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    Cromatografía

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    Patty Soncco Soncco
    La cromatografía separa mezclas de compuestos utilizando dos fases, una estacionaria y otra móvil. El documento describe los conceptos básicos de cromatografía en capa fina, incluyendo la definición de Rf, los adsorbentes, eluyentes y reveladores más comunes. También presenta un procedimiento para determinar alcaloides purínicos como la cafeína en muestras de té, café y cacao utilizando cromatografía en capa fina.

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    Patty Soncco Soncco
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    La cromatografía separa mezclas de compuestos utilizando dos fases, una estacionaria y otra móvil. El documento describe los conceptos básicos de cromatografía en capa fina, incluyendo la definición de Rf, los adsorbentes, eluyentes y reveladores más comunes. También presenta un procedimiento para determinar alcaloides purínicos como la cafeína en muestras de té, café y cacao utilizando cromatografía en capa fina.

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    La cromatografía separa mezclas de compuestos utilizando dos fases, una estacionaria y otra móvil. El documento describe los conceptos básicos de cromatografía en capa fina, incluyendo la definición de Rf, los adsorbentes, eluyentes y reveladores más comunes. También presenta un procedimiento para determinar alcaloides purínicos como la cafeína en muestras de té, café y cacao utilizando cromatografía en capa fina.

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    La cromatografía separa mezclas de compuestos utilizando dos fases, una estacionaria y otra móvil. El documento describe los conceptos básicos de cromatografía en capa fina, incluyendo la definición de Rf, los adsorbentes, eluyentes y reveladores más comunes. También presenta un procedimiento para determinar alcaloides purínicos como la cafeína en muestras de té, café y cacao utilizando cromatografía en capa fina.

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    de 10

    Cromatografa

    1. Introduccin
    CONCEPTO DE CROMATOGRAFA.
    La cromatografa se define como la separacin de una mezcla de dos o ms
    compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es estacionaria y la
    otra una fase mvil. Varios tipos de cromatografa son posibles, dependiendo de la
    naturaleza de las dos fases involucradas: slido-liquido (capa fina, papel o columna),
    liquido-lquido y gases-liquido ( fase vapor ). Todas las tcnicas cromatografas
    dependen de la distribucin de los componentes de la mezcla entre dos fases
    inmiscibles: una fase mvil, llamada tambin activa, que transporta las sustancias que
    se separan y que progresa en relacin con la otra, denominada fase estacionaria. La
    fase mvil puede ser un lquido o un gas y la estacionaria puede ser un slido o un
    lquido. Todos los slidos finamente pulverizados tienen el poder de adsorber en mayor
    o menor grado otras sustancias sobre su superficie; y, similarmente, todas las
    sustancias pueden ser adsorbidas, unas con ms facilidad que otras. Este fenmeno
    de adsorcin selectiva es el principio fundamental de la cromatografa.
    CONCEPTO DE R.F.
    Rf es el registro y se define como: Rf = distancia que recorre la muestra desde el
    punto de aplicacin / distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente El
    valor de Rf depende de las condiciones en las cuales se corre la muestra (tipo de
    adsorbente, eluyente, as como las condiciones de la placa, temperatura, vapor de
    saturacin, etc.). Tiene una reproducibilidad de 20%, por lo que es mejor correr
    duplicados de la misma placa.
    CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.
    En este caso se utiliza una placa recubierta con fase estacionaria manteniendo un
    pequeo espesor constante a lo largo de la placa. El eluyente ascender, por
    capilaridad, por la placa y arrastrar los componentes a lo largo de sta produciendo
    manchas de los componentes. Se usan lminas de: vidrio como soporte del
    adsorbente, plstico (ej: acetato) metlicos (ej: aluminio). Los tamaos de la placa
    para CCf convencional son: 20 x 20; 10 x 20 y 5 x 2. Hay placas que contienen un
    indicador de fluorescencia, para facilitar la identificacin de las muestras. Si no se usa
    indicador y los componentes no son coloridos se requerirn tcnicas de revelado.
    Eluyentes ms comunes para cromatografa en capa fina. ter de petrleo -tolueno
    -dietil-ter, t-butil-ter -diclorometano -acetato de etilo -n-pentano, n-hexano
    -ciclohexano -tetracloruro de carbono -ter dietlico -cloroformo -acetona -iso-propanol
    -etanol -metanol -cido actico

    REVELADORES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA


    Las manchas de color son, por supuesto, inmediatamente visibles; las incoloras
    pueden revelarse mediante: Luz UV: si la sustancia absorbe luz ultravioleta, se puede
    usar una fase estacionaria impregnada con un indicador fluorescente (F254 F366), el
    nmero que aparece como subndice nos indica la longitud de onda de excitacin del
    indicador utilizado. La introduccin de la placa en vapores de yodo. El roco con una
    solucin de agua/H2SO4 1:1 (dentro de un compartimiento especialmente protegido y
    bajo una campana de extraccin de gases). Despus calentar
    ADSORBENTES MS COMUNES PARA CROMATOGRAFA EN CAPA FINA.
    a)
    b)
    c)
    d)

    Silica gel (se utiliza en el 80% de las separaciones)


    xido de Aluminio Almina (cida, neutra bsica)
    Celulosa (Nativa o micro-cristalina)
    Poliamidas Para la seleccin del adsorbentes deber tomar las siguientes
    consideraciones:
    Polaridad
    Tamao de partcula a. Dimetro b. rea Superficial
    Homogeneidad

    FACTORES QUE INFLUYEN EN UNA SEPARACIN POR CROMATOGRAFA DE


    CAPA FINA.
    a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben ms en la fase
    estacionaria.
    b) La cromatografa debe llevarse a cabo en un rea sin corrientes de aire.
    c) Limpieza de las placas. Muchas placas estn contaminadas con grasa o agentes
    plastificantes o adhesivos. Para el trabajo a pequea escala, stas deben limpiarse
    corriendo primero una mezcla de cloroformo y metanol y despus dejar secar
    completamente antes de aplicar la muestra.
    d) Pureza de los disolventes.

