Teixeira, Yan Eduardo Pinto

Orientador:Ronaldo Campanher Luiz, Natanael Izídio Moreira

PESQUISA DE COLIFORMES TOTAIS & Escherichia

Coli NA ÁGUA COLETADA DA GRUTA NOSSA
SENHORA APARECIDA, ANDRADAS-MG

Graduação em Farmácia

São João da Boa Vista

2023
 RESUMO

Este trabalho teve como objetivo a realização de uma pesquisa acerca da qualidade da
água oriunda da gruta Nossa Sra Aparecida, município de Andradas-MG. Será
apresentado um trabalho prático que contou com uma revisão bibliográfica em conjunto
com as análises laboratorias. Duas amostras foram coletadas para que fosse investigada a
presença de coliformes totais e escherichia coli na água. As amostras foram coletadas e
armazenadas em vidro borissilicato e mantidas em refrigeração durante todo o período de
análise. Segundo a Portaria Nº 518/2004, a qualidade necessária a água distribuida para
consumo humano é a potabilidade, ou seja deve ser tratada, limpa e estar livre de qualquer
contaminação, seja de origem microbiológica, química, física ou radioativa, não devendo
em hipótese alguma oferecer riscos à saúde humana. Ao todo existem mais de 250 tipos
de doenças de transmissão hídrica e alimentar provenientes de bactérias e suas toxinas. O
Ministério da Saúde é o órgão que controla a qualidade da água para consumo humano,
também com a missão de garantir o seu padrão de potabilidade. Segundo a portaria
1469/2000, amostras individuais procedentes de poços, fontes, nascentes e outras formas
de abastecimento sem distribuição canalizada tolera-se a presença de coliformes totais, na
ausência de escherichia coli. A partir dessas referências, foram avaliadas as condições de
consumo dessa água utilizada pela população de Andradas-MG, através da observação de
possível atividade bacteriana. A técnica utilizada foi a de membrana filtrante, na qual
volumes e diluições da amostra são passados através de um filtro tipo Millipore que retém
os microorganismos. Estes filtros são colocados sobre meios de cultura seletivos contidos
em placas de pétri. O meio seletivo utilizado para detecção de E.Coli, principal indicador
de contaminação fecal foi o ágar cromogênico mTec modificado. Dado o processo
obtivemos os seguintes resultados : Positivo p/ Coliformes Totais=3UFC/ml. Negativo p/
Escherichia Coli. Podemos assim concluir que a análise laboratorial da gruta foi
satisfatória, tendo em vista o resultado de "água potável" o que atende as normas de
potabilidade do Ministério da Saúde. Porém é necessário observar que o abastecimento do
município de Andradas-MG não é feito somente deste local e que a pesquisa foi
especícfica. Dito isto, podemos concluir que, com base na referência bibliográfica
estudada onde foi visto que à "todas as pessoas em quaisquer estágios de
desenvolvimento e condições socioeconômicas tem o direito de ter acesso a um
suprimento adequado de água potável e seguro", segundo a OMS pode-se reafirmar que
com relação a este estudo específico, as expectativas foram atendidas já que a água da
gruta Nossa Sra Aparecida é pótavel conforme apontou análise laboratorial.

