toxikologischen
Eigenschaften dieser Substanz wurden noch nicht vollstndig untersucht.
Dieses Produkt ist fr die Verwendung in der In-vitro-Diagnostik bestimmt und
darf nur von entsprechend geschulten Personen verwendet werden.
Mikrobiologischen Gefahren sollte vorgebeugt werden, indem Proben, Behlter
und Transportmedien nach Gebrauch sterilisiert werden. Die Gebrauchsanweisung muss sorgfltig gelesen und genau befolgt werden. Zustzliche
Informationen finden Sie im Sicherheitsdatenblatt.
LAGERUNG
Dieses Produkt ist ohne weitere Vorbereitung gebrauchsfertig. Es sollte in
seinem Originalbehlter bei 20-25C bis zum Gebrauch aufbewahrt werden.

PACKUNGSGRSSE
REF R40052, Gram Crystal Violet .......................................... 250 ml/Flschchen
REF R40053, Gram Crystal Violet ...........................250 ml/Flschchen; 5/Packg.
REF R40073, Gram Crystal Violet .......................................................... 1 Gallone

Symbollegende
REF

Katalognummer

IVD

In-vitro-Diagnostikum

LAB

Fr Laborgebrauch
Gebrauchsanweisung beachten
Temperaturbeschrnkungen (Lagerungstemp.)

BEEINTRCHTIGUNG DER PRODUKTQUALITT

Dieses Produkt darf (1) bei Vernderung der purpurroten Farbe, (2) beim
berschreiten des Verfallsdatums und (3) beim Auftreten anderer Anzeichen
eines Qualittsverlusts nicht mehr verwendet werden.

LOT

Chargencode (Losnummer)
Verfallsdatum

PROBENENTNAHME, LAGERUNG UND TRANSPORT

Die Probenentnahme und -handhabung sollte nach
empfohlenen Richtlinien erfolgen.4,5

den

folgenden

EC REP

Autorisierte Vertretung fr U-Lnder

Hersteller

BENTIGTE MATERIALIEN (NICHT IM LIEFERUMFANG ENTHALTEN)

(1) Gert zur Sterilisation der Inokulationsschlinge, (2) Inokulation-sschlinge,
Abstrichbesteck, Probenbehlter, (3) Inkubatoren, andere Klimasysteme,
(4) zustzliche Transportmedien, (5) Qualittskontroll-organismen, (6) Gram
Iodine (R40056), (7) Gram Decolorizer (R40054), (8) Gram Safranin (R40058),
(9) Glas-Objekttrger, (10) Bunsenbrenner oder Objekttrgerheizgert,
(11) Mikroskop, Immersionsl, (12) Frbegestell, (13) Methanol (optional).
VERFAHREN
1.
Das zu untersuchende Material auf einem Glas-Objekttrger dnn
ausstreichen. Die Objekttrger an der Luft vollstndig trocknen lassen
bzw. ein Objekttrgerheizgert verwenden. Objekttrger fixieren. Dazu 3
oder 4 Mal durch die Flamme eines Bunsen-brenners ziehen oder den
Ausstrich mit Methanol trnken und anschlieend verdunsten lassen.
2.
Objekttrger in ein Frbegestell einsetzen und eine Minute lang in Gram
Crystal Violet eintauchen.
3.
Grndlich mit Wasser auswaschen und eine Minute in Beizmittel Gram
Iodine eintauchen.

12076 Santa Fe Drive

Lenexa, KS 66215, USA
www.remel.com
(800) 255-6730
International: (913) 888-0939
EC

REP

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Dartford, Kent, DA2 6PT, UK

Bei technischen Fragen wenden Sie sich bitte an Ihren zustndigen Vertriebspartner.
CAS (Chemical Abstracts Service).
Hergestellt fr Remel Inc.

IFU 40052, berarbeitete Fassung vom 2014-01-03

Printed in the USA.

4.

5.

