Centro de Bachillerato tecnológico y

industrial No. 144

Módulo: Ejecuta técnicas de análisis químicos cualitativos y

microbiológicos.

Submódulo: S3 Emplea técnicas de identificación de microorganismos.

Integrantes:

López Gómez Adriana Liseth

Pérez Flores Andrea Valentina

Rojas Girón Liliana Yasmin

Sántiz Díaz Sara

Semestre y grupo: 3- B Laboratorista Químico

Introducción breve:
Las bacterias son organismos microscópicos unicelulares. Se encuentran entre las
formas de vida más antiguas conocidas en el planeta. Hay miles de tipos de bacterias
diferentes y pueden vivir en todos los medios y ambientes imaginables, en cualquier parte
del mundo. Viven en el suelo, en el agua del mar y en las profundidades de la corteza
terrestre. Se ha podido comprobar que ciertas bacterias pueden vivir, incluso, en los
desechos radiactivos. Muchas bacterias viven en y en los cuerpos de personas y
animales, en la piel y en las vías respiratorias, la boca y los tractos digestivo, reproductivo
y urinario, sin causar ningún daño.

Las bacterias se clasifican de varias maneras:

• Nombres científicos: las bacterias, al igual que otros seres vivos, se clasifican por
género (basado en la existencia de una o varias características comunes) y, dentro
del género, por especie.
• Tinción: las bacterias pueden ser clasificadas por el color que adquieren después
de que se les apliquen ciertos productos químicos (tinciones).
• Formas: todas las bacterias se pueden clasificar en una de las tres formas básicas:
esferas (cocos), bastones (bacilos) y espirales o hélices (espiroquetas).

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Hipótesis:
Se espera identificar y clasificar diversas bacterias presentes en los medios de cultivo
como lo es en el “agar Mac Conkey”, mediante un enfoque sistemático que combine la
observación de su morfología colonial y la aplicación de pruebas bioquímicas, como la
tinción de Gram, la prueba de oxidasa y la prueba de catalasa. Inicialmente, se analizarán
características macroscópicas como forma, tamaño, textura y pigmentación de las
colonias para orientar las pruebas posteriores. Las técnicas mencionadas permitirán
clasificar las bacterias de manera precisa. Este proceso requiere tiempo, precisión y un
manejo adecuado de los materiales, ya que pueden surgir dificultades como
contaminación cruzada, resultados inconclusos o variaciones en el crecimiento
bacteriano, que podrían influir en la correcta identificación y clasificación de los
microorganismos.

Objetivos:
-General:

Mediante el análisis constante de una muestra tomada, lograr identificar los tipos de
bacterias presentes a partir del cultivo en diversos agares, tal es el caso del agar nutritivo
o agar Mac conkey, seleccionando una colonia y valorar bajo métodos estandarizados y
pruebas bioquímicas la certeza de la identidad de la bacteria.

-Específico:

• Prueba bioquímica de Catalasa: Identificar al grupo especifico al que pertenece

una bacteria, a partir del desprendimiento de burbujas procedentes del oxígeno
descompuesto por la enzima. Es decir, identificar si el organismo es productor de
catalasa.
• Prueba bioquímica de Oxidasa: Lograr interpretar los resultados de la prueba
analizar la presencia de un sistema citocromo oxidasa en la bacteria.
• Tinción de Gram: Agrupar las bacterias por color y forma para ayudar a determinar
qué tipo de bacteria está presente en el cultivo, clasificándola en dos tipos
importantes, grampositiva o gramnegativa.

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Justificación:
El estudio de bacterias es esencial para determinar a qué especie pertenecen, lo que
nos permite saber si representan una amenaza patógena para la salud o no. La
implementación de técnicas como la tinción de Gram, las pruebas bioquímicas (oxidasa
y catalasa), la observación de su morfología y los métodos de siembra y resiembra
permite identificar y caracterizar microorganismos de manera precisa, aportando datos
esenciales para el diagnóstico, la prevención y la solución de problemas en diversas
áreas.