Palavras Chaves: água, potábilidade, escherichia coli

 ABSTRACT

This work aimed to carry out research on the quality of water coming from the Nossa Sra
Aparecida cave, in the municipality of Andradas-MG. A practical work will be presented
that included a bibliographical review in conjunction with laboratory analyses. Two samples
were collected to investigate the presence of total coliforms and escherichia coli in the
water. The samples were collected and stored in borisilicate glass and kept refrigerated
throughout the analysis period. According to Ordinance No. 518/2004, the necessary quality
for water distributed for human consumption is potability, that is, it must be treated, clean
and free from any contamination, whether of microbiological, chemical, physical or
radioactive origin, and should not, under any circumstances, any pose risks to human health.
In total, there are more than 250 types of waterborne and foodborne diseases originating
from bacteria and their toxins. The Ministry of Health is the body that controls the quality of
water for human consumption, also with the mission of guaranteeing its potability standard.
According to ordinance 1469/2000, individual samples from wells, fountains, springs and
other forms of supply without piped distribution are tolerated for the presence of total
coliforms, in the absence of escherichia coli. Based on these references, the consumption
conditions of this water used by the population of Andradas-MG were evaluated, through
the observation of possible bacterial activity. The technique used was the filtering
membrane, in which volumes and dilutions of the sample are passed through a Millipore-
type filter that retains the microorganisms. These filters are placed on selective culture
media contained in petri dishes. The selective medium used to detect E.Coli, the main
indicator of fecal contamination, was modified mTec chromogenic agar.Given the process
we obtained the following results: Positive for Total Coliforms=3CFU/ml. Negative for
Escherichia Coli. We can therefore conclude that the laboratory analysis of the cave was
satisfactory, considering the result of "potable water" which meets the potability standards
of the Ministry of Health. However, it is necessary to note that the supply to the
municipality of Andradas-MG is not carried out only from this location and that the research
was specific. Having said this, we can conclude that, based on the bibliographical reference
studied, where it was seen that "all people at any stage of development and socioeconomic
conditions have the right to have access to an adequate and safe supply of drinking water",
according to the WHO It can be reaffirmed that in relation to this specific study,
expectations were met since the water in the Nossa Sra Aparecida cave is drinkable, as
indicated by laboratory analysis.

