QUIMICA ANALITICA E INSTRUMENTAL

Trabajo Práctico Simulado II

PRESENTADO POR:
JOSE FERNANDO VARGAS L.
Código: 75.073.324
FENNYS MARIA CABRERA PAYARES
Código: 49.693.020
LUIS GONZAGA SALGADO SOTO
Código: 75.077.192
ANA MILENA PEREZ VIVAS
Código: 66.739.612

JENNY PAOLA ORTEGA

Tutora

CURSO
301102_15

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

FACULTAD DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGIAS E INGENIERIAS
NOVIEMBRE
2014
 DESARROLLO
SECCION A. Reconocimiento de los parámetros cromatograficos en
cromatografía liquida de alta eficiencia (CLAE)

1. Defina y explique cómo se relacionan los siguientes conceptos. Incluya

cuando corresponda, el símbolo y ecuación que representa al concepto

2. Factor de separación. (α)

Define que tan selectiva es una columna para separar dos picos. La columna
puede ser selectiva a una separación, que se identifica por un valor alto de este
factor:

En términos tomados a partir de un cromatograma α se puede calcular:

3. Resolución.
La resolución de una columna constituye una medida cuantitativa de su
capacidad para separar dos analitos, en este término si se toma en cuenta el
ensanchamiento de los picos, así que la magnitud de este valor si permite
asegurar la separación de dos picos.
Donde WA y WB son los anchos de banda de A y B respectivamente La resolución
expresada en términos teóricos es:

4. Eficiencia. (N)
Para realizar una separación cromatografica optima, debe evitarse en lo posible, el
ensanchamiento de las bandas debido a la dispersión; en efecto cuanto más
anchas sean las bandas, menor número de ellas podrán ser resueltas en un
espacio de tiempo dado; es decir cuánto más agudos sean los picos que emergen
de una columna mejor estará actuando dicha columna. Las anchuras de las
bandas cromatograficas dependen de las características de la columna (tamaño
de las partículas del lecho estacionario, homogeneidad de este, velocidad de la
fase móvil, etc.). Se expresa como el número de platos teóricos:

El número de platos de una columna depende de su longitud, por lo que se debe

tener en cuenta la altura equivalente de un plato teórico, que relaciona la eficacia
de una columna con su longitud y se define como el cociente entre la longitud de
la columna y su número de platos teóricos.

5. Factor de retención.
Este factor () es adimensional expresa la retención de un compuesto por la fase
estacionaria, independiente del caudal de la fase móvil.

6. Tiempo de retención.
Es el tiempo que transcurre después de la inyección de la muestra para que el
pico del analito alcance el detector y se le da el símbolo . O en otras palabras es
el tiempo que tarda cada sustancia en abandonar el sistema cromatográfico.

7. Tiempo muerto.

Es el tiempo para que la especie no retenida alcance el detector

 El tiempo que tarda en eluir un soluto que no interacciona con la fase
estacionaria.

8. Ancho de banda (sigma total)

Corresponde al intervalo de longitudes de onda comprendido entre los puntos en

donde la transmitancia (de la radiación emitida por la fuente y que llega a la rendija
de salida) alcanza la mitad de su máximo de transmisión o el intervalo de
longitudes de onda que contiene el 75% de la energía radiante que proviene del
monocromador. La anchura de banda se puede expresar en términos de la
apertura o amplitud de las rendijas, S, y la dispersión lineal recíproca del
monocromador como:

SBW = S.D-1
9. Cromatografía líquida en fase normal

La fase estacionaria es polar (gel de sílice, grupos ciano, amino y diol) y la fase
móvil es no polar (hexano o isopropileter). El componente menos polar es el que
eluye primero.

10. Cromatografía líquida en fase reversa

La fase móvil es polar (agua, metanol o acetonitrilo). El componente más polar es

el primero en eluir y la fase estacionaria es no polar (cadena hidrocarbonada que
puede ser:
Cadena larga: C:18
Cadena intermedia: C:8
Cadena corta: C:2

11. Gradiente de elución

Se utilizan dos o más disolventes de distinta polaridad y se varía la composición

de forma continua o mediante etapas escalonadas.
12. Elución isocrática
Es la separación con disolvente de composición constante
Sección B: Efecto de la estructura de los compuestos (solutos) y de la
composición de la fase móvil sobre la retención y la resolución.

