Journal of Basic Sciences, Vol. 9 (24), pp.

44-50, enero - abril 2023

Evaluación antioxidante de Ácido o-cumárico aislado de hojas de Gliricidia sepium

Luis Fernando Martínez Morales1, *, Ever A. Blé González1, Carlos E. Lobato García1,
Abraham Gómez Rivera1, Manasés González Cortazar2
1DivisiónAcadémica de Ciencias Básicas, Universidad Juárez Autónoma de Tabasco, Km. 1. Carretera
Cunduacán-Jalpa de Méndez, Cunduacán, Tabasco, 86690.
2Centro de investigación Biomédicas del Sur, Instituto Mexicano del Seguro Social, Xochitepec, Morelos, Méx.

*fernandomn731@gmail.com

Resumen
Gliricidia sepium (cocoíte) es una especie que se utiliza para problemas de la piel principalmente en el
sureste del país, se tienen algunos estudios que hablan de la capacidad antioxidante de sus extractos,
mientras que a nivel de compuestos aislados los reportes son escasos. En este trabajo se reporta el
aislamiento del ácido o-cumárico de las hojas de G. sepium, que presentó una actividad antioxidante en
la prueba ABTS con una IC50 = 2.03 µg/mL. La caracterización de este compuesto se obtuvo de forma
comparativa con estándares a través de bandas características de absorción UV-Vis. Este estudio ha
demostrado la capacidad antioxidante del ácido o-cumárico y valida el uso en la medicina tradicional
del cocoíte.
Palabras claves: antioxidante, ácido o-cumárico, prueba ABTS.

Abstract
Gliricidia sepium (common name: cocoíte) is a species that is used for skin problems mainly in the
southeast of Mexico, there are some studies that report the antioxidant capacity of its extracts,
However, at the level of isolated compounds the reports are scarce. In this work, the isolation of o-
coumaric acid from the leaves of G. sepium is reported, this compound presented an antioxidant activity
in the ABTS test with an IC50 = 2.03 µg/mL. The characterization of the o-coumaric acid was performed
in a comparative way with standards through characteristic UV-Vis absorption bands. This study has
demonstrated the antioxidant capacity of o-coumaric acid and validates the use of cocoíte in traditional
medicine.

Keywords: antoxidant, coumaric acid, ABTS test.

Recibido: 03 de enero de 2023. Aceptado: 10 de marzo de 2023. Publicado: 14 de abril de 2023.

1. Introducción

El proceso degenaritivo en la fisiología está relacionado en gran medida con la presencia de radicales
libres, promoviendo el proceso oxidativo en el cuerpo. Las plantas tienen una gran cantidad de
compuestos fenolicos que son capaces de atrapar radicales libres entre los cuales se encuentran:
polifenoles, flavonoides, antocianinas, ácidos grasos, entre otros. Los cuales han despertado un gran
interes en su uso en la fitoterapia, además de respaldar su valor etnofarmacológico [1].

El rol que presentan los antioxidantes es neutralizar los radicales libres que presentan en las células y así
evitar el daño que producen en los organismos vivos. Por otro lado se ha relacionado una gran cantidad
de radicales libres, especialmente con un grupo o una especie llamada: Especies Reactivas de Oxígeno

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(ROS por sus siglas en inglés) con un gran daño a largo plazo principalmente en el funcionamiento de la
célula [2]. Además numerosos estudios han demostrado que los antioxidantes juegan un rol importante
en el mantenimiento de la salud en los humanos y en el tratamiento de las enfermedades todo esto debido
a la capacidad de reducir el estrés oxidativo [3].

A grandes rasgos los antioxidantes se dividen en dos grupos: enzimaticos y no enzimáticos, en el primer
grupo se pueden encontrar: catalasas, peroxidasas, reductasas, entre otros. Mientras que en el segundo
grupo están los derivados de plantas los cuales son: ácidos fenólicos, carotenoides, flavonoles,
isoflavonoides, flavonoides, flavanonas, antocianidinas [4]. siendo estos ultimos los de gran importancia
en el estudio de la especie Gliricidia sepium dado que dicha solo tiene reportes a nivel extracto
especialmente en el etanólico que indican que sí tiene capacidad antioxidante [5].

2. Metodología experimental

2.1. Material vegetal

El ejemplar de Gliricidia sepium fue colectada en Villahermosa, Tabasco, en enero de 2022 y un ejemplar
fue depositado en el herbario del de la Universidad Juárez Autónoma de Tabasco con número de registro:
36229.

2.2. Obtención de extractos, fracciones y compuestos

Las hojas frescas de Gliricidia sepium (1 Kg) fueron secadas a temperatura ambiente y en un lugar
protegido de la luz. El material seco (100 g) fue triturado y macerado de manera secuencial, por triplicado
con disolventes de polaridad ascendente como: n-hexano, acetato de etilo, y etanol (Merck). Cada
extracto se filtró y concentró a presión reducida en un rotaevaporador (Heidolph a 45 - 50°C). Los
extractos fueron liofilizados, para dar los extractos Gs-Hex, Gs-AcOEt, y Gs-EtOH, respectivamente.

Para llevar a cabo el fraccionamiento del extracto de acetato de etilo se utilizó la técnica de cromatografía
en columna por gravedad usando gel de sílice de fase normal en proporción 1 g de extracto adsorbido en
5 g de sílice por 10 g de sílice de fase normal utilizando diferentes sistemas de disolventes con diferentes
polaridades.
La metodología a empleada para el análisis por cromatografía líquida de alta resolución (CLAR o HPLC), se
utilizará un cromatógrafo equipado con un módulo de separación Waters 2695 acoplado un detector de
con arreglo de diodos Waters 2996 (Milford Massachusetts, USA) y una columna SupelcosilTM LC-F
column (4.6 mm × 250 mm, 5 µm, Sigma-Aldrich, Bellefonte, PA, USA): La fase móvil consistió en ácido
fórmico acuoso al 0,1% (v / v) (A) y acetonitrilo (B). Los estándares de referencia que se emplearon fueron
los adecuados de acuerdo con las características los perfiles cromatográficos que se obtengan en el
proceso [6].