GRAM CRYSTAL VIOLET

(Franais)

APPLICATION
Le violet de gentiane (ou cristal violet) pour coloration de Gram de Remel est
un ractif recommand dans le cadre des procdures qualitatives pour
diffrencier les organismes Gram ngatif des organismes Gram positif.
RSUM ET EXPLICATION
La coloration de Gram doit son nom au bactriologiste danois, Christian Gram,
qui mit au point le protocole en 1884 pour diffrencier les cellules bactriennes
des tissus infects.1 Par la suite, on a dcouvert que la composition de la paroi
des cellules bactriennes expliquait la coloration de Gram et permettait de
diffrencier les bactries en deux groupes selon la couleur de la cellule aprs
coloration. Depuis, cette technique a connu de nombreuses modifications.2,3
PRINCIPE
Le violet de gentiane (ou cristal violet) sert de colorant principal ; il sagit dun
colorant basique absorb par toutes les bactries en raison de son aptitude
pntrer rapidement travers la paroi cellulaire. Il colore le cytoplasme des
bactries en violet. Le mordanage seffectue grce un mlange diode et de
potassium qui forme un complexe avec le colorant principal prsent dans la
cellule. Dans les cellules Gram positif, le complexe violet de gentiane-iode est
pig lintrieur de la cellule en raison dune diminution de la permabilit de
la paroi cellulaire provoque par une dshydratation produite par de lalcool.
Les cellules Gram positif sont colores en violet. Dans les cellules Gram
ngatif, le complexe est limin grce un dcolorant en raison de
laugmentation de la permabilit provoque par la solubilit des lipides dans
lalcool. Le contre-colorant utilis doit tre dune couleur contrastante par
rapport au colorant principal, dans ce cas prcis, il sagit de la safranine qui
colore les cellules Gram ngatif en rouge.
RACTIFS (FORMULE CLASSIQUE)*
Violet de gentiane (CAS 548-62-9)...........................................................20,0 g
Oxalate d'ammonium (CAS 6009-70-7) .....................................................8,0 g
Alcool thylique 95% (CAS 64-17-5) ...................................................200,0 ml
Eau dminralise (CAS 7732-18-5)......................................................800,0 ml
*Avec compensations ventuelles pour satisfaire les normes de performance.

PRCAUTIONS
Avertissement! Liquide et vapeurs inflammables. Risque dirritation de la peau,
des yeux et des voies respiratoires. Possibilit de dpression du systme
nerveux central. Atteintes possibles du foie et des reins. Effets ventuels sur la
reproduction et le ftus. Les proprits toxicologiques de ce produit ne sont
pas totalement connues.
Ce produit, exclusivement destin un usage diagnostique in vitro, ne doit tre
utilis que par des personnes dment formes. Il faut prendre toutes les
prcautions contre les risques microbiologiques et il est indispensable de bien
striliser les prlvements, les rcipients et les milieux aprs usage. Il faut lire
attentivement les instructions et les respecter scrupuleusement. Pour de plus
amples renseignements, consulter la fiche de donnes de scurit.
CONSERVATION
Ce produit est prt lemploi ; aucune prparation supplmentaire nest
ncessaire. Conserver ce produit dans son flacon dorigine entre 20-25C
jusqu son utilisation.
DTRIORATION DU PRODUIT
Ce produit ne doit pas tre utilis si (1) la couleur violette a chang, (2) la date de
premption est dpasse ou (3) dautres signes de dtrioration sont prsents.
RECUEIL, CONSERVATION ET TRANSPORT DES PRLVEMENTS
Les prlvements doivent tre recueillis et manipuls conformment aux
recommandations en vigueur.4,5

6.

Recouvrir jusqu dbordement avec le dcolorant pour coloration de

Gram jusqu ce que le solvant scoule en un filet clair de la lame
(10 30 secondes).
Rincer leau et recouvrir de safranine pour coloration de Gram pendant
30 secondes.
Rincer leau et laisser scher.