• Tinción de Gram: Esta técnica es crucial para diferenciar bacterias en Gram

positivas y negativas, basándose en las propiedades de su pared celular. Dicha
clasificación no solo es clave en estudios taxonómicos, sino también en contextos
clínicos, donde ayuda a orientar tratamientos antimicrobianos efectivos. Por
ejemplo, bacterias Gram negativas suelen ser más resistentes a ciertos
antibióticos, lo que subraya la relevancia de esta técnica en terapias dirigidas.
• Pruebas Bioquímicas (Oxidasa y Catalasa): Las pruebas de oxidasa y catalasa
son herramientas indispensables en la identificación de bacterias, ya que evalúan
procesos metabólicos específicos. La prueba de oxidasa, al detectar la presencia
de citocromo oxidasa, permite diferenciar bacterias aerobias, mientras que la
catalasa identifica la capacidad de las bacterias para descomponer peróxido de
hidrógeno.
• Morfología Bacteriana: La observación de la morfología bacteriana (forma y
disposición) facilita la clasificación inicial de los microorganismos y su asociación
con características específicas.
• Siembra y Resiembra: Estas técnicas son esenciales para aislar y mantener
cultivos bacterianos en medios específicos. La siembra permite el estudio
controlado de bacterias, asegurando la pureza y viabilidad de los cultivos,
mientras que la resiembra es clave para su mantenimiento a lo largo del tiempo y
para la realización de pruebas adicionales.
• Relevancia en Diversos Ámbitos: En el ámbito médico, estas técnicas son la base
para el diagnóstico de infecciones bacterianas y el diseño de tratamientos
eficaces.

El estudio de bacterias mediante estas técnicas microbiológicas no solo enriquece

nuestro conocimiento sobre los microorganismos, sino que también tiene aplicaciones
prácticas en salud, medio ambiente e industria. Al entender y manejar las características
bacterianas, es posible abordar desafíos globales, desde el tratamiento de enfermedades
hasta la sostenibilidad ambiental. Por ello, estas técnicas representan una base sólida
para investigaciones y soluciones innovadoras en distintos camp

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Marco teórico:
Bacilos gram-negativo
Las bacterias se clasifican por su aspecto al microscopio y por otras características.

En microbiología se denominan bacterias Gram negativas a aquellas bacterias que no

se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram: de ahí el nombre de "Gram-
negativas" o también "gramnegativas". Esta característica está íntimamente ligada a la
estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo natural de organización
bacteriana. Son uno de los principales grupos de bacterias, las otras son las bacterias
Gram positivas.[1]

Las bacterias Gramnegativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se
localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-
positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptiglicano es mucho más
gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.

Los bacilos gramnegativos son causantes de un gran número de enfermedades. Algunos

de ellos son microorganismos comensales presentes en la flora intestinal normal. Estos
microorganismos comensales más otros provenientes de reservorios animales o del
medioambiente pueden causar enfermedades. La diarrea, la peritonitis y las infecciones
de las vías urinarias, el tubo digestivo, las vías biliares y el torrente sanguíneo suelen
estar causadas por bacilos gramnegativos.

Las bacterias gramnegativas causan peste, cólera y fiebre tifoidea. Estas infecciones son
raras en los Estados Unidos, pero son más comunes en áreas del mundo que tienen
condiciones sanitarias deficientes y/o un suministro de agua y alimentos inseguros. Estas
infecciones pueden ser graves.

Bacilos gramnegativos.

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 Enterobacterias
¿Qué es?

Las Enterobacterias son una gran familia de bacilos gramnegativas reconocidas como
un grupo importante en la industria alimentaria para monitorear la higiene y el
saneamiento. Este grupo incluye una gama completa de microorganismos, incluidas
todas las bacterias Coliformes. Sus miembros abarcan desde bacterias como la
Salmonella y la E. coli, bien conocidas por causar enfermedades transmitidas por los
alimentos, hasta agentes de deterioro de los alimentos y diversos microorganismos que
normalmente se encuentran en el tracto intestinal humano como parte de la flora
intestinal. Su distribución ubicua hace que sea casi inevitable que algunos miembros de
Enterobacteriácea ingresen a la cadena alimentaria.
-Descripción.
Las Enterobacterias se caracterizan por ser anaerobios facultativos, con forma de varilla,
negativos a la oxidasa, que fermentan la glucosa en ácido y / o dióxido de carbono.
Generalmente móviles, tienden a tener una longitud de 1–5 µm.