1. Dibuje estructuras de los siguientes compuestos utilizando las convenciones de

cuña/slash representando los ángulos de enlace adecuados:
2. Sobre la base de sus estructuras:

a) Prediga el orden de elución de los compuestos, partiendo del menos al más

retenido en RPLC (Cromatografía líquida en fase reversa). Justifique su respuesta.

4- Nitrofenol
Acetofenona
3- Nitrofenol
Etilparabeno
Propiofenona
Ketoprofeno
Benzofenona
Butilparabeno

b) ¿Cuáles son los principales usos de cada uno de estos compuestos?

Propiofenona
 Se utiliza en la síntesis de efedrina y derivados de propiofenona tales como
metcarinona y catinona.
 Es un intermediario útil para la preparación de medicamentos que actúan sobre
el sistema nervioso central tales como los hipnóticos, ansiolíticos
 Se puede también utilizar en la síntesis de alquenos arilo tales como
fenilpropanoides.

Acetofenona

 Se usa como precursor en la preparación de fragancias que se asemejan a la

almendra, la cereza, la madreselva, el jazmín y la fresa.
 También se usa para preparar resinas y como aditivo en las gomas de mascar
y en cigarrillos.

 A finales del siglo XIX se vendía como hipnótico y anti convulsionante con el
nombre hipnona (Hypnone™). Sus efectos sedantes se consideraban
superiores a los del paraldehído y a los del hidrato de cloral.
Benzofenona

 La benzofenona es una cetona aromática que ayuda a filtrar las radiaciones.

Esta cetona absorbe la radiación y la disipa en forma de calor. Por esa
principal característica es utilizada en la producción de perfumes, jabones y
protectores solares.
 En el caso de los perfumes y jabones, la benzofenona provoca que ni el olor ni
el color, pierdan sus propiedades debido a la exposición con los rayos UV,
mientras que en los protectores solares tienen como función absorber la
radiación y transformarla en energía no nociva para la salud de la piel.
 Fabricación de productos farmacéuticos (antihistamínicos, hipnóticos, pantallas
solares), cosméticos e insecticidas, en análisis, química fina, etc.

Butilparabeno

 Se utiliza muchísimo en muchos productos del cuidado de la piel e incluso en

medicinas tan comunes como el ibuprofeno.

 Es el anti fúngico más potente de entre los parabenos. De hecho, su potencial

microbiano es mayor que el del metilparabeno, el propilparabeno o el
etilparabeno. Es particularmente eficaz contra mohos y levaduras, y menos
contra bacterias. En cuanto a cómo funciona, parece que inhibe la capacidad
de síntesis del ADN y el ARN y con ello la capacidad de transporte de
sustancias entre membranas, lo cual retarda el crecimiento microbiano porque
les impide desarrollarse al ritmo habitual. Aún así, es frecuente encontrárselo
combinado con otras sustancias biocidas como liberadores de formaldehido,
isotiazolinonas y fenoxietanol para aumentar sus capacidades conservadoras,
así como con otros tipos de parabenos.

Etilparabeno

 Son utilizados como conservadores protegiendo a los productos de las

levaduras y los hongos. No obstante, no son muy efectivos contra las
bacterias. Su actividad es independiente de la acidez, y adicionalmente, son
poco solubles, lo que limita sus aplicaciones (antimicrobianos y ciertas
propiedades antioxidantes) en formas farmacéuticas liquidas como jarabes,
soluciones, suspensiones e inyectables.

 son usados en una gran variedad de alimentos y cosméticos.

Propilparabeno

 se usa con frecuencia en cosméticos, productos de cuidado para la piel y

comida. Tiene una toxicidad generalmente baja por ingestión
 Es muy poco soluble en agua fría, por lo que se trabaja en procesos con calor.
Es anti fermentativo, tiene amplio espectro antimicrobiano es bacteriostático y
antioxidante, combate mohos y levaduras. Es muy utilizado en cosméticos (es
el segundo producto de este tipo más utilizado), pero también es empleado en
la industria alimenticia, se recomienda utilizarlo del 0,05 al 0,1%; en la
preservación de grasas en una proporción del 0.1%.

Ketoprofeno
 El ketoprofeno de prescripción se usa para aliviar el dolor, sensibilidad,
inflamación (hinchazón) y la rigidez causada por la osteoartritis (artritis causada
por un deterioro del recubrimiento de las articulaciones) y la artritis reumatoide
(artritis causada por la hinchazón del recubrimiento de las articulaciones).
También se usa para aliviar el dolor, incluyendo el dolor menstrual (dolor que
se presenta antes o durante el período menstrual). El ketoprofeno sin
prescripción o de venta libre se usa para aliviar dolores leves causados por
cefaleas (dolor de cabeza), períodos menstruales, dolor de muelas, resfrío
común, dolores musculares, dolor de espaldas y para reducir la fiebre.
Pertenece a una clase de medicamentos llamados antiinflamatorios sin
esteroides. Funciona al detener la producción de una sustancia que causa
dolor, fiebre e inflamación.