2.3 Actividad antioxidante

Este método se fundamenta en la cuantificación de la decoloración del radical ABTS+, debido a su

reducción a ABTS por la acción de antioxidantes. El radical catiónico ABTS+ es un cromóforo verde azulado
que absorbe a una longitud de onda de 734 nm y se genera por una reacción de oxidación del ABTS (2,2'-
azino-bis- (3-etil benzotiazolin-6-sulfonato de amonio) con persulfato de potasio (Sigma Aldrich). De esta

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manera el grado de decoloración como porcentaje de inhibición del radical ABTS+ está determinado en
función a la concentración [7,8].
La solución del radical ABTS+ se preparó mezclando 5 ml de solución ABTS 7 [mM] con 88 µL de solución
de persulfato de potasio 140 [mM]. En el análisis se utilizaron 100 µL de la muestra y 1 mL de la solución
del radical ABTS+. Las mediciones se realizaron a una longitud de onda de 490 nm a los 30 min de reacción
y a temperatura ambiente [1,8]. Los resultados se expresaron mediante la construcción de una curva
patrón usando como antioxidante Camellia sinensis (Sigma Aldrich) a concentraciones de 6.25, 12.5, 25,
50, 100 y 200 µg/mL [8].

3. Resultados y Discusión

3.1 Aislamiento de ácido o-cumárico

Una vez seco y reducido el material, la cantidad de extractos orgánicos en gramos (g) y en porcentaje con
respecto al peso inicial (%) obtenidos fue la siguiente: Extracto de acetato de etilo 18.46 g, 1.74%.
Posteriormente se separó hasta obtener ocho fracciones las cuales se monitorearon por cromatografía
líquida de alta resolución (CLAR), además de que por Cromatografía en columna se utilizaron diferentes
solventes de diferentes polaridades para finalmente obtener el ácido o-cumárico cuya estructura se puede
ver en la figura 4.

Figura 1. Cromatograma de la Fracción 7 del extracto de Acetato de etilo a 280 nm.

Figura 2. Cromatograma del compuesto GSFC2R7-18 (Ác. Cumarico) a 280 nm.

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Figura 3. Espectro Uv-Vis del compuesto GSFCR7-18.

Figura 4. Estructura química del ácido o-cumárico [9].

En la figura 3 se observan las tres bandas de absorción máxima (218, 274, 325 nm), esto se debe a la
interacción de los enlaces dobles o enlaces π que tiene la molécula, debido al comportamiento en el Uv-
Vis de dicha molécula y de acuerdo con lo reportado en la literatura este comportamiento es indicativo
que el compuesto es ácido o-cumárico [10], un derivado del ácido cinámico. Por otro lado, se tienen
reportes de que dicho compuesto está en presente en la especie [10,11].

3.2 Actividad antioxidante

Los resultados que se presentan de la prueba de ABTS, podemos apreciar que existe una ausencia de
coloración en las celdas donde se encuentran ácido o-cumárico (figura 5) a diferentes concentraciones
como se presenta en la tabla 1 mientras que el estándar se presenta en la tabla 2.

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Figura 5. Placa utilizada para ABTS a 490 nm.

Desviación
Celda Concentración µg/mL % Inhibición
estándar

1 1000 87.2 1.417

2 500 81.1 1.028
3 250 70.0 0.755
4 125 53.6 0.065
5 62.5 38.4 2.515
6 31.25 24.4 4.011
Tabla 1. Prueba antioxidante de ABTS de ácido o-cumárico aislado de Gliricidia sepium.

Desviación
Celda Concentración µg/mL % Inhibición
estándar
1 200 95.8 0.065
2 100 66.7 0.536
3 50 34.1 1.047
4 25 11.9 0.364
5 12.5 2.0 0.173
Tabla 2. Prueba de ABTS para el estándar de Camellia sinensis.

Una vez realizada la evaluación antioxidante se confirmó que el ácido o-cumárico aislado de Gliricidia
sepium, tiene capacidad antioxidante utilizando la metodología de ABTS, dicha actividad se puede
clasificar como de intensidad media dado que el compuesto aislado tiene una IC50 = 117.9 µg/mL con
respecto al estándar utilizado de Camellia sinensis el cual ya tiene una actividad antioxidante demostrada

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en este modelo de acuerdo con la metodología presentada. Sin embargo, es importante realizar otro tipo
de metodologías para comprobar el mecanismo antioxidante que tiene este compuesto.

4. Conclusiones

El ácido o-cumárico posee capacidad antioxidante en la prueba de ABTS, por lo que también se podría
aplicar en modelos que tengan alguna actividad relacionada, tales como: antiinflamatorio,
antihipertensivo, entre otros. Sin embargo, son pocos los estudios que se tienen con respecto a este
compuesto que se ha reportado en esta especie [11–13] así como son pocos las publicaciones
correspondientes al metabolito presentado en este trabajo.

5. Agradecimientos

LFMM agradece al Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología por el apoyo otorgado mediante la beca de
maestría (1149351). Así mismo al Cuerpo Académico “Química Orgánica” de la UJAT y al personal del
Laboratorio de Fitoquímica del Centro de Investigación Biomédicas del Sur del Instituto Mexicano del
Seguro Social por las facilidades brindadas para el desarrollo de este proyecto.

6. Referencias

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Torres-Castillo JA. Drying Effects on Phenolics and Free Radical-Scavenging Capacity of Rhus
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