INTERPRTATION
Les organismes Gram positif sont colors en violet.
Les organismes Gram ngatif sont colors en rouge.
CONTRLE DE QUALIT
Tous les numros de lots du violet de gentiane pour coloration de Gram ont t
tests et reconnus comme offrant des rsultats de coloration acceptables,
comme lindique la section Interprtation. Les lames de contrle, positive et
ngative, doivent tre testes avant lutilisation de nouveaux numros de lots
de colorants et de ractif dcolorant puis au moins chaque semaine. En cas de
rsultats de contrle de qualit aberrants, ne pas fournir les rsultats des
patients.
LIMITES
1.
Tester les contrles positifs et ngatifs avec chaque nouveau numro de
lot de colorants et, une fois par semaine par la suite, pour vrifier
lefficacit des ractifs et sassurer que la procdure de dcoloration est
ralise adquatement.5
2.
Pour obtenir les rsultats les plus fiables, retirer les isolats des prlvements dune culture de 18-24 h poussant sur un milieu non slectif.5
3.
Ne pas surchauffer les frottis au moment de les fixer sur les lames. Une
chaleur excessive provoque une coloration atypique.5,6
4.
Les organismes Gram positif contenus dans un prlvement risquent
de se rvler ngatifs si le patient suit un traitement antimicrobien.5
5.
Le cristal violet prcipit peut prendre une forme coccode ou lapparence
dlements fongiques, mais aussi dautres artfacts ou matriaux
darrire-plan.5
BIBLIOGRAPHIE
1.
Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1952. Bacteriol. Rev. 16:1-29.
2.
Mittwer, T., J.W. Bartholomew, and B.J. Kallman. 1950. Stain Technol.
25:169-179.
3.
Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1951. Stain Technol. 26:231-240.
4.
Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scotts
Diagnostic Microbiology. 12th ed. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.
5.
Garcia, L.S. 2010. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 3rd ed.,
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
6.
Mangels, J.I., M.E. Cox, and L.H. Lindberg. 1984. Diagn. Microbiol. Infect.
Dis. 2:129-137.
CONDITIONNEMENT
REF R40052, Gram Crystal Violet ....................................................250 ml/flacon
REF R40053, Gram Crystal Violet .................................... 250ml/flacon, 5/paquet
REF R40073, Gram Crystal Violet ............................................................... Gallon

Lgende des Symboles

REF

Numro de rfrence

IVD

Dispositif mdical de diagnostic in vitro

LAB

Pour l usage de laboratoire

Lire les instructions avant utilisation (IFU = mode demploi)
Limites de temprature (stockage)

LOT

utiliser avant le (date de premption)

EC REP

MATRIEL REQUIS, MAIS NON FOURNI

(1) Dispositif de strilisation pour anses, (2) Anse inoculation (anse de platine),
couvillons, rcipients de prlvement, (3) Incubateurs, autres systmes
environnementaux, (4) Milieux supplments, (5) organismes de contrle de
qualit, (6) Iode pour coloration de Gram (R40056), (7) Dcolorant pour
coloration de Gram (R40054), (8) Safranine pour coloration de Gram (R40058),
(9) Lames de verre, (10) Bec Bunsen ou platine chauffante, (11) Microscope,
huile immersion, (12) Portoir coloration, (13) Mthanol (optionnel).
PROCDURE
1.
Raliser un talement fin (frottis) du matriau tudier sur une lame de
verre. Laisser la lame scher compltement l'air libre ou utiliser une
platine chauffante. Fixer la lame en la passant 3 ou 4 fois au-dessus de la
flamme dun bec Bunsen ou recouvrir jusqu dbordement le frottis de
mthanol et laisser vaporer.
2.
Placer la lame sur un portoir coloration et recouvrir de violet de
gentiane pour coloration de Gram pendant 1 minute.
3.
Rincer soigneusement leau et recouvrir de mordant, iode pour
coloration de Gram, pendant 1 minute.

Code de lot (numro)

Reprsentant autoris pour l'UE

Fabricant
12076 Santa Fe Drive
Lenexa, KS 66215, USA
www.remel.com
(800) 255-6730
International: (913) 888-0939

EC REP

Remel Europe Ltd.

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Dartford, Kent, DA2 6PT
UK

Pour tout support technique, contacter le distributeur local.

CAS (numro de registre CAS)
Fabriqu pour Remel Inc.
IFU 40052, rvise le 2014-01-03

Imprim aux tats-Unis

4.
5.
6.