Keywords: water, potability, escherichia coli

 INTRODUÇÃO

A biologia nos ensina que não pode existir vida sem água. Todo ser vivo-plantas,
animais, o homem-precisa de água para viver. Na verdade, todo ser vivo consiste
principalmente de água. Nosso corpo contém cerca de 65% de água. O mesmo acontece
com os camundongos.1 Todas as funções orgânicas (digestão, circulaçao do sangue,
respiração, excreção urinária, transpiração, etc) exigem a renovação rápida da água contida
nas células ou nos líquidos intracelulares.1 Todos os seres vivos necessitam de uma porção
de água desde à absorção de alimentos até à eliminação de resíduos. A água ajuda à
dissolver e absorver nutrientes e levá-los à todas as partes do organismo. Por meio de
reações químicas o organismo converte os nutrientes em energia, ou em materiais de que
precisa para crescer ou reconstituir suas partes. Essas reações químicas só podem ocorrer
em solução aquosa.1 Enfim, o organismo necessita de água para eliminar os resíduos.1
Inerente a esta necessidade, o direito humano à água atesta que todos possam ter acesso à
água suficiente, segura, aceitável, fisicamente acessível para uso pessoal e doméstico.2 Para
a Organização Mundial da Saúde (OMS) e seus países membros, "todas as pessoas em
quaisquer estágios de desenvolvimentoe condições socioeconômica, têm o direito de ter
acesso à um suprimento de água potável e segura.3
No ano de 1561, Estácio de Sá, fundador do Rio de Janeiro, mandou escavar o
primeiro poço para abastecer a cidade, dando origem ao primeiro sistema de abastecimento
do Brasil, e em 1864, também na cidade do Rio de Janeiro foi concluída a instalação da
primeira rede de esgoto.4 Contudo, as diretrizes para regulamentação dos serviços de
saneamento básico só foram instauradas no ano de 2007, com a Lei Federal Nº 11.445/2007,
que define que todos os cidadãos brasileiros devem ter à sua disposição: abastecimento de
água potável, esgotamento sanitário, limpeza urbana e manejo de resíduos sólidos ,
drenagem e manejo das águas pluviais urbanas .5 Todavia o acometimento de doenças
parasitárias, transmitidas principalmente por meio de água e alimentos contaminados, ainda
é considerado um dos principais problemas de saúde pública mundial. Os parasitos
encontram-se dispersos em diversos ambientes, podendo ter relação com saneamento
inadequado e má distribuição de água potável, associados ao processo de urbanização
desordenado .6 Segundo a Agência Nacional de Águas (ANA), órgão federal que regula
o setor,no ano de 2015 apenas 29% dos Brasileiros possuiriam um abastecimento
satisfatório de água potável.7 E de acordo com dados da Secretaria Nacional de Saneamento-
SNIS, 84% dos brasileiros possuem abastecimento de água tratada, mas apenas 54% têm
acesso à coleta de esgoto, isso significa que aproximadamente 100 milhões de
brasileiros não tem coleta de esgoto.8 Esses dados trazem à tona a lamentável situação que
o país se encontra nos dias atuais em relaçao ao saneamento básico, situação esta que pode
trazer riscos à saúde humana.
Em face disso, não basta que as populações apenas disponham de água, é necessário
também que se garanta um mínimo de qualidade. Segundo a Portaria Nº 518/2004 do
Ministério da Saúde, a qualidade necessária à água distribuida para consumo humano é a
potabilidade, ou seja, deve ser tratada, limpa e estar livre de qualquer contaminação, seja de
origem microbiológica, química, física, radioativa, não devendo em hipótes alguma oferecer
riscos à saúde humana.9 Também com a missão de garantir seu padrão de potabilidade, o
Ministério da Saúde divulgou a Portaria Nº 1469/2000, que estipulou parâmetros de
qualidade para a água de consumo humano através de padrões microbiológicos, avaliando a
presença de bactérias do grupo coliformes. Segundo essa portaria, "amostras individuais
procedentes de poços, fontes, nascentes e outras formas de abastecimento sem distribuição
canalizada tolera-se a presença de coliformes totais, na ausência de escherichia coli''.10
Também cita que "Amostras com resultados positivos para coliformes totais devem ser
analisadas para E.coli, e, ou, para coliformes termotolerantes".10 Isso pelo fato de que, a
simples presença de coliformes totais não é uma indicação útil de contaminação fecal, pois
este grupo inclui diversos gêneros e espécies de bactérias não entéricas como Serratia e
Aeromonas.11 Em condições normais, os coliformes não são por si só patogênicos, porém
algumas linhagens ou a proliferação destes organismos podem causar doenças.11 O principal
representante do grupo termotolerante e o indicador mais específico de contaminação fecal e
de eventual presença de organismo patogênicos é a Escherichia coli.11Quando linhagens
patogênicas de E.coli estão presentes na água, estas podem ocasionar diarréias moderadas e
severas, colite hemorrágica grave e síndrome hemolítica urêmica (SHU), e em casos mais
extremos pode vir à óbito.12 Para identificação de cepas de E.coli foi utilizado o ágar
cromogênico mTec modificado, descsrito na 23ºEd do Standard Methods.
Fundalmentamente, será apresentado uma avaliação de resultados obtidos das análises
realizadas à partir das amostras coletadas de uma fonte de abastecimento de água da gruta
Nossa Sra Aparecida em Andradas-MG, podendo-se observar a qualidade sanitária do local.
 JUSTIFICATIVA

O presente trabalho se justifica pela importância da água para os seres humanos e na

sua viabilidade de consumo. Ao todo existem mais de 250 tipos de doenças de transmissão
híidrica e alimentar em todo o mundo sendo comumente provenientes de bactérias e suas
toxinas.13 Para que se tenha maior segurança de consumo desta água serão ralizadas análises
microbiológicas com finalidade de identificar coliformes totais e termotolerantes. Sendo
assim, a pesquisa se torna relevante, pois seus métodos são capazez de identificar possíveis
contaminantes fecais naquela água, demonstrando em sí carácter profilático, pois tende
prevenir aparecimentos de surtos de E.coli na população da região do município de
Andradas-MG, que faz uso frequente desta água.