 El ketoprofeno por vía oral es efectivo y bien tolerado como tratamiento agudo
en los ataques de migraña.
3- Nitrofenol
 Se utiliza en peletería como fungicida.

4- Nitrofenol
 Es usado principalmente en la manufactura de medicamentos, fungicidas,
tinturas y para oscurecer el cuero.

3. Abra el HPLC simulator (http://www.hplcsimulator.org/).

4. Configure el simulador así:

Mobile phase Solvent A Solvent B Isocratic elution Solvent B

composition (Solvente A): (Solvente B): mode (Modo de fraction
(Composición de la Water (Agua) Methanol elución (Fracción del
fase móvil) (Metanol) isocratico) solvente B) (%
v/v): 50
Chrmatographic Temperature Injection Flow rate (Flujo): 2.0 mL/min
properties (Temperatura): volume
(Propiedades 25 ºC (Volumen de
cromatográficas) inyección):
10.0 μL
General properties Time constant Signal offset Noise (Ruido): Plot points
(Propiedades (Constante de (Desplazamien 2.0 (Puntos
generales) tiempo): 0.1 s to de la señal): marcados): 3000
0.0 min.
Column properties Stationary Length Inner diameter Particle size
(Propiedades de la phase (Fase (Longitud): (Diámetro (Tamaño de
columna) estacionaria): 100.0 mm interno): 4.6 mm partícula): 3.0
Waters μm
Acquity BEH
C18

C. Posteriormente, registre para cada compuesto: el tiempo de retención (tR), el

factor de retención (k’) y el ancho de banda (sigma total). Adjunte una imagen del
cromatograma obtenido.

K´ tR σ
propiopheneone 3,5762 2,4337 1,3495
acetofenona 1,5254 1,3431 0,7528
benzofenona 11,5799 6,6901 3,6941
butilparabén 13,0915 7,4940 4,1375
etilparabeno 2,7739 2,0070 1,1154
propilparabeno 6,2047 3,8315 2,1185
ketoprofeno 5,7020 3,5642 1,9712
nitrofenol 1,5371 1,3493 0,7562
nitrofenol 1,3728 1,2619 0,7088
d) Calcule el tiempo muerto (tM o t0).

K´ tR σ
acetophenone 0,5208 0,8088 0,4055
benzophenone 3,6878 2,4930 1,1888
butylparaben 2,0296 1,6112 0,77
49

propiopheneone 1,3452 1,2472 0,60

56

ethylparaben 0,4012 0,7452 0,37

71

propylparaben 0,9498 1,0369 0,50

89

ketoprofen 1,0948 1,1140 0,54

42

3-nitrophenol 0,4345 0,7629 0,38

50

4-nitrophenol 0,3760 0,7317 0,37

11
Sección C: Efecto del porcentaje del modificador en la composición de la
fase móvil sobre la retención y la resolución.

5. Cambie la composición de la fase móvil de metanol a acetonitrilo

1. En el listado de compuestos, elimine 7 solutos dejándo solo a Acetophenone
(acetofenona) y Ethylparaben (etilparabeno).
2. Fije las condiciones del simulador de acuerdo con:

Mobile phase Solvent A Solvent B Isocratic Solvent B

composition (Solvente (Solvente elution mode fraction
(Composición A): Water B): (Modo de (Fracción del
de la fase móvil) (Agua) acetonitrilo elución solvente B)
isocratico) (% v/v): 95
Chrmatographic Temperatur Injection Flow rate (Flujo): 1.0 mL/min
properties e volume
(Propiedades (Temperatur (Volumen
cromatográficas a): 25 ºC de
) inyección):
5.0 μL
General Time Signal offset Noise Plot points
properties constant (Desplazami (Ruido): 2.0 (Puntos
(Propiedades (Constante ento de la marcados):
generales) de tiempo): señal): 0.0 3000
0.1 s min.
Column Stationary Length Inner Particle size
properties phase (Fase (Longitud): diameter (Tamaño de
(Propiedades de estacionaria 100.0 mm (Diámetro partícula): 3.0
la columna) ): Waters interno): 4.6 μm
Acquity mm
BEH C18

a) Registre para los dos compuestos: el tiempo de retención (tR), el factor de

retención (k’) y el ancho de banda (sigma total). Adjunte una imagen del
cronograma obtenido.
COMPONENTE K´ tR (minuto) σ (total segundo)
Acetophenone 0.0098 1.0848 0,5837
Ethylparaben 0,0023 1,0768 0,5796
c) Calcule la resolución, α, para los dos compuestos