Gram Crystal Violet

(Italiano)

USO PREVISTO
Il Cristal violetto di Gram Remel un reagente consigliato per l'uso nelle
procedure qualitative allo scopo di differenziare gli organismi gram-negativi da
quelli gram-positivi.
DESCRIZIONE DEL PRODOTTO
Il metodo di colorazione di Gram fu sviluppato nel 1884 dal batteriologo danese
Christian Gram, allo scopo di differenziare le cellule batteriche dal tessuto
infetto.1 Successivamente fu scoperto che la composizione della parete
cellulare batterica era la chiave per la colorazione di Gram e che avrebbe
differenziato i batteri in due gruppi in base al colore delle cellule dopo la
colorazione. Da allora, sono state eseguite molte modifiche alla tecnica
originale.2,3
PRINCIPIO
La colorazione primaria il cristal violetto, un colorante basico assorbito da tutti
i batteri a causa della sua capacit di penetrare rapidamente nella parete
cellulare. Esso colora di porpora il protoplasto dei batteri. La miscela di
potassio-iodio il mordente che forma un complesso con la colorazione
primaria nelle cellule. Nelle cellule gram-positive, il complesso viola cristalloiodio viene catturato nelle cellula a causa di una diminuzione di permeabilit
della parete cellulare, provocata dalla disidratazione dell'alcol. Pertanto le
cellule gram-positive si colorano di porpora. Nelle cellule gram-negative, il
complesso viene rimosso dal decolorante a causa di un aumento di
permeabilit provocato dalla solubilit dei lipidi nell'alcol. Il colorante di
contrasto utilizzato deve essere di un colore contrastante la colorazione
primaria e, in questo caso, si tratta di safranina che colora di rosso le cellule
gram-negative.
REAGENTI (FORMULA CLASSICA)*
Cristal violetto (CAS 548-62-9) .................................................................20,0 g
Ossalato di ammonio (CAS 6009-70-7) .....................................................8,0 g
Alcol etilico al 95% (CAS 64-17-5) .........................................................200,0 ml
Acqua demineralizzata (CAS 7732-18-5) ...............................................800,0 ml
*La formulazione regolata in base ai criteri di performance richiesti.

PRECAUZIONI
Avvertenza! Liquido e vapore infiammabili. Pu causare irritazione a occhi, cute
e vie respiratorie. Pu causare depressione del sistema nervoso centrale. Pu
causare danni al fegato e ai reni. Pu causare effetti riproduttivi e avere
ripercussioni sul feto. Le propriet tossicologiche di questo materiale non sono
state del tutto analizzate.
Il prodotto indicato esclusivamente per uso diagnostico in vitro e deve essere
utilizzato solo da personale competente ed esperto. Si raccomanda di adottare
le dovute precauzioni contro eventuali rischi microbiologici, sterilizzando
opportunamente dopo l'uso campioni, contenitori e terreni di coltura. Leggere
con attenzione le istruzioni contenute in questo documento e attenervisi
scrupolosamente. Per ulteriori informazioni consultare la Scheda di Sicurezza
del prodotto.
CONDIZIONI DI CONSERVAZIONE
Questo prodotto pronto per luso e non necessita di ulteriore preparazione.
Conservare il prodotto nel contenitore originale ad una temperatura pari a 2025C fino al momento dell'utilizzo.
DETERIORAMENTO DEL PRODOTTO
Questo prodotto non deve essere usato se (1) il colore non pi porpora, (2)
trascorsa la data di scadenza o (3) sono presenti altri segni di deterioramento.

Irrigare con il decolorante Gram, finch il solvente non scorre privo di

colorazione dal vetrino (10-30 secondi).
Sciacquare con acqua e coprire con safranina Gram per 30 secondi.
Sciacquare con acqua e lasciare asciugare.