OBJETIVO GERAL

Com base no cenário mencionado, o presente trabalho tem por objetivo avaliar a
potabilidade da água da gruta Nossa Sra Aparecida, município de Andradas-MG, por meio
da observação microbiológica das amostras coletadas, com o propósito de monitorar as
condições de salubridade dessa fonte. Apresentando os resultados sobre a qualidade da água
da fonte com enfoque para coliformes totais e E.coli, com base nos parâmetros de
potabilidade estabelecidos pela portaria 1694/2000. Com fim de assegurar o padrão
microbiológico da água proveniente dali. Visando prevenir a ocorrência da ingestão de
microorganismos patogênicos pela população que utiliza destas águas, transmintindo uma
maior segurança à saúde desta comunidade ao utilizarem a água da fonte.
 METODOLOGIA

O presente trabalho contou com uma revisão bibliográfica em conjunto com

as análises da água coletada.
Sendo a coleta parte integrante do processo analítico e a sua execução decisiva para
os resultados, seguiu-se as instruções sobre técnicas de amostragem e preservação, medidas
de segurança, manuseio dos equipamentos usados; conhecimento da localização exata do
ponto de amostragem e registro de condições atípicas do referido local.14 Para realização de
tal procedimento foi-se aplicada a assepsia das mãos com alcool 70º.15 No momento da
coleta o aluno responsável estava paramentado de todos os EPI's necessários.15 Nesse
momento com cuidado para que não houvesse o contato do recipiente com outras impurezas
do local, utilizando-se de um frasco de vidro borissilicato estéril, ocorreu a coleta.14 A
amostra foi mantida refrigerada, e posteriormente transportada em uma caixa de isopor
contendo gelo reciclado para manutenção da temperatura na faixa de 2º-8ºC que contou com
o auxílio de um termômetro. As análises foram realizadas em menos de 24 horas após a
coleta.16
A técnica utilizada para a análise foi a de membrana filtrante, nesse processo
volumes e diluições são passados através de um filtro tipo Millipore, que retém os
microorganismos. Estes filtros posteriormente são colocados sobre meios de cultura
seletivos, contidos em placas de pétri. O processo de filtração se iniciou com a limpeza do
balcão e esterilização das mãos do profissional com álcool 70º, a amostra foi então
homogeneizada. O funil de Büchner foi devidamente posicionado no kitassato, a membrana
foi então introduzida no funil com o auxílio de pinça,então as amostras foram filtradas com
a ajuda da bomba à vácuo, dado este processo a membrana foi retirada com o auxílio da
pinça novamente e colocada em placa de pétri que continha o ágar cromogênico mTec
modificado, com objetivo de identificar cepas de E.coli. O ágar mTec modificado contém o
substrato cromogênico 5-bromol-6-cloro-3-indol-ß-D-glicuronídeo o qual é catabolizado em
ácido glicurônico e um composto de coloração vermelha/magenta pela enzima ß-D-
glicuronidase18
Ao final do processo as placas são incubadas à uma temperatura de 35ºC ± 0,5ºC por
2 horas para ressuscitar bactérias estressadas , então logo na sequência são incubadas à uma
temperatura de 44,5C ± 0,2ºC por mais 22horas.19 Depois da incubação, será possível
observar colônias vermelhas ou magentas (E. coli) usando uma lâmpada fluorescente de
emissão UV e uma lente de aumento.19
 RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os alunos Yan Eduardo Pinto Teixeira e Natanael Izidio Moreira Luiz fizeram a
coleta da água no dia 19 de julho de 2022 às 11 horas na BR-146, na cidade de Andradas-
MG, as amostras foram recebidas no mesmo dia pelo laboratório, com emissão de resultados
no dia 25 de julho de 2022 . O método empregado pelo laboratório para a detecção de
E.coli foi o 9213 D descrito no Standard Methods for the Examination of Water and
Wastewater, que utiliza o ágar mTec modificado, esse método se mostrou útil pois
necessitou seguir todas as normas instituidas pela RDC166/17 da Anvisa que estabelece os
critérios para validação de métodos analíticos utilizados em laboratórios.20 Esses critérios
incluem avaliação de precisão, exatidão, sensibilidade e robustez de método. A nota emitida
na análise, com base na portaria GM/MS Nº888 de 4 de maio de 2021, foi elucidada como
Limites Máximos Permissíveis (LMP).21