-Tipos de enterobacterias:

Las más comunes son:

Las bacterias entéricas se pueden clasificar en dos grandes grupos. Por un lado, las
bacterias simbiontes no perjudiciales; y, por el otro, las patógenas. Las primeras suelen
formar parte de lo que se conoce como flora intestinal en seres humanos y animales.
Como su nombre indica, viven de forma simbionte. No solo no perjudican a su huésped,
sino que contribuyen a la digestión.

Asimismo, es posible encontrarlas en otras zonas del cuerpo, especialmente en las vías
en contacto con el exterior. Es el caso de la vagina, la uretra o las fosas nasales, entre
otros. Aquí tampoco resultan patológicos, pues hacen una gran labor controlando el
crecimiento de otros tipos de bacterias y hongos. En cuanto al segundo grupo, el de
especies patógenas, podemos destacar como principales la Salmonella, la Escherichia
coli y la Klebsiella pneumoniae, entre otras.

• Salmonella: Hay muchos tipos diferentes de Salmonella, pero la mayoría de las

enfermedades son causadas por la Salmonella enteritidis y la Salmonella
typhimurium. Estas bacterias se hallan comúnmente en alimentos crudos, como
carne de ave y huevos.
• Escherichia coli: Al igual que ocurre con la Salmonella, la inmensa mayoría de las
cepas de Escherichia coli son inofensivas. Sin embargo, existen algunas con
consecuencias terribles para la salud. Es el caso de la Escherichia coli O157:H7.

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 • Klebsiella pneumoniae: Se trata de un microorganismo capaz de producir
infecciones de pulmón, de intestino y en las vías urinarias. El mayor foco de peligro
del contagio de esta bacteria reside en los hospitales, donde afecta,
especialmente, a los pacientes inmunodeprimidos.
• Enterobacterias en la industria: Diferentes países tienen diferentes pautas y
regulaciones con diferentes niveles de aceptación para las Enterobacterias no
patógenas, por lo que los fabricantes de alimentos han seguido diferentes criterios
y planes de muestreo según su ubicación.

Cuando se trata de pasos de control de peligros, las Enterobacterias son sensibles al

calor, por lo que la pasteurización o cocción se realiza con mayor frecuencia para prevenir
peligros biológicos como la Salmonella en el producto terminado. (Las Enterobacterias
también son susceptibles, como la mayoría de las bacterias gramnegativas, a sufrir
daños por el frío extremo, pero debido a que algunas células han demostrado su
capacidad para sobrevivir largos períodos de congelación, este método no es una
medida de control confiable o un paso de letalidad).

Una vez que se toman estos pasos, se extraen las muestras del producto y se analizan
para Enterobacterias para verificar que el tratamiento térmico está funcionando. La
presencia de Enterobacterias en la leche después de la pasteurización, por ejemplo,
puede indicar una pasteurización inadecuada o contaminación posterior al
procesamiento. El resultado de las pruebas para Enterobacterias es una garantía
adicional de que el proceso de fabricación está bajo control.

Muestra bajo el microscopio, mediante el proceso de tinción de

gram.

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 Tinción de Gram
La tinción de Gram consiste en una prueba de laboratorio útil para detectar la presencia
de microorganismos, especialmente bacterias y algunas veces hongos, en una muestra
obtenida del foco infeccioso o sospechoso de serlo. Proporciona resultados con relativa
rapidez y facilidad acerca de la presencia de bacterias u hongos, y de ser así del tipo.

La muestra de la zona infectada se extiende sobre un portaobjetos y se deja secar. Se

aplica una tinción especial y posteriormente un profesional con experiencia observa al
microscopio el portaobjetos teñido. Las bacterias que pueden visualizarse al microscopio
se clasifican en función del color y de la forma:

• Color: las bacterias pueden ser "Gram positivas" (color púrpura) o "Gram
negativas" (color rosado).
• Forma: las formas más comunes son las redondeadas (cocos) o en forma de
bastoncillo (bacilos).