INTERPRETAZIONE
Gli organismi gram-positivi si colorano di porpora.
Gli organismi gram-negativi si colorano di rosso.
CONTROLLO QUALIT
Tutti i numeri di lotto di Gram Crystal Violet sono stati esaminati ed stato
riscontrato che forniscono risultati di colorazione accettabili, come quelli
elencati nella sezione Interpretazione. I vetrini di controllo positivo e negativo
devono essere esaminati prima di utilizzare nuovi numeri di lotto di colorante e
di reagente decolorante e almeno una volta a settimana dopo l'utilizzo. Se i test
di controllo qualit forniscono risultati aberranti, i risultati ottenuti con i campioni
in esame non devono essere refertati.
LIMITAZIONI
1.
Esaminare i controlli positivi e negativi con ogni nuovo numero di lotto di
colorazioni e, settimanalmente, verificare l'efficacia e controllare che la
procedura di decolorazione venga eseguita correttamente.5
2.
Per ottenere risultati pi affidabili, rimuovere gli isolati di campione clinico
da una coltura di 18-24 ore in crescita su un terreno non selettivo.5
3.
Durante il fissaggio dei vetrini non surriscaldare gli strisci. Un
riscaldamento eccessivo dar luogo ad una colorazione atipica.5,6
4.
Gli organismi gram-positivi contenuti in un campione possono apparire
gram-negativi, se il paziente sta seguendo una terapia antimicrobica.5
5.
Il cristalvioletto precipitato pu apparire come forme coccoidi o elementi
fungini, nonch come artefatti o materiale di sfondo di altra natura.5
BIBLIOGRAFIA
1.
Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1952. Bacteriol. Rev. 16:1-29.
2.
Mittwer, T., J.W. Bartholomew, and B.J. Kallman. 1950. Stain Technol.
25:169-179.
3.
Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1951. Stain Technol. 26:231-240.
4.
Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scotts
Diagnostic Microbiology. 12th ed. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.
5.
Garcia, L.S. 2010. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 3rd ed.,
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
6.
Mangels, J.I., M.E. Cox, and L.H. Lindberg. 1984. Diagn. Microbiol. Infect.
Dis. 2:129-137.
CONFEZIONE
REF R40052, Gram Crystal Violet .............................................flacone da 250 ml
REF R40053, Gram Crystal Violet ................flacone da 250 ml, 5 per confezione
REF R40073, Gram Crystal Violet ........................................................... 3,8 L ca.

Legenda dei Simboli

REF

Codice numero

IVD

Dispositivo per uso diagnostico in vitro

LAB

Per uso in laboratorio

Consultare le istruzioni per l'uso (IFU)
Limitazioni per temperatura (Temp. di conservazione)

LOT

Codice lotto (Numero Lotto)

Da utilizzare entro (data di scadenza)

EC REP Rappresentante autorizzato per l'Europa

Fabbricante

PRELIEVO, CONSERVAZIONE E TRASPORTO DEI CAMPIONI

Prelevare e trattare i campioni attenendosi alle linee guida raccomandate.4,5
MATERIALE NECESSARIO MA NON FORNITO
(1) Dispositivo di sterilizzazione per anse, (2) ansa per inoculo, tamponi,
contenitori di prelievo, (3) termostato o sistemi per la formazione di atmosfere
modificate, (4) terreni di coltura supplementari, (5) Organismi per il controllo
qualit, (6) iodio Gram (R40056), (7) decolorante Gram (R40054), (8) safranina
Gram (R40058), (9) vetrini, (10) becco di Bunsen o riscaldatore per vetrini,
(11) microscopio, olio di immersione, (12) rack per colorazione, (13) metanolo
(opzionale).
PROCEDIMENTO
1.
Eseguire uno striscio sottile del materiale per lo studio sul vetrino.
Lasciare asciugare completamente all'aria il vetrino oppure utilizzare un
riscaldatore per vetrini. Fissare il vetrino, passandolo 3 o 4 volte
attraverso la fiamma di un becco di Bunsen oppure irrigare lo striscio con
metanolo e lasciarlo evaporare.
2.
Posizionare il vetrino su un rack per colorazione e coprirlo con Cristal
violetto di Gram per 1 minuto.
3.
Lavarlo completamente con acqua e coprirlo con il mordente di iodio
Gram per 1 minuto.

12076 Santa Fe Drive

Lenexa, KS 66215, USA
www.remel.com
(800) 255-6730
International: (913) 888-0939

EC REP

Remel Europe Ltd.