    2. Metodologa
    Materiales
    Refrigerante
    Mechero
    Baln
    Soporte universal

    Reactivos
    Etanol puro
    Ac. Actico glacial (CH3COOH)
    Ac sulfrico (H2SO4)
    Carbonato de sodio (Na2CO3)
    Cloruro de calcio (CaCl2)

    3. Procedimiento
    PREPARACIN DE ACETATO DE ETILO (FASE MVIL PARA
    CROMATOGRAFA)
    H+

    CH3CH2OH + CH3COOH CH3COOCH2CH3 + H2O


    H2O
    H2SO4

    SE AGREGARA:
    Ch3-COOH

    120ML

    ETANOL 96

    140ML

    AC.SULFURICO CC.

    12ML

    Aadir primero el
    etanol 96 en un baln,
    agregar ac. Actico y tambin
    ac. Sulfrico CC.

    Se reflujara por una hora se enfriara hasta


    que se pueda coger

    Modificar el sistema en el cual se


    necesitara un temperatura de 75-78C
    donde el ac. De etilo viajara hacia el
    matraz.

    Se colocara la destilacin en una pera de


    decantacin
    se agregara carbonato de sodio al 10 % 30

    mL 2 veces se agitara asta


    expulsar el gas medir el pH
    que debe estar neutro o
    base

    Descartar el agua y quedarse con la


    fase orgnica.

    Agregar una solucin formada por 20g


    CaCl2 en 25 mL de agua.
    Agregar Mg2SO

    DETERMINACIN DE ALCALOIDES PURINICOS POR TLC


    PREPARACIN DE EXTRACTO
    1g de droga molida se mezcla vigorosamente con 1 mL de sal de Na2CO3 al
    10%.

    la
    mezcla se le aade
    5mL de metanol y se reflujara.
    Na CO
    Se filtrara y se concentra de acuerdo a la cantidad
    total de alcaloides en una droga vegetal de tal modo
    que 100 mL de solucin contengan 50-100ug de
    alcaloides totales.
    2

    CUADRO N 1. ALCALOIDES PURNICOS EN DROGAS VEGETALES


    Semilla de cacao
    Semilla de caf
    Hojas de T

    0,2%-0,5%
    0,3%-2,5%
    2,5%- 4,5%

    0,35%
    1,4%
    3,5%

    Cafena
    Cafena
    Cafena

    Las muestras aplicadas en TLC deben tener entre 50 y 100ug de alcaloides totales.
    Ejm: La droga pulverizada (1g) con un contenido de alcaloides de 0,3%, se extrae con
    5 mL de metanol, por el mtodo descrito se tendra 3mg de droga en 5 mL de solucin
    metanlica lo cual significa 60ug alcaloides totales por 100uL SOL.

    1 g . 100 = 1 g 0,3 =0,003 g .=3 mg .


    xg . 0,3
    100

    60 , ug Alc .
    3 mg 3000 ug 60
    =
    =
    =
    100 uLSol . M 5 mL 5000uL 100

    C ACAO:1 g 0,0035 g Al CA .=

    T :1 g 0,035 gALC .=

    3,5 mgAlc 3500 ugal. 70ugAl .


    =
    =
    5 mLsol
    5000uLsol . 100 ul .

    35 mgAlc . 35000 ugAl . 70 ugAl .


    =
    =
    15 mLsol . 15000ulsol . 30 uLsol .

    CAFE :1 g 0,014 gAlc .=

    14 mg. Alc . 14000 mg. Alc . 84 ug . Alc .


    =
    =
    5 mL . sol .
    5000 uL. sol.
    30 uL . sol

    PREPARACION DEL ESTANDAR


    Moler tableta y mezclar con 1mL de metanol (por cada 10mg. de alcaloide), mezclar
    por 5 min a 60C .despus de lo, el extracto se aplica directamente a la placa, 10ul.
    Corresponden a 100ug. de alcaloides.

    CROMATOGRAFA
    Con
    del
    tiene

    una regla medir 15mL


    final de la placa que
    las medidas de 10cm

    6cm
    Dividir en 4 partes y
    Con
    una aguja marcar
    finamente los puntos donde se
    colocara la muestra

    Con una micro pipeta


    colocar las muestras de (muestra estndar
    ,t,caf,cacao)

    En un beaker colocar en el borde


    papel filtro y colocar nuestra placa con las muestras
    y colocar la fase mvil tapar con papel film astas
    que suba asta maso menos un centmetro antes de
    llegas al tope de la placa.

    Llevar a la estufa 60C asta


    secar

    Una es secas colocar en una cartulina y


    pinta las placas con los reactivos A y B
    para la revelacin llevar a sequedad.
    o El reactivo A contiene 1g yodo,1g
    yoduro de potasio y alcohol 96 100ml
    o
    El reactivo B contiene HCl 25% y etanol 96 25mL


    Al no observa
    los recorridos se
    agreg el reactivo
    dragendorff

    4. Discusin
    En la prctica de cromatografa se us dos reveladores A y B con los cuales se debi
    ver la cantidad de cafena de cada muestra pero al parecer no se tuvo un resultado
    esperado por que el revelador B posiblemente este muy acido lo cual nos llev a usar
    el reactivo dragendorff el cual nos dio el resultado esperado .

    5. Conclusin
    Al trmino de la prctica se llev a la conclusin de que l t tiene ms cantidad de
    cafena que las dems muestras

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