Se puede obtener información adicional observando las agrupaciones que forman las
bacterias en la preparación. Los cocos pueden presentarse aisladamente, en parejas, en
grupos de cuatro, en racimos o formando cadenas. Los bacilos pueden ser gruesos,
finos, cortos, largos, y pueden presentar esporas en una de sus extremidades. También
se detectan bacterias que se encuentren en el interior de los leucocitos.

La coloración de la tinción de Gram y la forma de las bacterias permiten predecir el tipo

de microorganismo que está causando la infección.

La tinción de Gram constituye una prueba de primera línea muy útil para detectar e
identificar bacterias y algunos hongos. Sin embargo, los resultados obtenidos deben
completarse con otras pruebas adicionales. Así, para confirmar el diagnóstico, son
necesarias pruebas como cultivos, pruebas de detección de antígenos o de anticuerpos,
o pruebas moleculares. Puede ser necesario además realizar un antibiograma, para
determinar cuál será el antibiótico más efectivo para combatir la infección.

Las tinciones de Gram no son útiles si el agente patógeno (el microorganismo causante
de la enfermedad) no puede distinguirse de la flora bacteriana normal. Por ejemplo, una
tinción de Gram de una muestra de la faringe no indica el tipo de bacteria que puede
estar causando una infección, porque tanto las bacterias "buenas" como las que causan
la infección toman la misma apariencia al microscopio.

El proceso es el siguiente:

1. Esterilizar un asa de incubación y tomar una gota de agua destilada.

2. Colocarla en el portaobjeto.
3. Nuevamente esterilizar el asa y tomar una pequeña parte de una colonia aislada.

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 4. De igual manera esparcir la pequeña parte de la colonia en la gota de agua.
5. Dejar que se seque la muestra y fijar 3 veces seguidas en el mechero.

Proceso de fijación:

1. Se agrega una gota del reactivo de cristal violeta por 1 minuto.

2. Se lava por 30 segundos la muestra.
3. Se agrega una gota de Lugol por 1 minuto.
4. Nuevamente se lava con agua por 30 segundos.
5. Se pone por 30 segundos el decolorante.
6. Se lava por 30 segundos.
7. Finalmente se agrega 1 gota de safranina por 1 minuto.
8. Se lava por 30 segundos.

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 Catalasa +
Es una enzima que se encuentra en casi todos los organismos aérobicos. La catalasa
positiva se refiere a la capacidad de algunas bacterias para producir esta enzima, como
el caso der Staphylococcus aureus y se utiliza para descomponer el peróxido de
hidrógeno (H2O2) en agua y oxígeno, existen diferentes tipos de catalasa, incluyendo:
catalasa clásica, catalasa-peroxidasa, catalasa-asociada a la membrana.

Si la catalasa presenta un burbujeo es positiva, y si no presenta nada la catalasa es

negativa, en este caso el proceso de la catalasa presento un burbujeo.

Oxidasa -
La prueba de oxidasa es un ensayo bioquímico utilizado para identificar bacterias en
función de la presencia o ausencia de la enzima citocromo c oxidasa. Esta enzima juega
un papel crucial en la cadena respiratoria de las bacterias aerobias, facilitando la
transferencia de electrones durante la respiración celular.

Si la oxidasa presenta un color azul la prueba es positiva, si no presenta nada es

negativa, es muy importante realizar este paso manera bien ya que pueden dar falsos
positivos alterando los resultados. En nuestra prueba salió negativa.

Prueba de catalasa + Prueba de oxidasa -

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Diagrama de flujo:

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Resultados:

Pruebas Resultados

1. Tinción de Gram Enterobacterias

2. Oxidasa Negativa (-)
3. Catalasa Positiva (+)

De un agar mac conckey se pudo identificar enterobacterias, en donde dio un resultado

de pruebas bioquímicas de oxidasa negativa y catalasa positiva.

11
Conclusión:
• López Gómez Adriana Liseth

Tras realizar el procedimiento experimental, se confirmó la hipótesis inicial, cumpliendo

de manera efectiva con los objetivos planteados. Los resultados obtenidos en las
pruebas bioquímicas de oxidasa (negativa) y catalasa (positiva) permitieron identificar la
presencia de enterobacterias, un grupo de bacilos Gram-negativos. Esta determinación
fue validada mediante el análisis microscópico.