FIG1.Ilust (coliformes totais) FIG2.Ilust (Escherichia Coli)

Dados coletados: Laboratório Analítico Teixeira e Filho.22

Para maior segurança dos resultados, foram realizados testes de branco de reagente
para que houvesse o controle de qualidade do método cujos resultados obtidos
deveriam ser inferiores à <1UFC/ml. Obtivemos os seguintes resultados para as
amostra filtradas: Coliformes Totais = 3UFC/ml. Este resultado nos indica a presença
de coliformes totais,deste modo foi necessário uma apuração mais profunda de
contaminação fecal da fonte. A partir dos resultados positivos para coliformes totais,
decorreu-se uma análise para verificar a presença de E.coli, principal indicador de
contaminação fecal e eventual presença de organismos patogênicos. Foi observada
total ausência desse organismo na amostra,sendo portanto nula qualquer possibilidade
haver contaminação, estando de acordo com os parâmetros de potabilidade do
Ministério da Saúde.

- A incerteza expandida foi

calculada de acordo com a
“Segunda Edição Brasileira do
Guia para Expressão da Incerteza
da medição”, nível de confiança
de aproximadamente 95%, com
k=2,0.23

Fig3. Incerteza expandida k=2

 Vale ressaltar que os resultados desta pesquisa não dispensam a necessidade de
novas averiguações do local, e análises físico-químicas na água da gruta regularmente
para que se mantenha sua segurança para consumo, especialmente pelo fato de ter sido
detectado a presença de coliformes totais, oque não significa que a água esteja contamina
ou que seja imprópria para consumo, porém esse grupo de bactérias é um forte indicador
da qualidade da água, e o fato delas terem sido detectadas implica que sejam realizadas
novas análises no local. Pelo fato de ter sido observada a presença de coliformes totais na
primeira análise, necessitou-se uma análise mais aprofundada da água da gruta, tendo
sido executada uma análise mais específica de contaminação fecal, no caso a E.coli, que
indicou ausência deste microorganismo.

CONCLUSÃO

Podemos concluir que a análise laboratorial da água da gruta foi satisfatória, tendo
em vista o resultado de "água potável", onde foi descartada a possibilidade de haver
contaminação pelo fato de que esta água demonstrou estar livre de agentes patogênicos
como demonstrado nas análises, que indicou total ausência do principal microorganismo
da classe dos coliformes termotolerantes e principal indicador de contaminação fecal a
E.coli. Porém é necessário observar que o abastecimento do município de Andradas-MG
não é realizado apenas desse local e que a pesquisa foi específica.

Com base na referência bibliográfica estudada onde foi visto que a " todas as
pessoas em quaisquer estágios de desenvolvimento e condições socioeconômicas têm o
direito de ter acesso à um suprimento adequado de água potável e segura, segundo a
OMS, pode-se reafirmar que com relação a este estudo específico, as expectativas foram
atendidas, já que a água da gruta Nossa Sra Aparecida é potável, conforme apontou
análise laboratorial. Importante lembrar que para ter água potável é necessário tratamento
e que fontes de água como, poços, fontes e minas entre outros que não possuam algum
tipo de tratamento deve ser observado pois essas águas são frequentemente usadas pela
populaçao, porém sua potabilidade não é investigada nesta mesma frequência, são raros
os casos de profissionais capacitados procurarem locais como esse afim de avaliar a
qualidade das águas.

Contudo as análises realizadas foram capazez de demonstrar sua potabilidade,

culminando em uma percepção de maior segurança e confiabilidade desta gruta fazendo
assim, posto isso a integridade desta comunidade perante surtos de E.coli.

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