RS = 2(1,0768 – 1.0848)
____________________

0.5837 + 0.5796

RS = - 0.008
__________________
1.1633

RS= - 0.00687
2. Cambie gradualmente el porcentaje de metanol en intervalos de 10% iniciando
en 95% y terminando en 5% (95%, 85%, 75%, 5%). 3. Registre el tiempo de
retención, el factor de retención y el sigma total para los dos compuestos.
Adjunte una imagen del cromatograma obtenido.

Compuesto Fracción del K´ tR Σ

solvente B)
(% v/v):
acethopenone 95 0,098 1.0848 0.5837
ethylparaben 95 0.023 0.0768 0.5796

compuesto Fracción del K´ tR Σ

solvente B)
(% v/v):
Acethopenone 85 0,0237 1.0888 0.5664
ethylparaben 85 0.0072 1,0713 0.5577
compuesto Fracción del K´ tR Σ
solvente B)
(% v/v):
Acethopenone 75 0.0573 1,1245 0,5662
ethylparaben 75 0.0227 1.0878 0,5487
compuesto Fracción del K´ tR Σ
solvente B)
(% v/v):
Acethopenone 65 0.1385 1,2109 0,5948
ethylparaben 65 0,0717 1.1398 0,5616

Compuesto Fracción del K´ tR Σ

solvente B)
(% v/v):

Acethopenone 55 0,3349 1,4199 0,6833

ethylparaben 55 0,2260 1.3040 0,6297

compuesto Fracción del K´ tR Σ
solvente B)
(% v/v):
Acethopenone 45 0,8099 1,9250 0,9110
ethylparaben 45 0,7125 1,8214 0,8631

compuesto Fracción del K´ tR Σ

solvente B)
(% v/v):
Acethopenone 35 1,9584 3,1466 1,4728
ethylparaben 35 2,2465 3,4530 1,6152
compuesto Fracción del K´ tR Σ
solvente B)
(% v/v):
Acethopenone 25 4,7355 6,1004 2,8413
ethylparaben 25 7,0832 8,5975 4,0021
compuesto Fracción del K´ tR Σ
solvente B)
(% v/v):
Acethopenone 15 11,4509 13,2430 6,1580
ethylparaben 15 22,3339 24,8183 11,5386

compuesto Fracción del K´ tR Σ

solvente B)
(% v/v):
Acethopenone 5 27,6893 30,5145 14,1836
ethylparaben 5 70,4198 75,9634 35,3070
f) Calcule la resolución, α, para los dos compuestos

Resolución Acetofenona Resolución Etilparabeno

Rs = 2 (1.0768 - 1.0848) Rs = 2(1.0848 –

1.0768)
___________________________ ---------------------------
0.5837 + 0.5795
0.5837 + 0.5796
Rs = 0.01375
Rs = - 0.016
___________

1.1633

Rs = - 0.01375
5- Conclusión sobre el efecto del porcentaje del modificador en la composición de
la fase móvil sobre la retención y la resolución:
Cuando se introduce un compuesto en la corriente de la fase móvil de un sistema
cromatografico, de no existir interacción con este con la fase estacionaria , la
banda que forma se desplazaría a la misma velocidad que la fácil móvil y
emergería del lecho estacionario cuando el volumen total de fase móvil fuese igual
al volumen vacío o intersticial de la columna; sin embargo como las moléculas de
la muestra interaccionan de hecho con la fase estacionaria, aquellas necesitan
para su elución el paso de un volumen mayor de fase móvil, que se denomina
volumen de retención de la muestra. Dado que un sistema cromatografico que
opere a caudal constante, el volumen eluido y el tiempo son proporcionales, los
conceptos de volumen muerto y volumen de retención, son directamente
intercambiables, por el tiempo muerto y el tiempo de retención.

BIBLIOGRAFIA
http://www.mncn.csic.es/docs/repositorio/es_ES/investigacion/cromatografia/princi
pios_de_cromatografia.pdf

ANEXOS EVIDENCIAS DEL ENCUENTRO SINCRONICO