La tinción de Gram fue una técnica crucial para la clasificación de la bacteria. Este
método permitió determinar que se trataba de bacterias Gram-negativas, reafirmando la
importancia de este procedimiento en la microbiología. Sin embargo, durante su
ejecución enfrenté dificultades al fijar la muestra, ya que se lavabo la muestra y retrasó
la verificación. Este problema subraya la necesidad de dominar las técnicas básicas para
obtener resultados confiables.

Por otro lado, las pruebas bioquímicas de oxidasa y catalasa fueron determinantes para
complementar la identificación. La prueba de catalasa confirmó la presencia de esta
enzima al obtener un resultado positivo, mientras que la oxidasa negativa indicó que la
bacteria carece de esta enzima específica. Cabe destacar que estos procesos requieren
un manejo minucioso y cuidado, ya que la oxidasa, en particular, puede dar falsos
positivos si no se ejecuta correctamente, lo que puede llevar a interpretaciones erróneas
de los resultados.

En general, este estudio resalta la importancia de la metodología sistemática en la

identificación bacteriana, así como la precisión, paciencia y habilidades técnicas
necesarias para evitar errores que puedan afectar los resultados. Asimismo, evidencia
cómo los métodos tradicionales, como la tinción de Gram y las pruebas bioquímicas,
siguen siendo herramientas fundamentales para clasificar microorganismos y
comprender su posible impacto en la salud humana.

12
Conclusión:
• Pérez Flores Andrea Valentina

El presente análisis microbiológico nos permitió cumplir con cada objetivo planteado y
validar la hipótesis propuesta. Podemos justificar esta afirmación en el hecho de que se
cumplió cada uno de los parámetros impuestos y se desarrollaron todas las pruebas
correspondientes para la identificación de la bacteria. Ya que gracias a estas pruebas
como es el caso de la tinción de gram y pruebas bioquímicas de catalasa y oxidasa se
cumplió la hipótesis propuesta.

El análisis morfológico colonial nos permitió observar las características principales y

físicas de la bacteria, empezando por el medio empleado el cual correspondió a un agar
Gelosa Sangre, y demás datos de la colonia como: tamaño, color, forma, elevación, luz
transmitida, luz reflejada y consistencia. Datos indispensables para la identificación de la
bacteria.

La tinción de Gram por otro lado estuvo presente después de cada resiembra y
evidentemente en el cultivo madre, el primer procedimiento de tinción proveniente del
Agar Gelosa Sangre nos evidencio la presencia de Bacillos Gram+, Bacillus Gram- y
finalmente Enterobacterias, el principal uso de la tinción además de lograr ver mejor en
el microscopio fue apreciar a partir de la coloración rojo de la bacteria (en el caso de ser
negativo) o morada (en el caso de ser positiva).

En el caso de las pruebas bioquímicas de catalasa y oxidasa nos ayudaron a concluir

que bacteria analizamos a lo largo de todo este proceso, designándonos los últimos
parámetros para decidir si era un microorganismo u otro, las cuales dieron como
resultado enterobacterias, ya que ambas pruebas dieron como resultado negativo.

Las enterobacterias hacen referencia a una gran familia de bacilos gramnegativos, que
se pueden encontrar tanto en el ambiente como en el tracto gastrointestinal de humanos
y otros animales, así como en diversos ambientes naturales.

13
Conclusión:
• Rojas Girón Liliana Yasmin.

Los estudios microbiológicos realizados durante esta práctica permitieron confirmar la

hipótesis, cumpliendo así con los objetivos iniciales. Analizando los resultados de la
tinción de Gram en el microscopio (bacterias Gram negativas) y las diferentes pruebas
bioquímicas como catalasa (-) y oxidasa (-), se pudo identificar a un grupo de bacterias
llamadas “Enterobacterias”, este grupo de bacterias lograron ser identificadas gracias a
que se cumplió con todos los procedimientos necesarios para su identificación.

Al analizar la morfología colonial, se pudo observar diversas características de la

bacteria, características las cuales son: tamaño, color, forma, elevación, luz transmitida,
luz reflejada y consistencia. Aunque pueda parecer que estos datos son insignificantes,
en realidad, son de gran ayuda para poder identificar a la bacteria correctamente.