Clipper Boulevard West, Crossways
Dartford, Kent, DA2 6PT
UK

Per lassistenza tecnica, rivolgersi al distributore di zona.

CAS (Numero del registro del Chemical Abstract Service)
Prodotto per Remel Inc.

IFU 40052, data ultima revisione: 2014-01-03

Stampato in U.S.A.

3.
4.

GRAM CRYSTAL VIOLET

(Espaol)

USO PREVISTO
El violeta cristal de Gram de Remel es un reactivo de uso recomendado en
procedimientos cualitativos para diferenciar entre microorganismos gramnegativos y grampositivos.
RESUMEN Y EXPLICACIN
El mtodo de tincin de Gram fue desarrollado en 1884 por el bacterilogo
dans Christian Gram para diferenciar clulas bacterianas de tejido infectado.1
Posteriormente, se descubri que la clave de la tincin de Gram estaba en la
composicin de la pared de las clulas bacterianas y que era posible
diferenciar las bacterias en dos grupos segn el color de las clulas despus
de la tincin. Desde entonces se han realizado numerosas modificaciones en
la tcnica original.2,3
PRINCIPIO DEL ENSAYO
La tincin principal es violeta cristal, un colorante bsico absorbido por todas
las bacterias debido a su capacidad de permear rpidamente en la pared
celular. Tie el protoplasto de la bacteria de color morado. La mezcla de
potasio y yodo es el mordiente que se combina con la tincin principal en la
clula. En las clulas grampositivas, el complejo violeta cristal-yodo queda
atrapado en ellas debido a una reduccin en la permeabilidad de la pared
celular causada por la deshidratacin con alcohol. Las clulas grampositivas se
tien de color morado. En las clulas gramnegativas, el complejo es eliminado
por el decolorante debido a un aumento en la permeabilidad causado por la
solubilidad de los lpidos en alcohol. La contratincin utilizada debe ser un color
que contraste con la tincin principal. En este caso se utiliza safranina, que tie
las clulas gramnegativas de color rojo.
REACTIVOS (FRMULA CLSICA)*
Violeta cristal (CAS 548-62-9) ..................................................................20.0 g
Oxalato de amonio (CAS 6009-70-7) .........................................................8.0 g
Alcohol etlico al 95% (CAS 64-17-5) .....................................................200.0 ml
Agua desmineralizada (CAS 7732-18-5)................................................800.0 ml
*Ajustado segn necesidades para cumplir los estndares de comportamiento.

PRECAUCIONES
Advertencia! Lquido y vapor inflamables. Puede irritar los ojos, la piel y las
vas respiratorias. Puede producir depresin del sistema nervioso central.
Puede producir dao heptico y renal. Puede tener efectos nocivos en la
reproduccin y el feto. An no se han investigado en profundidad las
propiedades toxicolgicas de este material.
Este producto es para uso diagnstico in vitro y debe ser utilizado por personal
con la formacin adecuada. Deben tomarse precauciones frente a los riesgos
microbiolgicos, esterilizando correctamente las muestras, envases y medios
despus de su uso. Se deben leer y seguir atentamente las instrucciones.
Consultar ms informacin en la Hoja de Datos de Seguridad del Material.
ALMACENAMIENTO
Este producto se presenta listo para su uso y no requiere ms preparacin.
Almacene el producto en su envase original a una temperatura de 20-25C
hasta el momento de su uso.
DETERIORO DEL PRODUCTO
Este producto no se debe usar si (1) el color ha cambiado y ya no es morado,
(2) se ha sobrepasado la fecha de caducidad o (3) hay otros signos de
deterioro.
OBTENCIN, ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS
Las muestras se deben obtener y manipular acorde con las directivas
recomendadas.4,5

5.
6.

Lave bien con agua y cubra con mordiente de yodo de Gram durante 1
minuto.
Cubra con decolorante de Gram hasta que el disolvente fluya incoloro del
portaobjetos (de 10 a 30 segundos).
Aclare con agua y cubra con safranina de Gram durante 30 segundos.
Aclare con agua y deje secar.

INTERPRETACIN
Los microorganismos grampositivos se tien de color morado.
Los microorganismos gramnegativos se tien de color rojo.
CONTROL DE CALIDAD
Todos los nmeros de lote de Gram Cristal Violeta se han analizado y se ha
determinado que ofrecan resultados de tincin aceptables, segn se indica en
la seccin Interpretacin. Los portaobjetos de control positivo y negativo
deben analizarse antes de usar los nuevos nmeros de lote de tinciones y de
reactivo decolorante, y al menos una vez a la semana en lo sucesivo. Si se
observan resultados anmalos en el control de calidad, no deben comunicarse
los resultados del paciente.
LIMITACIONES
1.
Pruebe el control positivo y el control negativo cada vez que reciba un
lote nuevo de tincin y, posteriormente, de forma semanal para
comprobar la eficacia del reactivo y asegurarse de realizar correctamente
el procedimiento de decoloracin.5
2.
Para obtener los resultados ms fiables, retire los inculos de muestras
clnicas de un cultivo de 18 a 24 horas en un medio no selectivo.5
3.
No caliente los frotis de forma excesiva cuando fije los portaobjetos. El
calor excesivo producir una tincin atpica.5,6
4.
Los microorganismos grampositivos contenidos en una muestra pueden
parecer gramnegativos si el paciente est recibiendo terapia
antimicrobiana.5
5.
Puede aparecer violeta de metilo precipitado con forma de coco o
elementos fngicos, as como otros artefactos o material de fondo.5
BIBLIOGRAFA
1.
Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1952. Bacteriol. Rev. 16:1-29.
2.
Mittwer, T., J.W. Bartholomew, and B.J. Kallman. 1950. Stain Technol.
25:169-179.
3.
Bartholomew, J.W. and T. Mittwer. 1951. Stain Technol. 26:231-240.
4.
Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2007. Bailey and Scotts
Diagnostic Microbiology. 12th ed. Mosby Elsevier, St. Louis, MO.
5.
Garcia, L.S. 2010. Clinical Microbiology Procedures Handbook. 3rd ed.,
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
6.
Mangels, J.I., M.E. Cox, and L.H. Lindberg. 1984. Diagn. Microbiol. Infect.
Dis. 2:129-137.
PRESENTACIN
REF R40052, Gram Crystal Violet ................................................... 250 ml/frasco
REF R40053, Gram Crystal Violet ................... 250 ml/frasco, 5 unidades/envase
REF R40073, Gram Crystal Violet ................................................................Galn

Smbolos
REF

Nmero de catlogo

IVD

Producto sanitario para diagnstico in vitro

LAB

Para uso en laboratorio

Consultar las instrucciones de uso (IFU)
Lmite de temperatura (de almacenamiento)

LOT

Fecha de caducidad

EC REP

MATERIALES NECESARIOS PERO NO SUMINISTRADOS

(1) Asa para esterilizacin, (2) asa de inoculacin, torundas y envases para
recogidas, (3) incubadoras, sistemas ambientales alternativos, (4) medios
complementarios, (5) Microorganismos de control de calidad, (6) yodo de Gram
(R40056), (7) decolorante de Gram (R40054), (8) safranina de Gram (R40058),
(9) portaobjetos de vidrio, (10) mechero de Bunsen o calentador de
portaobjetos, (11) microscopio, aceite de inmersin, (12) gradilla de tincin,
(13) metanol (opcional).
PROCEDIMIENTO
1.
Prepare un frotis delgado del material de estudio sobre un portaobjetos
de vidrio. Deje que el portaobjetos se seque al aire completamente o
utilice un calentador de portaobjetos. Fije el portaobjetos pasndolo 3 4
veces por la llama de un mechero de Bunsen o empape el frotis con
metanol y deje que se evapore.
2.
Coloque el portaobjetos sobre una gradilla de tincin y cubra con violeta
cristal de Gram durante 1 minuto.

Cdigo de lote (nmero de lote)

Representante autorizado en Europa

Fabricante

12076 Santa Fe Drive

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CAS (N del Chemical Abstracts Service Registry)
Fabricado para Remel Inc.
IFU 40052, Revisado el 2014-01-03

Impreso en los EE.UU.