La tinción de Gram es uno de los procesos más importantes para la identificación de las
bacterias, pues es un proceso que nos ayuda a saber si son bacterias Gram (+) o
bacterias Gram (-). Al realizar la primera tinción se logró apreciar bacterias Gram (+) las
cuales eran de un color morado/violeta. Mientras que, al realizar la segunda tinción, se
pudieron apreciar bacterias Gram (-), las cuales eran de color rojo, pero, con estas
pruebas aún no se podía identificar el grupo de bacterias.
Finalmente, las pruebas bioquímicas de catalasa y oxidasa (las cuales fueron cruciales
para la identificación de la bacteria), estas permitieron determinar la ausencia de estas
enzimas, dando un resultado negativo en ambas pruebas, lo cual fue de gran utilidad
para finalmente poder identificar a las bacterias.

Fue así como se llegó al resultado de “Entero bacterias”, las cuales también son
conocidas como “Bacterias entéricas” y estas son un grupo de bacterias Gram (-) que
generalmente habitan en el intestino de los animales y los seres humanos, además, que
este grupo puede causar enfermedades en algunos casos.

14
Conclusión:
• Santiz Díaz Sara

El estudio microbiológico realizado permitió alcanzar los objetivos propuestos y confirmar

la hipótesis inicial, al evidenciar la presencia de bacterias en las muestras analizadas.
Los resultados, que señalaron catalasa positiva y oxidasa negativa, apuntan al grupo de
las enterobacterias, respaldando las características identificadas a lo largo del proceso
experimental.

La observación de las colonias bacterianas permitió describir detalles importantes como

su forma, tamaño, textura y pigmentación, fundamentales para diferenciar los
microorganismos presentes. La tinción de Gram posibilitó su clasificación, determinando
que las bacterias eran bacilos Gram negativos, consistentes con las propiedades
esperadas.

Las pruebas bioquímicas fueron clave para completar el análisis. La prueba de catalasa
confirmó la producción de esta enzima, mientras que el resultado negativo en la prueba
de oxidasa descartó la presencia de un sistema citocromo oxidasa, lo cual es
característico de las enterobacterias.

Este trabajo pone de manifiesto la importancia de integrar diferentes técnicas

microbiológicas, como la morfología colonial, la tinción de Gram y las pruebas
bioquímicas, para lograr una identificación precisa de los microorganismos. Además,
subraya la necesidad de mantener condiciones de cultivo adecuadas para obtener
resultados confiables y evitar contaminaciones.

Los hallazgos de este análisis tienen implicaciones tanto en contextos clínicos como
ambientales, mostrando el valor de las herramientas empleadas para identificar y
clasificar bacterias con precisión. Este tipo de proyectos no solo fomenta el desarrollo de
habilidades prácticas en microbiología, sino que también contribuye a una mejor
comprensión de los procesos biológicos asociados a los microorganismos.

15
Referencias:

• SEQC (24 de julio de 2022) Tinción de Gram. Lab Test Online.

https://www.labtestsonline.es/tests/tincion-de-gram

• Clínica Universidad de Navarra (S.F) Diccionario Medico: Catalasa. CIMA LAB

Diagnostic. https://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/catalasa

• Rolain, J., Bonten, M., Kern, W., y Kahlmeter, G. (2012) Enterobacteriaceae.

Science Direct. https://www.sciencedirect.com/topics/medicine-and-
dentistry/enterobacteriaceae

• NeoGen (01 de abril de 2024) Microorganismos - Enterobacterias. NeoCenter.

https://www.neogen.com/es/neocenter/blog/microorganisms-enterobacteriaceae/

• Haymarket Medical Network. (s.f.) Diagnosis & Disease Information. Infectious

Disease. https://www.infectiousdiseaseadvisor.com/ddi/

16
Índice:

PORTADA ………………………………………………………………1

HIPOTESIS………………………………………………………………2

OBJETIVOS ……………………………………………………………...2

JUSTIFICACION …………………………………………………………...3

MARCO TEORICO…………………………………………………………4-9

DIAGRAMA DE FLUJO…………………………………………………………10

RESULTADOS ……………………………………………………………………11

CONCLUSIONES ………………………………………………………………12-15

BIBLIOGRAFIAS ………………………………………………………………………16

17